JPH08165286A

JPH08165286A - 抗生物質テトロマイシンａおよびｂとその製造法

Info

Publication number: JPH08165286A
Application number: JP6332226A
Authority: JP
Inventors: Tomio Takeuchi; 富雄竹内; Masa Hamada; 雅濱田; Hiroshi Osanawa; 博長縄; Yoshikazu Takahashi; 良和高橋; Ryuichi Sawa; 竜一澤
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1994-12-13
Filing date: 1994-12-13
Publication date: 1996-06-25

Abstract

(57)【要約】【目的】低毒性で多剤耐性菌（メチシリン耐性菌等）
に優れた抗菌活性を示す新しい分子骨格を有する抗生物
質を提供する。【構成】テトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢが
下記の一般式（Ｉ）で表される抗生物質として得られ
る。テトロマイシンＡ：Ｒ＝ＣＨ₃ＣＯ− テトロマイシンＢ：Ｒ＝Ｈ

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗菌活性を有する新規な
抗生物質であるテトロマイシン（Tetromycin）Ａおよび
テトロマイシンＢに関し、またテトロマイシン（Tetrom
ycin）Ａおよび（または）テトロマイシンＢの製造法に
関する。さらに本発明はテトロマイシンＡまたはＢ、あ
るいはこれら両者を有効成分とする抗菌剤に関する。ま
た本発明はテトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢを
生産できる特性を持つ新規な微生物ストレプトミセス
ＭＫ６７−ＣＦ９株にも関する。

【０００２】

【従来の技術】細菌感染症の化学療法において、多剤耐
性菌の出現は重大な問題である。従来知られるまたは使
用されている既知の抗菌性化合物とは、異なる化学構造
の骨格を有し且つ優れた抗菌剤と優れた性質を示す新し
い化合物を発見または創製することは常に望まれてお
り、そのための研究が行われている。

【０００３】

【発明が解決すべき問題】本発明は、上記の要望に応え
ることができる優れた抗菌活性を持つ新規な抗生物質を
提供することを目的にするものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは有用
な抗生物質を発見すべく研究を行い、その結果、新規な
微生物として、ストレプトミセス属に属する菌株を分離
することに成功し、またこの菌株が新しい構造骨格を有
する抗生物質を産生していることを見い出した。そし
て、その抗生物質２種を単離することに成功してテトロ
マイシン（Tetromycin）ＡおよびテトロマイシンＢとそ
れぞれ命名した。また、テトロマイシンＡおよびテトロ
マイシンＢがグラム陽性の細菌並びにその薬剤耐性菌
（メチシリン耐性菌等）に抗菌活性を示すことを見い出
した。さらに研究の結果、テトロマイシンＡおよびテト
ロマイシンＢを分析することにより、テトロマイシンＡ
およびＢの化学構造を決定した。そしてテトロマイシン
ＡおよびＢが新規化合物であることを確認し、後記の一
般式（Ｉ）により表せることを知見した。

【０００５】しかして、本発明は、ストレプトミセス属
に属する微生物を培養して得られて本発明者らによりテ
トロマイシンＡおよびテトロマイシンＢとそれぞれ命名
された抗生物質、およびその製造法について提供するも
のである。さらに、本発明はテトロマイシンＡおよび
（または）テトロマイシンＢを有効成分とする抗菌剤を
提供するものである。

【０００６】すなわち、第１の本発明によると、次の一
般式（Ｉ）〔式中、ＲはテトロマイシンＡではアセチル基を示し、
テトロマイシンＢでは水素原子を示す〕で表わされる抗
生物質テトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢ、ある
いはその塩が提供される。

【０００７】本発明による一般式（Ｉ）のテトロマイシ
ン（Tetromycin）Ａの理化学的性状は、次の通りであ
る。

【０００８】（１）外観、性状無色柱状結晶、酸性物質（２）分子式Ｃ₃₆Ｈ₄₈Ｏ₆ （３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：正イオンモ
ード）実験値５７７．３５４１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 計算値５７７．３５２９（４）融点２１０〜２１２℃ （５）比旋光度［α］_D ²⁴ ＋１１．３°（ｃ＝０．５３、アセトン）（６）紫外線吸収スペクトル紫外線吸収スペクトルは添付図面の図１に示す通りであ
る。

【０００９】なお、下記の吸収ピークが認められた。 λmax, nm(logε) : 245(3.84), 270(3.83), 281肩(3.7
8) (97%メタノール水溶液中) λmax, nm(logε) : 262(3.84) (0.03M HCl-97%メタノ
ール水溶液中) λmax, nm(logε) : 241(3.99), 273(3.90), 282(3.91)
(0.03M NaOH-97%メタノール水溶液中) （７）赤外線吸収スペクトル添付図面の図２に示す通りである。

【００１０】（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル５００ＭＨｚにおいて重クロロホルム中で室温にて測定
したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図３に示
す通りである。（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル１２５ＭＨｚにおいて重クロロホルム中で室温にて測定
した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図４に示
す通りである。

【００１１】（10）溶解性クロロホルム、アセトンおよび酢酸エチルに可溶で水に
不溶である。（11）ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製）の薄層クロマトグ
ラフィーで展開溶媒としてトルエン−酢酸エチル（６：
１）で展開したときのＲｆ値は０．４１である。

【００１２】本発明による一般式（Ｉ）のテトロマイシ
ン（Tetromycin）Ｂの理化学的性状は、次の通りであ
る。

【００１３】（１）外観、性状無色針状結晶、酸性物質（２）分子式Ｃ₃₄Ｈ₄₆Ｏ₅ （３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：正イオンモ
ード）実験値５３５．３４３４（Ｍ＋Ｈ）⁺ 計算値５３５．３４２３（４）融点１４３〜１４６℃ （５）比旋光度［α］_D ²⁴ −０．２°（ｃ＝０．５９、アセトン）（６）紫外線吸収スペクトル紫外線吸収スペクトルは添付図面の図５に示す通りであ
る。

【００１４】なお、下記の吸収ピークが認められた。 λmax, nm(logε) : 248(3.86), 268(3.90), 282肩(3.8
3) (97%メタノール水溶液中) λmax, nm(logε) : 262(3.89) (0.03M HCl-97%メタノ
ール水溶液中) λmax, nm(logε) : 241(4.04), 273(3.95), 281(3.95)
(0.03M NaOH-97%メタノール水溶液中) （７）赤外線吸収スペクトル添付図面の図６に示す通りである。

【００１５】（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル５００ＭＨｚにおいて重クロロホルム中で室温にて測定
したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図７に示
す通りである。（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル１２５ＭＨｚにおいて重クロロホルム中で室温にて測定
した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図８に示
す通りである。

【００１６】（10）溶解性クロロホルム、アセトンおよび酢酸エチルに可溶で水に
不溶である。（11）ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製）の薄層クロマトグ
ラフィーで展開溶媒としてトルエン−酢酸エチル（６：
１）で展開したときのＲｆ値は０．２６である。

【００１７】なお、テトロマイシンＡまたはＢの塩に
は、製薬的に許容できる塩、アルカリ金属、例えばナト
リウム、カリウム、あるいはアルカリ土類金属、例えば
カルシウム、マグネシウムとの塩、およびアンモニウム
塩が例示される。

【００１８】本発明による新規抗生物質テトロマイシン
ＡおよびＢが前記の一般式（Ｉ）で示される化学構造を
有することは、プロトンＮＭＲ、炭素１３ＮＭＲ等の分
析を詳細に検討することにより前記の通り決定された。

【００１９】本発明による一般式（Ｉ）のテトロマイシ
ンＡおよびＢは後記の生物学的性質を有する。

【００２０】すなわち、テトロマイシンＡおよびＢは、
多剤耐性菌（メチシリン耐性菌等）を含むグラム陽性の
細菌に対して抗菌活性を示す。またテトロマイシンＡお
よびＢは、ほ乳動物に対する急性毒性が低い。

【００２１】試験例１各種の微生物に対するテトロマイシンＡおよびＢの最小
発育阻止濃度（ＭＩＣ．）（μｇ／ｍｌ）は日本化学療
法学会標準法に基づき、ミュラー・ヒントン寒天培地上
で倍数希釈法によって測定した。その結果を抗菌スペク
トルとして表１に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】試験例２マウスを使用して本発明のテトロマイシンＡおよびＢの
急性毒性を試験した。このために、１０％ジメチルスル
ホキシドおよびツイーン８０含有の生理食塩水にテトロ
マイシンＡまたはＢを溶解し、その溶液を腹腔内に注射
し、マウスを１４日間観察した。その結果、テトロマイ
シンＡおよびＢは、それぞれ１００ｍｇ／ｋｇの投与で
毒性は認められなかった。

【００２４】第２の本発明によると、ストレプトミセス
属に属する前記の一般式（Ｉ）のテトロマイシンＡおよ
びテトロマイシンＢの生産菌を培養し、培養物から、テ
トロマイシンＡまたはテトロマイシンＢあるいはこれら
両者を採取することを特徴とする一般式（Ｉ）の抗生物
質テトロマイシンＡおよび（または）テトロマイシンＢ
の製造法が提供される。

【００２５】本発明の方法で使用するテトロマイシンＡ
およびテトロマイシンＢの生産菌（以下で単に「テトロ
マイシン生産菌」という）は、前述した理化学的性質お
よび生物学的性質を有する抗生物質を生産する能力を有
するものであれば、その種を問わず使用でき広範な微生
物から選ぶことができる。かかる微生物のうち、テトロ
マイシン生産菌の具体的な好適の一例は、本発明者らに
より平成５年１１月に微生物化学研究所において横浜市
港北区の土壌より分離された放線菌で、ＭＫ６７−ＣＦ
９の菌株番号が付された菌である。

【００２６】以下にＭＫ６７−ＣＦ９株の菌学的諸性質
について記載する。１．形態ＭＫ６７−ＣＦ９株は、分枝した基生菌糸より気菌糸を
伸長し、気菌糸の先端は、らせん状あるいはループ状を
呈する。輪生枝は認められない。成熟した胞子鎖は、５
〜２０個以上の長円形の胞子が連鎖する。胞子の大きさ
は、約０．４〜０．５×０．８〜１．０ミクロンであ
り、胞子の表面は平滑である。なお、集束菌糸、および
胞子のうは認められない。

【００２７】２．各種培地における生育状態色の記載について［］内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（Container Corporation ofAmerica
のColor Harmoney Manual）を用いた。

【００２８】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（27
℃培養）無色〜うす黄の発育上に、白〜明るいオリーブ灰［1 g
e, Citron Gray］の気菌糸をややうっすらと着生し、溶
解性色素は認められない。（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（27℃培養）無色〜うす黄の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生
し、溶解性色素は認められない。（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP-培地
５、27℃培養）黄味灰［1 1/2 ec, Putty〜２ ie, Lt Mustard Tan］の
発育上に、緑味白［1dc, Putty］の気菌糸を着生し、溶
解性色素はかすかに茶色味を帯びる。（４）スターチ・無機塩寒天培地（ISP-培地４、27℃培
養）無色〜うす黄［1 1/2 ca, Cream〜２ ca, Lt Ivory］の
発育上に、明るいオリーブ灰［1 cb, Parchment〜1 dc,
Putty］の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められな
い。

【００２９】（５）チロシン寒天培地（ISP-培地７、27
℃培養）灰味黄茶［3 lg, Adobe Brown〜3 li, Beaver］の発育
上に、緑味白［1 dc, Putty］の気菌糸を着生する。溶
解性色素は暗い茶を呈する。（６）栄養寒天培地（27℃培養）無色〜うす黄［2 ca, Lt Ivory］の発育上に、白の気菌
糸をうっすらとわずかに着生し、溶解性色素は認められ
ない。（７）イースト・麦芽寒天培地（ISP-培地２、27℃培
養）うす黄茶［2 le, Mustard］〜茶灰［2 nl, Covert Brow
n］の発育上に、黄味灰［1 cb, Parchment〜1 ec, Lt C
itron Gray］の気菌糸を着生し、溶解性色素は茶色味を
帯びる。

【００３０】（８）オートミール寒天培地（ISP-培地
３、27℃培養）無色〜うす黄の発育上に、白〜黄味灰［1 cb, Parchmen
t〜1 ec, Lt Citron Gray］の気菌糸を着生し、溶解性
色素は認められない。（９）スターチ寒天培地（27℃培養）無色の発育上に、白の気菌糸をうっすらとわずかに着生
し、溶解性色素は認められない。

【００３１】３．生理的性質（１）生育温度範囲スターチ・無機塩寒天培地（ISP-培地４）を用い、10
℃、20℃、24℃、27℃、30℃、37℃、50℃の各温度で試
験した結果、10℃、50℃を除き、そのいずれの温度でも
生育する。生育至適温度は27℃付近と思われる。（２）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培
地、ISP-培地４およびスターチ寒天培地、いずれも27℃
培養）いずれの培地においても陰性である。

【００３２】（３）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ISP-培地１；ペプトン・イースト
・鉄寒天培地、ISP-培地６；チロシン寒天培地、ISP-培
地７；いずれも27℃培養）ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP-培地６）におい
ては陰性である。トリプトン・イースト・ブロス（ISP-
培地１）およびチロシン寒天培地（ISP-培地７）におい
てはおそらく陰性である。

【００３３】（４）炭素源の利用性（プリドハム・ゴト
リーブ寒天培地、ISP-培地９、27℃培養）Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、
ラムノースおよびＤ−マンニトールを利用して発育し、
Ｌ−アラビノースはおそらく利用する。イノシトールは
おそらく利用せず、シュクロースおよびラフィノースは
利用しない。（５）硝酸塩の還元反応（0.1%硝酸カリウム含有ペプト
ン水、ISP-培地８、27℃培養）陰性である。

【００３４】以上を要約すると、ＭＫ６７−ＣＦ９株
は、その形態上、分枝した基生菌糸より気菌糸を伸長す
る。気菌糸の先端はらせん状あるいはループ状を呈す
る。輪生枝、集束菌糸、胞子のうは認められない。成熟
した胞子鎖には５〜20個以上の長円形の胞子を連鎖し、
その表面は平滑である。種々の培地で、うす黄〜うす黄
茶の発育上に、黄味灰〜緑味白の気菌糸を着生し、溶解
性色素はISP-培地２、５および７で茶色味を帯びるが、
他の培地では認められない。生育至適温度は、27℃付近
である。メラニン様色素の生成は、ISP-培地６では陰
性、ISP-培地１および７ではおそらく陰性である。スタ
ーチの水解性は陰性である。なお、細胞壁に含まれる2,
6-ジアミノピメリン酸はLL-型であった。

【００３５】これらの性状より、ＭＫ６７−ＣＦ９株
は、ストレプトミセス（Streptomyces）属に属すると考
えられる。近縁の既知菌種を検索すると、ストレプトミ
セス・ニベウス（Streptomyces niveus）〔文献１：Shi
rling, E.B. and D. Gottlieb,「International Journa
l of Systematic Bacteriology」18巻、152頁、1968年
および文献２：Skerman, V.B.D., V.McGowan and P. H.
A. Sneath, 「International Journal of Systematic
Bacteriology」30巻、394頁、1980年〕、およびストレ
プトミセス・オリバセオビリディス（Streptomyces oli
vaceoviridis）〔文献１：Shirling, E.B. and D. Gott
lieb,「International Journal of Systematic Bacteri
ology」19巻、458頁、1969年および文献２：Skerman,
V.B.D., V.McGowan and P. H. A. Sneath, 「Internati
onal Journal of Systematic Bacteriology」30巻、395
頁、1980年〕があげられた。そこで、上記の２菌種およ
びＭＫ６７−ＣＦ９株を実地に比較検討する予定であ
る。したがって、現時点では、ＭＫ６７−ＣＦ９株をス
トレプトミセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＭＫ６
７−ＣＦ９とする。

【００３６】なお、ＭＫ６７−ＣＦ９株を工業技術院生
命工学工業技術研究所に寄託申請し、平成６年１０月２
８日、寄託番号 FERM P-14609として受託された。

【００３７】第２の本発明の方法において、テトロマイ
シンＡおよび（または）テトロマイシンＢは、ストレプ
トミセス属に属するテトロマイシン生産菌を適当な培地
で好気的に培養し、その培養液から目的の抗生物質を採
取することによって製造することができる。

【００３８】第２の本発明の方法においては、テトロマ
イシンＡおよび（または）テトロマイシンＢの製造の好
ましい実施方法は次の通りである。

【００３９】すなわち、テトロマイシン生産菌を栄養培
地中に接種して、適当な培養温度で好気的に振とうしな
がら培養し、テトロマイシンＡおよびＢを含む培養物を
得る。このような目的に用いる栄養培地としては、放線
菌の使用しうるものが使用される。栄養源として、例え
ば市販されているペプトン、酵母エキス、コーン、ステ
ィープ・リカー、硫酸アンモニウム等の窒素源が使用で
き、また、グリセリン、でん粉、グルコース、ガラクト
ース、デキストリン等の炭水化物あるいは脂肪などの炭
素源が使用できる。さらに食塩、炭酸カルシウム等の無
機塩を添加して使用できる。その他必要に応じて微量の
金属塩を添加することができる。これらの添加物は、テ
トロマイシン生産菌が利用し、テトロマイシンＡおよび
テトロマイシンＢの生産に役に立つものであればよく、
公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。

【００４０】テトロマイシンＡ、Ｂの大量生産のために
は、寒天培地上のＭＫ６７−ＣＦ９株の斜面培養から得
た生育物を接種菌として用い、これを栄養培地に接種し
て種母培養液を調製し、次いで種母培養液を大量の栄養
培地に接種して好気的に深部培養するのが都合よい。

【００４１】培養温度は、テトロマイシン生産菌の発育
が実質的に阻害されずに目的の抗生物質を生産しうる範
囲であれば、特に制約されるものではなく、使用する生
産菌に応じて選択できるが、好ましくは、２５〜３０℃
の範囲内の温度、特に２７℃付近の温度を挙げることが
できる。

【００４２】テトロマイシン生産菌として使用する場
合、ＭＫ６７−ＣＦ９株の生育は通常３ないし４日で最
高に達するが、一般に充分な抗菌活性が培地に付与され
るまで続ける。この培養液中のテトロマイシンＡ、Ｂの
力価の経時変化は、ミクロコッカス・ルテウスＩＦＯ
３３３３あるいはバチルス・ステアロサーモフィルスを
被検菌とする円筒平板法により測定できる。

【００４３】第２の本発明の方法においては、上記のよ
うにして得られた培養物からテトロマイシンＡおよび
（または）テトロマイシンＢを採取する。その採取法と
しては微生物の生産する代謝物を採取するのに用いられ
る手段を適宜利用することからなる。例えば、水と混ざ
らない溶媒による抽出の手段、各種吸着剤に対する吸着
親和性の差を利用する手段、ゲルろ過、向流分配を利用
したクロマトグラフィー等を単独または組み合わせて利
用しテトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢをそれぞ
れ単独に、あるいはそれらの混合物として採取できる。
また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶
媒抽出法や菌体破砕による溶出法により菌体から抽出し
上記と同様に単離精製して採取することができる。かく
して、前記した抗生物質テトロマイシンＡおよび（また
は）テトロマイシンＢが得られる。

【００４４】前記した通り、本発明によるテトロマイシ
ンＡおよびテトロマイシンＢは、メチシリン耐性菌のよ
うな薬剤耐性菌を含めて各種のグラム陽性細菌に対して
優れた抗菌活性を有し、しかも急性毒性が低い。

【００４５】従って、第３の本発明では、一般式（Ｉ）
のテトロマイシンＡまたはテトロマイシンＢあるいはこ
れら両者を有効成分として含有することを特徴とする抗
菌剤が提供される。

【００４６】第３の本発明の抗菌剤は、有効成分化合物
を製薬学的に許容できる常用の固体または液状担体、例
えばエタノール、水、でん粉等と混和して製剤化した組
成物の形であることができる。

【００４７】本発明のテトロマイシンを医療用抗菌剤と
して用いる場合には、一般に経口的にまたは非経口的に
投与できる。

【００４８】一般的に、テトロマイシンまたはその製薬
学的に許容できる塩は、賦形剤あるいは担体と混合して
注射剤、経口剤または坐剤などの製剤の形で投与され
る。賦形剤および担体としては製薬学上許容されるもの
が選ばれ、その種類および組成は投与経路や投与方法に
よって決まる。例えば、液状担体として水、アルコール
もしくは大豆油、ゴマ油、ミネラル油などの動植物油、
または合成油などが用いられる。固体担体としてマルト
ース、シュクロースなどの糖類、リジンなどのアミノ酸
類、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘
導体、シクロデキストリンなどの多糖類、ステアリン酸
マグネシウムなどの有機酸塩などが使用される。

【００４９】注射剤として製剤する場合には、テトロマ
イシンと混和できる液状担体は一般に生理食塩水、各種
緩衝液、グルコース、イノシトール、マンニトールなど
の糖類溶液、エチレングリコール、ポリエチレングリコ
ール、などのグリコース類であることができる。ま
た、、イノシトール、マンニトール、グルコース、マン
ノース、マルトース、シュクロースなどの糖類、フェニ
ルアラニンなどのアミノ酸類などの賦形剤と共に凍結乾
燥製剤とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤、例え
ば滅菌水、生理食塩水、ブドウ糖液、電解質溶液、アミ
ノ酸などの静脈投与用液体に溶解して使用できる。

【００５０】製剤された組成物中におけるテトロマイシ
ンの含量は製剤型により種々異なるが、通常は0.1〜99
重量％、好ましくは1〜90重量％である。例えば注射液
の場合には、通常0.1〜5重量％の含量でテトロマイシン
を含むようにすることがよい。経口投与の場合には、前
記固体担体もしくは液状担体と共に錠剤、カプセル剤、
粉剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、液剤、シロップ剤な
どの形態で用いられる。カプセル、錠剤、顆粒、粉剤の
場合、一般にテトロマイシンの含量は３〜100重量％、
好ましくは５〜90重量％であり、残部は担体である。

【００５１】本発明によるテトロマイシンの投与量は、
患者の年令、体重、症状、治療目的などにより決定され
る。しかし、その投与量は動物試験の結果など種々の状
況を勘案して総投与量が一定量を越えない範囲で、連続
的または間けつ的に投与できる。一定の条件下における
投与の適量と投与回数は、専門医の決定による。

【００５２】さらにまた、第４の本発明では、前記の一
般式（Ｉ）のテトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢ
を生産する特性を持つストレプトミセスＭＫ６７−Ｃ
Ｆ９株が新規で有用な微生物として提供される。

【００５３】以下に、実施例により本発明をさらに詳細
に説明する。実施例１抗生物質テトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢの製
造寒天斜面培地に培養したストレプトミセスＭＫ６７−
ＣＦ９株（FERM P-14609）を、でん粉２％、グルコース
２％、酵母エキス０．５％、食塩０．２５％、トースト
・ソーヤ・ミール２％、炭酸カルシウム０．３２％、無
機塩を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラス
コ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注して常法によ
り１２０℃で２０分滅菌した培地に接種した。その後２
７℃で５日間回転振とう培養した。これにより種母培養
液を得た。この種母培養液を、同様に三角フラスコに分
注し滅菌した前記の種母培地と同じ成分を含む液体培地
１０リットル（ｐＨ７．４に調整）に１％量で接種し、
２７℃で５日間回転振とう培養した。

【００５４】このようにして得られた培養液を遠心分離
して菌体を分離した。この培養ろ液は、酢酸エチル８リ
ットルで抽出してテトロマイシンＡおよびＢを分離し
た。その抽出液を、４リットルの水で水洗した後、酢酸
エチル層を分配した。また菌体には３リットルのメタノ
ールを加え、攪拌し、ろ過した。このメタノール溶液
は、減圧下で濃縮した後、濃縮液から酢酸エチル５００
ｍｌでテトロマイシンＡおよびＢを抽出し、その抽出液
を５００ｍｌの水で水洗した。その後、その抽出液を培
養ろ液由来の酢酸エチル抽出液とあわせて無水硫酸ナト
リウムで脱水した。脱水後の抽出液を減圧下で濃縮し、
得られた残さ５．２９ｇをシリカゲルクロマトグラフィ
ー（１４３ｇ）にかけ、トルエンで洗浄した後、トルエ
ン−酢酸エチル（５０：１〜１：２）で溶出した。

【００５５】このうちテトロマイシンＡを含む抗菌活性
画分およびテトロマイシンＢを含む抗菌活性画分をそれ
ぞれ集めて減圧下で濃縮してテトロマイシンＡについて
は９３０．２ｍｇのうす黄色の油状物質を得、またテト
ロマイシンＢについては１０１５．４ｍｇのうす黄色の
油状物質をそれぞれ得た。

【００５６】テトロマイシンＡとして得た上記のうす黄
色の油状物質をアセトニトリル溶液中で結晶化し３１
２．９ｍｇの柱状結晶としてテトロマイシンＡを得た。
テトロマイシンＢとして得た上記のうす黄色の油状物質
を遠心液液クロマトグラフィーによりアセトニトリル−
ヘキサンの溶媒系を用いて溶出し、１８０．８ｍｇの白
色粉末を得た。さらにアセトニトリル溶液中で結晶化
し、１４８．９ｍｇの針状結晶としてテトロマイシンＢ
を得た。

【００５７】

【発明の効果】本発明によるテトロマイシンＡおよびＢ
は多剤耐性菌を含めて各種のグラム陽性菌に優れた抗菌
活性を有し且つ低毒性があって優れた抗菌剤として有用
である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はテトロマイシンＡの紫外線吸収スペクト
ルである。

【図２】図２はテトロマイシンＡのＫBr錠剤法で測定し
た赤外線吸収スペクトルである。

【図３】図３はテトロマイシンＡの重クロロホルム溶液
中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核
磁気共鳴スペクトルである。

【図４】図４はテトロマイシンＡの重クロロホルム溶液
中にて室温にて測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３
核磁気共鳴スペクトルである。

【図５】図５はテトロマイシンＢの紫外線吸収スペクト
ルである。

【図６】図６はテトロマイシンＢのＫBr錠剤法で測定し
た赤外線吸収スペクトルである。

【図７】図７はテトロマイシンＢの重クロロホルム溶液
中にて室温にて測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン
核磁気共鳴スペクトルである。

【図８】図８はテトロマイシンＢの重クロロホルム溶液
中にて室温にて測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３
核磁気共鳴スペクトルである。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成７年５月２４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１１】（10）溶解性クロロホルム、アセトンおよび酢酸エチルに可溶で水に
不溶である。（11）ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製）の薄層クロマトグ
ラフィーで展開溶媒としてトルエン−酢酸エチル（６：
１）で展開した時のＲｆ値は0.41である。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１６】（10）溶解性クロロホルム、アセトンおよび酢酸エチルに可溶で水に
不溶である。（11）ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ₂₅₄（メルク社製）の薄層クロマトグ
ラフィーで展開溶媒としてトルエン−酢酸エチル（６：
１）で展開した時のＲｆ値は0.26である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者高橋良和東京都多摩市桜ケ丘３丁目２番地の３ (72)発明者澤竜一神奈川県綾瀬市西４丁目６番７号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の一般式（Ｉ）〔式中、ＲはテトロマイシンＡではアセチル基を示し、
テトロマイシンＢでは水素原子を示す〕で表わされる抗
生物質テトロマイシンＡおよびテトロマイシンＢ、ある
いはその塩。
【請求項２】ストレプトミセス属に属する請求項１に
記載の一般式（Ｉ）のテトロマイシンＡおよびテトロマ
イシンＢの生産菌を培養し、培養物からテトロマイシン
ＡまたはテトロマイシンＢあるいはこれら両者を採取す
ることを特徴とする、抗生物質テトロマイシンＡおよび
（または）テトロマイシンＢの製造方法。
【請求項３】請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表され
るテトロマイシンＡまたはテトロマイシンＢあるいはこ
れら両者を有効成分として含有することを特徴とする抗
菌剤。
【請求項４】請求項１に記載の一般式（Ｉ）テトロマ
イシンＡおよびテトロマイシンＢを生産する特性を持つ
ストレプトミセスＭＫ６７−ＣＦ９株。