JPS6316120B2 - - Google Patents

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JPS6316120B2
JPS6316120B2 JP54173819A JP17381979A JPS6316120B2 JP S6316120 B2 JPS6316120 B2 JP S6316120B2 JP 54173819 A JP54173819 A JP 54173819A JP 17381979 A JP17381979 A JP 17381979A JP S6316120 B2 JPS6316120 B2 JP S6316120B2
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JP
Japan
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culture
medium
antibiotic
ethyl acetate
added
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Application number
JP54173819A
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English (en)
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JPS56102793A (en
Inventor
Kazunori Hatano
Masanari Nakamichi
Shunichi Akyama
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
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Publication date
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Priority to DE8080107008T priority patent/DE3066026D1/de
Priority to AT80107008T priority patent/ATE5726T1/de
Priority to EP80107008A priority patent/EP0031430B1/en
Priority to ES497033A priority patent/ES8107306A1/es
Priority to US06/209,983 priority patent/US4356265A/en
Priority to HU803107A priority patent/HU182267B/hu
Publication of JPS56102793A publication Critical patent/JPS56102793A/ja
Publication of JPS6316120B2 publication Critical patent/JPS6316120B2/ja
Granted legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/18—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/365—Nocardia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/872—Nocardia

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  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
本発明は、抗生物質Ｃ―15003P―３を工業的
に有利に製造する方法に関する。 抗生物質Ｃ―15003P―３〔以下、「Ｐ―３」と
略称することもある。〕は、土壌などの試料から
分離された微生物ノカルデイア属に属する微生物
の培養により得られる化合物で、この化合物およ
びその製造法については、特開昭53−130495号公
報、特開昭53−130693号公報に詳しく開示されて
いる。しかし、これらの方法では抗生物質Ｃ―
15003の各成分を同時に産生するので、そのうち
のＰ―３成分のみを採取する場合には、培養物か
らの分離、精製は複雑な工程となるため、収量お
よび収率の面で有利な方法とはいえない。 本発明者らは、上記の方法においてＰ―３成分
を特異的に産生する方法についてさらに創意改良
を重ねたところ、ノカルデイア属に属する微生物
を培地に培養するに際し、培地中にイソブチルア
ルコールおよび／またはイソブチルアルデヒドを
添加することにより所期の目的を達成することを
見い出し、さらに研究した結果本発明を完成し
た。 本発明は、ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ
―15003生産菌（以下、「Ｃ―15003生産菌と称す
ることもある。）を培地に培養し培養物中に抗生
物質Ｃ―15003P―３を生成蓄積せしめるに際し、
イソブチルアルコールおよび／またはイソブチル
アルデヒドを培地中に添加することを特徴とする
抗生物質Ｃ―15003P―３の製造法である。 本発明でいう「抗生物質Ｃ―15003」あるいは
「Ｃ―15003」とは、下記の一般式（）において
示される三つの化合物の夫々単一化合物あるいは
２以上の混合物を含めた総称をいうものとする。 〔式中、Ｒは―CO―CH2―CH3，
【式】又は
【式】を表わす。〕 一般式（）においてＲが―CO―CH2―CH3
の化合物を「抗生物質Ｃ―15003P―２」あるい
は単に「Ｐ―２」と、Ｒが
【式】の 化合物を「抗生物質Ｃ―15003P―３」と、Ｒが
【式】の化合物を「抗生物質 Ｃ―15003P―４」あるいは単に「Ｐ―４」と、
それぞれ称することもある。 本発明の方法に用いることができる微生物の具
体例としては、たとえば土壌などから分離された
放線菌No.Ｃ―15003株〔ノカルデイアsp.No.Ｃ―
15003；以下、「No.Ｃ―15003株」と略称すること
もある。〕などが挙げられる。 本菌株No.Ｃ―15003株は、工業技術院微生物工
業技術研究所にFERM―ＰNo.3992として、財団
法人発酵研究所にIFO―13726として、ジ・アメ
リカン・タイプ・カルチヤー・コレクシヨン
（The American Type Culture Collection U.S.
A.）にATCC―31281として、それぞれ寄託され
ている。No.Ｃ―15003株の菌学的性状は、特開昭
53−130495号公報、特開昭53−130693号公報に記
載されている。 一般に、ノカルデイア属菌はその性状が変化し
やすく、たとえばＸ線照射、紫外線照射、放射線
照射、人工変異剤（例、ニトロソグアニジン、エ
チレンイミンなど）を用いる人工変異手段などで
容易に変異し得る。このような変異株であつて
も、抗生物質Ｃ―15003の生産能を有するものは、
すべて本発明の方法に使用し得る。 本発明方法において培地中に添加するイソブチ
ルアルコールおよび／またはイソブチルアルデヒ
ドは、単独で又は両者を同時に培地中に添加され
るが、その添加量は、単独の量としてあるいは両
者の合量として一般的には培地に対し約0.005な
いし約１容量／容量パーセントになるように添加
される。また、イソブチルアルコールおよび／ま
たはイソブチルアルデヒドは、培地に対し約0.01
ないし約0.5容量／容量パーセントの範囲で添加
するのが好ましい。 イソブチルアルコールおよび／またはイソブチ
ルアルデヒドを培地に添加する時期は、培地を滅
菌後Ｃ―15003生産菌を接種する前でもよく、ま
たＣ―15003生産菌を培地に接種後Ｃ―15003の生
産が継続している培養途中で添加してもよい。 イソブチルアルコールおよび／またはイソブチ
ルアルデヒドを添加する際に、それらを誘導体と
して添加してもよい。該誘導体としては、たとえ
ば種々の酸との間で生成するエステル（例、ギ酸
エステル、酢酸エステル、酪酸エステル、吉草酸
エステルなど）が挙げられる。 抗生物質Ｃ―15003生産菌の培養に用いられる
培地は該微生物が利用し得る栄養源を含むものな
ら、液状でも固状でもよいが、大量を処理すると
きには液体培地を用いるのがより適当である。培
地には本発明に用いられる添加物を添加するほ
か、Ｃ―15003生産菌が同化し得る炭素源、消化
し得る窒素源、無機物質、微量栄養素等が適宜配
合される。炭素源としては、たとえばブドウ糖、
乳糖、シヨ糖、麦芽糖、デキストリン、でん粉、
グリセリン、マンニトール、ソルビトール等、油
脂類（例、大豆油、ラード油、チキン油等）その
他が、また窒素源としては、たとえば肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチー
プ・リカー、ペプトン、棉実粉、癈糖蜜、尿素、
アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウム等）その他が用いられる。さらにナトリウ
ム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを
含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、ニツ
ケルなどの金属塩類、リン酸、ホウ酸などの塩類
が適宜用いられる。さらに、要すれば、ビタミン
類、核酸塩基などを含有させてもよい。もちろ
ん、培地のPHを調節する目的で、培養当初あるい
は培養間に酸、アルカリ類を加え、また消泡の目
的で油脂類、界面活性剤などの適量を添加しても
よい。 培養の手段は静置培養でも、振盪培養あるいは
通気撹拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の
処理には、いわゆる深部通気撹拌培養によるのが
望ましいことはいうまでもない。培養の条件は培
地の状態、組成、菌株の種類、培養の手段等によ
つて一定しないのは当然であるが、培地の溶性は
概ねPH5.5〜8.0の間でよく、望ましくはPH約6.5〜
7.5の中性近傍でよりよい結果をうることができ
る。また、培養の温度は約15゜〜35℃好ましくは
約20゜〜30℃がよい。培養は、Ｐ―３の蓄積濃度
が最大となる迄行うが、これに要する時間は、培
養の方法、温度、培地の組成など条件によつて差
はあるものの、通常約２〜10日程度である。 このように培養物中に特異的に蓄積生成された
Ｐ―３を精製取得するには、かかる微生物代謝物
を採取するのに通常用いられる分離精製の方法が
適宜利用される。まず本物質が中性脂溶性である
ため、水と混じらない有機溶媒たとえば酢酸エチ
ル、酢酸アミルなどの脂肪酸エステル、ブタノー
ルなどのアルコール類、クロロホルムなどのハロ
ゲン化炭化水素、メチルイソブチルケトンなどの
ケトン類が用いられる。抽出は中性付近で行なわ
れ、好ましくはPH７に調整された培養物から酢酸
エチルを用いて行なわれる。抽出液を水洗後、減
圧下に濃縮し、石油エーテル、ヘキサンのような
非極性溶媒を加えて有効成分を含む粗物質を採取
する。この中にはTLC上で抗生物質Ｃ―15003以
外の多数のスポツトがみとめられるため、つぎに
精製工程が利用される。すなわち、通常用いられ
る精製法として種々の吸着クロマトグラフイーが
有効であり、吸着剤としては一般に使用される担
体たとえばシリカゲル、アルミナ、マクロポーラ
ス非イオン系吸着樹脂等が利用できる。シリカゲ
ルを利用する場合には、非極性溶媒たとえば石油
エーテル、ヘキサンから展開をはじめ、酢酸エチ
ル、アセトン、エタノール、メタノールなどの極
性溶媒を添加するかまたはジクロルメタン、クロ
ロホルムなどの含ハロゲン炭化水素類から展開を
はじめ、エタノール、メタノールなどのアルコー
ル類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケト
ン類等の極性溶媒を添加することにより、Ｐ―３
を溶出、分離、採取する。また、マクロポーラス
吸着性樹脂を用いる場合、Ｐ―３を溶出するに
は、低級アルコール類あるいは低級ケトン類、エ
ステルと水との混合物等が用いられる。低級アル
コール類としては、たとえばメタノール、エタノ
ール、プロパノール、ブタノールなど、低級ケト
ン類としては、たとえばアセトン、メチルエチル
ケトン、エステル類としては、酢酸エチルなどが
利用できる。その一例を示すと60％メタノール水
に粗物質をとかし、ダイヤイオンHP―10（三菱
化成）カラムに通過させて吸着せしめ、70％メタ
ノール水で洗浄後90％メタノール水で溶出すると
目的物Ｐ―３が溶出される。 いずれの方法でも、得られたＰ―３の画分を減
圧濃縮し、乾燥物に対して５〜８倍量の酢酸エチ
ルを加え放置するとＰ―３の結晶が析出する。本
発明の方法によれば、Ｐ―３の生成比率は非常に
高く、また生成量も増大するので、生産量の増大
と分離精製の容易さに加えて、安価な液体原料を
用い、かつイソ酪酸の如き甚しい悪臭や、装置の
腐触もなく、イソブチルアルコールおよびイソブ
チルアルデヒドはＣ―15003生産菌に対する毒性
は低い。したがつて、本発明方法は工業生産上き
わめて有利な方法である。 抗生物質Ｃ―15003P―３は、特開昭53−
130495号公報、特開昭53−130693号公報に記載さ
れているとおり、以下の生物活性および用途を有
する。 生物活性 Ａ 抗微生物活性 トリプテイカーゼ・ソイ寒天培地（BBL製）
を検定培地として、以下に示す微生物に対する発
育阻止能をペーパー・デイスク法で検する。すな
わち、下記微生物含菌平板培地上でＣ―15003P
―３の300μｇ／mlの溶液の0.02mlをペーパー・デ
イスク（東洋製作所、薄型、直径８mm）に含ませ
たものにより生育阻止能を検すると、下記微生物
に対しては活性を示さない。 エシエリヒア・コリ、プロテウス・ブルガリ
ス、プロテウス・ミラビリス、シユウドモナス・
アエルギノサ、スタフイロコツクス・アウレウ
ス、バチルス・ズブチリス、バチルス・セレウ
ス、クレブジエラ・ニユウモニエ、セラチア・マ
ルセスセンス、ミコバクテリウム・アビウム 一方、検定培地〔燐酸二ナトリウム3.5ｇ、燐
酸一カリウム0.5ｇ、酵母エキス（デイフコ）５
ｇ、グルコース10ｇ、寒天15ｇ、蒸留水1000ml，
PH7.0〕の寒天平板を用い、タラロマイセス・ア
ベラネウス（Talaromyces avellaneus）を試験
菌としてその生育能を検するとＣ―15003P―３
は、3μｇ／mlで生育阻止力を示す。 また、テトラヒメナ・ピリホルミス
（Tetraphymena pyriformis）Ｗ株を試験微生物
とし、検定培地〔トリプトース・ペプトン（デイ
フコ）20ｇ、酵母エキス１ｇ、グルコース２ｇ、
蒸留水1000ml，１モル燐酸緩衝液PH7.0，10ml〕
を用い、28℃，44時間ないし48時間培養して、液
体稀釈検定法により該抗生物質の該微生物発育阻
止能を検すると、Ｃ―15003P―３は1μｇ／mlで
該微生物の発育を阻止する。 Ｂ 抗腫瘍活性 腫瘍細胞P388（１×106細胞／匹、マウス、腹
腔移植）に対するＣ―15003P―３の治療効果
（９日間連続腹腔内投与）については、この物質
によるマウスの延命率は対照に比し、0.00625
mg／Kg／日投与で200％を示す抗腫瘍作用が認め
られる。 Ｃ 毒性 マウスを供試動物とした急性毒性試験で、Ｃ―
15003P―３を腹腔注射すると、該抗生物質は
LD100値が0.625mg／Kg、またLD0値は0.313mg／Kg
である。 上記したように抗生物質Ｃ―15003P―３は糸
状菌および原虫に対し、強い発育阻止能を有する
ので、防黴剤または抗原虫剤としても有用なもの
である。また、抗生物質Ｃ―15003P―３は、腫
瘍をもつ哺乳動物（例、マウスなど）に対し延命
効果を示すので、抗腫瘍剤としても有用であると
期待される。 本抗生物質Ｃ―15003P―３を防黴剤および抗
原虫剤として使用するには、たとえば土壌、活性
汚泥または動物体液などの細菌生態を検する際の
試薬として有利に使用し得る。すなわち、土壌か
ら有用な細菌類を分離する場合、または癈水処理
に用いられている活性汚泥法の運転、解析に原虫
または黴以外の細菌類の作用を検する場合、試料
中に生存する黴または原虫を発育させず、細菌生
態を選択的に発育させることが出来る。具体的に
は被検試料を液体または固体培地に添加し、その
培地１ml当りに本抗生物質10ないし100μｇ／ml
の１％メタノール含有水溶液を0.1ml添加し、培
養する。 以下に実施例を挙げて、本発明をより具体的に
説明する。 実施例 １ 種培地（グルコース1.0％、バクトートリプト
ン2.0％、バクトー酵母エキス1.2％，PH7.0）40ml
を200mlエルレンマイヤーフラスコに分注し、滅
菌後、ノカルデイアsp.No.．Ｃ―15003株を接種し
た。このものを28℃で回転振盪機上（200r.p.m.）
で48時間培養し種培養とした。この培養物を滅菌
した蒸留水で３回洗菌後、洗菌体を滅菌蒸留水で
元の量に戻し、この１mlを主培地（可溶性でんぷ
ん３％、塩化アンモニウム0.2％、硫酸マグネシ
ユウム0.05％、リン酸第１カリウム1.09％、リン
酸第２カリウム2.09％、硫酸第一鉄0.001％、重
量／容量）40mlに接種し、28℃で48時間振盪培養
したのち、イソブチルアルデヒドを、0.05％（容
量／容量）になるように添加し、さらに６日間培
養を続行した。培養終了時、培養物中の抗生物質
Ｃ―15003の総生成濃度は27mg／で、そのうち
Ｐ―３の占める割合は約95％（重量比）であつ
た。なお添加物なしに培養したときには総生成量
10mg／，Ｐ―３の占める割合は65％（重量比）
にすぎなかつた。 また、以下の実施例を含めて、抗生物質Ｃ―
15003各成分の総生成量および各成分別の量は次
の方法によつて測定した。すなわち、総生成量
は、フイロバシジユウム・ユニグツラツム
（Filobasidium uniguttulatum）IFO0699を被験
菌とし、組成、トリプチカーゼペプトン15ｇ、フ
イトンペプトン５ｇ、食塩10ｇ、グルコース10
ｇ、寒天15ｇ、蒸留水１、（PH7.3）の検定培地
を用いるアガーウエル法で、被験菌の阻止円径を
標準Ｐ―３溶液を用いた阻止円径と対比して、Ｐ
―３換算量として求めた。また、各成分別の量は
これらを含む水性試料に同量の酢酸エチルを添加
抽出し、濃縮、乾固後、元の液の1/100容の酢
酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフイー用の
試料とした。薄層クロマトグラフイーは、シリカ
ゲル60F254（メルク社製）のガラスプレートを用
い展開溶媒として、水飽和酢酸エチルを用いた。
生成量および生成比率は、島津２波長クロマトス
キヤナーCS―910を用い254nmの吸収の濃さと広
さから測定した。 実施例 ２ 実施例１に示した種培地を調製し、その500ml
を2000ml坂口コルベンに分注、滅菌した。これに
ノカルデアsp.No.Ｃ―15003を接種し、28℃で往復
振盪機上（110r.p.m.）で48時間培養し接種用種
培養を調製した。200容ステンレススチール醗
酵タンクに種培地（グルコース2.0％、可溶性で
んぷん3.0％、コーン・スチープ・リカー1.0％、
生大豆粉1.0％、ポリペプトン0.5％、食塩0.3％、
炭酸カルシユウム0.5％PH7.0）100を調製し、
121℃，20分間滅菌し冷却後、接種用種培養500ml
接種した。温度28℃、通気量100／分、200回
転／分で48時間種培養を行なつた。この種培養10
を200容ステンレススチール醗酵タンク中の
主培地（デキストリン５％、コーン・スチープ・
リカー３％、ペプトン0.1％、炭酸カルシウム0.5
％（重量／容量）、PH7.0）100に移植し、28℃
で、通気量1VVM、撹拌150rpmの条件で48時間
培養したのち、イソブチルアルコールを0.1％
（容量／容量）になるように添加してさらに48時
間培養を継続した。その結果、Ｃ―15003総生成
量は20mg／で、そのうちＰ―３は96％（重量
比）の割合を占めていた。同条件でイソブチルア
ルコールを添加せず培養した場合には、総生成量
12mg／，Ｐ―３の比率63％（重量比）にとどま
つた。 実施例 ３ 実施例１の種培養物を可溶性でんぷん３％、塩
化アンモニウム0.2％、硫酸マグネシユウム0.05
％、塩化カリウム0.05％、リン酸第１カリウム
1.09％、リン酸第２カリウム2.09％、硫酸第１鉄
0.001％からなる培地40mlに１mlづつ接種し、イ
ソブチルアルコールまたは／およびイソブチルア
ルデヒドを第１表に示す条件で添加して28℃で８
日間振盪培養した結果、第１表に示す結果が得ら
れた。
【表】 実施例 ４ 実施例３の方法において、培養の当初に添加す
る方法によつてイソブチルアルコールおよびイソ
ブチルアルデヒドの濃度の効果を調べると、第２
表に示す結果が得られた。
【表】 実施例 ５ 実施例１の種培養物を可溶性でんぷん３％、プ
ロフロ（トレイダース・オイルCo.，米国）0.1
％、塩化アンモニウム0.2％、硫酸マグネシユウ
ム0.05％、リン酸第１カリウム1.09％、リン酸第
２カリウム2.09％、硫酸第１鉄0.001％、イソブ
タノール0.05％からなる培地40mlに２mlずつ接種
し、28℃で８日間振盪培養した。培養終了時、培
養物中の抗生物質Ｃ―15003の総生成濃度は38
mg／で、そのうちＰ―３の占める割合は、約95
％（重量比）であつた。 実施例 ６ 実施例２で得られた培養物95にアセトン50
を加え30分間撹拌し、ハイフロスーパーセル（米
国 ジヨンズマンヴイル・プロダクト社）２Kgを
加えよくかきまぜる。混合物を加圧式過機で
過し、液120を得る。液に水50、酢酸エ
チル90を加え撹拌抽出し、この操作を２回くり
返す。酢酸エチル層を合せて水80宛で２回水洗
し、無水硫酸ナトリウム１Kgを加えて乾燥後200
mlまで減圧濃縮し、石油エーテルを加え、析出す
る沈殿を取する（58ｇ）。得られた粗生質に酢
酸エチル50mlを加えかきまぜ、不溶物を去し
液にシリカゲル（西独 メルク社0.05〜0.2mm）
10ｇを加えてかきまぜた後酢酸エチルを減圧下に
留去しあらかじめ用意したシリカゲルカラム
（500ml）の上端におき、ｎ―ヘキサン500ml、ｎ
―ヘキサン・酢酸エチル（３：１）500ml、ｎ―
ヘキサン・酢酸エチル（１：１）、水飽和酢酸エ
チル２を流し、溶出液を50ml宛分画する。各フ
ラクシヨンの１ml宛を濃縮乾固し0.1mlの酢酸エ
チルを加え、シリカゲルガラスプレート（西独
メルク社 キーゼルゲル60F2540.25mm20×20）の
下端から2.5cmの位置にスポツトし、展開溶媒、
水飽和酢酸エチルで約17cm展開する。展開後紫外
線42537Å）下で吸収像をしらべRf0.42附近に吸
収のあるフラクシヨンを集め約20mlまで減圧濃縮
後、濃縮液に石油エーテル200mlを加え、粗結晶
1.5ｇを得た。これを酢酸エチル20mlに加温溶解
後、冷却し、析出する結晶を取すると1.4ｇの
Ｐ―３精結晶が得られた。 mp.189〜190℃（純度97W／Ｗ％） 実施例 ７ 実施例３の培養において、次表に示す濃度及び
種類のエステルを培養開始後42時間目に添加し、
さらに培養を続けた結果、次の結果がえられた。
【表】

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ ノカルデイア属に属するＣ―15003生産菌を
    培地に培養し培養物中に式 で表される化合物を生成蓄積せしめるに際し、イ
    ソブチルアルコールおよび／またはイソブチルア
    ルデヒドを培地中に添加することを特徴とする該
    化合物の製造法。
JP17381979A 1979-12-28 1979-12-28 Preparation of antibiotic c-15003 p-3 Granted JPS56102793A (en)

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