JPH0381283A - 抗腫瘍性物質ｂｅ―１４３２４類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産呈上曵且亙允匪 本発明は医薬の分野で有用であり，さらに詳細には腫瘍
細胞の増殖を阻害し、制癌効果を発揮する新規化合物、
その製法及びその用途並びに該新規物質を産生ずる新規
なストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｉ＋ｙｃｅｓ）属
に属する微生物に関するものである。

丈来旦挟曳 癌化学療法の分野においては、プレオマイシン（Ｂｌｅ
ｏｍｙｃｉｎ）及びアドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙ
ｃｉｎ）等の多くの微生物代謝産物を臨床的に応用する
ことが試みられ、またこれらは実際に臨床において使用
されている．しかしながら、様々な種類の腫瘍に対して
その効果は必ずしも充分ではなく、また臨床上これらの
薬剤に対する腫瘍細胞の耐性現象が明らかにされるにつ
れ、その臨床的応用性は複雑化している〔第４７回日本
癌学会総会記事、ｌ２頁〜ｌ５頁（１９８８年）参照〕
。

が解　しようとす聖艷星 このような状況においては、常に新規制癌物質の開発が
臨床上求められている．即ち、既存の制癌物質に対する
耐性を克服する目的であり、また既存の制癌物質が充分
に効果を発揮できない種類の癌に対して有効性を示す物
質が求められている。

題を　　するための手 本発明者らは，抗腫瘍性物質について微生物代謝産物を
広くスクリーニングした結果、後記の物質が優れた抗腫
瘍作用を示すことを見い出して本発明を完成した。

即ち、本発明は一般式 ［式中、Ｒ，はグルコピラノシル基又は０−ガラクトビ
ラノシル−（ｌ→６）一グルコビラノシル基を、Ｒ，は
メチル基又はヒドロキシメチル基を示すコで表される新
規な抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４類、その製造法及び
その用途並びに該新規物質を産生ずる新規なストレプト
ミセスに属する微生物に関するものである。

以下に，本発明に係わる新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−１４
３２４Ａ及びＢについて物理化学的な性状を示す。

しｎ３ ｕ′１３　ＬＪｌＪ　　聞３ 性状：白色粉末 分子式：Ｃ，、Ｈ４アＮｏ，　。

元素分析値：理論値　炭素６２．７１　　水素７．９８
実測値　炭素６２．５０　　水素７，８７融点：５８〜
６３℃ マススペクトル：　ＦＡＢマススペクトルを第１図に示
す，　［５９４，　（阿＋Ｈ）加 ＵＶスペクトル：メタノール中（ｔｏｌ４／ｄ）で測定
したＵＶスペクトルを第２図に示す。

ＩＲスペクトル：　ＫＢｒ錠剤法によるＩＲスペクトル
を第３図に示す。

’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル二Ｎクロロホルム中で測定し
た’　！１−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を第４
図に示す。

”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル二重クロロホルム中で測定し
た”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル（７５ＭＨＺ）を第５図に
示す。

溶解性：メタノール、クロロホルム及びジメチルスルホ
キシドに可溶であるが、水に難溶である。

酸性、中性、塩基性物質の区別：弱酸性Ｒｆ４ｆｌ　：
　０．３４（メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ、　、　
。

使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（５：１）
） 呈色反応二過マンガン酸カリウム反応陽性性状：白色粉
末 分子式：　Ｃ，、Ｈ，、Ｎｏ、。

元素分析値二理論値　炭素６０．０７　　水素７，７７
実測値　炭素５９．８６　　水素７．６５融点：９６〜
９９℃ マススペクトル：　ＦＡＢマススペクトルを第６図に示
す、　［７４０，（Ｍ＋Ｈ）”コ ＵＶスペクトル：メタノール中（１０μ／−）で測定し
たＵｖスペクトルを第７図に示す。

ＩＲスペクトル：　ＫＢｒ錠剤法によるＩＲスペクトル
を第８図に示す。

’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で測定し
た’　）ｌ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を第９
図に示す。

目Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重りロロホルム中で測定した
”　Ｃ−Ｎ？ｌＲスペクトル（７５ＭＨｚ）を第１０図
に示す。

溶解性：メタノール、クロロホルム及びジメチルスルホ
キシドに可溶であるが、水に難溶である。

酸性、中性、塩基性物質の区別：弱酸性Ｒｆ値：０．１
４（メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ、　、。

使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（５：１）
） 呈色反応二過マンガン酸カリウム反応陽性ＢＥ−１４３
２４の生　学的　性 抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢのマウス実験腫
瘍細胞に対する増殖阻止作用を決定するため、１ｎｖｉ
ｔｒｏで試験を行った。　Ｐ３８８腫瘍細胞に対する１
ｎｖｉｔｒｏの抗腫瘍作用試験は、試験化合物をまずジ
メチルスルホキシドに溶解したのち、２０％のジメチル
スルホキシドを含む細胞培養用培地（２０％ＤＭＳＯ−
ＲＰ）ＩＩ−１６４０培地）で逐次希釈し、３Ｘ１０’
個の腫瘍細胞を含む細胞培養用培地（仔牛血清ｌＯ％含
有ＲＰＭＩ−１６４０培地）２００４に対し２バを加え
た。３７℃で７２時間、５％ＣＯ３雰囲気下で培養した
のち、コールタ−カウンターにて生存する細胞数をカウ
ントし、対照群と比較した。その結果、ＢＥ−１４３２
４ＡはＰ３８８腫瘍細胞に対し、強い増殖阻止作用を示
し、その腫瘍細胞の増殖を５０％阻止する濃度（ＩＣ，
、、）はＰ３８８／Ｓ細胞に対して１ｇ／ｄであり、Ｐ
３８８７Ｙ細胞に対しては０．７ｕｇ／−であった、こ
こにおいてＰ３８８／Ｓは通常のマウス白血病細胞の一
種であり、Ｐ３８８／Ｖ細胞は制癌物質ビンクリスチン
に対して耐性を獲得したＰ３８８白血病細胞である。

更に、ＢＥ−１４３２４Ａは制癌物質アドリアマイシン
に対して耐性を獲得したＰ３８８／Ａ＄ｌｌ胞に対して
も増殖阻止効果を示し、その５０％増殖阻害濃度（ｒｃ
、、）はｌ１４／ｒｄであった。

同様に、ＢＥ−１４３２４８もＰ３８８＠胞に対して強
い増殖阻害作用を有し、それぞれ、Ｐ３８８／Ｓ、　Ｐ
３８８／Ｖ及びＰ３８８／Ａ＃Ｉｌ胞に対する、５０％
増殖阻害濃度（ＩＣ，、）は、　１５．１２及び１２題
／ｄであった。

上述したように、本発明のＢＥ−１４３２４Ａ及びＢは
、マウス実験癌細胞に対し、顕著な増殖阻止作用を示す
、従って、本発明は温血哺乳動物の腫瘍の治療剤として
有用である。

本発明はまた、本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する
場合、有効量の本発明化合物単独又は有効量の本発明化
合物及び不活性且つ薬学的に許容しうる担体から成る医
薬組成物として使用される。

この医薬組成物は、本発明の化合物と不活性な薬学的担
体とを組み合わせて製造され、各種の処方で経口的、非
経口的若しくは局所的に投与される。適切な組成物の例
としては、錠剤、カプセル、丸剤、粉末、顆粒等の経口
投与用の固形組成物、溶液、サスペンション、エマルジ
ョンのような経口投与用の液体組成物を包含する。また
、使用直前に滅菌水、生理的食塩水若しくは他の注射用
滅菌溶剤に溶解しつる滅菌組成物の形で製造することも
できる。

本発明の化合物の実際に好ましい投与量は、使用される
化合物の種類、配合された組成物の種類、適用頻度及び
治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍によって変化するこ
とに注意すべきである。１日当りの成人工人当りの投与
量は、経口投与の場合、１０ないし１０００ｍｇであり
、非経口投与の場合、１日当り１０ないし５００ｍｇで
ある。非経口投与の場合、静脈内注射が好ましい、なお
、投与回数は投与方法及び症状により異なるが、１日当
り１回ないし数回である。

ＢＥ−１４３２４類の製造法について説明する。

本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの製造
に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質ＢＥ
−１４３２４類を産生ずるものならばいずれでも良いが
、例えば以下の菌学的性状を有する微生物を挙げること
ができる。

１、形態 良く発達した気菌糸の先端から５０箇以上の胞子鎖を直
状に着生し、車輪状分枝、菌糸の分断等は認められない
、胞子の大きさは０．７〜０．９Ｘ１．５〜２．５μｍ
位の罪状又は円筒状で、胞子の表面は平滑である。胞子
のう、鞭毛胞子及び菌核等の特殊な器官は観察されない
。

２、各種寒天平板培地における培養性状（２８℃、１４
日間培養） 各種寒天平板培地において、２８℃で１４日間培養した
結果を第１表に示す。

（以下余白） ３、生育温度（ベネット寒天培地、１４日間培養）１２
℃：生育及び気菌糸形成不良 ２０℃：生育及び気菌糸形成は良好 ２８℃：生育及び気菌糸形成は良好 ３７℃：生育は不良で気菌糸形成せず ４５℃：生育せず ４゜生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　陰性（グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの
加水分解　　　　　　　　　陽性（スターチ・無機塩寒
天培地） （３）脱脂牛乳の凝固　　　　　　　　　　　陰性（ス
キムミルク培地） （４）脱脂牛乳のペプトン化　　　　　　　　陽性（ス
キムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成　　　　　　　　陰性（６
）食塩耐性　　　　食塩含有量４％以下で生育（イース
ト・麦芽寒天培地） ５、炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、各種糖類
を添加して、２８℃、 の結果を第２表に示す。

１４日間培養した。

そ 第２表 ６、＠胞壁紹成 ＬＬ−ジアミノピメリン酸及びグリシンが検出された。

以上の菌学的諸性質により、　ＢＡ１４３２４株は放線
菌ストレプトミセス属に属することが判明した。

したがって１本発明者らは、　ＢＡ１４３２４株をスト
レプトミセス・エスピー・Ｂ＾１４３２４（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓｓｐ、　ＢＡ１４３２４）と称すること
とした。

なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されており、その微工研受託番号は微工研菌
寄第１０７４９号（ＦＥＲ阿Ｐ−１０７４９）である。

本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４Ａ及び
Ｂを産生ずる微生物の変異株は、例えばｘ＃Ｉ若しくは
紫外線等の照射処理５例えばナイトロジェン・マスター
ド、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（Ｎ
ＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質
転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処
理方法により抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢ産
生菌を変異させた微生物である。

本発明のＢＥ−１４３２４Ａ及びＢを製造するにあたり
、ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの生産菌株ＢＡ１４３２４
株を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させること
により、ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢを含む培養物が得ら
れる。栄養源としては、放線菌の栄養源として公知のも
のが使用できる１例えば、炭素源としては、市販されて
いるブドウ糖、グリセリン、麦芽糖、デンプン、庶糖、
糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物として用い
られる。窒素源としては、市販されている大豆粉、コー
ンステイープリカー、肉エキス、酵母エキス、締実粉、
ペプトン、小麦胚芽、魚粉、無機アンモニウム塩又は硝
酸ナトリウムなどが単独又は混合物として用いられる。

無機塩としては、市販されている炭酸カルシウム、塩化
ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム又は各種
リン酸塩などを使用することができる。その他必要に応
じて、鉄、マンガン又は亜鉛などの重金属塩を微量添加
することもできる。また、発泡の著しい時には、消泡剤
として、例えば大豆油又は亜麻仁油等の植物油、オクタ
デカノール等の高級アルコール類、各種シリコン化合物
等を適宜添加しても良いにれらのもの以外でも、該生産
菌が利用し、ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの生産に役立つ
ものであれば、いずれも使用することができる。

培養方法としては、一般の微生物代謝産物の生産方法と
同様に行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい、液
体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振盪培養又は通
気培養などのいずれを実施してもよいが、＠に振盪培養
又は深部通気撹拌培養が好ましい、培養温度は２０℃〜
３７℃が適当であるが、２５℃〜３０℃が好ましい、好
ましい培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は２４時
間〜１９２時間、好ましくは４８時間〜１２０時間であ
る。

培養物から目的とするＢＥ−１４３２４Ａ及びＢを採取
す。

るには、微生物の生産する代謝物の培養物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。　ＢＥ
−１４３２４Ａ及びＢは培養濾液中及び菌体中に存在す
るので、培養濾液又は菌体より通常の分離手段、例えば
溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着若しくは分配ク
ロマトグラフィー法及びゲル濾過法等を単独又は組合せ
て行うことにより精製できる。また高速液体クロマトグ
ラフィーや薄層クロマトグラフィーなども抽出精製に利
用可能である。

好ましい分離−精製の例としては次の方法が挙げられる
。まず培養液を遠心分離し、培養濾液を得る。得られた
濾液をダイヤイオン）ＩＰ−２０等の吸着剤に吸着させ
、水洗後、活性物質をメタノールで溶出する。溶出物を
減圧下に濃縮し、濃縮液を酢酸エチルなどの有機溶媒で
抽出する。この抽出液を濃縮することにより、ＢＥ−１
４３２４Ａ及びＢを含む粒物質が得られる１次に、カラ
ムクロマトグラフィーを行って精製すれば、ＢＥ−１４
３２４Ａ及びＢを白色粉末として得ることができる。

次に実施例を挙げ、本発明を具体的に説明する。

しかしながら、本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段はもちろん、本発明によって明ら
かにされたＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの性状に基づいて
、公知の手段を用いてＢＥ−１４３２４Ａ及びＢを生産
、濃縮、抽出、精製する方法すべてを包括する。

来凰斑 斜面寒天培地に培養した放線菌ＢＡ１４３２４株をグル
コース０．１％、デキストリン２．０％、コーングルテ
ンミール１．０％、魚粉０．５％、酵母エキス０．１％
、塩化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５
％、塩化カルシウム０．０５％、硫酸第一鉄０，０００
２％、塩化第一銅０．００００４％、塩化マンガン０．
００００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸亜
鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウムｏ、ｏｏｏｏｓ
％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％、及び
３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％か
らなる培地（１）Ｈ６，７）　Ｉ　Ｑを含む３Ｑ容の三
角フラスコ２本に接種し、２８℃で４８時間、回転振盪
機（毎分２００回転）上で培養した。この培養液を、１
１２ずつ、上記培地１３０Ｍを含む２００ｎ容のジャー
フッメンタ−２本に接種し、２８℃で１２４時間、毎分
１３０Ｑの通気量、２４０回転の攪拌下で、深層部通気
培養を行った。

得られた培養液（約２２５　Ｑ　）を濾過法によって濾
過し、得られた濾液２１ＯＱをダイヤイオンＨＰ−２０
（三菱化成工業社製）５１２に吸着させる６吸着剤を、
脱イオン水１ｉで洗浄後、メタノール−水混合溶媒（２
０％、４０％、６０％及び８０％）及びメタノールを溶
出剤とし、各５Ｑを用いて段階的にメタノール含量を上
げて活性物質を溶出させた。得られた活性分画１４Ｑを
減圧濃縮後、酢酸エチル４Ｑで活性物質を抽出した。こ
の抽出液をｔＩＡｗＩ乾固することにより粒物質１５．
３　ｇが得られた。この粒物質をワコーゲルＣ−３００
（和光純薬製、φ４０　Ｘ　５００ａｕａ　）のカラム
に吸着させ、クロロホルムＩＱで洗浄後、順次メタノー
ル含量を上げていくグラジェント溶出法で活性物質を溶
出し、ＢＥ−１４３２４Δ及びＢ３．２ｇを含む黄褐色
油状分画を得た。この分画は、更に、９０％メタノール
３０−に溶解させ、分取用高速液体クロマトグラフィー
装置で精製することによりＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの
両成分に分離された。即ち、固定層として逆層担体（Ｄ
ｅｖｅｌｏｓｉｌ　ＯＤＳφ５０　Ｘ　５００ａｎ　）
を用い、移動層としてメタノール−水（８０：　２０）
を毎分６０ｄで送液して分取した。　２４０ｎｍ付近の
紫外吸収を指標として、それぞれＢＥ−１４３２４Ａ及
びＢを含む分画を集めた。これらの分画を減圧！！縮後
、凍結乾燥することにより、　ＢＥ−１４３２４Ａ及び
Ｂをそれぞれ白色粉末として１１４ｍｇ及び１６６０ｍ
ｇ得た。

Ａ里曵熱麦 本発明に記載するＢＥ−１４３２４Ａ及びＢは、既存の
制癌剤に耐性を有する腫瘍細胞に対しても該制癌剤に耐
性を獲得していない細胞と同程度の増殖阻止効果を有す
ることから、既存の抗腫瘍剤に刻して感受性を有する腫
瘍はもちろんのこと、耐性を有する腫瘍の治療剤として
も有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第６図は、ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢのＦＡ
Ｂマススペクトルの図である。第２図及び第７図は、メ
タノール中におけるＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの紫外部
及び可視部の吸収スペクトルの図である。第３図及び第
８図は、ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢのＫＢｒ錠剤法によ
る赤外吸収スペクトルの図である。第４図及び第９図は
、　ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢの重クロロホルム中にお
ける３００ＭＨｚ　’Ｈ−Ｎ？ＩＲスペクトルの図であ
る。第５図及び第】０図は、ＢＥ−１４３２４Ａ及びＢ
の重クロロホルム中における７５ＭＨｚ　”Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルの図である。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１はグルコピラノシル基又はＯ−ガラクト
   ピラノシル−（１→６）−グルコピラノシル基を、Ｒ＿
   ２はメチル基又はヒドロキシメチル基を示す］で表され
   る抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４類。
2. （２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１はグルコピラノシル基又はＯ−ガラクト
   ピラノシル−（１→６）−グルコピラノシル基を、Ｒ＿
   ２はメチル基又はヒドロキシメチル基を示す］で表され
   る抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４類を有効成分とする抗
   腫瘍剤。
3. （３）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１はグルコピラノシル基又はＯ−ガラクト
   ピラノシル−（１→６）−グルコピラノシル基を、Ｒ＿
   ２はメチル基又はヒドロキシメチル基を示す］で表され
   る抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４類の製造に際し、抗腫
   瘍性物質ＢＥ−１４３２４類を産生する微生物又はその
   変異株を培養して抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４類を蓄
   積させ、採取することを特徴とする製法。
4. （４）ストレプトミセス・エスピーＢＡ１４３２４（Ｓ
   ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＢＡ１４３２４）株又は
   その変異株を培養することを特徴とする第３請求項記載
   の製法。
5. （５）抗腫瘍性物質ＢＥ−１４３２４類を産生する能力
   を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
   ）に属する微生物又はその変異株。
6. （６）ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
   ｙｃｅｓｓｐ．）ＢＡ１４３２４株又はその変異株であ
   ることを特徴とする第５請求項記載の微生物。