JPH11349522A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−６９７８５ａ及びその製造法 - Google Patents
抗腫瘍性物質ｂｅ−６９７８５ａ及びその製造法Info
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- JPH11349522A JPH11349522A JP16921898A JP16921898A JPH11349522A JP H11349522 A JPH11349522 A JP H11349522A JP 16921898 A JP16921898 A JP 16921898A JP 16921898 A JP16921898 A JP 16921898A JP H11349522 A JPH11349522 A JP H11349522A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】本発明は新規な構造式［Ｉ］
【化１】
で表される化合物に関する。
【効果】本発明の化合物は、マウス及びヒトの腫瘍細胞
に対して強い増殖抑制効果を示すことから、医薬の分野
で癌の治療剤として有用である。
に対して強い増殖抑制効果を示すことから、医薬の分野
で癌の治療剤として有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を示す新規化合物、その製造法及びその用途並びに
該化合物を産生する微生物に関するものである。
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を示す新規化合物、その製造法及びその用途並びに
該化合物を産生する微生物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。このような状況
下、癌治療の分野においては常に新規抗腫瘍性物質の開
発が求められている。
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。このような状況
下、癌治療の分野においては常に新規抗腫瘍性物質の開
発が求められている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記構
造式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記構
造式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。
【０００５】即ち、本発明は新規な構造式［Ｉ］
【０００６】
【化２】 で表される化合物、その製造法及びその用途並びに該化
合物を産生する能力を有することを特徴とするストレプ
トミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生
物に関するものである。
合物を産生する能力を有することを特徴とするストレプ
トミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生
物に関するものである。
【０００７】なお、抗腫瘍効果及び生産菌株ストレプト
ミセス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）に因んで、構造式
［Ｉ］で表される化合物をＢＥ−６９７８５Ａと称す
る。
ミセス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）に因んで、構造式
［Ｉ］で表される化合物をＢＥ−６９７８５Ａと称す
る。
【０００８】以下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−６９７８５Ａの物理化学的な性状を示す。下記
に核磁気共鳴スペクトルにおける略号の意味を示す。 ｓ ：シングレット ｄ ：ダブレット ｔ ：トリプレット ｑ ：カルテット ｍ ：マルチプレット ｂｒ：ブロード Ｊ ：カップリング定数 Ｈｚ：ヘルツ
質ＢＥ−６９７８５Ａの物理化学的な性状を示す。下記
に核磁気共鳴スペクトルにおける略号の意味を示す。 ｓ ：シングレット ｄ ：ダブレット ｔ ：トリプレット ｑ ：カルテット ｍ ：マルチプレット ｂｒ：ブロード Ｊ ：カップリング定数 Ｈｚ：ヘルツ
【０００９】ＢＥ−６９７８５Ａの物理化学的性状 性状 ；褐色粉末 分子式 ；Ｃ21Ｈ24Ｏ5 質量分析 ；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］ｍ／ｚ 実測値 ：３５７．１７０２（Ｍ＋Ｈ）+ 計算値 ：３５７．１７０２（Ｃ21Ｈ25Ｏ5） 紫外部吸収スペクトル；λmax（ＭｅＯＨ）ｎｍ
（ε）：２０６（２６，５００），２２７（１６，７０
０），２７３（１８，３００），３２５（１０，８０
０），３９５（４，６００） 赤外部吸収スペクトル；νmax（ＫＢｒ）ｃｍ-1 ：３
３４４，２９６７，２９２１，２３６０，２３３７，１
６４１，１５８１，１５２９，１４８８，１４４６，１
３９６，１３３８，１３０１，１２５１，１１６８，１
１２８，１０９１，１０５２，９８１，８８７，７９
６，７５７，７４２，７１３，６７１，６１３，５２８ 核磁気共鳴スペクトル； 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４
００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ １．５４（３Ｈ，
ｓ），１．５８（３Ｈ，ｓ），１．７５（３Ｈ，ｓ），
１．９４（２Ｈ，ｍ），２．０３（２Ｈ，ｍ），２．０
８（３Ｈ，ｓ），３．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈ
ｚ），５．０２（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），
５．１５（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．０
２（１Ｈ，ｓ）13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル （１００ＭＨｚ， ＣＤ3Ｏ
Ｄ）：δ ７．８（ｑ），１６．４（ｑ），１７．７
（ｑ），２３．１（ｔ），２５．８（ｑ），２７．６
（ｔ），４０．８（ｔ），１０８．０（ｓ），１０８．
５（ｄ），１１６．９（ｓ），１２２．２（ｄ），１２
３．８（ｓ），１２５．３（ｄ），１３２．１（ｓ），
１３３．３（ｓ），１３６．９（ｓ），１５７．０
（ｓ），１６３．２（ｓ），１６４．４（ｓ），１８
５．４（ｓ），１８５．５（ｓ） 溶解性 ；クロロホルム、メタノ−ル、アセトン、ジメ
チルスルホキシドに溶け易く、トルエン、水に溶けにく
い。 Ｒｆ値 ；０．８ ［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
254使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（２
０：１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性
（ε）：２０６（２６，５００），２２７（１６，７０
０），２７３（１８，３００），３２５（１０，８０
０），３９５（４，６００） 赤外部吸収スペクトル；νmax（ＫＢｒ）ｃｍ-1 ：３
３４４，２９６７，２９２１，２３６０，２３３７，１
６４１，１５８１，１５２９，１４８８，１４４６，１
３９６，１３３８，１３０１，１２５１，１１６８，１
１２８，１０９１，１０５２，９８１，８８７，７９
６，７５７，７４２，７１３，６７１，６１３，５２８ 核磁気共鳴スペクトル； 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４
００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ １．５４（３Ｈ，
ｓ），１．５８（３Ｈ，ｓ），１．７５（３Ｈ，ｓ），
１．９４（２Ｈ，ｍ），２．０３（２Ｈ，ｍ），２．０
８（３Ｈ，ｓ），３．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈ
ｚ），５．０２（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），
５．１５（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．０
２（１Ｈ，ｓ）13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル （１００ＭＨｚ， ＣＤ3Ｏ
Ｄ）：δ ７．８（ｑ），１６．４（ｑ），１７．７
（ｑ），２３．１（ｔ），２５．８（ｑ），２７．６
（ｔ），４０．８（ｔ），１０８．０（ｓ），１０８．
５（ｄ），１１６．９（ｓ），１２２．２（ｄ），１２
３．８（ｓ），１２５．３（ｄ），１３２．１（ｓ），
１３３．３（ｓ），１３６．９（ｓ），１５７．０
（ｓ），１６３．２（ｓ），１６４．４（ｓ），１８
５．４（ｓ），１８５．５（ｓ） 溶解性 ；クロロホルム、メタノ−ル、アセトン、ジメ
チルスルホキシドに溶け易く、トルエン、水に溶けにく
い。 Ｒｆ値 ；０．８ ［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
254使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（２
０：１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性
【００１０】ＢＥ−６９７８５Ａの生物学的活性（抗腫
瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−６９７８５Ａのマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻害作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
試験は、ＢＥ−６９７８５Ａをジメチルスルホキシドに
溶解後、逐次ジメチルスルホキシドで希釈し、次に牛胎
児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地で１０倍希釈し
て検液とした。細胞増殖阻害の検定は、１×１０3個の
腫瘍細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有Ｒ
ＰＭＩ１６４０培地、２０μＭの２−メルカプトエタノ
ールを含む）１００μｌに対し上記検液５μｌを加え
た。３７℃で７２時間、５％ＣＯ2下で培養後、ＭＴＴ
測定法により対照群と比較した。 その結果、ＢＥ−６
９７８５Ａはマウス腫瘍細胞に対し、強い増殖阻害活性
を示し、その５０％増殖阻害濃度は第１表の通りであっ
た。
瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−６９７８５Ａのマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻害作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
試験は、ＢＥ−６９７８５Ａをジメチルスルホキシドに
溶解後、逐次ジメチルスルホキシドで希釈し、次に牛胎
児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地で１０倍希釈し
て検液とした。細胞増殖阻害の検定は、１×１０3個の
腫瘍細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有Ｒ
ＰＭＩ１６４０培地、２０μＭの２−メルカプトエタノ
ールを含む）１００μｌに対し上記検液５μｌを加え
た。３７℃で７２時間、５％ＣＯ2下で培養後、ＭＴＴ
測定法により対照群と比較した。 その結果、ＢＥ−６
９７８５Ａはマウス腫瘍細胞に対し、強い増殖阻害活性
を示し、その５０％増殖阻害濃度は第１表の通りであっ
た。
【００１１】更に、ＢＥ−６９７８５Ａのヒト腫瘍細胞
に対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。ヒト肺癌細
胞ＰＣ−１３に対する抗腫瘍試験は、ＢＥ−６９７８５
Ａをジメチルスルホキシドに溶解後、逐次ジメチルスル
ホキシドで希釈し、次に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地で１０倍希釈して検液とした。腫瘍細胞増
殖阻害の検定は、１×１０3個の腫瘍細胞を含む細胞培
養用培地１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注
し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ2下で培養した後、上
記検液５μｌを加えた。更に７２時間培養後、細胞を１
６．７％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％スルホロー
ダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて細胞から
色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長として５５０ｎ
ｍに於ける吸光度を測定して対照群と比較した。その結
果、ＢＥ−６９７８５Ａはヒト腫瘍細胞においても強い
増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻害濃度は第１表
の通りであった。
に対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。ヒト肺癌細
胞ＰＣ−１３に対する抗腫瘍試験は、ＢＥ−６９７８５
Ａをジメチルスルホキシドに溶解後、逐次ジメチルスル
ホキシドで希釈し、次に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地で１０倍希釈して検液とした。腫瘍細胞増
殖阻害の検定は、１×１０3個の腫瘍細胞を含む細胞培
養用培地１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注
し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ2下で培養した後、上
記検液５μｌを加えた。更に７２時間培養後、細胞を１
６．７％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％スルホロー
ダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて細胞から
色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長として５５０ｎ
ｍに於ける吸光度を測定して対照群と比較した。その結
果、ＢＥ−６９７８５Ａはヒト腫瘍細胞においても強い
増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻害濃度は第１表
の通りであった。
【００１２】
【表１】 上述したようにＢＥ−６９７８５Ａはマウス及びヒトの
腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻害作用を示す。したがっ
て、本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤と
して有用である。
腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻害作用を示す。したがっ
て、本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤と
して有用である。
【００１３】次に、ＢＥ−６９７８５Ａの製造法につい
て説明する。 本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−６９７８５
Ａの製造に使用する微生物は、抗腫瘍性物質ＢＥ−６９
７８５Ａを生産するものならばいずれでも良いが、例え
ば以下の菌学的性状を有する微生物、即ち、Ａ６９７８
５を用いることができる。 １．形態 Ａ６９７８５はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸を
形成し、輪生岐及び菌糸の分断は認められない。気菌糸
上には胞子の長い連鎖（５０個以上）を作り、その形態
はらせん状である。胞子の表面は平滑で大きさが０．７
〜１．０×０．８〜１．３μｍ位の円筒状であり、胞子
のう、鞭毛胞子及び菌核等の特殊な器官は観察されな
い。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 各種寒天平板培地における培養性状（２８℃、１４日間
培養）は第２表の通りであった。
て説明する。 本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−６９７８５
Ａの製造に使用する微生物は、抗腫瘍性物質ＢＥ−６９
７８５Ａを生産するものならばいずれでも良いが、例え
ば以下の菌学的性状を有する微生物、即ち、Ａ６９７８
５を用いることができる。 １．形態 Ａ６９７８５はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸を
形成し、輪生岐及び菌糸の分断は認められない。気菌糸
上には胞子の長い連鎖（５０個以上）を作り、その形態
はらせん状である。胞子の表面は平滑で大きさが０．７
〜１．０×０．８〜１．３μｍ位の円筒状であり、胞子
のう、鞭毛胞子及び菌核等の特殊な器官は観察されな
い。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 各種寒天平板培地における培養性状（２８℃、１４日間
培養）は第２表の通りであった。
【００１４】
【表２】 ３．生育温度 生育温度（イ−スト・麦芽寒天培地、１４日間培養）は
第３表の通りであった。
第３表の通りであった。
【００１５】
【表３】 ４．生理学的諸性質 生理学的諸性質は第４表の通りであった。
【００１６】
【表４】 ５．炭素源の利用能 炭素源の利用能は第５表の通りであった。
【００１７】
【表５】 ６．菌体成分 細胞壁からは、ＬＬージアミノピメリン酸およびグリシ
ンが検出された。
ンが検出された。
【００１８】以上の菌学的諸性質によりＡ６９７８５は
放線菌ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
属に属すると考えられる。したがってＡ６９７８５をス
トレプトミセス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）と称すること
とした。尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲＭ
Ｐ−１６７９０である。
放線菌ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
属に属すると考えられる。したがってＡ６９７８５をス
トレプトミセス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）と称すること
とした。尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲＭ
Ｐ−１６７９０である。
【００１９】本発明のストレプトミセス エスピー Ａ
６９７８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ６
９７８５）の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外線など
の照射処理、例えばナイトロジェンマスタード、アザセ
リン、亜硝酸、２−アミノプリンもしくは１−メチル−
３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）等の
変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転換、形質
導入又は接合などの通常用いられる菌種変換処理方法に
よりストレプトミセス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）を変異
させた微生物である。
６９７８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ６
９７８５）の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外線など
の照射処理、例えばナイトロジェンマスタード、アザセ
リン、亜硝酸、２−アミノプリンもしくは１−メチル−
３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）等の
変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転換、形質
導入又は接合などの通常用いられる菌種変換処理方法に
よりストレプトミセス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）を変異
させた微生物である。
【００２０】
【発明の実施の形態】本発明のＢＥ−６９７８５Ａを製
造するにあたり、ＢＥ−６９７８５Ａの生産菌株を栄養
源含有培地に接種して好気的に発育させることにより、
ＢＥ−６９７８５Ａを含む培養物が得られる。栄養源と
しては、放線菌の栄養源として公知のものが使用でき
る。例えば、炭素源としては、市販されているブドウ
糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンな
どが単独又は混合物として用いられる。窒素源として
は、市販されている大豆粉、コーンステイープリカー、
グルテンミール、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿
実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂
米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナト
リウムなどが単独又は混合物として用いられる。無機塩
としては、市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウ
ム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用する
ことができる。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、モリブデン酸などの重金属塩を微量添加
することもできる。また、発泡の激しい場合には消泡剤
として、例えば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オク
タデカノールなどの高級アルコール類、各種シリコン化
合物などを適宜添加してもよい。これらのもの以外で
も、該生産菌が利用し、ＢＥ−６９７８５Ａの生産に役
立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホ
ン酸（ＭＯＰＳ）又はホウ酸ナトリウムなどであれば、
いずれも使用することができる。
造するにあたり、ＢＥ−６９７８５Ａの生産菌株を栄養
源含有培地に接種して好気的に発育させることにより、
ＢＥ−６９７８５Ａを含む培養物が得られる。栄養源と
しては、放線菌の栄養源として公知のものが使用でき
る。例えば、炭素源としては、市販されているブドウ
糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンな
どが単独又は混合物として用いられる。窒素源として
は、市販されている大豆粉、コーンステイープリカー、
グルテンミール、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿
実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂
米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナト
リウムなどが単独又は混合物として用いられる。無機塩
としては、市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウ
ム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用する
ことができる。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、モリブデン酸などの重金属塩を微量添加
することもできる。また、発泡の激しい場合には消泡剤
として、例えば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オク
タデカノールなどの高級アルコール類、各種シリコン化
合物などを適宜添加してもよい。これらのもの以外で
も、該生産菌が利用し、ＢＥ−６９７８５Ａの生産に役
立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホ
ン酸（ＭＯＰＳ）又はホウ酸ナトリウムなどであれば、
いずれも使用することができる。
【００２１】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１４〜３４℃が適当であるが、好ましくは２５
〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は１９２〜３１２時間、好ましくは２１６
〜２６４時間である。培養物から目的とするＢＥ−６９
７８５Ａを採取するには、微生物の生産する代謝物から
採取するのに通常使用される分離手段を適宜利用するこ
とができる。
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１４〜３４℃が適当であるが、好ましくは２５
〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は１９２〜３１２時間、好ましくは２１６
〜２６４時間である。培養物から目的とするＢＥ−６９
７８５Ａを採取するには、微生物の生産する代謝物から
採取するのに通常使用される分離手段を適宜利用するこ
とができる。
【００２２】ＢＥ−６９７８５Ａは菌体中に存在するの
で、菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオ
ン交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグラフィー
法及びゲル濾過法などを単独又は組み合わせて行なうこ
とにより精製できる。
で、菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオ
ン交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグラフィー
法及びゲル濾過法などを単独又は組み合わせて行なうこ
とにより精製できる。
【００２３】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノール又はアセトンなどの有機溶媒を用いて
抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチル
で分配を行ない、酢酸エチル層を留去後、得られる残留
物について逆相カラムクロマトグラフィーを行なう。Ｂ
Ｅ−６９７８５Ａを含む画分を減圧下で濃縮し、再度逆
相カラムクロマトグラフィーを行うことにより、ＢＥ−
６９７８５Ａを得ることができる。
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノール又はアセトンなどの有機溶媒を用いて
抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチル
で分配を行ない、酢酸エチル層を留去後、得られる残留
物について逆相カラムクロマトグラフィーを行なう。Ｂ
Ｅ−６９７８５Ａを含む画分を減圧下で濃縮し、再度逆
相カラムクロマトグラフィーを行うことにより、ＢＥ−
６９７８５Ａを得ることができる。
【００２４】本発明の化合物ＢＥ−６９７８５Ａは腫瘍
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明
化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤若しくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液
若しくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げら
れる。
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明
化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤若しくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液
若しくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げら
れる。
【００２５】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばアルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カルシウ
ムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリドン若しくは
ポリアルキレングリコールなどの合成高分子、例えばス
テアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウ
ムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアルコール若しく
はベンジルアルコールなどのアルコール類、例えばメチ
ルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセ
ルロース若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース
などの合成セルロース誘導体、その他、水、ゼラチン、
タルク、植物油、アラビアゴムなど通常用いられる添加
物が挙げられる。
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばアルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カルシウ
ムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリドン若しくは
ポリアルキレングリコールなどの合成高分子、例えばス
テアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウ
ムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアルコール若しく
はベンジルアルコールなどのアルコール類、例えばメチ
ルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセ
ルロース若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース
などの合成セルロース誘導体、その他、水、ゼラチン、
タルク、植物油、アラビアゴムなど通常用いられる添加
物が挙げられる。
【００２６】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。液状製
剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、ピーナッツ
油若しくはゴマ油などの植物由来の油など液状製剤にお
いて通常用いられる適当な添加剤を使用し、懸濁液、シ
ロップ剤又は注射剤などの形態として製造される。 特
に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又は皮下注射で投
与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射用蒸留
水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射用）、生理食塩
水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液体
（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウムなどの水溶
液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）
など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。 これらの
注射剤はあらかじめ溶解したもののほか、粉末のままあ
るいは適当な添加剤を加えたものを用時溶解する形態も
とり得る。これらの注射液は通常、０．１〜１０重量
％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含む。 ま
た、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤などの液剤は、
０．５〜１０重量％の有効成分を含む。
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。液状製
剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、ピーナッツ
油若しくはゴマ油などの植物由来の油など液状製剤にお
いて通常用いられる適当な添加剤を使用し、懸濁液、シ
ロップ剤又は注射剤などの形態として製造される。 特
に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又は皮下注射で投
与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射用蒸留
水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射用）、生理食塩
水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液体
（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウムなどの水溶
液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）
など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。 これらの
注射剤はあらかじめ溶解したもののほか、粉末のままあ
るいは適当な添加剤を加えたものを用時溶解する形態も
とり得る。これらの注射液は通常、０．１〜１０重量
％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含む。 ま
た、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤などの液剤は、
０．５〜１０重量％の有効成分を含む。
【００２７】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。
【００２８】
【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。 実施例ＢＥ−６９７８５Ａの製造法 斜面寒天培地に接種した放線菌Ａ６９７８５をグルコー
ス ０．１％、デキストリン（ＭＳ−３６００） ２．
０％、魚粉 ０．５％、コーングルテンミール１．０
％、酵母エキス ０．１％、ＭＯＰＳ ０．５％、硫酸
マグネシウム０．０５％、塩化ナトリウム ０．１％、
塩化カルシウム ０．０５％、硫酸第一鉄 ０．０００
２％、塩化第二銅 ０．００００４％、塩化マンガン
０．００００４％、塩化コバルト ０．００００４％、
硫酸亜鉛 ０．００００８％、ホウ酸ナトリウム ０．
００００８％及びモリブデン酸ナトリウム ０．０００
２４％からなる培地（ｐＨ７．０）１１０ｍｌを含む５
００ｍｌ容の三角フラスコ２本に接種し、２８℃で７２
時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。こ
の培養液２００ｍｌを上記培地１０Ｌを含む２０Ｌ容の
タンク１本に接種し、２８℃で１６５時間、通気（１．
０ｖｖｍ）攪拌（毎分３００回転）培養した。
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。 実施例ＢＥ−６９７８５Ａの製造法 斜面寒天培地に接種した放線菌Ａ６９７８５をグルコー
ス ０．１％、デキストリン（ＭＳ−３６００） ２．
０％、魚粉 ０．５％、コーングルテンミール１．０
％、酵母エキス ０．１％、ＭＯＰＳ ０．５％、硫酸
マグネシウム０．０５％、塩化ナトリウム ０．１％、
塩化カルシウム ０．０５％、硫酸第一鉄 ０．０００
２％、塩化第二銅 ０．００００４％、塩化マンガン
０．００００４％、塩化コバルト ０．００００４％、
硫酸亜鉛 ０．００００８％、ホウ酸ナトリウム ０．
００００８％及びモリブデン酸ナトリウム ０．０００
２４％からなる培地（ｐＨ７．０）１１０ｍｌを含む５
００ｍｌ容の三角フラスコ２本に接種し、２８℃で７２
時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。こ
の培養液２００ｍｌを上記培地１０Ｌを含む２０Ｌ容の
タンク１本に接種し、２８℃で１６５時間、通気（１．
０ｖｖｍ）攪拌（毎分３００回転）培養した。
【００２９】上記の培養により得られた培養液（約１０
Ｌ）から濾過により菌体を得た。この菌体にメタノール
（８Ｌ）を加え、攪拌後濾過し、メタノール抽出液を得
た。このメタノール抽出液を減圧下濃縮後、１Ｌの酢酸
エチルで２回抽出し、酢酸エチル画分を減圧下濃縮乾固
した。その乾固物をメタノール（５０ｍｌ）に溶解後、
セファデックス ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー
（ファルマシア社製、φ５×３０ｃｍ）に付し、メタノ
ールで溶出後、目的の化合物を含む画分を減圧下濃縮乾
固した。次にその乾固物をメタノール（１０ｍｌ）に溶
解した後、クロマトレックス ＯＤＳ２０３５Ｍカラム
クロマトグラフィー（富士シリシア化学社製、φ３×５
０ｃｍ）に付し、メタノールで溶出後、目的の化合物を
含む画分を減圧下濃縮乾固した。更にその乾固物をメタ
ノール（５ｍｌ）に溶解した後、クロマトレックス Ｏ
ＤＳ２０３５Ｍカラムクロマトグラフィー（富士シリシ
ア化学社製、φ３×５０ｃｍ）に付し、メタノール−水
（９：１）で溶出後、目的の化合物を含む画分を減圧下
濃縮乾固した。最後にこの乾固物をトルエン（２０ｍ
ｌ）より析出させることでＢＥ−６９７８５Ａの粉末１
９．９ｍｇを得た。
Ｌ）から濾過により菌体を得た。この菌体にメタノール
（８Ｌ）を加え、攪拌後濾過し、メタノール抽出液を得
た。このメタノール抽出液を減圧下濃縮後、１Ｌの酢酸
エチルで２回抽出し、酢酸エチル画分を減圧下濃縮乾固
した。その乾固物をメタノール（５０ｍｌ）に溶解後、
セファデックス ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー
（ファルマシア社製、φ５×３０ｃｍ）に付し、メタノ
ールで溶出後、目的の化合物を含む画分を減圧下濃縮乾
固した。次にその乾固物をメタノール（１０ｍｌ）に溶
解した後、クロマトレックス ＯＤＳ２０３５Ｍカラム
クロマトグラフィー（富士シリシア化学社製、φ３×５
０ｃｍ）に付し、メタノールで溶出後、目的の化合物を
含む画分を減圧下濃縮乾固した。更にその乾固物をメタ
ノール（５ｍｌ）に溶解した後、クロマトレックス Ｏ
ＤＳ２０３５Ｍカラムクロマトグラフィー（富士シリシ
ア化学社製、φ３×５０ｃｍ）に付し、メタノール−水
（９：１）で溶出後、目的の化合物を含む画分を減圧下
濃縮乾固した。最後にこの乾固物をトルエン（２０ｍ
ｌ）より析出させることでＢＥ−６９７８５Ａの粉末１
９．９ｍｇを得た。
【００３０】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−６９７８５Ａ）１０部、重質酸化マグネ
シウム１５部及び乳糖７５部を均一に混合して、５００
μｍ以下の粉末状又は細粒状の散剤とする。この散剤を
カプセル容器に入れカプセル剤とした。 製剤例２ 本物質（ＢＥ−６９７８５Ａ）４５部、澱粉１５部、乳
糖１６部、結晶性セルロース２１部、ポリビニルアルコ
ール３部及び蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造
粒して乾燥し、次いで篩別して直径３５５〜１４００μ
ｍの大きさの顆粒剤とした。 製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。 製剤例４ 製剤例２と同様の方法で得られた顆粒剤９０部に対して
結晶性セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３
部を加えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、こ
れにシロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁
液を加えて糖衣錠を作製した。 製剤例５ 本物質（ＢＥ−６９７８５Ａ）０．６部、非イオン系界
面活性剤２．４部及び生理的食塩水９７部を加温混合し
てからアンプルに入れ、滅菌を行って注射剤を作製し
た。
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−６９７８５Ａ）１０部、重質酸化マグネ
シウム１５部及び乳糖７５部を均一に混合して、５００
μｍ以下の粉末状又は細粒状の散剤とする。この散剤を
カプセル容器に入れカプセル剤とした。 製剤例２ 本物質（ＢＥ−６９７８５Ａ）４５部、澱粉１５部、乳
糖１６部、結晶性セルロース２１部、ポリビニルアルコ
ール３部及び蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造
粒して乾燥し、次いで篩別して直径３５５〜１４００μ
ｍの大きさの顆粒剤とした。 製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。 製剤例４ 製剤例２と同様の方法で得られた顆粒剤９０部に対して
結晶性セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３
部を加えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、こ
れにシロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁
液を加えて糖衣錠を作製した。 製剤例５ 本物質（ＢＥ−６９７８５Ａ）０．６部、非イオン系界
面活性剤２．４部及び生理的食塩水９７部を加温混合し
てからアンプルに入れ、滅菌を行って注射剤を作製し
た。
【００３１】
【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−６９７８５Ａ
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 7/26 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 近藤 久雄 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 小尻 勝久 東京都中央区日本橋本町２丁目２番３号 萬有製薬株式会社内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】構造式［Ｉ］ 【化１】 で表される化合物。
- 【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属し、請求項１記載の構造式［Ｉ］で表され
る化合物を産生する能力を有する微生物を培養し、その
培養物から該構造式［Ｉ］で表される化合物を採取する
ことを特徴とする、該構造式［Ｉ］で表される化合物の
製造法。 - 【請求項３】請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化
合物を産生する能力を有する微生物が、ストレプトミセ
ス エスピー Ａ６９７８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｓｐ． Ａ６９７８５）又はその変異株である請求
項２記載の製造法。 - 【請求項４】請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化
合物を有効成分とする抗腫瘍剤。 - 【請求項５】請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化
合物を産生する能力を有することを特徴とするストレプ
トミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生
物。 - 【請求項６】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属する微生物が、ストレプトミセス エスピ
ー Ａ６９７８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．
Ａ６９７８５）又はその変異株である請求項５記載の
微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16921898A JPH11349522A (ja) | 1998-06-02 | 1998-06-02 | 抗腫瘍性物質ｂｅ−６９７８５ａ及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16921898A JPH11349522A (ja) | 1998-06-02 | 1998-06-02 | 抗腫瘍性物質ｂｅ−６９７８５ａ及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11349522A true JPH11349522A (ja) | 1999-12-21 |
Family
ID=15882412
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16921898A Pending JPH11349522A (ja) | 1998-06-02 | 1998-06-02 | 抗腫瘍性物質ｂｅ−６９７８５ａ及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11349522A (ja) |
-
1998
- 1998-06-02 JP JP16921898A patent/JPH11349522A/ja active Pending
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