JPH0341069A - 抗腫瘍性物質ｂｅ―１３７９３類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 意果些１里立夏 本発明は医薬の分野で有用であり、さらに詳細には腫瘍
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮する新規化合物
、その製法及びその用途に関するものである。

粱來旦挟敬 癌化学療法の分野においては、プレオマイシン（Ｂｌｅ
ｏｏ＋ｙｃｉｎ）及びアドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍ
ｙｃｉｎ）等の多くの微生物代謝産物を臨床的に応用す
ることが試みられ、またこれらは実際に臨床において使
用されている。しかしながら、様々な種類の腫瘍に対し
てその効果は必ずしも充分ではなく、また臨床上これら
の薬剤に対する腫瘍細胞の耐性現象が明らかにされるに
つれ、その臨床的応用性は複雑化している（第４７回日
本癌学会総会記事、　１２頁〜１５頁（１９８８年）参
照〕。

が　゛しようとする課延 このような状況においては、新規抗腫瘍性物質の開発が
常に求められている。即ち、既存の抗腫瘍性物質に対す
る耐性を克服する目的であり、また既存の抗腫瘍性物質
が充分に効果を発揮できない種類の腫瘍に対して有効で
ある物質が求められている。

題を　　するための手段 本発明者らは、該課題を解決するために抗腫瘍性物質に
ついて微生物代謝産物を広くスクリーニングした結果、
後記の物質が優れた抗腫瘍作用を示すことを見い出して
本発明を完成した。

即ち、本発明は一般式 ［式中、Ｒは水素原子又は水酸基を示す］で表される新
規な抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３類又はその薬学的に
許容される塩、その製造法及びその用途に関するもので
ある。

ここにおいて、Ｒが水素原子である化合物をＢＥ−１３
７９３Ａと、Ｒが水酸基である化合物をＢＥ−１３７９
３Ｂと称する。

以下に、本発明に係わる新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−１３
７９３Ａ及びＢについて物理化学的な性状を示す。

ＢＥ−１３７９３Ａの理化学的性状 性状：淡褐色粉末 分子式二Ｃ□Ｈ，、Ｎｏ。

元素分析値：理論値炭素７４．７６％、水素７．７０％
実測値炭素７４．５９％、水素７．６８％マススペクト
ル：　ＦＡＢマススペクトルを第１図に示す、　（ｍ／
ｚ　３５３．１９７５、「）ＵＶスペクトル：メタノー
ル中（１０ｇ／ｍＥ）で測定したＵＶスペクトルを第２
図に示す。

ＩＲスペクトル：　ＫＢｒ錠剤法によるＩＲスペクトル
を第３図に示す。

“Ｈ−ＮＭＲスペクトル二重クロりホルム中で測定した
’　Ｈ−Ｎｌ’ｌＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を第４
図に示す。

”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル二重クロりホルム中で測定し
た’　”　Ｃ−ＮＭＩ？スペクトル（７５ＭＨｚ）を第
５図に示す。

溶解性：水に溶けにくく、メタノール又は酢酸エチルな
どの有機溶媒に溶けやすい。

酸性、中性、塩基性物質の区別：塩基性物質Ｒｆ値：　
０．７９（メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ、　、　、使
用、展開溶媒；クロロホルム／メタノール＝５＋１） 呈色反応：過マンガン酸カリウム反応陽性ＢＥ−１３７
９３Ｂの理化学的性状 性状：淡褐色粉末 分子式：　Ｃ，、Ｈ，、Ｎｏ４ 元素分析値二理論値炭素７１．５２％、水素７．３７％
実測値炭素７１．４７％、水素７．３２％マススペクト
ル：　ＦＡＢマススペクトルを第６図に示す、　（ｍ／
ｚ　３６９，１９５４．　Ｍ”）ＵＶスペクトル：メタ
ノール中（ｔｏｇ）ｄ）で測定したＵＶスペクトルを第
７図に示す。

ＩＲスペクトル：　ＫＢｒｌｉ剤法によるＩＲスペクト
ルを第８図に示す。

Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で測定した’
　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００Ｍｌ（Ｚ）を第９図に
示す。

”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で測定し
た”　Ｃ−Ｎ？ＩＲスペクトル（７５Ｍ）１２）を第１
０図に示す。

溶解性：水に溶けにくく、メタノール又は酢酸エチルな
どの有機溶媒に溶けやすい。

酸性、中性、塩基性物質の区別：塩基性物質Ｒｆ値：　
０．６５（メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ、　、　、使
用、展開溶媒；クロロホルム／メタノール＝５：１） 呈色反応二過マンガン酸カリウム反応陽性本発明のＢＥ
−１３７９３＾及びＢの生物学的活性抗腫瘍性物質ＢＥ
−１３７９３Ａ及びＢのマウス実験腫瘍細胞に対する増
殖阻止作用を決定するため、１ｎｖｉｔｒｏで試験を行
った。　Ｐ３８８腫瘍細胞に対する１ｎｖｉｔｒｏの抗
腫瘍作用試験は、試験化合物をまずジメチルスルホキシ
ドに溶解したのち、２０％にジメチルスルホキシドを含
む細胞培養用培地（２０％ＤＭＳＯ−ＲＰＭＩ−１６４
０培地）で逐次希釈し、３Ｘ１０’個の腫瘍細胞を含む
細胞培養用培地（仔牛血清１０％含有ＲＰＶ’ｌｌ−１
６４０培地）２００ｕｇに対し２ｕＱを加えた。３７℃
で７２時間、５％ＣＯ１下で培養したのち、コールタ−
カウンターにて生存する細胞数をカウントし、対照群と
比較した。その結果、ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢはＰ３
８８腫瘍細胞に対し、強い増殖阻止作用を示した。

腫瘍蕪胞の増殖を５０％阻止する濃度（ｒｃ、、）はＰ
３８８／Ｓ細胞に対してはＢＥ−１３７９３Ａ及びＢと
もに４．０μ？ｌであり、Ｐ３Ｂ８／Ｖ＠胞に対シテハ
ＢＥ−１３７９３Ａ及ヒＢそれぞれ２．０及び０．８μ
Ｎであった。

ここにおいてＰ３８８／Ｓは通常のマウス白血病細胞の
一種であり、　Ｐ３８８／Ｍｌ胞は抗腫瘍性物質ビンク
リスチンに対して耐性を獲得したＰ３８８白血病細胞で
ある。

更に、　ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢは抗腫瘍性物質アド
リアマイシンに対して耐性を獲得したＰ３８８／Ａｍ胞
に対しても増殖阻止効果を示し、その５０％増殖阻害濃
度（ＩＣ，、）はそれぞれ２．０及び１．０μにであっ
た。

上述したように、本発明のＢＥ−１３７９３Ａ及びＢは
、マウス実験腫瘍細胞に対し、顕著な増殖阻止作用を示
す、従って、本発明は温血哺乳動物の腫瘍の治療剤とし
て有用である。

本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する場合、有効量の
本発明化合物単独又は有効量の本発明化合物及び不活性
且つ薬学的に許容しうる担体から成る医薬組成物として
使用される。

この医薬組成物は、本発明の化合物と不活性な薬学的担
体とを組み合わせて製造され、各種の処方で経口的、非
経口的若しくは局所的に投与される。適切な組成物の例
としては１錠剤、カプセル。

乳剤、粉末、顆粒等の経口投与用の囚形紹成物、溶液、
サスペンション、エマルジョンのような経口投与用の液
体組成物を包含する。また、使用直前に滅菌水、生理的
食塩水若しくは他の注射用滅菌溶剤に溶解しろる滅菌組
成物の形で製造することもできる。

本発明化合物の薬学的に許容しつる塩とは、例えば塩酸
又は硫酸等の無機酸との塩である。

本発明の化合物の実際に好ましい投与量は、使用される
化合物の種類、配合された組成物の種類、適用頻度及び
治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍によって変化するこ
とに注意すべきである。−日当りの成人−人当りの投与
量は、経口投与の場合、１０ないしｌｏｏｏＩＩｌｇで
あり、非経口投与の場合ＩＯないし５００１１ｇである
。非経口投与方法としては静脈内注射が好ましい、なお
、投与回数は投与方法及び症状により異なるが、１回な
いし数回である。

本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの製造
法について説明する。

本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの製造
に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質ＢＥ
−１３７９３Ａ及びＢを産生するものならばいずれでも
良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物を挙げ
ることができる。

１、形態 ＢＡ−１３７９３株は、顕微鏡下で、よく発達した気菌
糸よりほぼ一定間隔の輪生技が形成され、さらに５〜８
本の二次分枝を形成し、それらの先端が５〜１０ケの直
状の胞子鎖となっている。

胞子の大きさが０．５Ｘ１〜１．５μ誼位の円筒状で、
その表面は平滑である。

胞子のう、鞭毛胞子、菌核等の特殊な器官及び菌糸の分
断は観察されない。

２、ｔａ養性状 、各種寒天平板培地における２８℃、　１４日間培養時
の性状を第１表に示す。

（以下余白） ３、生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培養
） １２℃：生育は不良で気菌糸を形成せず２０℃：生育は
不良で気菌糸を形成せず２８℃：生育及び気菌糸形成は
良好 ３７℃：生育は良好で気菌糸形成は不良４５℃：生育せ
ず ４、生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　陰性（グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの
加水分解　　　　　　　　　陽性（スターチ・無機塩寒
天培地） （３）脱脂牛乳の凝固及びペプトン化　　　　陰性（ス
キムミルク培地） （４）メラニン様色素の生成　　　　　　　　陰性（５
）食塩耐性　　　　食塩含有量４％以下で生育（イース
ト・麦芽寒天培地） ５ｏ炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地として、下記各
種糖を添加して、２８℃、１４日間培養した。

その結果を第２表に示す。

第２表 ６、細胞壁のアミノ酸 ＬＬ−ジアミノピメリン酸及びグリシンが検出された。

以上の菌学的性状により、ＢＡ−１３７９３株は放＃Ｊ
菌ストレプトパーティシリウム属に分類され、パーシー
ズ・マニュアル・オブ・デターミナティブ・バクテリオ
ロジー第８版、工９７４年（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕ
ａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ　８ｔｈＥｄｆｔｉｏｎ、　１９７４）
及び放線菌の同定実験法（日本放線菌学会ｗＩ）などの
文献検索によると、ストレプトパーティシリウム・モバ
ラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏ−ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ
　ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ）が近縁な種として挙げられる
。しかし、　ＢＡ−１３７９３株とはラフィノース。

シュクロースの利用能が異なり、また寒天培地上での培
養性状における菌糸の色調などの点では、ストレプトパ
ーティシリウム・モバラエンスは緑色が基調になってお
り、ＢＡ−１３７９３株とは異なる。

従って、ＢＡ−１３７９３株をストレプトバーティシリ
ウム・エスピー・ＢＡ−１３７９３（Ｓｔｒｅｐｔｏｖ
ｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｓｓｐ、　ＢＡ−１３７９３）と
称する。

なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されており、その微工研受託番号は微工研菌
寄第１０４８９号（ＦＥＲＩ’Ｉ　Ｐ−１０４８９）で
ある。

本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３Ａ及び
Ｂを産生する微生物の変異株は１例えばＸ線若しくは紫
外線等の照射処理、例えばナイトロジエン・マスタード
、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ−
メチル−Ｎｏ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転
換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処理
方法により抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３類産生菌を変
異させた微生物である。

本発明のＢＥ−１３７９３Ａ及びＢを製造するにあたり
、ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの生産菌であるＢＡ−１３
７９３株を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させ
ることにより、　ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢを含む培養
物が得られる。

栄養源としては、放線菌の栄養源として公知のものが使
用できる０例えば、炭素源としては、市販されているブ
ドウ糖、グリセリン、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又
はデキストリンなどが単独又は混合物として用いられる
。窒素源としては、市販されている大豆粉、コーンステ
イープリカー内エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン
、小麦胚芽、魚粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリ
ウムなどが単独又は混合物として用いられる。無機塩と
しては、市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリウ
ム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム又は各種リン酸塩
などを使用することができる。

その他必要に応じて、鉄、マンガン又は亜鉛などの重金
属塩を微量添加することもできる。また、発泡の著しい
時には、消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁油等の
植物油、オクタデカノール等の高級アルコール類、各種
シリコン化合物等を適宜添加しても良い、これらのもの
以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−１３７９３Ａ及び
Ｂの生産に役立つものであれば、いずれも使用すること
ができる。

培養方法としては、一般の微生物代謝産物の生産方法と
同様に行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい、液
体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振盪培養又は通
気培養などのいずれを実施してもよいが、特に振盪培養
又は深部通気撹拌培養が好ましい、培養温度は２０℃〜
３７℃が適当であるが、２５℃〜３０℃が好ましい、好
ましい培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は２４時
間〜１９２時間、好ましくは４８時間〜１２０時間であ
る。

培養物から目的とするＢＥ−１３７９３Ａ及びＢを製造
するには、微生物の生産する代謝物の培養物から採取す
るのに通常使用される分離手段が適宜利用される。　Ｂ
Ｅ−１３７９３Ａ及びＢは培養濾液中及び菌体中に存在
するので、培養濾液又は菌体より通常の分離手段１例え
ば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着若しくは分配
クロマトグラフィー法及びゲル濾過法等を単独又は組合
せて行うことにより精製できる。また高速液体クロマト
グラフィーや薄層クロマトグラフィーなども抽出精製に
利用可能である。

好ましい分離−精製の例としては次の方法が挙げられる
。まず培養液を遠心分離し、菌体を得る。

得られた菌体をメタノール又はアセトン等の有機溶媒を
用いて抽出する。抽出物を減圧下にｔｌＡｍし、ａｗＩ
液を酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出する。

この抽出液を濃縮することにより、ＢＥ−１３７９３Ａ
及びＢを含む粒物質が得られる６次に、セファデックス
ＬＨ−２０などのカラムクロマトグラフィー等により精
製すれば、ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢを淡褐色の粉末と
して得ることができる。

次に実施例を挙げ、本発明を具体的に説明する。

しかしながら１本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段はもちろん、本発明によって明ら
かにされたＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの性状に基づいて
、公知の手段を用いてＢＥ−１３７９３Ａ及びＢを生産
、濃縮、抽出、精製する方法すべてを包括する。

裏塵班 斜面寒天培地に培養した放線菌ＢＡ−１３７９３株をグ
ルコース０．１％、デキストリン２．０％、コーングル
テンミール１．０％、魚粉０．５％、酵母エキス０．１
％、塩化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０
５％。

塩化カルシウム０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２％
、塩化第一銅０．０Ｑ００４％、塩化マンガン０．００
００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０
．００００８％、ホウ酸ナトリウムｏ、ｏｏｏｏｓ％、
モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％、及び３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％からな
る培地（ｐＨ６，７）１００−を含む５００−容の三角
フラスコ４本に接種し、２８℃で７２時間１回転振盪機
（毎分１８０回転）上で培養した。

この培養液を１−ずつ、上記の培地を１００−含む５０
０ｄ容の三角フラスコ５０本に接種し、２８℃で１２０
時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

培養液（約５Ｑ）を濾過法によって濾過し、得られた菌
体を脱イオン水５００−で洗浄した後、菌体にメタノー
ル２．５Ｑを加え室温で１時間撹拌した。

濾過法によってメタノール抽出液を得た。メタノール抽
出をもう一度行い、合わせて約５Ｑのメタノール抽出液
を約８００−にまで濃縮した。得られた濃縮液を酢酸エ
チル３息を用いて抽出し、酢酸エチル抽出液を濃縮乾固
した。得られた残渣にクロロホルム５００−を加え、沈
殿物を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィーの塔
（３Ｘ　６０ａｎにかけ、少量のクロロホルムで洗浄し
た後、クロロホルム−メタノール（５０：１）の展開溶
媒を用いて溶出することにより、　ＢＥ−１３７９３Ａ
を含む分画と、ＢＥ−１３７９３Ｂを含む分画とを得た
。　ＢＥ−１３７９３Ａを含む分画を減圧ｆＡｗＩシて
橙色のシロップ状物質１１０ｍｇを得たが、これを更に
セファデックスＬｌ（−２０の塔（２ｘ　６０ｃｍ、メ
タノール）にかけ、メタノールで展開して精製すること
により得られるＢＥ−１３７９３Ａの分画からＢＥ−１
３７９３Ａ　５６ｍｇを淡褐色の粉末として得た。同様
に上記のＢＥ−１３７９３Ｂを含む分画を減圧下に濃縮
して得られた褐色のシロップ状物質５５ｍｇをセファデ
ックスＬＨ−２０の塔（２Ｘ　６０ａｎ、メタノール）
にかけ、メタノールで展開して精製することにより、Ｂ
Ｅ−１３７９３８３１，ｋを淡褐色の粉末として得た。

及里曵墓玉 本発明のＢＥ−１３７９３Ａ及びＢは、既存の抗腫瘍剤
に耐性を有する腫瘍細胞に対しても該抗腫瘍剤に耐性を
獲得していない細胞と同程度の増殖阻止効果を有するこ
とから、医薬の分野で腫瘍の治療剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第６図は各々ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢのＦ
ＡＢマススペクトルの図である。第２図及び第７図は各
々メタノール中で測定したＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの
紫外部吸収スペクトルである。第３図及び第８図は各々
ＫＢｒ錠剤法によるＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの赤外吸
収スペクトルの図である。第４図及び第９図は各々重ク
ロロホルム中で測定したＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの’
　Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）スペクトルの図である。 第５図及び第１Ｏ図は各々重クロロホルム中で測定した
ＢＥ−１３７９３Ａ及びＢの’　”Ｃ−ＮＭＲ（７５Ｍ
Ｈｚ）スペクトルの図である。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは水素原子又は水酸基を示す］ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３類又はその薬
   学的に許容される塩。
2. （２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは水素原子又は水酸基を示す］ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３類又はその薬
   学的に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
3. （３）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは水素原子又は水酸基を示す］ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３類又はその薬
   学的に許容される塩の製造に際し、抗腫瘍性物質ＢＥ−
   １３７９３類を産生する微生物又はその変異株を培養し
   て抗腫瘍性物質ＢＥ−１３７９３類を蓄積させ、採取す
   ることを特徴とする製法。
4. （４）ストレプトバーティシリウム・エスピーＢＡ−１
   ３７９３（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　
   ｓｐ．ＢＡ−１３７９３）株又はその変異株を培養する
   ことを特徴とする第３請求項記載の製法。