JPH07300462A

JPH07300462A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−１９４１２類

Info

Publication number: JPH07300462A
Application number: JP11428794A
Authority: JP
Inventors: Katsuhisa Ojiri; 勝久小尻; Masahisa Tsukamoto; 匡央塚本; Shigeru Nakajima; 中島　　茂; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1994-04-28
Filing date: 1994-04-28
Publication date: 1995-11-14

Abstract

(57)【要約】【構成】一般式【化１】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物、そ
の薬学的に許容しうる塩、その製法並びにその用途及び
その化合物を産生する能力を有するストレプトミセス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に関す
る。【効果】本発明に係る化合物は腫瘍細胞の増殖を抑制す
ることから医薬の分野で有用であり、特に抗腫瘍剤とし
ての使用が期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍作
用を有する新規化合物群、その製造法及びその用途並び
に該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）参照］。

【０００３】かかる状況下、癌治療の分野においては常
に新規制癌物質の開発が求められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
の希求に応える新規抗腫瘍物質を提供することであり、
既存の抗腫瘍物質が充分に効果を発揮できない種々の腫
瘍に対しても抗腫瘍効果を発揮する化合物を見い出すこ
とが本発明が解決しようとする課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について、微
生物二次代謝産物を鋭意スクリーニングした結果、下記
一般式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示
すことを見いだして本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は新規な一般式［Ｉ］

【０００７】

【化８】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物、又
はその薬学的に許容しうる塩、その製法並びに用途、及
び式［Ｉ］の化合物を産生する能力を有するストレプト
ミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物
に関するものである。次に本明細書において使用する用
語について説明する。本明細書において使用する「低
級」なる語は、この語の付された基又は化合物の炭素数
が６個以下、好ましくは４個以下であることを意味す
る。

【０００８】「低級アルキル基」とは炭素数が１〜６個
の直鎖状又は分岐状のアルキル基を示し、例えば、メチ
ル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル
基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチ
ル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、
ヘキシル基等が挙げられる。

【０００９】「低級アルカノイル基」とは炭素数が１〜
６個の直鎖状又は分岐状のアルカノイル基を示し、例え
ばホルミル基、アセチル基、プロプオニル基、ブチリル
基基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基等が挙げられ
る。

【００１０】以下に本発明に係る新規抗腫瘍性物質ＢＥ
−１９４１２類の物理化学的性状を示す。

【００１１】ここで、一般式［Ｉ］でＲが水素原子であ
る化合物（構造式［ＩＩ］の化合物）をＢＥ−１９４１
２Ａと称し、一般式［Ｉ］でＲがメチル基である化合物
をＢＥ−１９４１２Ｂと称する。

【００１２】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を示
す。ｓ：シングレットｄ：ダブレットｔ：トリプレットｑ：カルテットｍ：マルチプレットＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツＢＥ−１９４１２Ａの物理化学的性状性状：黄色アモルファス状固体若しくは結晶分子式：Ｃ₂₈Ｈ₂₂ＮＯ₈Ｃｌ質量分析：［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺として：計算値５３６．１１１２実測値５３６．１０８３紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２１７，２４３，２８７，４１２，４３１赤外吸収スペクトル：（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４２３，２９３９，１６４９，１６１４，１５１０，
１４５０，１３８１，１２１１，１０９３，８９５，８
３３，６１１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆に微量の重塩酸を添加，δｐｐｍ）２．００（３Ｈ，ｓ），２．３３（１Ｈ，ｍ），２．４
４（１Ｈ，ｍ），２．４５（３Ｈ，ｓ），２．８９
（２Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４Ｈ
ｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），５．９１（１Ｈ，ｓ），
６．８９（１Ｈ，ｓ），７．１６（１Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆に微量の重塩酸を添加，δ ｐｐｍ）１４．７
（ｑ），１６．７（ｔ），１８．５（ｑ），２４．６
（ｔ），５３．６（ｄ），６２．６（ｑ），７５．７
（ｓ），１０２．１（ｄ）×２，１０７．８（ｓ），１
０８．２（ｓ），１０８．７（ｓ），１１５．４
（ｓ），１２１．８（ｄ），１２５．３（ｓ），１２
７．４（ｓ），１２９．５（ｓ），１３７．６（ｓ），
１３９．８（ｓ），１４０．９（ｓ），１４２．４
（ｓ），１５４．８（ｓ），１５８．０（ｓ），１５
８．７（ｓ），１６０．２（ｓ），１６２．０（ｓ），
１９９．１（ｓ），２００．３（ｓ）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機
溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。酸性、中性、塩基性物質の区別：中性薄層クロマトグラフィー：メルク社製キーゼルゲル６０
Ｆ₂₅₄使用Ｒｆ値０．６（展開溶媒クロロホルム：メタノール
＝５：１）呈色反応：硫酸反応陽性また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールア
ミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン
塩、プロカイン塩等の脂肪族アミン塩、例えばＮ，Ｎ−
ジベンジルエチレンジアミン塩等のアラルキルアミン
塩、例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソ
キノリン塩等の複素芳香族アミン塩、例えばテトラメチ
ルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベン
ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルア
ンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メ
チルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモ
ニウム塩等の第４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リ
ジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。ＢＥ−１９４１２Ｂの物理化学的性状性状：橙色アモルファス状固体若しくは結晶分子式：Ｃ₃₀Ｈ₂₆ＮＯ₈Ｃｌ質量分析：［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ として：計算値５６４．１４２５：実測値５６４．１４６４紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２１７，２３４，２９０，３８８，４０４赤外吸収スペクトル：（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４２７，２９４１，２３６２，１６８９，１６５３，
１６０５，１４５６，１３９８，１２２７，１０９５，
１０２６，９８９，８９１，７５８，６１１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆，δ ｐｐｍ）２．０３（３Ｈ，ｓ），２．３８（１Ｈ，ｍ），２．５
２（１Ｈ，ｍ），２．６６（３Ｈ，ｓ），２．９４（２
Ｈ，ｍ），３．４５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），
３．７５（３Ｈ，ｓ），３．７６（３Ｈ，ｓ），４．０
５（３Ｈ，ｓ），５．９７（１Ｈ，ｓ），６．００（１
Ｈ，ｓ），６．９４（１Ｈ，ｓ），７．３４（１Ｈ，
ｓ），１０．８（１Ｈ，ｓ），１４．８（１Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
₆，δ ｐｐｍ）１４．９（ｑ），１６．６（ｔ），１８．３（ｑ），２
４．４（ｔ），５４．１（ｄ），５６．６（ｑ），６
１．２（ｑ），６２．４（ｑ），７５．５（ｓ），１０
１．９（ｄ），１０２．５（ｄ），１１０．６（ｓ），
１１５．０（ｓ），１１５．３（ｓ），１１８．６
（ｓ），１２１．７（ｄ），１２５．０（ｓ），１２
７．３（ｓ），１３０．６（ｓ），１３８．１（ｓ），
１３９．７（ｓ），１４０．７（ｓ），１４２．２
（ｓ），１５５．９（ｓ），１５７．０（ｓ），１５
８．４（ｓ），１６０．０（ｓ），１６０．６（ｓ），
１９９．３（ｓ），２０１．２（ｓ）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け易く、水に溶けにくい。酸性、中性、塩基性物質の区別：中性薄層クロマトグラフィー：メルク社製キーゼルゲル６０
Ｆ₂₅₄使用Ｒｆ値０．１１（展開溶媒クロロホルム：アセトン
＝１０：１）呈色反応：硫酸反応陽性また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールア
ミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン
塩、プロカイン塩等の脂肪族アミン塩、例えばＮ，Ｎ−
ジベンジルエチレンジアミン塩等のアラルキルアミン
塩、例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソ
キノリン塩等の複素芳香族アミン塩、例えばテトラメチ
ルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベン
ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルア
ンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メ
チルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモ
ニウム塩等の第４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リ
ジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。

【００１３】ＢＥ−１９４１２類の生物学的活性（抗腫
瘍作用）抗腫瘍性物質ＢＥ−１９４１２類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎｖｉｔｒ
ｏで試験を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対す
る抗腫瘍作用試験は、ＢＥ−１９４１２類をジメチルス
ルホキシドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次
希釈してから、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０
培地（２０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に
加え検液とした。１×１０³ 個の腫瘍細胞を含む細胞
培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培
地、２０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）５
０μｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２
４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液５０μ
ｌを加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、
ＭＴＴ測定法により対照群と比較した。

【００１４】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６に対する
抗腫瘍試験は、ＢＥ−１９４１２類をジメチルスルホキ
シドに溶解した後ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地に加
え検液とした。１×１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培
養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地）
１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃
で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液１
００ｍｌを加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培
養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％スルホ
ローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて細胞
から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長として５５
０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比較した。そ
の結果、ＢＥ−１９４１２類は両癌細胞に対し、強い増
殖阻止活性を示し、５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は第
１表の通りであった。

【００１５】更に、ＢＥ−１９４１２類のヒト癌細胞
に対する抗腫瘍活性をｉｎｖｉｔｒｏで試験した。細
胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−
１３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養
用培地は、全ての癌細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰ
ＭＩ１６４０培地を用い、上記のマウス大腸癌細胞ｃｏ
ｌｏｎ２６に対する抗腫瘍試験と同様の手法を用いて測
定した。

【００１６】

【表１】上述したようにＢＥ−１９４１２類はマウス及びヒトの
癌細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本発
明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有用
である。

【００１７】次いでＢＥ−１９４１２類の製造法につい
て説明する。本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１９４１２
類の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性
物質ＢＥ−１９４１２Ａを生産するものならばいずれ
でも良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が
挙げられる。１．形態Ａ１９４１２株は基生菌糸の形成は良好であるが、気菌
糸の形成が良好ではない。気菌糸には輪生岐が見られる
が、成熟した胞子の形成は見られない。また、胞子の
う、および菌核等の特殊な器官も観察されない。２．各種寒天平板培地における培養性状（２８゜Ｃ，１
４日間培養）

【００１８】

【表２】３．生育温度（グリセリン・アスパラギン寒天培地、１
４日間培養）１２゜Ｃ：生育せず１６゜Ｃ：生育良好、気菌糸形成せず１８゜Ｃ：生育良好、気菌糸形成痕跡２２゜Ｃ：生育良好、気菌糸形成僅少２６゜Ｃ：生育非常に良好、気菌糸形成僅少２９゜Ｃ：生育非常に良好、気菌糸形成僅少３７゜Ｃ：生育不良、気菌糸形成せず３９゜Ｃ：生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（弱い）（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陽性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陽性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陰性（６）食塩耐性食塩含有量２％以下で生育（グリセリン・アスパラギン寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８゜Ｃ１４日間培養した。

【００１９】Ｄ−グルコース＋ラフィノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−マンニトール − Ｌ−アラビノース − イノシトール＋Ｌ−ラムノース ± サリシン − Ｄ−フルクトース ± シュクロース − Ｄーガラクトース＋６．細胞壁組成ＬＬージアミノピメリン酸及びグリシンが検出された。

【００２０】以上の菌学的諸性質よりＡ１９４１２株は
放線菌ストレプトミセス属に属すると考えられる。した
がってＡ１９４１２株をストレプトミセスエスピー
Ａ１９４１２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ１
９４１２）と称することとした。

【００２１】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、その微工研受託番
号はＦＥＲＭＰ−１４１９４である。

【００２２】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−１９
４１２Ａを生産する微生物の変異株は、例えばＸ線もし
くは紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマス
タード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリンもしく
はＮ−メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合などの通常用いられる菌種
変換処理方法によりＢＥ−１９４１２Ａ生産菌を変異さ
せた微生物である。

【００２３】本発明のＢＥ−１９４１２類を製造するに
あたり、ＢＥ−１９４１２の生産菌株を栄養源含有培地
に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−１９
４１２Ａを含む培養物が得られる。栄養源としては、放
線菌の栄養源として公知のものが使用できる。

【００２４】例えば、炭素源としては、市販されている
ブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキスト
リンなどを単独又は混合物として用いることができる。

【００２５】窒素源としては、市販されている大豆粉、
コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エキス、乾燥
酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミー
ル、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は
硝酸ナトリウムなどを単独又は混合物として用いること
ができる。

【００２６】無機塩としては、市販されている炭酸カル
シウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシ
ウム、臭化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン
酸塩などを用いることができる。

【００２７】その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、モリブデンなどの重金属塩を微量添加す
ることもできる。

【００２８】また、発泡の激しい場合には消泡剤とし
て、例えば大豆油もしくは亜麻仁油などの植物油、オク
タデカノールなどの高級アルコール類又は各種シリコン
化合物などを適宜添加してもよい。

【００２９】これらのもの以外でも、該生産菌が利用
し、ＢＥ−１９４１２Ａの生産に役立つもの例えば３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナト
リウムなどであれば、いずれも使用することができる。

【００３０】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１６〜２９℃が適当であるが、好ましくは２６
〜２９℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は７２時間〜１６８時間である。

【００３１】培養物から目的とするＢＥ−１９４１２Ａ
を採取するには、微生物の生産する代謝物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。

【００３２】ＢＥ−１９４１２Ａは培養濾液中及び菌
体中に存在するので、培養濾液又は菌体より通常の分離
手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着も
しくは分配クロマトグラフィー法及びゲル濾過法などを
単独又は組み合わせて行なうことにより精製できる。

【００３３】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノール又はアセトンなどの有機溶媒を用いて
抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチル
分配を行ない、酢酸エチルを留去後得られる抽出物につ
いてシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタ
ノールで溶出）などを行なうことにより、ＢＥ−１９４
１２Ａを黄色粉末として得ることができる。

【００３４】一般式［Ｉ］においてＲが水素原子である
化合物（構造式［ＩＩ］の化合物）（ＢＥ−１９４１２
Ａ）は化学の分野で公知のアルキル化、低級アルカノイ
ル化又はベンゾイル化の方法により一般式［Ｉ］でＲが
低級アルキル基、低級アルカノイル基又はベンゾイル基
である化合物に容易に変換することができる。

【００３５】例えば塩基の存在下にＢＥ−１９４１２Ａ
をアルキル化剤で処理し、対応する低級アルキル誘導体
に導くことができ、塩基存在下に、ＢＥ−１９４１２Ａ
を酸無水物又は酸ハロゲン化物で処理して低級アルカノ
イル又はベンゾイル誘導体を容易に得ることができる。

【００３６】本発明の化合物ＢＥ−１９４１２類は腫瘍
細胞の増殖を阻害し、制癌効果を発揮するが、本発明化
合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては各
種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、
顆粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液もし
くは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げられ
る。

【００３７】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸類、例
えばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リ
ン酸カルシウムなどの無機塩類、例えばポリビニルピロ
リドンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高
分子類、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステア
リン酸マグネシウムなどの脂肪酸塩類、例えばステアリ
ルアルコールもしくはベンジルアルコールなどのアルコ
ール類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロピ
ルメチルセルロースなどの合成セルロース誘導体類、又
は水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通
常用いられる添加物が挙げられる。

【００３８】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３９】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤もしくは注射剤などの形態
として製造される。特に、非経口的に筋肉内注射、静脈
注射又は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤として
は、例えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉
注射用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、
静脈内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリ
ウムなどの水溶液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び
静脈内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられ
る。

【００４０】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤な
どの液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００４１】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、患者の病態及び
腫瘍によって変化することに注意すべきである。例え
ば、１日あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１
０〜５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注
射の場合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。な
お、投与回数は投与方法及び症状によって異なるが、１
回ないし５回である。

【００４２】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に
説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるも
のではない。実施例１．ＢＥ−１９４１２Ａの製造法斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ１９４１２株をグリ
セリン２．０％、麦芽水飴１．０％、綿実粉０．５％、
小麦胚芽０．５％、肉エキス０．２％、酵母エキス０．
１％、硫酸アンモニウム０．１％、リン酸二水素カリウ
ム０．１％、塩化ナトリウム０．２％、硫酸マグネシウ
ム０．２％、硫酸亜鉛０．００１％、炭酸カルシウム
０．２％、硫酸第一鉄０．００１％からなる培地（ｐＨ
６．７）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラス
コ４本に接種し、２８℃で７２時間、回転振盪機（毎分
１８０回転）上で培養した。この培養液を２ｍｌずつ上
記の培地を１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラス
コ１００本に接種し２８℃で１４４時間、回転振盪機
（毎分１８０回転）上で培養した。

【００４３】このようにして得られた培養液（１０Ｌ）
から濾過により菌体を分離し、この菌体にメタノール５
Ｌを加え、数時間攪拌後濾過した。この濾液を減圧下で
５００ｍｌまで濃縮してから１Ｎ塩酸でｐＨを３に調整
した後、酢酸エチル７００ｍｌを加え液−液分配を行な
った。水層を更に５００ｍｌの酢酸エチルで抽出した。
得られた酢酸エチル画分を合わせてｐＨ３の希塩酸５０
０ｍｌで洗い、更にｐＨ３の希塩酸３００ｍｌで洗って
から減圧下に濃縮し、残渣を２００ｍｌのｎ−ヘキサン
で洗浄した。この残渣を酢酸エチル１５０ｍｌに溶解
し、シリカゲルカラム（メルク社製キーゼルゲル６０，
７０〜２３０メッシュ、３×３５ｃｍ）に吸着させ、ま
ず酢酸エチル５００ｍｌで溶出し、ついで酢酸エチル／
メタノール（４０：１）４１０ｍｌ、酢酸エチル／メタ
ノール（２０：１）２，１００ｍｌ、酢酸エチル／メタ
ノール（１０：１）５５０ｍｌ、酢酸エチル／メタノー
ル（５：１）６００ｍｌ、酢酸エチル／メタノール
（２：１）６００ｍｌの順に展開した。溶出した活性画
分を減圧下に濃縮乾固してからメタノール１００ｍｌに
溶解し、この溶液を濃縮するとＢＥ−１９４１２Ａの沈
殿を生じた。沈殿を濾取して乾燥することにより、ＢＥ
−１９４１２Ａの黄色粉末２４４ｍｇを得た。実施例２．ＢＥ−１９４１２Ｂの製造法ＢＥ−１９４１２Ａ１０５ｍｇをメタノール１０ｍｌ及
びベンゼン２０ｍｌに懸濁し、攪拌しながらトリメチル
シリルジアゾメタン（１０％ヘキサン溶液）１．８ｍｌ
を小量づつ添加し、そのまま室温で１６時間反応させ
た。反応液を減圧下に濃縮し、残渣をメタノール５ｍｌ
に溶解し、セファデックスＬＨ−２０のクロマトグラフ
ィー（１．８×５０ｃｍ，展開溶媒；メタノール）を行
ない、該当画分を減圧下に濃縮した。ついで得られた粗
物質についてシリカゲルのクロマトグラフィー（２．５
×３２ｃｍ）を行ない、クロロホルム５００ｍｌ、クロ
ロホルム／アセトン（５０：１）５１０ｍｌ、クロロホ
ルム／アセトン（３０：１）６２０ｍｌ、クロロホルム
／メタノール（２０：１）８４０ｍｌ、クロロホルム／
メタノール（１０：１）９９０ｍｌで順次展開した。Ｂ
Ｅ−１９４１２Ｂを含む分画を集めて減圧下に濃縮乾燥
し、ＢＥ−１９４１２Ｂの橙色粉末３０ｍｇを得た。

【００４４】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。製剤例１本物質（ＢＥ−１９４１２Ａ）１０部重質酸化マグネシウム１５部乳糖７５部を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。製剤例２本物質（ＢＥ−１９４１２Ａ）４５部澱粉１５部乳糖１６部結晶性セルロース２１部ポリビニルアルコール３部蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。製剤例３製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。製剤例５本物質（ＢＥ−１９４１２Ａ）０．６部非イオン系界面活性剤２．４部生理的食塩水９７部を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なって注
射剤を作製した。

【００４５】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−１９４１２類
は、マウス及びヒトの癌細胞に対して強い増殖抑制効果
を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用で
ある。

【００４６】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者鈴木肇茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内 (72)発明者須田寛之茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式［Ｉ］【化１】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物又は
その薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属し、構造式［ＩＩ］【化２】の化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、その培養液及び菌体から構造式［ＩＩ］の化
合物を採取し、要すれば薬学的に許容しうる塩とするこ
とを特徴とする構造式［ＩＩ］【化３】の化合物又はその薬学的に許容しうる塩の製造法。
【請求項３】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属し、構造式［ＩＩ］【化４】の化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、その培養液及び菌体から構造式［ＩＩ］の化
合物を採取し、構造式［ＩＩ］の化合物をアルキル化、
アルカノイル化又はベンゾイル化することを特徴とする
一般式［Ｉ］【化５】の化合物又はその薬学的に許容しうる塩の製造法。
【請求項４】微生物又はその変異株が、ストレプトミセ
スエスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）で
ある請求項２記載の製法。
【請求項５】一般式［Ｉ］【化６】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物又は
その薬学的に許容しうる塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
【請求項６】構造式［ＩＩ］【化７】の化合物を産生する能力を有する、ストレプトミセス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物又はそ
の変異株。
【請求項７】微生物が、ストレプトミセスエスピーＡ
１９４１２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ１９
４１２）である請求項６記載の微生物又はその変異株。