JPH0737B2 - スタウロスポリン発酵法 - Google Patents
スタウロスポリン発酵法Info
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- JPH0737B2 JPH0737B2 JP2333494A JP33349490A JPH0737B2 JP H0737 B2 JPH0737 B2 JP H0737B2 JP 2333494 A JP2333494 A JP 2333494A JP 33349490 A JP33349490 A JP 33349490A JP H0737 B2 JPH0737 B2 JP H0737B2
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- Japan
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- staurosporine
- strain
- medium
- producing
- streptomyces
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/55—Streptomyces hygroscopicus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
- Y10S435/898—Streptomyces hygroscopicus
Description
【発明の詳細な説明】 発明の背景 （１） 発明の分野 本発明は、アルカロイド化合物スタウロスポリンを製造
するための新規微生物的方法に関する。
するための新規微生物的方法に関する。
（２） 従来技術の説明 スタウロスポリンは構造、 を有する既知アルカロイド化合物である。米国特許第4,
107,297号はストレプトマイセス・スタウロスポレウス
（Streptomyces staurosporeus）nov.sp.NRRL11,184の
発酵によるスタウロスポリン（該文献中にAM−2282と称
されている）の製造を開示している。スタウロスポリン
の分子構造に関する情報はジャーナル・オブ・ケミカル
・ソサイエティー、ケミカル・コミュニケーションズ
（J.Chem.Soc.Chem.Comm）、1978:800〜801、1978中に
記載されていた。
107,297号はストレプトマイセス・スタウロスポレウス
（Streptomyces staurosporeus）nov.sp.NRRL11,184の
発酵によるスタウロスポリン（該文献中にAM−2282と称
されている）の製造を開示している。スタウロスポリン
の分子構造に関する情報はジャーナル・オブ・ケミカル
・ソサイエティー、ケミカル・コミュニケーションズ
（J.Chem.Soc.Chem.Comm）、1978:800〜801、1978中に
記載されていた。
スタウロスポリンは抗菌活性（主に酵母および真菌に対
して）を有することが知られ、また血圧低下活性を有す
ることが報告されている。米国特許第4,735,039号はス
タウロスポリンがまた殺虫活性を有することを開示して
いる。
して）を有することが知られ、また血圧低下活性を有す
ることが報告されている。米国特許第4,735,039号はス
タウロスポリンがまた殺虫活性を有することを開示して
いる。
発明の概要 本発明はスタウロスポリンを製造するための新規微生物
学的方法に関する。新方法はストレプトマイセス・ハイ
グロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）のスタ
ウロスポリン産生株、最も好ましくはストレプトマイセ
ス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicu
s）C39280−450−９株（ATCC53730）あるいはそのスタ
ウロスポリン産生突然変異体または変異体を、炭素およ
び窒素の資化性源を含む水性普通培地中で、液内好気性
条件下に実質量のスタウロスポリンが前記培地中に前記
生産菌により生産されるまで培養し、次いでスタウロス
ポリンを前記培地から回収することを含む。
学的方法に関する。新方法はストレプトマイセス・ハイ
グロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）のスタ
ウロスポリン産生株、最も好ましくはストレプトマイセ
ス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicu
s）C39280−450−９株（ATCC53730）あるいはそのスタ
ウロスポリン産生突然変異体または変異体を、炭素およ
び窒素の資化性源を含む水性普通培地中で、液内好気性
条件下に実質量のスタウロスポリンが前記培地中に前記
生産菌により生産されるまで培養し、次いでスタウロス
ポリンを前記培地から回収することを含む。
詳細な説明 本発明の好ましいスタウロスポリン生産菌は、ここにス
トレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces
hygroscopicus）C39280−450−９株として示されるス
トレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces
hygroscopicus）の新規株である。この株は日本国、静
岡県沼津市で捕集した土壌試料から分離された。C39280
−450−９株の生物学的に純粋な培養株はアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Cu
lture,Rockville,Maryland）に寄託され、ATCC53730と
してその微生物の永久コレクションに加えられた。C392
80と称されるこの培養株はまた、ブリストル・マイヤー
ズ・スクイブ・ファルマシューティカル・リサーチ・ア
ンドデベロープメント・ディビジョン・カルチャー・コ
レクション（Bristotol−Myers Squibb Pharmaceutical
Research and Development Division Culture Collect
ion,5Research Parkway,Wallingford,Connecticut0649
2）において凍結乾燥管および低温貯蔵バイアル中に休
眠菌株として維持されている。
トレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces
hygroscopicus）C39280−450−９株として示されるス
トレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces
hygroscopicus）の新規株である。この株は日本国、静
岡県沼津市で捕集した土壌試料から分離された。C39280
−450−９株の生物学的に純粋な培養株はアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Cu
lture,Rockville,Maryland）に寄託され、ATCC53730と
してその微生物の永久コレクションに加えられた。C392
80と称されるこの培養株はまた、ブリストル・マイヤー
ズ・スクイブ・ファルマシューティカル・リサーチ・ア
ンドデベロープメント・ディビジョン・カルチャー・コ
レクション（Bristotol−Myers Squibb Pharmaceutical
Research and Development Division Culture Collect
ion,5Research Parkway,Wallingford,Connecticut0649
2）において凍結乾燥管および低温貯蔵バイアル中に休
眠菌株として維持されている。
C39280−450−９株で行なった分類学研究の結果は、該
株がストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Strept
omyces hygroscopicus）の新規株であることを示す。C3
9280−450−９株はシャーリングおよびゴットリーブ（S
hirling＆Gottlieb）〔インタナショナル・ジャーナル
・オブ・システマチック・バクテリオロジー（Int.J.Sy
st.Bacteriology）、16;313〜340、1966;同上、18;69〜
189、1968;同上、22;265〜394、1972〕、スタネックほ
か（Staneck＆Roberts）、〔アプライド・ミクロバイオ
ロジー（Appl.Microbiol.）、28;226〜31、1974〕、シ
ャール（K.P.Schaal）〔M.グッド・フェローほか（M.Go
od Fellow and D.E.Minnikin）編、細菌分類学における
化学的方法（Chemical Methods in Bacterial Systemat
ics）、アカデミック・プレス（Academic Press In
c.）、PP.359〜381、1985〕により記載された物質およ
び操作により決定し、次の性質を有する。
株がストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Strept
omyces hygroscopicus）の新規株であることを示す。C3
9280−450−９株はシャーリングおよびゴットリーブ（S
hirling＆Gottlieb）〔インタナショナル・ジャーナル
・オブ・システマチック・バクテリオロジー（Int.J.Sy
st.Bacteriology）、16;313〜340、1966;同上、18;69〜
189、1968;同上、22;265〜394、1972〕、スタネックほ
か（Staneck＆Roberts）、〔アプライド・ミクロバイオ
ロジー（Appl.Microbiol.）、28;226〜31、1974〕、シ
ャール（K.P.Schaal）〔M.グッド・フェローほか（M.Go
od Fellow and D.E.Minnikin）編、細菌分類学における
化学的方法（Chemical Methods in Bacterial Systemat
ics）、アカデミック・プレス（Academic Press In
c.）、PP.359〜381、1985〕により記載された物質およ
び操作により決定し、次の性質を有する。
形態学 C39280−450−９株の形態学特性には：（１）非分断性
基質および気中菌糸の形成、（２）気中菌糸上の分枝胞
子柄から生ずる分節胞子のら旋鎖、胞子鎖は２〜６回転
を有する、（３）滑らかな胞子刻紋、が包含される。
基質および気中菌糸の形成、（２）気中菌糸上の分枝胞
子柄から生ずる分節胞子のら旋鎖、胞子鎖は２〜６回転
を有する、（３）滑らかな胞子刻紋、が包含される。
培養および生理学的特性 記述培地で観察された細菌学特性は表１中に総括され
る。吸湿性変化がISP培地No.4および修正ベンネットの
培地中に明らかである。可溶性馬鈴薯デンプンおよびグ
ルコースが生育に利用される。イノシトールの利用は疑
問である。生理学的特徴は表２中に総括される。
る。吸湿性変化がISP培地No.4および修正ベンネットの
培地中に明らかである。可溶性馬鈴薯デンプンおよびグ
ルコースが生育に利用される。イノシトールの利用は疑
問である。生理学的特徴は表２中に総括される。
細胞壁化学 C39280−450−９株全細胞水解物の分析による細胞壁成
分は、LL−ジアミノピメリン酸、ガラクトース、リボー
スおよびマンノースであった、従って生産菌の細胞壁帰
属はＩ型であった。リン脂質分析はホスファチルエタノ
ールアミンおよびホスファチジルグリセロールの存在が
検出され、リン脂質としてPII型として分類された。
分は、LL−ジアミノピメリン酸、ガラクトース、リボー
スおよびマンノースであった、従って生産菌の細胞壁帰
属はＩ型であった。リン脂質分析はホスファチルエタノ
ールアミンおよびホスファチジルグリセロールの存在が
検出され、リン脂質としてPII型として分類された。
表2.C39280−450−９株の生理学的特性 増殖温度 10℃〜37℃ pH耐性 5.5〜9 NaCl耐性 １％〜８％ ゼラチン液化 ＋ デンプン加水分解 ＋ ウレアーゼ ＋ ミルク凝結 − ペプトン化 ＋ ナイトレート還元 − リゾチーム − C39280−450−９株の形態学特性および細胞化学は、そ
れをストレプトマイセス（Streptomyces）種として分類
する。さらにストレプトマイセス・ハイグロスコピカス
（Streptomyces hygroscopicus）株としての分類は微生
物体のら旋状胞子鎖の密集および以後の吸湿特性により
確証される。
れをストレプトマイセス（Streptomyces）種として分類
する。さらにストレプトマイセス・ハイグロスコピカス
（Streptomyces hygroscopicus）株としての分類は微生
物体のら旋状胞子鎖の密集および以後の吸湿特性により
確証される。
本発明によるスタウロスポリンの製造に対して前記特定
の好ましい株に限定することが意図されていないことを
理解すべきである。ストレプトマイセス・ハイグロスコ
ピカス（Streptomyces hygroscopicus）の他のスタウロ
スポリン産生株、殊に既知操作例えばＸ線または紫外線
による照射、ナイトロジェンマスタードによる処理、フ
ァージ暴露などにより生ずる寄託株の変異体または突然
変異体を発明の範囲内に包含することが殊に望ましくか
つ意図されている。
の好ましい株に限定することが意図されていないことを
理解すべきである。ストレプトマイセス・ハイグロスコ
ピカス（Streptomyces hygroscopicus）の他のスタウロ
スポリン産生株、殊に既知操作例えばＸ線または紫外線
による照射、ナイトロジェンマスタードによる処理、フ
ァージ暴露などにより生ずる寄託株の変異体または突然
変異体を発明の範囲内に包含することが殊に望ましくか
つ意図されている。
スタウロスポリンの製造 スタウロスポリンは、本発明により、ストレプトマイセ
ス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicu
s）のスタウロスポリン産生株、好ましくはC39280−450
−９株（ATCC53730）の確認特性を有するストレプトマ
イセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscop
icus）の株あるいはその突然変異体または変異体を、通
常の水性普通培地中で培養することにより製造すること
ができる。微生物体は放射菌類に対する既知栄養源、す
なわち、炭素および窒素の資化性源、加えて、場合によ
り無機塩および他の既知増殖因子を含む普通培地中で増
殖させる。液内好気性条件が多量の抗生物質の生成に対
して好ましく使用されるが、しかし限定量の生産には表
面培養およびボトルもまた使用できる。他の放線菌類の
培養に対して行われる一般的操作を本発明に適用でき
る。
ス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicu
s）のスタウロスポリン産生株、好ましくはC39280−450
−９株（ATCC53730）の確認特性を有するストレプトマ
イセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscop
icus）の株あるいはその突然変異体または変異体を、通
常の水性普通培地中で培養することにより製造すること
ができる。微生物体は放射菌類に対する既知栄養源、す
なわち、炭素および窒素の資化性源、加えて、場合によ
り無機塩および他の既知増殖因子を含む普通培地中で増
殖させる。液内好気性条件が多量の抗生物質の生成に対
して好ましく使用されるが、しかし限定量の生産には表
面培養およびボトルもまた使用できる。他の放線菌類の
培養に対して行われる一般的操作を本発明に適用でき
る。
普通培地は適当な炭素源例えばスクロース、ラクトー
ス、グルコース、ラムノース、フルクトース、グリセロ
ールまたは溶性デンプンを含有すべきである。資化性窒
素源例えば魚粉、ペプトン、落花生粕、綿実粕またはコ
ーンスティープリカーもまた使用すべきである。栄養無
機塩もまた、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カ
ルシウム、リン酸、硫酸、塩化物、臭化物、硝酸、炭酸
などのイオンを与えるように培地中に加えることができ
る。
ス、グルコース、ラムノース、フルクトース、グリセロ
ールまたは溶性デンプンを含有すべきである。資化性窒
素源例えば魚粉、ペプトン、落花生粕、綿実粕またはコ
ーンスティープリカーもまた使用すべきである。栄養無
機塩もまた、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カ
ルシウム、リン酸、硫酸、塩化物、臭化物、硝酸、炭酸
などのイオンを与えるように培地中に加えることができ
る。
スタウロスポリンの製造は、生産菌の良好な増殖を行な
うことができる任意の温度例えば10〜37℃で行なうこと
ができ、通常約28℃の温度で行なわれる。発酵はフラス
コ中、あるいは種々の容量の実験室または工業的発酵槽
中で行なうことができる。タンク発酵を用いるとき、小
容量の培地に生産菌の斜面培養菌株または凍結乾燥菌株
を接種することにより普通ブロス中に増殖形接種菌を生
成させることが望ましい。この方法で生育可能な活性接
種菌を得た後、それを、スタウロスポリンの大規模生産
のための生産培地を仕込んだ発酵タンクに無菌的に移
す。増殖形接種菌を調製する培地は、それが生産菌の良
好な増殖を得させさえすればタンク中に用いるものと同
じであっても又異なっていてもよい。発酵の間のかくは
んを機械的撹拌装置により与えることができる。消泡剤
例えばラード油またはシリコーン油を、必要であれば添
加することができる。抗生物質の生産は高速液体クロマ
トグラフィー（HPLC）検定により、または普通の生物学
的検定によりモニターすることができる。
うことができる任意の温度例えば10〜37℃で行なうこと
ができ、通常約28℃の温度で行なわれる。発酵はフラス
コ中、あるいは種々の容量の実験室または工業的発酵槽
中で行なうことができる。タンク発酵を用いるとき、小
容量の培地に生産菌の斜面培養菌株または凍結乾燥菌株
を接種することにより普通ブロス中に増殖形接種菌を生
成させることが望ましい。この方法で生育可能な活性接
種菌を得た後、それを、スタウロスポリンの大規模生産
のための生産培地を仕込んだ発酵タンクに無菌的に移
す。増殖形接種菌を調製する培地は、それが生産菌の良
好な増殖を得させさえすればタンク中に用いるものと同
じであっても又異なっていてもよい。発酵の間のかくは
んを機械的撹拌装置により与えることができる。消泡剤
例えばラード油またはシリコーン油を、必要であれば添
加することができる。抗生物質の生産は高速液体クロマ
トグラフィー（HPLC）検定により、または普通の生物学
的検定によりモニターすることができる。
最適ブロス力価が得られた後、スタウロスポリンを、実
施例４に記載するような通常の抽出およびクロマトグラ
フィー技術により培地から回収することができる。
施例４に記載するような通常の抽出およびクロマトグラ
フィー技術により培地から回収することができる。
本発明の方法により得られるスタウロスポリンは、文献
に記載されている該抗生物質の特性と同じ特性を示す。
に記載されている該抗生物質の特性と同じ特性を示す。
次の実施例は単に本発明の例示のために提供され、全く
本発明の範囲を限定するものではない。
本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１ C39280−450−９株の凍結保存培養株の調製 C39280−450−９株をレブコ（Revco）超低温フリーザー
中に−80℃で貯蔵した凍結保存菌株として維持した。凍
結保存菌株を調製するため、C39280−450−９株を試験
管中に、ISP培地No.4〔ディフコ（Difco）〕の寒天斜面
上に移した。
中に−80℃で貯蔵した凍結保存菌株として維持した。凍
結保存菌株を調製するため、C39280−450−９株を試験
管中に、ISP培地No.4〔ディフコ（Difco）〕の寒天斜面
上に移した。
寒天斜面を28℃で14日間培養した。増殖形菌株を、 ルコー 20g ペプトン 5g 魚粉エキス 5g 酵母エキス 3g CaCo3 4g 脱イオン水 十分量 １リットルまで からなる無菌栄養培地100mlを入れた500ml三角フラスコ
へ斜面培養から表面増殖を移すことにより調製した。
へ斜面培養から表面増殖を移すことにより調製した。
この増殖形菌株を28℃で72時間、230rpmにセットした回
転振とう機上で培養した。増殖形菌株を、 スクロース 100g グリセロール 200g 脱イオン水 十分量 １リットルまで からなる凍結保護溶液等容量と混合した。
転振とう機上で培養した。増殖形菌株を、 スクロース 100g グリセロール 200g 脱イオン水 十分量 １リットルまで からなる凍結保護溶液等容量と混合した。
この混合物の5ml部分を無菌低温貯蔵管〔ヌンク（Nun
c）〕に移し、ドライアイス−アセトン浴中で凍結し
た。凍結した増殖形菌株を次いでレブコ（Revco）超低
温フリーザー中に−80℃で貯蔵した。
c）〕に移し、ドライアイス−アセトン浴中で凍結し
た。凍結した増殖形菌株を次いでレブコ（Revco）超低
温フリーザー中に−80℃で貯蔵した。
実施例２ C39280−450−９株の増殖形菌株の調製 凍結保存菌株5mlを、実施例１に記載した栄養培地と同
じ組成を有する無菌栄養培地100mlを入れた500ml三角フ
ラスコに移すことにより増殖形菌株を調製した。増殖形
菌株を28℃で72時間、250回転／分にセットした回転振
とう機上で培養した。
じ組成を有する無菌栄養培地100mlを入れた500ml三角フ
ラスコに移すことにより増殖形菌株を調製した。増殖形
菌株を28℃で72時間、250回転／分にセットした回転振
とう機上で培養した。
実施例３ 振とうフラスコ培養中によるスタウロスポリンの発酵 実施例２の操作により調製した増殖形菌株4mlを、 グルコース 30g ニュートリソイ（Nutrisoy） 15g CaCO3 4g 脱イオン水 十分量 １リットルまでからなる生産培地
100mlをそれぞれ入れた500ml三角フラスコ中へ接種し
た。
100mlをそれぞれ入れた500ml三角フラスコ中へ接種し
た。
生産菌を28℃で250回転／分にセットした回転振とう機
上で培養した。スタウロスポリンの生成はHPLC分析によ
りモニターした。130μg/mlの最適生成は６日の発酵で
達せられた。
上で培養した。スタウロスポリンの生成はHPLC分析によ
りモニターした。130μg/mlの最適生成は６日の発酵で
達せられた。
実施例４ スタウロスポリンの分離および精製 実施例３の一般的操作により得られた全ブロス（10）
をダイカライト（Dicalite）濾過補助剤を用いて濾過し
た。菌糸マットをテトラヒドロフラン（THF）（２リッ
トル）中で１時間かくはんした後濾過し、さらにアセト
ン（１リットル）で洗浄した。濾液を減圧下に濃縮して
水溶液とし、ブライン（１リットル）で容積を増加し、
水層をクロロホルム（１リットル,2回）で抽出すると粗
抽出物45gが得られた。粗抽出物のCHCl3−CH3OH−THF
（1:1:1,v/v）可溶性物質をシリカゲル〔リクロプレプ
（Licroprep）Si60,40〜63μｍ、EMサイエンス（EM Sci
ence）〕16g上に吸着させ、他の54gのシリカゲルを入れ
た150mlVLC（真空液体クロマトグラフィー）カラムに装
填した。ヘキサン−THF段階勾配溶出を行なった。半精
製スタウロスポリンがヘキサン−THF（1:4,v/v）で溶離
した。画分は合わせて3gであった。
をダイカライト（Dicalite）濾過補助剤を用いて濾過し
た。菌糸マットをテトラヒドロフラン（THF）（２リッ
トル）中で１時間かくはんした後濾過し、さらにアセト
ン（１リットル）で洗浄した。濾液を減圧下に濃縮して
水溶液とし、ブライン（１リットル）で容積を増加し、
水層をクロロホルム（１リットル,2回）で抽出すると粗
抽出物45gが得られた。粗抽出物のCHCl3−CH3OH−THF
（1:1:1,v/v）可溶性物質をシリカゲル〔リクロプレプ
（Licroprep）Si60,40〜63μｍ、EMサイエンス（EM Sci
ence）〕16g上に吸着させ、他の54gのシリカゲルを入れ
た150mlVLC（真空液体クロマトグラフィー）カラムに装
填した。ヘキサン−THF段階勾配溶出を行なった。半精
製スタウロスポリンがヘキサン−THF（1:4,v/v）で溶離
した。画分は合わせて3gであった。
次の精製をセファデックス（Sephadex）LH−20で行なっ
た。溶出画分をCHCl3−CH3OH−THF（1:1:1,v/v）に溶解
し、THF−CHCl3（2:1,v/v）で平衡させたカラムに装填
した。流量は1.3ml/分であった。スタウロスポリンは3/
4ベッド体積で溶出した（1.4g）。この物質を、THFで平
衡させた第2LH−20カラムに装填した。スタウロスポリ
ン（1.16g）が１ベッド容積で溶出した。
た。溶出画分をCHCl3−CH3OH−THF（1:1:1,v/v）に溶解
し、THF−CHCl3（2:1,v/v）で平衡させたカラムに装填
した。流量は1.3ml/分であった。スタウロスポリンは3/
4ベッド体積で溶出した（1.4g）。この物質を、THFで平
衡させた第2LH−20カラムに装填した。スタウロスポリ
ン（1.16g）が１ベッド容積で溶出した。
上記操作により得られたスタウロスポリンはすべての点
で（1H−NMR、13C−NMR、UV、IR、質量スペクトル、HPL
C PR−C18）、スタウロスポリンに対する公表された理
化学データに一致した。
で（1H−NMR、13C−NMR、UV、IR、質量スペクトル、HPL
C PR−C18）、スタウロスポリンに対する公表された理
化学データに一致した。
フロントページの続き (72)発明者 ジャックリーン エム マッティ アメリカ合衆国 コネチカット州 イース ト ヘヴン ベルマン ストリート ８ (72)発明者 グレース エイ ヘスラー アメリカ合衆国 コネチカット州 ブラン フォード フローレンス ロード 125- ２ビー
Claims (2)
- 【請求項１】ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス
（Streptomyces hygroscopicus）のスタウロスポリン産
生株を水性普通培地中で液内好気性条件下に、実質量の
スタウロスポリンが前記培地中に前記生産菌株により生
産されるまで培養し、共生産物質を実質的に含まない培
地からスタウロスポリンを回収することを含む、スタウ
ロスポリンを製造する方法。 - 【請求項２】生産菌がストレプトマイセス・ハイグロス
コピカス（Streptomyces hygroscopicus）C39280−450
−９株（ATCC53730）あるいはそのスタウロスポリン産
生突然変異体または変異体である、請求項（１）記載の
方法。
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