JPH08231532A

JPH08231532A - 抗菌性物質ｂｅ−４０６６５ｄ

Info

Publication number: JPH08231532A
Application number: JP7065262A
Authority: JP
Inventors: Masahisa Tsukamoto; 匡央塚本; Shigeru Nakajima; 中島　　茂
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1995-03-01
Filing date: 1995-03-01
Publication date: 1996-09-10

Abstract

(57)【要約】【構成】本発明は、式【化１】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩、その
製造法及びその用途並びに該化合物を産生する微生物に
関するものである。【効果】本発明に記載するＢＥ−４０６６５ＤはＭＲＳ
Ａを含む各種の病原性微生物に対して顕著な抗菌活性を
示し、これらの病原性微生物を起炎菌とする疾病に対し
ての抗菌剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には微生物の増殖を阻害して抗菌作用を
発揮する新規化合物、その製造法及び用途並びに該化合
物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）は化膿性疾患の起炎菌として
知られているが、特に重症患者をかかえる大病院ではメ
チシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ
ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ：ＭＲＳＡ）等の多剤耐性菌の院内感
染が多く、臨床上非常に問題となっている。［小栗ら、
臨床と微生物、１５巻、７〜１５頁（１９８８年）等参
照］。このような状況下、ＭＲＳＡに対して有効な薬剤
の開発が求められている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】既存の抗菌剤が充分に
効果を発揮できない多剤耐性のＭＲＳＡに対しても優れ
た抗菌活性を有する新規な化合物を提供することが本発
明が解決しようとする課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決すべ
く、抗菌活性を有する物質について微生物二次代謝産物
を広くスクリーニングした結果、後記式［Ｉ］で表され
る化合物が優れた抗菌作用を示すことを見いだして本発
明を完成した。

【０００５】即ち、本発明は新規な式［Ｉ］

【０００６】

【化６】で表される抗菌性物質ＢＥ−４０６６５Ｄ又はその薬学
的に許容しうる塩、その製法及び用途、並びにＢＥ−４
０６６５Ｄを産生する能力を有するアクチノプラネス
（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属に属する微生物に関す
るものである。以下に本発明にかかわる新規な抗菌性物
質ＢＥ−４０６６５Ｄの物理化学的な性状を示す。

【０００７】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を
示す。ｓ：シングレットｄ：ダブレットｔ：トリプレットｑ：カルテットｍ：マルチプレットｂｒ：ブロードＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツＢＥ−４０６６５Ｄの物理化学的性状性状：黄色アモルファス状固体又は結晶分子式：Ｃ₂₂Ｈ₂₁Ｏ₇Ｂｒ質量分析：［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］［Ｍ＋Ｈ］⁺ と
して：計算値４７７．０５４９実測値４７７．０５４２比旋光度：［α］²⁰ _D＝−３４．０°（ｃ０．１０，Ｃ
ＨＣｌ₃）紫外部吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２
２５，２６５，３１７，３３０，４０５赤外部吸収スペクトル：（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４２９，
２９２７，１７３９，１６２８，１４５２，１３８７，
１３５５，１２６１，９５８，７６０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，δ
ｐｐｍ）１６．３（１Ｈ，ｓ），９．９１（１Ｈ，
ｓ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．３
３（１Ｈ，ｓ），６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈ
ｚ），５．５４（１Ｈ，ｓ），４．０９（３Ｈ，
ｓ），３．５６（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝１．８，７．０Ｈ
ｚ），２．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），２．２
９（１Ｈ，ｍ），１．４６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈ
ｚ），１．１４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．
１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，
δ ｐｐｍ）２０４．７（ｓ），１８１．４（ｓ），
１６９．６（ｓ），１６４．５（ｓ），１５７．９
（ｓ），１３６．１（ｄ），１３５．８（ｓ），１３
４．１（ｓ），１１６．３（ｄ），１１５．１（ｓ），
１１３．４（ｄ），１１１．５（ｓ），１０８．６
（ｓ），９３．１（ｄ），８６．８（ｓ），７９．２
（ｓ），５９．９（ｑ），４６．０（ｄ），３５．４
（ｄ），１８．３（ｑ），１７．４（ｑ），８．５
（ｑ）溶解性：クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。

【０００８】酸性、中性、塩基性物質の区別：中性Ｒｆ値：０．７５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ２
５４使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／酢酸
（２０：１：０．２）］呈色反応：硫酸反応陽性また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩等が挙げられる。ＢＥ−４０６６５Ｄの抗菌活性ＢＥ−４０６６５Ｄの抗菌活性を各種の病原性微生物に
対して測定し、その最少発育阻止濃度を求めた。ＢＥ−
４０６６５Ｄについての結果を第１表に示す。

【０００９】

【表１】第１表に示したごとく、ＢＥ−４０６６５ＤはＭＲＳＡ
を含む各種の病原性微生物に対して顕著な抗菌活性を示
す。従って、これらの病原性微生物を起炎菌とする疾病
に対しての抗菌剤として有用である。

【００１０】次いでＢＥ−４０６６５Ｄの製造法につい
て説明する。

【００１１】本発明の抗菌性物質ＢＥ−４０６６５Ｄの
製造に使用する微生物又はその変異株は、抗菌性物質
ＢＥ−４０６６５Ｄを生産するものならばいずれでも良
いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙げら
れる。１．形態Ａ４０６６５株は気菌糸を着生せず、分岐する基生菌
糸に生ずる胞子のう柄の先端に胞子のうを１個ずつ形成
する。胞子のうの表面は平滑で、その形状は亜球形又は
不規則型であり大きさは６〜１０×１０〜１２μｍ位で
ある。胞子のうには多数の胞子が内蔵され、成熟した胞
子のうを水中に投じると胞子が放出され、その胞子は遊
走性を示す。２．各種寒天平板培地における培養性状（２８゜Ｃ、１
４日間培養）

【００１２】

【表２】３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養）１２℃：生育せず１６℃：生育良好１９℃：生育非常に良好２３℃：生育非常に良好２８℃：生育非常に良好３２℃：生育非常に良好３７℃：生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陰性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陰性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陽性（チロシン寒天培地）（６）硝酸塩の還元陽性（０．１％硝酸カリウム含有ブロス）（７）チロシンの分解陰性（チロシン添加栄養寒天培地）（８）カゼインの分解陽性（スキムミルク寒天培地）（９）食塩耐性食塩含有量２％以下で生育（イースト・麦芽寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。炭素源の利用能
の結果を第３表に示す。

【００１３】

【表３】６．菌体成分細胞壁からはｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸、３−ヒド
ロキシジアミノピメリン酸及びグリシンが検出され、細
胞壁タイプはＩＩ型であると考えられる。また、分類上
特徴ある全菌体糖成分はアラビノースおよびキシロース
であり、糖パターンはＤ−型であった。

【００１４】以上の菌学的諸性質よりＡ４０６６５株
は放線菌アクチノプラネス属に属すると考えられる。従
ってＡ４０６６５株をアクチノプラネスエスピー
Ａ４０６６５（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．Ａ
４０６６５）と称することとした。

【００１５】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、その受託番号はＦ
ＥＲＭＰ−１４０６９である。

【００１６】本発明で使用する抗菌性物質ＢＥ−４０６
６５Ｄを生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若しく
は紫外線等の照射処理、例えばナイトロジェンマスター
ド、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ
−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（Ｎ
ＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質
転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処
理方法によりＢＥ−４０６６５Ｄ生産菌を変異させた微
生物である。

【００１７】本発明のＢＥ−４０６６５Ｄを製造するに
あたり、ＢＥ−４０６６５Ｄの生産菌株を栄養源含有培
地に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−４
０６６５Ｄを含む培養物が得られる。栄養源としては、
放線菌の栄養源として公知のものが使用できる。例え
ば、炭素源としては、市販されているブドウ糖、麦芽
糖、デンプン、庶糖、糖蜜若しくはデキストリン等が単
独又は混合物として用いられる。窒素源としては、市販
されている大豆粉、コーンステイープリカー、肉エキ
ス、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚
芽、魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無
機アンモニウム塩若しくは硝酸ナトリウム等が単独又は
混合物として用いられる。無機塩としては、市販されて
いる炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、
硫酸マグネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム
又は各種リン酸塩等を使用することができる。その他必
要に応じて、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、モリブデ
ン酸等の重金属塩を微量添加することもできる。また、
発泡の激しい場合には消泡剤として、例えば大豆油若し
くは亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール等の高級ア
ルコール類又は各種シリコン化合物等を適宜添加しても
よい。これらのもの以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ
−４０６６５Ｄの生産に役立つもの例えば３−（Ｎ−モ
ルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナトリウム等
であれば、いずれも使用することができる。

【００１８】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養等のいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が好ましい。培
養温度は１６〜３２℃が適当であるが、好ましくは１９
〜３２℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８〜３６０時間、好ましくは７２〜２
４０時間である。培養物から目的とするＢＥ−４０６６
５Ｄを採取するには、微生物の生産する代謝物から採取
するのに通常使用される分離手段が適宜利用される。

【００１９】ＢＥ−４０６６５Ｄは培養濾液中及び菌体
中に存在するので、培養濾液及び／又は菌体よりの通常
の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は
吸着若しくは分配クロマトグラフィー法及びゲル濾過法
等を単独又は組み合わせて行なうことにより精製でき
る。

【００２０】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、得られた菌体をメタノ
ール又はアセトン等の有機溶媒を用いて抽出する。この
抽出物を濃縮し、水−酢酸エチルで分配を行ない酢酸エ
チル抽出液を濃縮乾固後、ｎ−ヘキサンを加え、ｎ−ヘ
キサン可溶部についてシリカゲル及びＴＯＹＯＰＥＡＲ
Ｌ^TM ＨＷ−４０Ｓ（東ソー社製）クロマトグラフィー
等を行なうことによりＢＥ−４０６６５Ｄを黄色粉末と
して得ることができる。

【００２１】本発明の化合物ＢＥ−４０６６５Ｄは病原
性微生物の増殖を阻害し、抗菌効果を発揮するが、本発
明化合物を抗菌剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤若しくは液剤等の経口剤、又は例えば溶液若
しくは懸濁液等の殺菌した液状の非経口剤が挙げられ
る。

【００２２】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
等の糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米等のデ
ンプン類、例えばステアリン酸等の脂肪酸類、例えばメ
タケイ酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カ
ルシウム等の無機塩類、例えばポリビニルピロリドン若
しくはポリアルキレングリコール等の合成高分子類、例
えばステアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグ
ネシウム等の脂肪酸塩類、例えばステアリルアルコール
若しくはベンジルアルコール等のアルコール類、例えば
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチ
ルセルロース若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース等の合成セルロース誘導体類又はその他、水、ゼラ
チン、タルク、植物油若しくはアラビアゴム等通常用い
られる添加物が挙げられる。

【００２３】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末等の固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、好
ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００２４】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油若しくはゴマ油等の植物由来の油
等液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を使用
し、懸濁液、シロップ剤又は注射剤等の形態として製造
される。

【００２５】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又
は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例え
ば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
等の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内
注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００２６】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００２７】又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤等の
液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００２８】本発明の化合物の好ましい投与量は、使用
される化合物又は塩の種類、配合された組成物の種類、
適用頻度及び患者の病状によって変化することに注意す
べきである。例えば、１日あたりの成人の投与量は、経
口投与の場合、１０〜５００ｍｇであり、非経口投与、
好ましくは静脈注射の場合、１日あたり、１０〜１００
ｍｇである。なお、投与回数は投与方法及び症状によっ
て異なるが、１回乃至５回である。

【００２９】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に
説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定される
ものではない。実施例１ＢＥ−４０６６５Ｄの製造法：斜面軟寒天培地に接種し
た放線菌Ａ４０６６５株をグルコース０．２％、デキス
トリン２％、ミートミール０．５％、脱脂米ヌカ０．５
％、脱脂肉骨粉０．２％、乾燥酵母０．１％、硫酸マグ
ネシウム０．０５％、臭化ナトリウム０．０５％、塩化
ナトリウム０．５％、臭化カリウム０．５％、リン酸水
素二カリウム０．１％、塩化カルシウム０．００２％、
硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第二銅０．００００４
％、塩化マンガン０．００００４％、塩化コバルト０．
００００４％、硫酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナト
リウム０．００００８％、及びモリブデン酸アンモニウ
ム０．０００２４％からなる培地（ｐＨ７．２）１００
ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラスコ３本に接種し、
２８℃で７２時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で
培養した。この培養液を２ｍｌずつ上記の培地を１００
ｍｌ含む５００ｍｌ容の三角フラスコ１００本に接種し
２８℃で２４０時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上
で培養した。

【００３０】このようにして得られた培養液（約１０
Ｌ）から濾過により菌体を分離し、メタノール（５Ｌ×
２）を加えて抽出した。このメタノール抽出液を減圧下
に濃縮してから濃縮物を酢酸エチル（３Ｌ×２）で抽出
し、得られた抽出液を減圧下に濃縮乾固し、ｎ−ヘキサ
ン１００ｍｌを加えｎ−ヘキサン可溶部を１．５３ｇ得
た。この可溶部をシリカゲル（メルク社製キーゼルゲル
６０、７０−２３０メッシュ、３．０φ×２３ｃｍ）の
クロマト用カラムを用いて、クロロホルム／メタノール
／酢酸（１００：１：０．１）で溶出し、得られた活性
画分を減圧下に濃縮乾固した。これにメタノールを加
え、メタノール不溶部をＴＯＹＯＰＥＡＲＬ^TM ＨＷ−
４０Ｓ（東ソー社製、３．０φ×４６ｃｍ）のクロマト
用カラムを用いメタノールで溶出し、得られたＢＥ−４
０６６５Ｄを含む分画を減圧下に濃縮乾固しＢＥ−４０
６６５Ｄの黄色粉末３．５ｍｇ得た。

【００３１】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。製剤例１本物質（ＢＥ−４０６６５Ｄ）１０（部）重質酸化マグネシウム１５乳糖７５を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。製剤例２本物質（ＢＥ−４０６６５Ｄ）４５（部）澱粉１５乳糖１６結晶性セルロース２１ポリビニルアルコール３蒸留水３０を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。製剤例３製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。製剤例５本物質（ＢＥ−４０６６５Ｄ）０．６（部）非イオン系界面活性剤２．４生理的食塩水９７を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なって注
射剤を作製した。

【００３２】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４０６６５Ｄは
ＭＲＳＡを含む各種の病原性微生物に対して顕著な抗菌
活性を示す。従って、これらの病原性微生物を起炎菌と
する疾病に対しての抗菌剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 17/04 Ｃ１２Ｒ 1:045）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式［Ｉ］【化１】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎ
ｅｓ）属に属し、式［Ｉ］【化２】の化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、その培養液及び菌体から式［Ｉ］で表される
化合物を採取することを特徴とする、式［Ｉ］【化３】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩の製造
法。
【請求項３】微生物又はその変異株が、アクチノプラネ
スエスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）で
ある請求項２記載の製法。
【請求項４】式［Ｉ］【化４】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩を有効
成分とする抗菌剤。
【請求項５】式［Ｉ］【化５】の化合物を産生する能力を有するアクチノプラネスエ
スピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）属に属
する微生物又はその変異株。
【請求項６】微生物が、アクチノプラネスエスピー
Ａ４０６６５（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．Ａ４
０６６５）である請求項５記載の微生物又はその変異
株。