JPH05202056A - 抗菌性物質ｂｅ−２４５６６ｂ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 【化１】式 で表される化合物、その製法及びその用途並びに新規微
生物ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｓｐ．）に関する。 【効果】 この化合物は微生物の発育に対して強い増殖
抑制効果を示し、抗菌剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、さらに詳細には微生物の増殖を阻害し、抗菌効果を
発揮する新規化合物、その製法及びその用途並びに新規
微生物ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ｓｐ．）に関する。

【０００２】

【従来の技術】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は化膿性疾患の起炎菌として
知られ、臨床上の分離頻度は外来患者由来株としては本
菌種が最も多く、入院患者由来株では緑膿菌についで多
く分離されており、特に重症患者をかかえる大病院では
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉ
ｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ａｕｒｅｕｓ：ＭＲＳＡ）などの多剤耐性菌の院内
感染が多く臨床上非常に問題となっている。一般的にＭ
ＲＳＡはβ−ラクタム剤の耐性株が多く、β−ラクタム
剤以外の薬剤ではゲンタミシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉ
ｎ：ＧＭ）、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ：
ＴＯＢ）、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉ
ｎ：ＥＭ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉ
ｎ：ＣＬＤＭ）等の耐性株が非常に多い［小栗ら、臨床
と微生物、１５巻、７〜１５頁（１９８８年）参照］。
このような状況下、ＭＲＳＡに対して有効な抗菌剤の開
発が求められている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】既存の抗菌剤が充分に
効果を発揮できない多剤耐性のＭＲＳＡに対しても優れ
た抗菌活性を有する化合物を見出すことが本発明が解決
しようとする課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく、抗菌活性を有する物質について微生物代
謝産物を広くスクリーニングした結果、後記一般式で表
される化合物が優れた抗菌作用を示すことを見出して本
発明を完成した。即ち、本発明は

【０００５】

【化４】式 で表される抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂ又はその薬学
的に許容しうる塩、その製造法及びその用途、並びに、
本発明はＢＥ−２４５６６Ｂを産生する能力を有するス
トレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属す
る微生物に関するものである。

【０００６】以下に、本発明化合物の理化学的性状を示
す。 ＢＥ−２４５６６Ｂの理化学的性状 性状：淡黄色アモルファス状固体又は結晶 分子式：Ｃ₂₇Ｈ₂₄Ｏ₇ 元素分析値：理論値 炭素 ７０．４２％、水素 ５．
２５％ 実測値 炭素 ７０．３６％、水素 ５．２８％ 融点：１６０〜１７０℃付近で褐変するが明瞭な融点は
認められない。

【０００７】マススペクトル：高分解能ＦＡＢ−ＭＳ；
ｍ／ｚ ４６１．１６１１［Ｍ＋Ｈ］⁺ ＵＶスペクトル：λ［ＭｅＯＨ，ｍａｘ，ｎｍ（ε）］
２０４（５６，６００），２２０（ｓｈ．，３５，００
０），２７３（９，２００），３６０（１８，９００） ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４１８，１４７
０，１３６５，１２９０，１２３０，１１４３，１０２
９，１６１１，１４３１，１３２６，１２５４，１１７
０，１０５６，８３４ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（アセトン−ｄ₆，δｐｐｍ）：
１３．５（１Ｈ，ｂｒｓ），１２．８（１Ｈ，ｂｒ
ｓ），７．１３（１Ｈ，ｂｒｓ），６．７４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），６．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．
１Ｈｚ），６．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），
６．２４（１Ｈ，ｓ），６．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．
５Ｈｚ），３．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），
３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），２．４４（３
Ｈ，ｓ），１．６７（３Ｈ，ｓ），１．６４（３Ｈ，
ｓ），１．６０（３Ｈ，ｓ） Ｃ−ＮＭＲスペクトル（アセトン−ｄ₆，δｐｐｍ）：
１９０．６（ｓ），１６５．７（ｓ），１６５．６
（ｓ），１５７．６（ｓ），１５６．９（ｓ），１５
４．８（ｓ），１５２．４（ｓ），１５０．３（ｓ），
１４１．９（ｓ），１３６．０（ｓ），１２３．６
（ｓ），１１７．４（ｄ），１１３．８（ｓ），１１
１．３（ｓ），１１０．０（ｄ），１０７．０（ｓ），
１０６．５（ｄ），１０１．１（ｄ），１００．８
（ｄ），９７．７（ｓ），６５．０（ｄ），４０．１
（ｔ），３８．６（ｓ），３３．３（ｑ），３３．２
（ｑ），２７．１（ｑ），１８．７（ｑ） 溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別：弱酸性物質 Ｒｆ値：０．５（メルク社製、キーゼルゲル６０使用，
展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：１）） 呈色反応：過マンガン酸カリウム反応 陽性、硫酸反応
陽性 ＢＥ−２４５６６Ｂの抗菌作用 ＢＥ−２４５６６Ｂの抗菌作用を最小発育阻止濃度（Ｍ
ＩＣ）法によって測定した。その結果を第１表に示す。

【０００８】

【表１】 第１表に示したように、ＢＥ−２４５６６Ｂは、バチル
ス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）をはじめとするグラム陽性菌の増殖を良く阻害す
る。従って本発明はグラム陽性菌一般を起炎菌とする感
染症の治療剤として有用である。

【０００９】ＢＥ−２４５６６Ｂの製造法について説明
する。

【００１０】本発明者らはＢＥ−２４５６６Ｂを、静岡
県城ヶ崎の土壌より分離採取されたストレプトミセス属
に属する放線菌の培養物より単離した。

【００１１】以下にこの生産菌の菌学的性状を述べる。 １．形態 Ａ２４５６６株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し、輪生岐及び基生菌糸の分断は認められない。
気菌糸上には胞子の連鎖を作り、その形態はらせん状で
ある。胞子の表面はしわ状で、胞子のう、鞭毛胞子及び
菌核等の特殊な器官は観察されない。オートミール寒天
培地等で気菌糸の成熟と共に次第に湿潤し黒色となるこ
とが観察された。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 各種寒天平板培地において２８℃、１４日間培養した結
果を第２表に示す。

【００１２】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） １０℃： 生育せず １５℃： 生育及び気菌糸形成不良 ２１℃： 生育及び気菌糸形成良好 ２６℃： 生育及び気菌糸形成非常に良好 ３２℃： 生育及び気菌糸形成非常に良好 ３８℃： 生育及び気菌糸形成非常に良好 ４１℃： 生育及び気菌糸形成良好 ４４℃： 生育及び気菌糸形成不良 ４８℃： 生育せず４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含
有量７％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。その結果を第３
表に示す。

【００１３】

【表３】 ６．細胞壁組成 ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出された。

【００１４】以上の菌学的諸性質より、Ａ２４５６６株
は放線菌ストレプトミセス属に分類された。したがっ
て、Ａ２４５６６株をストレプトミセス・エスピー・Ａ
２４５６６（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ２
４５６６）と称することとした。

【００１５】なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託されており、その微工研受託番
号は微工研菌寄第１２０８０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２０
８０）である。また、本菌株は国際寄託に付されてお
り、その受託番号は微工研条寄第３９９４号（ＦＥＲＭ
ＢＰ−３９９４）である。

【００１６】本発明で使用する抗菌性物質ＢＥ−２４５
６６Ｂを産生する微生物の変異株は、例えばＸ線若しく
は紫外線等の照射処理、例えばナイトロジェン・マスタ
ード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくは
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変
換処理方法によりＢＥ−２４５６６Ｂ産生菌を変異させ
た微生物である。

【００１７】本発明のＢＥ−２４５６６Ｂを製造するに
あたり、ＢＥ−２４５６６Ｂの生産菌株Ａ２４５６６株
を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させることに
より、ＢＥ−２４５６６Ｂを含む培養物が得られる。栄
養源としては、放線菌の栄養源として公知のものが使用
できる。例えば、炭素源としては、市販されているブド
ウ糖、グリセリン、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又は
デキストリンなどが単独又は混合物として用いられる。
窒素源としては、市販されている大豆粉、コーングルテ
ンミール、コーンスティープリカー、肉エキス、脱脂肉
骨粉、ミートミール、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、
ペプトン、小麦胚芽、脱脂米糠、魚粉、無機アンモニウ
ム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物として用
いられる。無機塩としては、市販されている炭酸カルシ
ウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、臭化ナトリウ
ム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム又は各種リン酸塩
などを使用することができる。その他必要に応じて、
鉄、マンガン、コバルト、モリブデン、銅又は亜鉛など
の重金属塩を微量添加してもよい。また、発泡の著しい
時には、消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁油等の
植物油、オクタデカノール等の高級アルコール類、各種
シリコン化合物等を適宜添加しても良い。これらのもの
以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−２４５６６Ｂの生
産に役立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパン
スルホン酸又はホウ酸ナトリウムなどであれば、いずれ
も使用することができる。

【００１８】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行えばよく、固体培養でも液体培養
でもよい。液体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振
盪培養又は通気培養などのいずれを実施してもよいが、
特に振盪培養又は深部通気撹拌培養が好ましい。培養温
度は２０℃〜３７℃が適当であるが、好ましくは２５℃
〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８時間〜１６８時間、好ましくは９６
時間〜１４４時間である。

【００１９】培養物から目的とするＢＥ−２４５６６Ｂ
を採取するには、微生物の生産する代謝物の培養物から
採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用され
る。ＢＥ−２４５６６Ｂは培養濾液中及び菌体中に存在
するので、培養濾液又は菌体より通常の分離手段、例え
ば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着若しくは分配
クロマトグラフィー法及びゲル濾過法等を単独又は組合
せて行うことにより精製できる。また高速液体クロマト
グラフィーや薄層クロマトグラフィーなども抽出精製に
利用可能である。

【００２０】本発明化合物を抗菌剤として使用する際
に、本発明の化合物は薬学的に許容しうる塩としても使
用される。薬学的に許容しうる塩の典型例としては、例
えば苛性ソーダ、苛性カリ等の無機酸との塩を挙げるこ
とができる。本発明化合物を抗菌剤として使用する際の
投与形態としては各種の形態を選択でき、例えば錠剤、
カプセル剤、散剤、顆粒剤若しくは液剤等の経口剤、又
は例えば溶液若しくは懸濁液等の殺菌した液状の非経口
剤が挙げられる。固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもでき
るが、適当な添加物を使用して製造することもできる。
そのような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ
糖等の糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米等の
澱粉類、例えばステアリン酸等の脂肪酸、例えばメタケ
イ酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カルシ
ウム等の無機塩、例えばポリビニルピロリドン若しくは
ポリアルキレングリコール等の合成高分子、例えばステ
アリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウム
等の脂肪酸塩、例えばステアリルアルコール若しくはベ
ンジルアルコール等のアルコール類、例えばメチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロー
ス若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等の合
成セルロース誘導体、その他、水、ゼラチン、タルク、
植物油、アラビアゴム等通常用いられる添加物が挙げら
れる。これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉末等の
固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、好ましく
は５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００２１】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナツ油若しくはゴマ油等の植物由来の油等
液状製剤において通常用いられる適当な添加物を使用
し、懸濁液、シロップ剤若しくは注射剤等の形態として
製造される。

【００２２】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈内注射
又は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例
えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉内注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
等の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内
注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。又、
これらの注射剤は予め溶解したものの他、粉末のまま或
いは適当な添加物を加えたものを用時溶解する形態もと
り得る。これらの注射液は、通常０．１〜１０重量％、
好ましくは１〜５重量％の有効成分を含む。又、経口投
与の懸濁剤又はシロップ剤等の液剤は、０．５〜１０重
量％の有効成分を含む。本発明の化合物の実際に好まし
い投与量は、使用される化合物の種類、配合された組成
物の種類、適用頻度及び治療すべき特定部位及び宿主に
よって変化することに注意すべきである。例えば、一日
当りの成人一人当りの投与量は、経口投与の場合、１０
ないし５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈
内注射の場合、１日当り１０ないし１００ｍｇである。
なお、投与回数は投与方法及び症状により異なるが、１
回ないし５回である。

【００２３】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるも
のではない。 実施例１ 斜面寒天培地に培養したＡ２４５６６株をグルコース
０．２％、デキストリン２．０％、ミートミール０．５
％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉０．２％、乾燥酵
母０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、臭化ナトリ
ウム０．０５％、塩化ナトリウム０．５％、リン酸一水
素カリウム０．１％、塩化カルシウム０．２％、塩化第
一銅０．００４％、塩化マンガン０．００４％、塩化コ
バルト０．００４％、硫酸亜鉛０．００８％、ホウ酸ナ
トリウム０．００８％、モリブデン酸アンモニウム０．
０２４％、硫酸第一鉄０．０２％からなる培地（ｐＨ
７．２）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の培養用三角フ
ラスコ４本に接種し、２８℃で７２時間、回転振盪機
（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液２ｍｌず
つを上記培地１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラ
スコ１００本に接種し、２８℃で１２０時間、回転振盪
機（毎分１８０回転）上で培養した。

【００２４】培養によって得られた培養液（約１０Ｌ）
を濾過し、菌体を得た。菌体にメタノール８Ｌを加え室
温で３０分間撹拌した後、菌体を濾去し、メタノール抽
出液を得た。得られたメタノール抽出液を減圧下に約１
Ｌまで濃縮し、酢酸エチル１．５Ｌを加えて抽出する。
水層に０．７Ｌの酢酸エチルを加えて再び抽出し、合わ
せて約２．７Ｌの酢酸エチル抽出液を得た。この抽出液
に脱イオン水１Ｌ（×２）を加えて水洗した後、酢酸エ
チルを減圧下に留去し、残渣に酢酸エチル１．５Ｌ及び
脱イオン水０．７Ｌを加え、活性成分を酢酸エチル層に
抽出する。水層は更に酢酸エチル１Ｌ（×２）で抽出
し、合わせて約３Ｌの酢酸エチル抽出液を得、無水硫酸
ナトリウムを加えた。その後、酢酸エチルを減圧下に留
去し、残渣にメタノール２４０ｍｌ及びｎ−ヘキサン４
００ｍｌを加えメタノール層を分取した。ｎ−ヘキサン
層は更にメタノール５０ｍｌを用いて抽出し、合わせて
約５００ｍｌのメタノール抽出液を得た。このメタノー
ル抽出液を減圧下に濃縮し、残留物にクロロホルム２０
０ｍｌを加えてシリカゲルのクロマト塔（３×４８ｃ
ｍ）にかけ、クロロホルム／酢酸エチルの混合溶媒（２
０：１→１：１）で順次溶出して溶出される活性画分を
減圧下に濃縮乾固した。得られたＢＥ−２４５６６Ｂの
粗粉末をメタノール１０ｍｌに溶解し、セファデックス
ＬＨ−２０のクロマト塔（２×８８ｃｍ）にかけ、メ
タノールで溶出することにより、ＢＥ−２４５６６Ｂを
純粋に含む画分を得た。ＢＥ−２４５６６Ｂを含む画分
を減圧下に濃縮することにより、ＢＥ−２４５６６Ｂの
淡黄色粉末２０９．６ｍｇを得た。

【００２５】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−２４５６６Ｂ
は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌をはじめとするグラ
ム陽性菌に強い抗菌効果を示すことから、医薬の分野で
感染症の治療剤として有用である。

【００２６】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 【化１】式 で表される抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂ又はその薬学
   的に許容しうる塩。
2. 【請求項２】 【化２】式 で表される抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂ又はその薬学
   的に許容しうる塩を有効成分とする抗菌剤。
3. 【請求項３】 【化３】式 で表される抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂ又はその薬学
   的に許容しうる塩の製造に際し、抗菌性物質ＢＥ−２４
   ５６６Ｂを産生する微生物又はその変異株を純粋に培養
   して抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂを蓄積させ、採取す
   ることを特徴とする製法。
4. 【請求項４】ストレプトミセス・エスピー Ａ２４５６
   ６（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ２４５６６）
   株又はその変異株を純粋培養することを特徴とする第３
   請求項記載の製法。
5. 【請求項５】抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂを産生する
   能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
   ｅｓ）属に属する微生物又はその変異株。
6. 【請求項６】抗菌性物質ＢＥ−２４５６６Ｂを産生する
   能力を有する微生物がストレプトミセス・エスピー Ａ
   ２４５６６（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ２４
   ５６６）であることを特徴とする第５請求項記載の微生
   物又はその変異株。