JPH08198874A

JPH08198874A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−４８０２１

Info

Publication number: JPH08198874A
Application number: JP2746295A
Authority: JP
Inventors: Takayoshi Okabe; 隆義岡部; Yoko Okabe; 洋子岡部; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1995-01-24
Filing date: 1995-01-24
Publication date: 1996-08-06

Abstract

(57)【要約】【構成】式［１］【化１】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩、その
製法及び用途、並びに式［１］の化合物を生産する能力
を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ）属に属する微生物に関する。【効果】本発明に記載するＢＥ−４８０２１は癌細胞
の増殖を強く抑制するため、医薬の分野で癌の治療薬と
しての使用が期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍作
用を有する新規化合物、その製造法及びその用途並びに
該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）参照］。

【０００３】このような状況下、癌治療の分野において
は常に新規抗腫瘍性物質の開発が求められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記式
［１］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示すこと
を見いだして本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は新規な式［１］

【０００７】

【化４】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩、その
製法及び用途、並びに式［１］の化合物を産生する能力
を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ）属に属する微生物に関するものである。

【０００８】以下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−４８０２１の物理化学的な性状を示す。

【０００９】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を示
す。

【００１０】ｓ：シングレットｄ：ダブレットｔ：トリプレットｑ：カルテットｍ：マルチプレットｂｒ：ブロードＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツＢＥ−４８０２１の物理化学的性状性状：白色粉末分子式：Ｃ₂₂Ｈ₂₇ＮＯ₅ 質量分析：［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ）⁺として：実測値３８５．１９０１計算値３８５．１８８９紫外部吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２
２７，２４９，２６９，２９１，３３２，３４４赤外部吸収スペクトル：（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４２３，
２９７０，２９３３，１５０６，１４５８，１４１７，
１３０９，１１１５，１０１２¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），
１．３５（３Ｈ，ｓ），１．４６（３Ｈ，ｓ），２．４
２（３Ｈ，ｓ），２．５８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．９
４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．１，６．６Ｈｚ），３．０
５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
６．６，５．８Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
４．１，５．８Ｈｚ），３．８０（３Ｈ，ｓ），４．２
６（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝８．２，６．１Ｈｚ），４．９９
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．２０（１Ｈ，ｂ
ｒ．ｓ），７．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），
７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．１０（１
Ｈ，ｓ），８．９８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１２．９，１８．９，１８．９，２４．８，
３５．２，５８．７，６１．４，６５．１，７０．４，
７６．０，１１０．４，１１２．３，１２２．２，１２
２．４，１２５．８，１２６．４，１２８．６，１３
６．６，１３７．９，１３８．１，１４３．７溶解性：クロロホルム、メタノール、アセトンに易溶、
ヘキサンに不溶である。

【００１１】酸性、中性、塩基性物質の区別：弱酸性物
質Ｒｆ値：０．５５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／テトラヒ
ドロフラン（６：１：１）］呈色反応：過マンガン酸カリウム反応陽性よう素反応陽性塩化第二鉄反応陰性ＢＥ−４８０２１の生物学的活性（抗腫瘍作用）抗腫瘍性物質ＢＥ−４８０２１のマウス実験腫瘍細胞に
対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験を
行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍作
用試験は、ＢＥ−４８０２１をジメチルスルホキシドに
溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈してか
ら、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２０
ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え検液と
した。１×１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地（牛
胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地、２０ｍＭの
２−メルカプトエタノールを含む）５０μｌを９６穴マ
イクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ
₂下で培養した後に上記の検液を５０μｌを加え、３７
℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法に
より対照群と比較した。

【００１２】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６に対す
る抗腫瘍試験は、ＢＥ−４８０２１をジメチルスルホキ
シドに溶解した後ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地に加
え検液とした。１×１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養
培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地）１
００μｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃で
２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液１
００μｌを加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培
養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％スルホ
ローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて細胞
から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長として５５
０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比較した。そ
の結果、ＢＥ−４８０２１は両腫瘍細胞に対し、強い増
殖阻止活性を示し、５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は
第１表の通りであった。

【００１３】更に、ＢＥ−４８０２１のヒト腫瘍細胞に
対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。細胞は、ヒト
大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒ
ト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用培地は、
全ての腫瘍細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６
４０培地を用い、上記のマウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２
６細胞と同様の方法を用いて測定した。その結果、ＢＥ
−４８０２１はヒト腫瘍細胞に対しても強い増殖阻害活
性を示し、その５０％増殖阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表
の通りであった。

【００１４】

【表１】上述したようにＢＥ−４８０２１はマウス及びヒトの腫
瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本発
明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有用
である。

【００１５】次にＢＥ−４８０２１の製造法について説
明する。

【００１６】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−４８０２１の
製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質
ＢＥ−４８０２１を生産するものならばいずれでも良
いが、例えばストレプトミセス（工業技術院生命工学工
業技術研究所受託番号ＦＥＲＭＢＰ−２７８５）を
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで
処理して変異させた変異株Ａ４８０２１株等が好まし
い。

【００１７】本Ａ４８０２１株は以下の菌学的性質を有
する。

【００１８】Ａ４８０２１株の菌学的性状１．形態Ａ４８０２１株はよく伸張し分岐する基生菌糸を形成す
るが気菌糸の形成は僅少である。胞子は見られず、菌核
等の特殊な器官も観察されない。２．各種寒天平板培地における培養性状（２８℃、１４
日間培養）

【００１９】

【表２】３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養）９℃ ：生育せず１３℃：生育良好、気菌糸形成せず１６℃：生育良好、気菌糸形成せず２０℃：生育良好、気菌糸形成せず２３℃：生育非常に良好、気菌糸形成せず２７℃：生育非常に良好、気菌糸形成僅少３１℃：生育非常に良好、気菌糸形成せず３７℃：生育良好、気菌糸形成せず４０℃：生育せず４４℃：生育せず４８℃：生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陰性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陰性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陽性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陰性（６）食塩耐性食塩含有量７％以下で生育（イースト・麦芽寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃で１４日間培養した。炭素源の利用
能の結果を第３表に示す。

【００２０】

【表３】６．細胞壁組成ＬＬ−ジアミノピメリン酸とグリシンが検出された。

【００２１】以上の菌学的諸性質において親株と異なる
点も見られるが親株がストレプトミセスであることか
ら、Ａ４８０２１株も放線菌ストレプトミセス属に属す
ると考えられる。したがってＡ４８０２１株をストレプ
トミセスエスピーＡ４８０２１（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ４８０２１）と称することとし
た。

【００２２】なお、本菌株は通産省工業技術院生命工学
工業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲＭ
Ｐ−１４７０８である。

【００２３】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−４８
０２１を生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若しく
は紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマスタ
ード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくは
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合などの通常用いられる菌種
変換処理方法によりＢＥ−４８０２１生産菌を変異させ
た微生物である。

【００２４】本発明のＢＥ−４８０２１を製造するにあ
たり、ＢＥ−４８０２１の生産菌株を栄養源含有培地に
接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−４８０
２１を含む培養物が得られる。栄養源としては、放線菌
の栄養源として公知のものが使用できる。例えば、炭素
源としては、市販されているブドウ糖、麦芽糖、デンプ
ン、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物
として用いられる。窒素源としては、市販されている大
豆粉、コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミ
ートミール、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウ
ム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物として用
いられる。無機塩としては、市販されている炭酸カルシ
ウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウ
ム、臭化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン酸
塩などを使用することができる。その他必要に応じて、
鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、モリブデン酸などの重
金属塩を微量添加することもできる。また、発泡の激し
い場合には消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁油な
どの植物油、オクタデカノールなどの高級アルコール
類、各種シリコン化合物などを適宜添加してもよい。こ
れらのもの以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−４８０
２１の生産に役立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリノ）
プロパンスルホン酸又はホウ酸ナトリウムなどであれ
ば、いずれも使用することができる。

【００２５】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１３〜３７℃が適当であるが、好ましくは２３
〜３１℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８時間〜１４４時間、好ましくは７
２時間〜１２０時間である。培養物から目的とするＢＥ
−４８０２１を採取するには、微生物の生産する代謝物
から採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用さ
れる。

【００２６】ＢＥ−４８０２１は培養濾液中及び菌体
中、主に濾液中に存在するので、培養濾液又は菌体より
通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法
又は吸着若しくは分配クロマトグラフィー法及びゲル濾
過法などを単独又は組み合わせて行なうことにより精製
できる。

【００２７】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、濾液を得る。濾液を酢
酸エチル抽出し、抽出液を減圧下濃縮後、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）
に供しＢＥ−４８０２１を含む分画を得る。このものを
ゲル濾過クロマトグラフィーにて精製することによりＢ
Ｅ−４８０２１の白色粉末を得る事ができる。

【００２８】本発明の化合物ＢＥ−４８０２１は腫瘍
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明
化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤若しくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液
若しくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げら
れる。

【００２９】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸類、例
えばメタケイ酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リ
ン酸カルシウムなどの無機塩類、例えばポリビニルピロ
リドン若しくはポリアルキレングリコールなどの合成高
分子類、例えばステアリン酸カルシウム若しくはステア
リン酸マグネシウムなどの脂肪酸塩類、例えばステアリ
ルアルコール若しくはベンジルアルコールなどのアルコ
ール類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロース、エチルセルロース若しくはヒドロキシプロピ
ルメチルセルロースなどの合成セルロース誘導体類又は
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。

【００３０】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３１】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油若しくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤若しくは注射剤などの形態
として製造される。

【００３２】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又
は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例え
ば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
などの水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈
内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００３３】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００３４】又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤など
の液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３５】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。

【００３６】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００３７】実施例１：ＢＥ−４８０２１の製造法斜面寒天培地に接種した放線菌Ａ４８０２１株をグルコ
ース０．１％、デキストリン２．０％、魚粉０．５％、
グルテンミール１．０％、酵母エキス０．１％、塩化ナ
トリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、塩化
カルシウム０．０５％、硫酸亜鉛０．００００８％、硫
酸第一鉄０．０００２％、塩化第二銅０．００００４
％、塩化マンガン０．００００４％、塩化コバルト０．
００００４％、ほう酸ナトリウム０．００００８％、モ
リブデン酸アンモニウム０．０００２４％、３−（Ｎ−
モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％からなる培地
（ｐＨ６．８）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フ
ラスコ２本に接種し、２８℃で７２時間、回転振盪機
（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液を２ｍｌ
ずつ上記の培地を１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角
フラスコ５０本に接種し２８℃で７２時間、回転振盪機
（毎分１８０回転）上で培養した。このようにして得ら
れた培養液（約５Ｌ）にセライトを加え、濾過法により
濾液（約４．５Ｌ）を得た。この濾液に酢酸エチル４．
５Ｌを加え抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウ
ムにて脱水後、減圧下濃縮乾固した。残渣をクロロホル
ム１０ｍｌに溶解しシリカゲルカラム（３０ｇ，メルク
社製キーゼルゲル６０）に吸着させ、クロロホルムで洗
浄後、クロロホルム／メタノール（５０：１）で溶出し
た。ＢＥ−４８０２１を含む分画を集め、メタノール２
ｍｌに溶解し、セファデックスＬＨ−２０カラム（２．
５×９６ｃｍ，ファルマシア社製）にかけ、メタノール
で展開することによりＢＥ−４８０２１の白色粉末１０
７ｍｇを得た。

【００３８】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。

【００３９】製剤例１本物質（ＢＥ−４８０２１）１０部重質酸化マグネシウム１５部乳糖７５部を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。

【００４０】製剤例２本物質（ＢＥ−４８０２１）４５部澱粉１５部乳糖１６部結晶性セルロース２１部ポリビニルアルコール３部蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。

【００４１】製剤例３製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。

【００４２】製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。

【００４３】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４８０２１は、
マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効果を
示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用であ
る。

【００４４】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者須田寛之茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式［１］【化１】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属し、式［１］【化２】で表される化合物を産生する能力を有する微生物又はそ
の変異株を培養し、その培養液及び菌体から式［１］で
表される化合物を採取し、要すれば薬学的に許容しうる
塩とすることを特徴とする式［１］で表される化合物又
はその薬学的に許容しうる塩の製造法。
【請求項３】微生物又はその変異株が、ストレプトミセ
スエスピーＡ４８０２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓｓｐ．Ａ４８０２１）である請求項２記載の製造
法。
【請求項４】式［１］【化３】で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩を有効
成分とする抗腫瘍剤。
【請求項５】式［１］で表される化合物を産生する能力
を有するストレプトミセス属に属する微生物又はその変
異株。
【請求項６】微生物が、ストレプトミセスエスピー
Ａ４８０２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ４
８０２１）である請求項５記載の微生物又はその変異
株。