JPH0725893A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−１３７９３ｘ及びｂｅ−１３７９３ｘａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】式： 【化１】 で表される化合物、式： 【化２】 で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。 【効果】本発明に記載するＢＥ−１３７９３Ｘ及びＢＥ
−１３７９３ＸＡは、マウス及びヒトの癌細胞に対し、
強い増殖抑制効果を示すことから、医薬の分野で癌の治
療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害し、制癌効果
を発揮する新規化合物ＢＥ−１３７９３Ｘ、その新規酸
加水分解物ＢＥ−１３７９３ＸＡ、その製造法及びその
用途並びにＢＥ−１３７９３Ｘを産生するストレプトバ
ーティシリウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ）属に属する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁−１５頁（１９８８年）参照］。このような状況下、
癌治療の分野においては常に新規制癌物質の開発が求め
られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な制癌物質を提供することを目
的とするものである。即ち、既存の制癌物質が充分に効
果を発揮できない種類の癌に対しても優れた制癌活性を
有する化合物を見いだすことが本発明が解決しようとす
る課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記式
［Ｉ］で表される化合物及び式［ＩＩ］で表される式
［Ｉ］の酸加水分解生成物が優れた抗腫瘍作用を示すこ
とを見いだして本発明を完成した。

【０００５】即ち、本発明は新規な式：

【０００６】

【化４】 で表される化合物（以下、ＢＥ−１３７９３Ｘとい
う）、式：

【０００７】

【化５】 で表される化合物（以下、ＢＥ−１３７９３ＸＡとい
う）又はその薬学的に許容しうる塩、その製法及びその
用途並びに式［Ｉ］の化合物を産生する能力を有するス
トレプトバーティシリウム属に属する微生物に関するも
のである。

【０００８】以下に、本発明に係わる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−１３７９３Ｘ及びＢＥ−１３７９３ＸＡについ
ての物理化学的な性状を示す。

【０００９】ＢＥ−１３７９３Ｘの物理化学的性状 性状 ；黄色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₄₇Ｈ₅₆Ｏ₂₀ 融点 ；１９８−２０２℃ 高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）；９４１．３４１３
（Ｍ＋Ｈ）⁺ 比旋光度；［ａ］²⁰ _D ＝＋２１５°（ｃ ０．９７，
ＭｅＯＨ） 紫外部吸収スペクトル； ［ＭｅＯＨ中］：λｍａｘ，ｎｍ（ε） ２３１（２
５，８２０），２７４（２８，５３０），２９５（ｓｈ
１８，８００），３６２（１４０９０），４２０
（４，４６０） ［０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ中］：λｍａｘ，ｎｍ
（ε） ２３１（２７，５７０），２５０（２３，０９
０），２７６（３５，８５０）， ２９６（ｓｈ ２
４，０１０），３６０（１６，７４０），４２０（４，
２１０） ［０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ中］：λｍａｘ，ｎｍ
（ε） ２３６（ｓｈ ３１，５８０），２７７（２
５，５２０），３９１（１７，６７０） 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）；ν（ｃｍ^-1） ３
４６６，２９３８，１６６８，１６２９，１５７８，１
５６３，１４６７，１４４９，１３８０，１３４１，１
２５７，１２３０，１１７０，１０６２，９８７¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル （ＤＭＳＯ−ｄ₆，δ ｐｐ
ｍ）；０．９４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．１
８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）， １．２０（３Ｈ，
ｄ， Ｊ＝６．０Ｈｚ）， １．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ
＝６．０Ｈｚ），１．２５（１Ｈ，ｍ），１．４０（１
Ｈ，ｍ），１．４７（２Ｈ，ｍ），１．６２（１Ｈ，
ｍ），１．６８（１Ｈ，ｍ），１．７８（１Ｈ，ｍ），
２．０８（１Ｈ，ｍ），２．３１（１Ｈ，ｍ），２．４
８（１Ｈ，ｍ），２．８９（１Ｈ，ｍ），２．９７（３
Ｈ，ｍ），３．１４（２Ｈ，ｍ），３．２９（１Ｈ，
ｍ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．３６（２Ｈ，ｍ），
３．５１（１Ｈ，ｍ），３．７２（１Ｈ，ｍ），３．９
６（３Ｈ，ｓ），４．５４（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５
８（１Ｈ，ｓ），４．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．８，
１．８Ｈｚ），４．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．８，
１．４Ｈｚ），４．７５（１Ｈ，ｍ），４．８９（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．０４（１Ｈ，ｂｒ
ｓ），５．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），５．２
０（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），５．４７（２
Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９１（１Ｈ，ｓ），７．１２（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．８Ｈｚ），１１．７（２Ｈ，ｂｒｓ），１２．２
（１Ｈ，ｂｒ ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル （ＤＭＳＯ−ｄ ₆，δ ｐｐ
ｍ）；１３．６，１７．６，１７．７，１７．７，１
８．０，３１．７，３５．９，３６．０，３６．４，３
８．７，５６．６，６２．５，６４．４，６８．５，６
９．８，７１．２，７１．７，７１．９，７４．０，７
４．７，７７．３，７９．３，７９．６，８６．８，９
６．７，９７．７，１００．１，１０６．５，１０７．
３，１０８．０，１０８．５，１１３．１，１１７．
７，１１９．８，１２７．１，１３８．０，１３９．
２，１３９．３，１４１．４，１４５．８，１４８．
３，１４９．９，１５０．３，１５２．９，１５８．
２，１６９．８，１８５．８ 溶解性；酢酸エチル、メタノール、ジメチルスルホキシ
ド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１０】酸性、中性、塩基性物質の区別；酸性物質 Ｒｆ値；０．４５［メルク社製キーゼルゲル６０使用、
展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：１）］ 呈色反応；硫酸反応（陽性）、塩化第二鉄反応（陽
性）、過マンガン酸カリウム反応（陽性）ＢＥ−１３７９３ＸＡの物理化学的性状 性状 ；黄色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₈Ｈ₂₄Ｏ₁₁ 融点 ；１７８−１８０℃ 高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）；５３７．１４０２
（Ｍ＋Ｈ）⁺ 比旋光度；［ａ］²⁰ _D＝＋４４９°（ｃ １．００，Ｍ
ｅＯＨ） 紫外部吸収スペクトル； ［ＭｅＯＨ中］：λｍａｘ，ｎｍ（ε） ２３５（２
７，０５０），２７４（ｓｈ ２５，２６０），２８４
（２６，８７０），３７４ （１２，３７０），４３４
（５，７００） ［０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ中］：λｍａｘ，ｎｍ
（ε） ２３５（２４，１００），２８２（３７，０８
０），３００（ｓｈ ２３，７２０），３６７（１２，
４００），４２８（３，４８０） ［０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ中］：λｍａｘ，ｎｍ
（ε） ２３７（ｓｈ ３０，６９０），２９１（２
５，９６０），３９５（１４，１３０） 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）；ν（ｃｍ^-1） ３
４００，２９５３，２９２６，２３６８，２３２９，１
６５８，１６２５，１６０５，１５７９，１４８７，１
４６７，１４３７，１３８２，１３０３，１２５７，１
２３１，１１８４，１０５３¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆，δ ｐｐ
ｍ）；０．９４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．４
７（２Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｍ），１．７８（１
Ｈ，ｍ），２．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，１
０．３Ｈｚ），３．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，
３．６Ｈｚ），３．９５（３Ｈ，ｓ），４．５２（１
Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），４．７６（１Ｈ，
ｍ），５．０３（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），
５．４６（２Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９０（１Ｈ，ｓ），
７．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），９．４９（１Ｈ，ｓ），１
１．５（１Ｈ，ｓ），１１．７（１Ｈ，ｓ），１２．３
（１Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆，δ ｐｐ
ｍ）；１３．６，１７．７，３１．７，３６．０，６
２．４，６４．４，７１．２，７９．３，１０６．５，
１０７．２，１０７．９，１０８．４，１１２．６，１
１７．８，１１９．８，１２４．９，１３８．０，１３
９．０，１４０．７，１４１．０，１４５．８，１４
６．９，１４８．０，１４８．４，１５２．８，１５
８．１，１６９．８，１８５．９ 溶解性；酢酸エチル、メタノール、ジメチルスルホキシ
ド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１１】酸性、中性、塩基性物質の区別；酸性物質 Ｒｆ値；０．４４［メルク社製キーゼルゲル６０使用、
展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：１）］ 呈色反応；硫酸反応（陽性）、塩化第二鉄反応（陽
性）、過マンガン酸カリウム反応（陽性）ＢＥ−１３７９３Ｘ及びＢＥ−１３７９３ＸＡの生物学
的活性（抗腫瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３Ｘのマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏで試験を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８及びマ
ウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ ２６に対する抗腫瘍試験
は、ＢＥ−１３７９３Ｘをジメチルスルホキシドに溶解
した後、ＰＢＳ（−）（Ｃａ²⁺，Ｍｇ²⁺ｆｒｅｅ ｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で
逐次希釈し、３×１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培
地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ−１６４０培地）１
００μｌに対し１０μｌを加えた。３７℃で７２時間、
５％ＣＯ₂下で培養後、Ｐ３８８細胞はＭＴＴ測定法に
より対照群と比較した。ｃｏｌｏｎ ２６細胞は、５０
％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％スルホローダミン
Ｂで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて細胞から色素を
抽出した。４５０ｎｍを対照波長として５４０ｎｍに於
ける吸光度を測定して対照群と比較した。その結果、Ｂ
Ｅ−１３７９３Ｘは両癌細胞に対し、強い増殖阻止活性
を示し、５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通り
であった。更に、ＢＥ−１３７９３Ｘのヒト癌細胞に対
する抗腫瘍活性をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。細胞
は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１
３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用
培地は、全ての癌細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭ
Ｉ−１６４０培地を用いた。ＢＥ−１３７９３Ｘをまず
ジメチルスルホキシドに溶解し、次にＰＢＳ（−）で逐
次希釈して検液とした。癌細胞増殖阻害の検定は、３×
１０³個の癌細胞を含む細胞培養用の培地１００μｌを
９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、
５％ ＣＯ₂下で培養した後、上記検液１０μｌを加え
た。更に、７２時間培養後細胞を５０％トリクロロ酢酸
で固定し、以下ｃｏｌｏｎ ２６細胞と同様の方法を用
い対照群と比較検討した。その結果、ＢＥ−１３７９３
Ｘはヒト腫瘍細胞においても強い増殖阻害活性を示し、
そのＩＣ₅₀値は第１表の通りであった。また、抗腫瘍性
物質ＢＥ−１３７９３ＸＡのマウス実験腫瘍（Ｐ３８８
細胞）及びヒト癌細胞（ＤＬＤ−１細胞、ＰＣ−１３細
胞、ＭＫＮ−４５細胞）に対する抗腫瘍活性について
も、ＢＥ−１３７９３Ｘと同様の方法により測定を行な
い、そのＩＣ₅₀値を第１表に示した。

【００１２】

【表１】 上述したようにＢＥ−１３７９３Ｘ及びＢＥ−１３７９
３ＸＡはマウス及びヒトの癌細胞に対し顕著な増殖阻止
作用を示す。従って、本発明はヒトをはじめとする哺乳
動物の抗腫瘍剤として有用である。

【００１３】ＢＥ−１３７９３Ｘの製造法について説明
する。

【００１４】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３Ｘ
の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物
質ＢＥ−１３７９３Ｘを産生するものならばいずれでも
良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物を挙げ
ることができる。 １．形 態 ＢＡ−１３７９３株は、顕微鏡下で、よく発達した気菌
糸よりほぼ一定間隔の輪生枝が形成され、さらに５〜８
本の二次分枝を形成し、それらの先端が５〜１０ヶの直
状の胞子鎖となっている。

【００１５】胞子の大きさが０．５×１〜１．５μｍ位
の円筒状で、その表面は平滑である。

【００１６】胞子のう、鞭毛胞子、菌核等の特殊な器官
及び菌糸の分断は観察されない。 ２．培養性状 各種寒天平板培地における２８℃、１４日間培養時の性
状を第２表に示す。

【００１７】

【表２】 ３．生 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） １２℃：生育は不良で気菌糸を形成せず ２０℃：生育は不良で気菌糸を形成せず ２８℃：生育及び気菌糸形成は良好 ３７℃：生育は良好で気菌糸形成は不良 ４５℃：生育せず ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陰性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂牛乳の凝固及びペプトン化 陰性 （スキムミルク培地） （４）メラニン様色素の生成 陰性 （５）食塩耐性 食塩含有量４％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地として、下記の
各種糖を添加して、２８℃、１４日間培養した。その結
果を第３表に示す。

【００１８】

【表３】 ６．細胞壁のアミノ酸 ＬＬ−ジアミノピメリン酸及びグリシンが検出された。

【００１９】以上の菌学的性状により、ＢＡ−１３７９
３株は放線菌ストレプトバーティシリウム属に分類さ
れ、バージーズ・マニュアル・オブ・デターミナティブ
・バクテリオロジー第８版、１９７４年（Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ
ｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ８ｔｈ Ｅｄｉｔｉ
ｏｎ， １９７４）及び放線菌の同定実験法（日本放線
菌学会編）などの文献検索によると、ストレプトバーテ
ィシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉ
ｃｉｌｌｉｕｍ ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ）が近縁な種と
して挙げられる。しかし、ＢＡ−１３７９３株とはラフ
ィノース、シュクロースの利用能が異なり、また寒天培
地上での培養性状における菌糸の色調などの点では、ス
トレプトバーティシリウム・モバラエンスは緑色が基調
になっており、ＢＡ−１３７９３株とは異なる。従っ
て、新規な微生物であることから、ＢＡ−１３７９３株
をストレプトバーティシリウム・エスピー・ＢＡ−１３
７９３（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓ
ｐ． ＢＡ−１３７９３）と称する。

【００２０】なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生
物工業技術研究所に国際寄託されており、その微工研受
託番号は微工研条寄第２７８５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２
７８５）である。

【００２１】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−１３
７９３Ｘを産生する微生物の変異株は、例えばＸ線若し
くは紫外線等の照射処理、例えばナイトロジェン・マス
タード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しく
はＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変
換処理方法によりＢＥ−１３７９３Ｘ生産菌を変異させ
た微生物である。

【００２２】本発明のＢＥ−１３７９３Ｘを製造するに
あたり、ＢＥ−１３７９３Ｘの生産菌株ＢＡ−１３７９
３株を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させるこ
とにより、ＢＥ−１３７９３Ｘを含む培養物が得られ
る。栄養源としては、放線菌の栄養源として公知のもの
が使用できる。例えば、炭素源としては、市販されてい
るブドウ糖、グリセリン、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖
蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物として用いら
れる。窒素源としては、市販されている大豆粉、コーン
グルテンミール、コーンスティープリカー、肉エキス、
酵母エキス、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、無機
アンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合
物として用いられる。無機塩としては、市販されている
炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
マグネシウム又は各種リン酸塩などを使用することがで
きる。その他必要に応じて、鉄、銅、コバルト、モリブ
デン、マンガン又は亜鉛などの重金属塩を微量添加する
こともできる。また、発泡の著しい時には、消泡剤とし
て、例えば大豆油又は亜麻仁油等の植物油、オクタデカ
ノール等の高級アルコール類、各種シリコン化合物等を
適宜添加しても良い。これらのもの以外でも、該生産菌
が利用し、ＢＥ−１３７９３Ｘの生産に役立つもの例え
ば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ
酸ナトリウムなどであれば、いずれも使用することがで
きる。

【００２３】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行えばよく、固体培養でも液体培養
でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、振
盪培養又は通気培養などのいずれを実施してもよいが、
特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が好ましい。培養温
度は２０℃〜３７℃が適当であるが、２５℃〜３０℃が
好ましい。好ましい培地のｐＨは４−８の範囲で、培養
時間は通常ＢＥ−１３７９３Ｘが十分に蓄積するまで継
続でき、使用生産菌や培地組成、培養温度により異なる
が、通常は７２−１４４時間の培養で目的物質を得るこ
とができる。

【００２４】かくして、培養物中に蓄積されたＢＥ−１
３７９３Ｘは、培養後に必要により、濾過、遠心分離な
どのそれ自体公知の分離方法によって菌体を除去し、そ
の濾液上澄から適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や吸
着、高速液体クロマトグラフィー、向流分配を利用した
クロマトグラフィーを単独又は組み合わせて使用するこ
とにより単離精製して採取することができる。ここに用
いられる有機溶媒としては、酢酸エチル、メチルエチル
ケトンなどＢＥ−１３７９３Ｘを溶解でき、水に実質的
に不溶なものを挙げることができる。また、吸着クロマ
トグラフィーの担体としては、活性炭、シリカゲル、多
孔性ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂を用いること
ができる。また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒
を用いた有機溶媒抽出法や 菌体破砕による溶出法に
より菌体から抽出し、上記と同様に単離精製して採取す
ることができる。ここに用いられる有機溶媒としては、
メタノール、アセトンなどＢＥ−１３７９３Ｘを溶解で
き菌体を破壊できるものを挙げることができる。

【００２５】次に、ＢＥ−１３７９３ＸＡの製造法につ
いて説明する。

【００２６】本発明のＢＥ−１３７９３ＸＡを製造する
にあたり、本発明のＢＥ−１３７９３Ｘを酸性条件下で
加水分解することにより得られる。用いられる酸は、酢
酸、硫酸、塩酸、硝酸、又はリン酸などでよく、加水分
解は直接、種々の濃度の酸でまたは有機溶媒例えばメタ
ノール、アセトンなどと組み合わせたもので、加熱しま
たは加熱せずに行なうことができる。酸加水分解物ＢＥ
−１３７９３ＸＡは、溶媒を除去するために減圧下で蒸
留することにより、反応混合物から回収してもよい。残
留物は水で洗浄され、そして水に非混和性の溶媒例えば
酢酸エチルなどで抽出することにより、純粋なＢＥ−１
３７９３ＸＡを得ることができる。

【００２７】本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際
に、本発明の化合物は薬学的に許容しうる塩としても使
用される。薬学的に許容しうる塩の典型例としては、例
えば苛性ソーダ、苛性カリ等の無機塩基との塩を挙げる
ことができる。

【００２８】本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際
の投与形態としては各種の形態を選択でき、例えば錠
剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤若しくは液剤等の経口
剤、又は例えば溶液若しくは懸濁液等の殺菌した液状の
非経口剤が挙げられる。

【００２９】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
等の糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米等の澱
粉類、例えばステアリン酸等の脂肪酸、例えばメタケイ
酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カルシウ
ム等の無機塩、例えばポリビニルピロリドン若しくはポ
リアルキレングリコール等の合成高分子、例えばステア
リン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウム等
の脂肪酸塩、例えばステアリルアルコール若しくはベン
ジルアルコール等のアルコール類、例えばメチルセルロ
ース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース
若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等の合成
セルロース誘導体、その他、水、ゼラチン、タルク、植
物油、アラビアゴム等通常用いられる添加物が挙げられ
る。

【００３０】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末等の固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、好
ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３１】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナツ油若しくはゴマ油等の植物由来の油等
液状製剤において通常用いられる適当な添加物を使用
し、懸濁液、シロップ剤若しくは注射剤等の形態として
製造される。

【００３２】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈内注射
又は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例
えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉内注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
等の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内
注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００３３】又、これらの注射剤は予め溶解したものの
他、粉末のまま或いは適当な添加物を加えたものを用時
溶解する形態もとり得る。これらの注射液は、通常０．
１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を
含む。又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤等の液剤
は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３４】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、一日
当りの成人一人当りの投与量は、経口投与の場合、１０
ないし５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈
内注射の場合、１日当り１０ないし１００ｍｇである。
なお、投与回数は投与方法及び症状により異なるが、１
回ないし５回である。

【００３５】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるも
のではない。

【００３６】実施例１ 斜面寒天培地に培養したＢＡ−１３７９３株をグルコー
ス０．１％、デキストリン２．０％、コーングルテンミ
ール１．０％、魚粉０．５％、酵母エキス０．１％、塩
化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、
塩化カルシウム０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２
％、塩化第二銅０．００００４％、塩化マンガン０．０
０００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛
０．００００８％、ホウ酸ナトリウム０．００００８
％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％及び３
−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％から
なる培地（ｐＨ６．８）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容
の三角フラスコ３本に接種し、２８℃で９６時間、回転
振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液
２．５ｍｌをグルコース０．２％、デキストリン４．０
％、酵母エキス０．１％、Ｌ−イソロイシン０．５％、
塩化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５
％、塩化カルシウム０．０５２％、硫酸第一鉄０．００
０２％、塩化第二銅０．００００４％、塩化マンガン
０．００００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫
酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウム０．０００
０８％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％及
び３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％
からなる培地（ｐＨ６．８）１００ｍｌを含む５００ｍ
ｌ容の培養用三角フラスコ１００本に接種し、２５℃で
６日間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

【００３７】このようにして得られた培養液（１０Ｌ）
から濾過により菌体を分離し、この菌体にメタノール４
Ｌを加え、数時間攪拌後濾過した。この濾液を減圧下で
濃縮した後、先の濾液と合わせ酢酸エチル／メチルエチ
ルケトン（３：１）の混合溶媒１０ＬでＢＥ−１３７９
３Ｘを抽出した。この抽出液を減圧下に濃縮し、得られ
た残渣をセファデックスＬＨ−２０のカラムクロマトグ
ラフィー（１．８ｘ９０ｃｍ，ファルマシア社製）にか
けメタノールで展開溶出を行なった。次に、ＢＥ−１３
７９３Ｘ含有画分を集め、減圧下に濃縮して得られた油
状物（７５１．１ｍｇ）をシリカゲルカラム（５０ｍ
ｌ）にかけてクロロホルム／メタノール混合溶媒系で展
開溶出を行ない、ＢＥ−１３７９３Ｘを含む画分を得
た。この画分をＯＤＳカラム（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ
^TM−ＯＤＳ，２０ｘ２５０ｍｍ）を用い、移動相として
７５％メタノール水を毎分１０ｍｌで送液して分取高速
液体クロマトグラフィーを行なった。ＢＥ−１３７９３
Ｘを含む溶出液を集め、濃縮後、セファデックスＬＨ−
２０のカラム（１．８ｘ３５ｃｍ）にかけてメタノール
で溶出し、ＢＥ−１３７９３Ｘを３７．０ｍｇ得た。

【００３８】実施例２ ＢＥ−１３７９３Ｘ ３０６ｍｇを５０％酢酸３０ｍｌ
に溶解し、室温で１５分間攪拌後、更に、６５℃で３０
分間攪拌しながら加水分解を行なった。反応液を水７０
ｍｌで希釈後、１００ｍｌの酢酸エチルで抽出し、酢酸
エチル層を濃縮することによりＢＥ−１３７９３ＸＡを
１９１ｍｇ得た。

【００３９】以下に、本発明の化合物の製剤例を示す
が、本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるもの
ではない。

【００４０】製剤例１ 本物質（ＢＥ−１３７９３Ｘ） １０（部） 重質酸化マグネシウム １５ 乳糖 ７５ を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れてカプセ
ル剤とした。

【００４１】製剤例２ 本物質（ＢＥ−１３７９３Ｘ） ４５（部） 澱粉 １５ 乳糖 １６ 結晶性セルロース ２１ ポリビニルアルコール ３ 蒸留水 ３０ を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。

【００４２】製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作った後、この顆粒剤
９６部に対してステアリン酸カルシウム４部を加えて圧
縮成形し、直径１０ｍｍの錠剤を作製した。

【００４３】製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤
の９０部に対して結晶性セルロース１０部及びステアリ
ン酸カルシウム３部を加えて圧縮成形し、直径８ｍｍの
錠剤とした後、これにシロップゼラチン、沈降性炭酸カ
ルシウム混合けん濁液を加えて糖衣錠を作製した。

【００４４】製剤例５ 本物質（ＢＥ−１３７９３Ｘ） ０．６（部） 非イオン系界面活性剤 ２．４ 生理的食塩水 ９７ を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行って注射
剤を作成した。

【００４５】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−１３７９３Ｘ及
びＢＥ−１３７９３ＸＡは、マウス及びヒトの癌細胞に
対し、強い増殖抑制効果を示すことから、医薬の分野で
癌の治療剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｄ 7432−4Ｂ 19/60 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 19/60 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 中島 茂 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内 (72)発明者 河村 健二 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式： 【化１】 で表される化合物、式： 【化２】 で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。
2. 【請求項２】ストレプトバーティシリウム（Ｓｔｒｅｐ
   ｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属し、式［Ｉ］の
   化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株を
   培養し、その培養物から式［Ｉ］の化合物を採取し、要
   すれば薬学的に許容しうる塩とすることを特徴とする、
   式： 【化３】 で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩の製
   法。
3. 【請求項３】微生物又はその変異株が、ストレプトバー
   ティシリウム・エスピー ＢＡ−１３７９３（Ｓｔｒｅ
   ｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＢＡ−１３７
   ９３）株である請求項２記載の製法。
4. 【請求項４】請求項１記載の式［Ｉ］の化合物の酸処理
   による、請求項１記載の式［ＩＩ］で表される化合物又
   はその薬学的に許容しうる塩の製造法。
5. 【請求項５】請求項１記載の式［Ｉ］の化合物若しくは
   式［ＩＩ］の化合物又はその薬学的に許容しうる塩を有
   効成分とする抗腫瘍剤。
6. 【請求項６】請求項１記載の式［Ｉ］の化合物を産生す
   る能力を有するストレプトバーティシリウム（Ｓｔｒｅ
   ｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する微生物又
   はその変異株。
7. 【請求項７】微生物が、ストレプトバーティシリウム・
   エスピー ＢＡ−１３７９３（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔ
   ｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ． ＢＡ−１３７９３）株の変
   異株である請求項６記載の微生物。