JPH0343266B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な抗生物質とその製造法に関する
ものであり、さらに詳しくはストレプトマイセス
属に属するピロロマイシンＦ生産菌を培地に培養
し、得られた培養物から採取される新抗生物質ピ
ロロマイシンＦならびにその製法に関するもので
ある。 本発明者らは、先に微生物の培養液中から新抗
生物質ピロロマイシンＡ，Ｂ，Ｃ及びＤ（SF−
2080A，Ｂ，Ｃ及びＤ）を得て、それらの化学構
造及び有用性を明らかにした（J.Antibiotics誌
1363頁，1981年、特開昭56−90099号、特開昭57
−56492号，特開昭57−53494号）。 ついで本発明者らは、当該培養液中から新規な
抗生物質ピロロマイシンＦを得、更に本抗生物質
を構成成分ピロロマイシンF₁，F₂及びF₃に分離
し、それぞれの純物質を得て、その理化学性状及
び生物学的性状を明らかにして、本発明を完成し
た。本発明に言うピロロマイシンＦはピロロマイ
シンF₁，F₂及びF₃の総称であり、またピロロマ
イシンF₁，F₂及びF₃はいずれも抗菌・抗カビ剤
として有用である。 本発明の抗生物質ピロロマイシンＦは下記の一
般式で示される。 （式中、Ｘは塩素原子もしくは臭素原子を表わ
す。ただし、Ｘがすべて塩素原子の場合は除く。）
ピロロマイシンＦとして、後記する理化学的性状
を有するピロロマイシンF₁，F₂およびF₃の３種
類の化合物がある。 本発明の方法に用いられる抗生物質ピロロマイ
シンＦの生産菌としては、その培養液中に採取す
るに充分な量のピロロマイシンＦ生産能を有する
ものがある。このような菌株としては、例えば本
発明者らによつて長野県長野市の千曲川の川底の
土壌より分離されたストレプトマイセス・エスピ
ー・SF−2080株がある。この菌株は菌学的性状
が特開昭56−90099号に本発明者らによつて開示
されているものと同一であり、ストレプトマイセ
ス・エスピー・SF−2080として微工研に寄託さ
れ、その受託番号は微工研菌寄第5072号である。 SF−2080株は、他の放線菌の菌株を場合にみ
られるように、その性状が変化しやすく、例えば
紫外線，エツツクス線，高周波，放射線，薬品等
を用いる人工的変異手段で変異しうるものであ
り、このようにして得られる変異株であつて抗生
物質ピロロマイシンＦの生産能を有するものは、
すべて本発明の方法に使用することができる。 本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が
利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄
養源としては、従来放線菌の培養に利用されてい
るものが使用できる。例えば炭素源としてグルコ
ース，グリセロール，シユークロース，でんぷ
ん，デキストリン，水あめ、糖みつ，大豆油等を
使用しうる。また窒素源としては大豆粉，小麦胚
芽，綿実かす，肉エキス，ペプトン，酵母エキ
ス，乾燥酵母，コーン・ステイープ・リカー，硫
酸アンモニウム，硫酸ソーダ等を使用することが
できる。その他必要に応じて炭酸カルシウム，臭
化ナトリウム，塩化コバルト，燐酸塩等の無機塩
を添加したり、菌の発育を助け、抗生物質ピロロ
マイシンＦの生産を促進するごとく有機物および
無機物を適当に添加することができる。 培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同
じく好気的条件下で深部培養法が最も適してい
る。培養に適当な温度は25〜34℃であるが、多く
の場合28〜32℃で培養する。抗生物質ピロロマイ
シンＦの生産は振とう培養、タンクク培養共に２
〜７日で蓄積が最高に達し、抗生物質ピロロマイ
シンＦは培養液内および菌体成分（固型分）内
に蓄積される。 抗生物質ピロロマイシンＦの定量は例えばバチ
ルス・ズプチリス（Bacillus subtilis）を用い
る生物検定およびシリカゲル薄層クロマトグラフ
イーを用いる化学検定を併用して行うことができ
る。 ピロロマイシンＦは後記する理化学性状を有す
るので、その性状に従つて抽出，精製することが
可能であり、以下に示す方法が効率的である。す
なわち、有効成分を含む培養物に酢酸エチル等の
水と自由に混和しない有機溶剤を加え撹拌し、固
型物を液より有機溶媒層を分離して有効成分の
抽出液を得る。本抽出液を濃縮して得た油状の残
留物に、良く知られた精製方法、例えば各種の溶
媒及び担体を用いたカラムクロマトグラフイー，
再結晶法などを組み合わせて使用し、抗生物質ピ
ロロマイシンＦを単離する。かくして得られたピ
ロロマイシンＦはいずれもその理化学性状から、
純物質であることが示されている。前記の方法で
得られた抗生物質ピロロマイシンＦの理化学性状
（第１表）並びに寒天希釈法で測定した各種の微
生物に対する最小発育阻止濃度（第２表）は以下
に示す通りである。 なお、ピロロマイシンF₁，F₂，F₃の化学構造
式を以下に示す。 または

【表】 〓ヘキサンに難溶

【表】 ゲイタス
前記したピロロマイシンＦの理化学性状および
生物学的性状を既知抗生物質のそれと比較した
が、該当する物質はなく、これら物質はいずれも
新規な抗生物質である。 以下にピロロマイシンＦの製造法の実施例を示
すが、ここに例示しなかつた多くの変形、修飾手
段を用いうることはもちろんである。 実施例 ぶどう糖２％，ペプトン0.5％，酵母エキス0.3
％，大豆粉0.2％，肉エキス0.2％および炭酸カル
シウム0.1％，臭化ナトリウム0.1％の組成を有す
る液体培地を調製し、100ml容の三角フラスコに
20mlずつ分注して殺菌し、これにストレプトマイ
セス・エスピー・SF−2080株（微工研菌寄5072
号）を接種し、28℃で５日間振とう培養して第１
種菌液とし、以下同じ培地で順次容量を大きくし
て第２，第３種菌液を作成した。別に水あめ２
％，大豆油0.15％，大豆粉１％，サングレイン
0.25％，フアーマメデイア0.5％，硫酸第一鉄
0.0005％，塩化ニツケル0.00005％，塩化コバル
ト0.00005％，炭酸カルシウム0.1％および臭化ナ
トリウム0.1％の組成を有する培地35を50容
のステンレス製醗酵槽に仕込み、殺菌後、前記の
第３種菌液800mlを接種し、28℃で通気撹拌培養
を行つた。通気量は35／分，回転数は300回／
分である。120時間後に培養を中止し、培養液を
PH２に調節し、酢酸エチル20を加えて撹拌後、
固型分を別し、液から酢酸エチル層を分離し
た。酢酸エチル溶液を減圧下に１まで濃縮し、
水１及び５％水酸化ナトリウム溶液を加え、PH
7.5で撹拌した。酢酸エチル層を分液し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥の後、塩基性アルミナ250ｇ
のカラムを通し抗生物質を吸着させた。アルミナ
カラムを酢酸エチル500mlで洗つたのち、酢酸エ
チル−濃塩酸混合物（500：７）で溶出を行い、
ピロロマイシンＦ含有フラクシヨン1.0を分画し
減圧下に濃縮すると、黄色油状物4.4ｇが残留し
た。シリカゲル200ｇのカラムクロマトグラフイ
ー（溶媒系；ベンゼン／酢酸エチル＝10/1で精製
し、ピロロマイシンＦ粗結晶0.98ｇを得た。この
粗結晶300mgをメタノール10mlに溶解し、セフア
デツクスLH−20 1.0（溶媒系；メタノール／
水＝3/2）でカラムクロマトグラフイーを行つた。
混合溶媒５を通過させたのち、溶出した淡黄色
溶液を20mlづつ分画し、各分画をバチルス・ズブ
チルス（Bacillus subtilis）を用いたペーパ
ー・デイスク法により検定した。フラクシヨン86
〜155を合併し濃縮するとピロロマイシンF₃49.2
mgが黄色針状結晶として得られた。同様にして、
フラクシヨン166〜224からピロロマイシンF₂97.8
mg，フラクシヨン225〜295からピロロマイシン
F₁121.6mgがそれぞれ黄色針状結晶として得られ
た。各結晶をベンゼン−ヘキサン混合溶媒から再
結晶して、それぞれの純品を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図，第２図及び第３図はピロロマイシン
F₁，F₂及びF₃の赤外吸収スペクトルであり、そ
れぞれKBr錠として測定したものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中、Ｘは塩素原子もしくは臭素原子を表わ
   す。ただし、Ｘがすべて塩素原子の場合は除く。）
   で示されるピロロマイシンＦ。 ２ ストレプトマイセス属に属し、抗生物質ピロ
   ロマイシンＦを生産する菌株を培地に培養し、培
   養物から該抗生物質ピロロマイシンＦを採取する
   ことを特徴とするピロロマイシンＦの製法。 ３ ストレプトマイセス属に属し、抗生物質ピロ
   ロマイシンＦを生産する菌株がストレプトマイセ
   ス・エスピーSF−2080（微工研菌寄第5072号）で
   ある特許請求の範囲第２項記載の製法。