JPH07258242A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−３９８９１類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】一般式： 【化１】 （式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を示す）で
表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。 【効果】本発明に記載するＢＥ−３９８９１類は、癌細
胞に対して強い増殖抑制効果を示すことから、医薬の分
野で癌の治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害し、制癌効果
を発揮する新規化合物ＢＥ−３９８９１類、その製造法
及びその用途並びにＢＥ−３９８９１を産生する新規な
ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属
する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）参照］。このような状況下、
癌治療の分野においては常に新規制癌物質の開発が求め
られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な制癌物質を提供することを目
的とするものである。即ち、既存の制癌物質が充分に効
果を発揮できない種類の癌に対しても優れた制癌活性を
有する化合物を見いだすことが本発明が解決しようとす
る課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、下記一
般式（１）で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。

【０００５】即ち、本発明は新規な式：

【０００６】

【化５】 （式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を示す）で
表される化合物、その薬学的に許容しうる塩、その製法
及び用途並びに一般式（１）の化合物のうちＲが水素原
子である化合物を産生する能力を有するストレプトミセ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に関
するものである。

【０００７】なお、明細書中、低級アルキル基とは、メ
チル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチ
ル基、ペンチル基、ヘキシル基等の炭素数１〜６個の分
枝状又は直鎖状のアルキル基を意味する。

【０００８】以下、一般式（１）で表されるＢＥ−３９
８９１類と称される化合物のうちＲが水素原子である化
合物をＢＥ−３９８９１と称し、Ｒがメチル基である化
合物をＢＥ−３９８９１ＭＥと称する。

【０００９】以下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−３９８９１及びＢＥ−３９８９１ＭＥについて
の物理化学的な性状を示す。

【００１０】ＢＥ−３９８９１の物理化学的性状 性状 ；無色油状物質 分子式 ；Ｃ₃₉Ｈ₆₈Ｏ₈ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ
６６５．５０１８紫外部吸収スペクトル； λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ） ２０１（ε＝２５６
０），２７７（ε＝１０３８０） λｍａｘ（０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ １：９，ｎ
ｍ） ２００（ε＝３２５０），２７７（ε＝１０７０
０） λｍａｘ（０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ １：９，ｎ
ｍ） ２９５（ε＝１３６９０） 赤外部吸収スペクトル；νｍａｘ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）
２９６８，１７３０，１７０９，１６１４，１４６２，
１３７７，１０８８，１０７８，１０３２，９７４¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，５００ＭＨｚ）δ
ｐｐｍ：０．８４（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．
８６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．００（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．０２〜１．１７（５Ｈ，
ｍ），１．１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．１
２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．１３（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．１４（３Ｈ，ｓ），１．１
５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．２７（３Ｈ，
ｓ），１．４０〜１．５８（４Ｈ，ｍ），１．５８〜
１．７２（７Ｈ，ｍ），１．７５〜２．００（５Ｈ，
ｍ），２．０６（１Ｈ，ｍ），２．１２〜２．２３（２
Ｈ，ｍ），２．４２（２Ｈ，ｍ），２．５４（１Ｈ，
ｍ），２．８０〜３．３０（２Ｈ，ｂｒ ｓ），３．５
８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，５．５Ｈｚ），３．
７９（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，８．２Ｈｚ），４．１３（１
Ｈ，ｍ），５．３６（２Ｈ，ｍ），５．５９（１Ｈ，
ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，１２５ＭＨｚ）
δｐｐｍ：１６．１（ｑ），１７．４（ｑ），１７．８
（ｑ），１８．５（ｑ），１８．５（ｑ），１９．３
（ｑ），１９．３（ｑ），１９．３（ｑ），２３．９
（ｑ），２５．８（ｑ），２７．６（ｔ），２８．０
（ｄ），２８．０（ｄ），３０．４（ｔ），３０．８
（ｄ），３１．９（ｔ），３４．０（ｔ），３６．８
（ｄ），４０．１（ｄ），４０．１（ｄ），４０．２
（ｔ），４０．２（ｔ），４１．２（ｔ），４１．９
（ｔ），４２．４（ｔ），４２．９（ｄ），４５．０
（ｔ），７３．３（ｄ），７４．３（ｄ），８０．６
（ｄ），８３．８（ｄ），８５．２（ｓ），８６．９
（ｓ），９７．７（ｄ），１２９．４（ｄ），１３３．
６（ｄ），１７９．３（ｓ），１９８．４（ｓ），１９
８．６（ｓ） 溶解性；クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホキ
シド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１１】酸性、中性、塩基性物質の区別；酸性物質 Ｒｆ値；０．４５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１５：
１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性 リンモリブデン酸反応 陽性ＢＥ−３９８９１ＭＥの物理化学的性状 性状 ；無色油状物質 分子式 ；Ｃ₄₀Ｈ₇₀Ｏ₈ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ
６７９．５０６６ 紫外部吸収スペクトル； λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ） ２０１（ε＝３２３
０），２７７（ε＝１２３４０） λｍａｘ（０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ １：９，ｎ
ｍ） ２００（ε＝４３００），２７７（ε＝１２７１
０） λｍａｘ（０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ １：９，ｎ
ｍ） ２９７（ε＝１８９３０） 赤外部吸収スペクトル；νｍａｘ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）
２９６８，１７３８，１４５８，１３７５，１１２４，
１０９０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，５００ＭＨｚ）δ
ｐｐｍ：０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．
８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８６（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
０Ｈｚ），１．０２（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，
７．０Ｈｚ），１．０５〜１．１７（３Ｈ，ｍ），１．
０９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．１０（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），１．１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
０Ｈｚ），１．１２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），
１．１３（３Ｈ，ｓ），１．２５（３Ｈ，ｓ），１．４
３〜１．５２（４Ｈ，ｍ），１．５３〜１．７１（７
Ｈ，ｍ），１．８３（３Ｈ，ｍ），１．９０（１Ｈ，
ｍ），１．９８（１Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｍ），
２．１２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，９．８Ｈ
ｚ，１２．５Ｈｚ），２．１９（１Ｈ，ｍ），２．４１
（２Ｈ，ｍ），２．５３（１Ｈ，ｍ），３．６０（１
Ｈ，ｍ），３．６５（３Ｈ，ｓ），３．７３（１Ｈ，
ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），３．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
７．０Ｈｚ，８．３Ｈｚ），４．１３（１Ｈ，ｍ），
５．３７（２Ｈ，ｍ），５．４６（１Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，１２５ＭＨｚ）
δｐｐｍ：１６．１（ｑ），１７．５（ｑ），１７．７
（ｑ），１８．３（ｑ），１８．５（ｑ），１９．２
（ｑ），１９．３（ｑ），１９．４（ｑ），２３．７
（ｑ），２５．５（ｑ），２７．５（ｔ），２７．７
（ｄ），２７．９（ｄ），３０．３（ｔ），３０．７
（ｄ），３２．１（ｔ），３４．１（ｔ），３７．１
（ｄ），４０．０（ｄ），４０．１（ｄ），４０．２
（ｔ），４０．４（ｔ），４０．９（ｔ），４２．０
（ｔ），４２．２（ｔ），４２．８（ｄ），４４．５
（ｔ），５１．３（ｑ），７２．９（ｄ），７４．５
（ｄ），８０．９（ｄ），８３．７（ｄ），８５．１
（ｓ），８６．９（ｓ），９７．０（ｄ），１２９．１
（ｄ），１３３．６（ｄ），１７７．３（ｓ），１９
８．４（ｓ），１９８．７（ｓ） 溶解性；クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホキ
シド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１２】酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 Ｒｆ値；０．７５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（２０：
１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性 リンモリブデン酸反応 陽性ＢＥ−３９８９１類の生物学的活性（抗腫瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−３９８９１およびＢＥ−３９８９１
ＭＥのマウス実験腫瘍細胞に対する増殖阻止作用を決定
するため、ｉｎ ｖｉｔｒｏで試験を行なった。マウス
白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍作用試験は、検体を
ジメチルスルホキシドに溶解した後、牛胎児血清１０％
含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２０μＭの２−メルカプト
エタノールを含む）で逐次希釈し、２×１０³個の腫瘍
細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地、２０μＭの２−メルカプトエタノール
を含む）５０μｌに対し５０μｌを加えた。３７℃で７
２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法［本郷輝
明ら「マイクロプレート短期培養、ＭＴＴ ｄｙｅ還元
法による制癌感受性試験」、癌と化学療法、１４巻、４
７２−４７８頁、１９８７年］により対照群と比較し
た。

【００１３】更に、ＢＥ−３９８９１及びＢＥ−３９８
９１ＭＥのヒト癌細胞に対する抗腫瘍活性をｉｎ ｖｉ
ｔｒｏで試験した。細胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−
１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−
４５を使用し、細胞培養用培地は、全ての癌細胞共に牛
胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用いた。検
体をまずジメチルスルホキシドに溶解し、次に牛胎児血
清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地で逐次希釈して検液
とした。癌細胞増殖阻害の検定は、１×１０³個の癌細
胞を含む細胞培養用の培地１００μｌを９６穴マイクロ
プレートに分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で
培養した後、上記検液１００μｌを加えた。更に、７２
時間培養後細胞を５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．
４％スルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を
用いて細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長
として５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比
較した。その結果、ＢＥ−３９８９１類はヒト腫瘍細胞
においても強い増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻
止濃度（ＩＣ₅₀）値は第１表の通りであった。

【００１４】

【表１】 上述したようにＢＥ−３９８９１類はマウス及びヒトの
癌細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本発
明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有用
である。

【００１５】次いで、ＢＥ−３９８９１の製造法につい
て説明する。

【００１６】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−３９８９１の
製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質
ＢＥ−３９８９１を生産するものならばいずれでも良い
が、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙げられ
る。 １．形態 Ａ３９８９１株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し輪生岐および菌糸の分断は認められない。胞子
の形状は、卵型、三角型、Ｔ字型で大きさが０．６〜
０．９×０．７〜１．２ｍｍ位でその表面は平滑であ
る。胞子の鎖（１０個以上）は気菌糸上に形成され、三
角型およびＴ字型の胞子を基点として分枝する。

【００１７】胞子のう、鞭毛胞子、および菌核等の特殊
な器官は観察されない。 ２．培養性状 各種寒天平板培地における２８℃、１４日間培養時の性
状を第２表に示す。

【００１８】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） １２℃；生育せず １６℃；生育良好、気菌糸形成せず １９℃；生育非常に良好、気菌糸形成僅少 ２３℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ２８℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ３２℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ３７℃；生育せず ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含有量４％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。その結果を第３
表に示す。

【００１９】

【表３】 ６．細胞壁組成 ＬＬージアミノピメリン酸およびグリシンが検出され
た。

【００２０】以上の菌学的諸性質よりＡ３９８９１株は
放線菌ストレプトミセス属に属すると考えられる。

【００２１】したがってＡ３９８９１株をストレプトミ
セス エスピー Ａ３９８９１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ｓｐ．Ａ３９８９１）と称することとした。

【００２２】また、Ｓｃｉ．Ｒｅｐｏｒｔｓ ｏｆ Ｍ
ｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａ Ｋａｉｓｈａ Ｎｏ．１３，７
２−７９（１９７３）など文献調査の結果、Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｔｒｉａｎｇｕｌａｔｕｓが近縁の種
と推定された。

【００２３】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、その受託番号はＦ
ＥＲＭ Ｐ−１４０７０である。

【００２４】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−３９
８９１を生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若しく
は紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマスタ
ード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくは
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質、転換形質導入又は接合などの通常用いられる菌種
変換処理方法によりＢＥ−３９８９１生産菌を変異させ
た微生物である。

【００２５】本発明のＢＥ−３９８９１及びＢＥ−３９
８９１ＭＥを製造するにあたり、ＢＥ−３９８９１の生
産菌株を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させる
ことにより、ＢＥ−３９８９１を含む培養物が得られ
る。栄養源としては、放線菌の栄養源として公知のもの
が使用できる。例えば、炭素源としては、市販されてい
るブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキス
トリンなどが単独又は混合物として用いられる。窒素源
としては、市販されている大豆粉、コーンステイープリ
カー、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプ
トン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱
脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなど
が単独又は混合物として用いられる。無機塩としては、
市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化
カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸
ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用することができ
る。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、モリブデンなどの重金属塩を微量添加することもで
きる。また、発泡の激しい場合には消泡剤として、例え
ば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オクタデカノール
などの高級アルコール類、各種シリコン化合物などを適
宜添加してもよい。これらのもの以外でも、該生産菌が
利用し、ＢＥ−３９８９１の生産に役立つもの例えば３
−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナ
トリウムなどであれば、いずれも使用することができ
る。

【００２６】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は２７〜３７℃が適当であるが、好ましくは２５
〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は７２時間〜３６０時間、好ましくは９６
時間〜２４０時間である。培養物から目的とするＢＥ−
３９８９１を採取するには、微生物の生産する代謝物か
ら採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用され
る。

【００２７】ＢＥ−３９８９１は培養濾液中及び菌体中
に存在するので、培養濾液または菌体より通常の分離手
段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法、吸着クロマ
トグラフィー、分配クロマトグラフィー法、ゲル濾過法
などを単独又は組み合わせて行なうことにより精製でき
る。

【００２８】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノールまたはアセトンなどの有機溶媒を用い
て抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチ
ル分配を行ない、酢酸エチルを留去後得られる抽出物に
ついてシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／
メタノールで溶出）を行なう。ＢＥ−３９８９１を含む
フラクションを減圧下に濃縮し、更にゲル濾過（メタノ
ールで溶出）を行なう。ＢＥ−３９８９１を含むフラク
ションを減圧下で濃縮し、残留物を更に逆相カラムクロ
マトグラフィーによって精製することにより、ＢＥ−３
９８９１を無色油状物質として得ることができる。

【００２９】次にＢＥ−３９８９１低級アルキルエステ
ル体の製造法について説明する。

【００３０】本発明のＢＥ−３９８９１ＭＥは本発明の
ＢＥ−３９８９１をメチル化することにより得ることが
できる。用いるメチル化剤はジアゾメタンまたはトリメ
チルシリルジアゾメタン等でよく、メチル化は有機溶媒
中（例えばエーテル、ヘキサン、メタノール、クロロホ
ルム等を単独又は、組み合わせて用いる）で、加熱し、
又は加熱せずに行なうとができる。メチル化物は減圧
下、溶媒留去後、従来の分離法例えば、逆相カラムクロ
マトグラフィー等を行なうことにより、純粋なＢＥ−３
９８９１ＭＥを得ることができる。更に、メチルエステ
ル誘導体及びメチルエステル体以外の低級アルキルエス
テル誘導体は化学の分野で通常良く知られているカルボ
ン酸のエステル化法を使って製造することができる。例
えば、ＢＥ−３９８９１を良くとかす溶媒、例えばクロ
ロホルム／メタノール（１：２）などの溶媒にＢＥ−３
９８９１を溶解し、これに低級アルキルアルコールを加
え、塩酸などの酸を添加することにより対応するＢＥ−
３９８９１の低級アルキルエステルを製造することがで
きる。

【００３１】本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際
に、本化合物の薬学的に許容しうる塩としても使用され
る。これらには、通常の無機塩基、有機塩基との塩が含
まれるが、薬学的に許容しうる塩の典型例としては例え
ばナトリウム塩、カリウム塩等を挙げることができる。

【００３２】本発明の化合物ＢＥ−３９８９１及びＢＥ
−３９８９１ＭＥは腫瘍細胞の増殖を阻害し、制癌効果
を発揮するが、本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する
際の投与形態としては各種の形態を選択でき、例えば錠
剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤もしくは液剤などの経口
剤、又は例えば溶液もしくは懸濁液などの殺菌した液状
の非経口剤が挙げられる。

【００３３】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コールもしくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルルース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。

【００３４】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３５】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤もしくは注射剤などの形態
として製造される。

【００３６】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又
は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例え
ば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
などの水溶液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び静脈
内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００３７】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液 は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００３８】又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤など
の液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３９】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。

【００４０】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。

【００４１】実施例１ 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ３９８９１株をグル
コース０．２％、デキストリン２％、ミートミール０．
５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉０．１％、乾燥
酵母０．０５％、硫酸マグネシウム０．０２５％、臭化
ナトリウム０．０２５％、塩化ナトリウム０．２５％、
リン酸水素二カリウム０．０５％、硫酸第一鉄０．００
０２％、塩化第二銅０．００００４％、塩化マンガン
０．００００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫
酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウム０．０００
０８％、及びモリブデン酸ナトリウム０．０００２４％
からなる培地（ｐＨ７．２）１００ｍｌ含む５００ｍｌ
容の三角フラスコ２本に接種し、２８℃で７２時間、回
転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液
を２ｍｌずつ上記の培地を１００ｍｌ含む５００ｍｌ容
の三角フラスコ１００本に接種し２８℃で１４４時間、
回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

【００４２】このようにして得られた培養液（１０Ｌ）
から濾過により菌体を分離し、この菌体にメタノール４
Ｌを加え、３０分攪拌後濾過した。残渣に更に４Ｌのメ
タノールを加え攪拌後、濾過した。この濾液を減圧下３
００ｍｌまで濃縮した後、酢酸エチル３００ｍｌで抽出
した。酢酸エチル層を更に３００ｍｌの水で洗浄した。
得られた酢酸エチル層を減圧下に濃縮し、残渣を２００
ｍｌの９０％メタノールに溶解し２００ｍｌのｎ−ヘキ
サンで２回洗浄した。この９０％メタノール画分を減圧
下に濃縮し、粗抽出物を得た。この粗抽出物をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（メルク社製キーゼルゲル
６０、７０〜２３０メッシュ、３．０φ×２０ｃｍ，ク
ロロホルム／メタノール（１９：１）で溶出）に付し、
溶出した活性画分を更にセファデックスＬＨ−２０カラ
ム（ファルマシア社、２．８φ×４４ｃｍ）にかけメタ
ノールで溶出した。次に、ＢＥ−３９８９１を含む画分
を集め、減圧下に濃縮して得られたものをＯＤＳカラム
（Ｃａｐｃｅｌｌｐａｋ^TMＣ₁₈，資生堂，２０φ×２５
０ｍｍ）で精製した。移動相として０．５％の酢酸を含
む８５％のアセトニトリル水を用い、毎分５ｍｌで送液
して分取高速液体クロマトグラフィーを行なった結果、
ＢＥ−３９８９１を３２０ｍｇを得た。

【００４３】実施例２ ８４ｍｇのＢＥ−３９８９１をクロロホルム／メタノー
ル（１：２）１．５ｍｌに溶解し、１０％のトリメチル
シリルジアゾメタンのｎ−ヘキサン溶液を０．７ｍｌを
加え室温で攪拌する。３時間後、溶媒を減圧下に留去
し、残留物を高速液体クロマトグラフィーに供した。カ
プセルパック Ｃ１８ （Ｃａｐｃｅｌｌｐａｋ^TM Ｃ
₁₈、資生堂、１．０φ×２５ｃｍ）を用い、移動相９０
％アセトニトリルを毎分２ｍｌで送液し、活性画分をあ
つめ、純粋なＢＥ−３９８９１ＭＥ３３．４ｍｇを得
た。

【００４４】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。

【００４５】製剤例１ ＢＥ−３９８９１ １０（部） 重質酸化マグネシウム １５ 乳糖 ７５ を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。

【００４６】製剤例２ ＢＥ−３９８９１ ４５（部） 澱粉 １５ 乳糖 １６ 結晶性セルロース ２１ ポリビニルアルコール ３ 蒸留水 ３０ を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１７７〜１４１０μｍの大きさの顆粒剤とし
た。

【００４７】製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。

【００４８】製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。

【００４９】製剤例５ ＢＥ−３９８９１ ０．６（部） 非イオン系界面活性剤 ２．４ 生理的食塩水 ９７ を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なって注
射剤を作製した。

【００５０】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−３９８９１類
は、癌細胞に対して強い増殖抑制効果を示すことから、
医薬の分野で癌の治療剤として有用である。

【００５１】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式： 【化１】 （式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を示す）で
   表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。
2. 【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
   ｅｓ）属に属し、下記式（２）の化合物を産生する能力
   を有する微生物又はその変異株を培養し、その培養物か
   ら下記式（２）で表される化合物を採取し、要すれば薬
   学的に許容しうる塩とすることを特徴とする、式： 【化２】 で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩の製
   法。
3. 【請求項３】微生物又はその変異株が、ストレプトミセ
   ス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ａ
   ３９８９１株又はその変異株である請求項２記載の製
   法。
4. 【請求項４】式： 【化３】 で表される化合物又はその塩をエステル化することを特
   徴とする、式： 【化４】 （式中、Ｒ¹は低級アルキル基を示す）で表される化合
   物の製法。
5. 【請求項５】請求項１記載の一般式（１）で表される化
   合物又はそれらの薬学的に許容しうる塩を有効成分とす
   る抗腫瘍剤。
6. 【請求項６】請求項２記載の式（２）の化合物を生産す
   る能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
   ｃｅｓ）属に属する微生物又はその変異株。
7. 【請求項７】請求項２記載の式（２）の化合物を生産す
   る能力を有するストレプトミセス エスピー（Ｓｔｒｅ
   ｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ａ３９８９１株又はその変
   異株。