JPH09208575A

JPH09208575A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−５２４４０類及びその製造法

Info

Publication number: JPH09208575A
Application number: JP4420996A
Authority: JP
Inventors: Masahisa Tsukamoto; 匡央塚本; Shigeru Nakajima; 中島　　茂; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Katsuhisa Ojiri; 勝久小尻; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1996-02-06
Filing date: 1996-02-06
Publication date: 1997-08-12

Abstract

(57)【要約】【課題】新規抗腫瘍剤の創製。【解決手段】構造式【化１】［式中、Ｒは式：−ＣＯＯＣＨ₃又は式：−ＣＨ₂ＯＨで
表される基を示す］で表される化合物又はその医薬とし
て許容されうる塩。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を示す新規化合物、その製造法及びその用途並びに
該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。

【０００３】このような状況下、癌治療の分野において
は常に新規抗腫瘍性物質の開発が求められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記構
造式［１］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は新規な構造式［１］

【０００７】

【化２】［式中、Ｒは式：−ＣＯＯＣＨ₃又は式：−ＣＨ₂ＯＨで
表される基を示す］で表される化合物、その製法及び用
途、並びに構造式［１］の化合物を産生する能力を有す
るストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に
属する微生物に関するものである。

【０００８】構造式［１］の化合物は、その抗腫瘍効果
及び産生菌株ストレプトミセス・エスピーＡ５２４
４０株に因んで、抗腫瘍性物質ＢＥ−５２４４０類と命
名された。

【０００９】以下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−５２４４０類の物理化学的な性状を示す。ここ
で、構造式［１］のＲが−ＣＯＯＣＨ₃で表される基で
ある化合物をＢＥ−５２４４０Ａ、Ｒが−ＣＨ₂ＯＨで
表される基である化合物をＢＥ−５２４４０Ｂと称す
る。

【００１０】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を示
す。ｓ：シングレットｄ：ダブレットｔ：トリプレットｑ：カルテットｍ：マルチプレットｂｒ：ブロードＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツＢＥ−５２４４０Ａの物理化学的性状性状；白色アモルファス状固体又は結晶分子式；Ｃ₃₄Ｈ₃₄Ｏ₁₄Ｓ質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ として：実測値６９９．１７５５計算値６９９．１７４８比旋光度；［α］²⁰ _D ＝ −２５２°（ｃ１．０，ＤＭＳＯ）紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２３３（３６１００），３５６（１３１０
０）赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３５６
８，３４２１，１７３０，１６９７，１６５５，１４
５４，１２６３，１１７１，１１１５，１０５７¹Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δｐ
ｐｍ：１１．３（２Ｈ，ｓ），７．７６（２Ｈ，ｔ，
Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ，１．６Ｈｚ），７．２８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ，１．６Ｈｚ），４．１０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝
７．３Ｈｚ），３．９２（２Ｈ，ｍ），３．７６（６
Ｈ，ｓ），３．６５（２Ｈ，ｓ），２．５９（２Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，３．０Ｈｚ），２．５１（２
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，９．４Ｈｚ），２．２５
（４Ｈ，ｍ），１．１６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ₃）δｐｐｍ：１９５．７（ｓ），１８９．４
（ｓ），１７０．６（ｓ），１６１．９（ｓ），１３
７．５（ｄ），１３３．１（ｓ），１２４．１（ｄ），
１２０．３（ｄ），１１４．５（ｓ），７６．１
（ｓ），７４．４（ｄ），６３．０（ｄ），６１．３
（ｓ），５１．８（ｑ），３９．６（ｔ），２７．８
（ｔ），１４．２（ｑ）溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に溶け易
く、水に溶けにくい。酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質呈色反応；硫酸反応陽性ＢＥ−５２４４０Ｂの物理化
学的性状性状；白色アモルファス状固体又は結晶分子式；Ｃ₃₃Ｈ₃₄Ｏ₁₃Ｓ質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺として：実測値６７１．１７９１計算値６７１．１７９８比旋光度；［α］²⁰ _D ＝ −２１５°（ｃ１．０，ＣＨＣｌ₃ ）紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２３３（２９３００），３５６（１０２０
０）赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４４
８，１７３６，１７０１，１６５７，１４５４，１２
５９，１１６９，１１１３，１０５９，１０１４¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１１．３（２Ｈ，ｓ），７．７６（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ，１．５Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝
７．８Ｈｚ），７．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８Ｈ
ｚ，１．０Ｈｚ），７．２８（２Ｈ，ｍ），４．１２
（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．０９（１Ｈ，ｑ，
Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．９１（１Ｈ，ｍ），３．８０
（２Ｈ，ｍ），３．７８（１Ｈ，ｓ），３．７６（３
Ｈ，ｓ），３．７１（１Ｈ，ｓ），３．６７（１Ｈ，
ｍ），２．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，３．
０Ｈｚ），２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．０Ｈ
ｚ，９．２Ｈｚ），２．３７（１Ｈ，ｂｒｓ），２．２
４（４Ｈ，ｍ），１．８０（２Ｈ，ｍ），１．２０（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．１６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．０Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ₃）δｐｐｍ：１９５．９（ｓ），１９５．８
（ｓ），１８９．５（ｓ），１８９．３（ｓ），１７
０．６（ｓ），１６１．９（ｓ）ｘ２，１３７．５
（ｄ），１３７．３（ｄ），１３３．３（ｓ），１３
３．１（ｓ），１２４．１（ｄ）ｘ２，１２０．４
（ｄ），１１９．５（ｄ），１１４．７（ｓ），１１
４．５（ｓ），７６．２（ｓ），７６．１（ｓ），７
４．４（ｄ），７４．２（ｄ），６５．３（ｄ），６
３．０（ｄ），６１．３（ｓ），６１．２（ｓ），６
０．４（ｔ），５１．８（ｑ），３９．６（ｔ），３
６．９（ｔ），２８．７（ｔ），２７．８（ｔ），１
４．６（ｑ），１４．２（ｑ）溶解性；クロロホルム、ジメチルスルホキシド等の有機
溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質呈色反応；硫酸反応陽性ＢＥ−５２４４０類の生物学的活性（抗腫瘍作用
）抗腫瘍性物質ＢＥ−５２４４０類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
作用試験は、ＢＥ−５２４４０類をジメチルスルホキシ
ドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２
０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え検液
とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地
（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地、２
０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）５０ μｌ
を９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時
間、５％ＣＯ ₂下で培養した後に上記の検液を５０μｌ
を加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、Ｍ
ＴＴ測定法により対照群と比較した。

【００１１】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６に対する
抗腫瘍試験は、ＢＥ−５２４４０類をジメチルスルホキ
シドに溶解した後ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地に
加え検液とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培
養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培
地）１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３
７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上記の検
液１００μｌを加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下
で培養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％ス
ルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて
細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長とし
て５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比較し
た。その結果、ＢＥ−５２４４０類は両腫瘍細胞に対
し、強い増殖阻止活性を示し、５０％増殖阻害濃度（Ｉ
Ｃ₅₀）は第１表の通りであった。

【００１２】更に、ＢＥ−５２４４０類のヒト腫瘍細胞
に対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。細胞は、ヒ
ト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及び
ヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用培地
は、全ての腫瘍細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地を用い、上記のマウス大腸癌細胞ｃｏ
ｌｏｎ２６と同様の方法を用いて測定した。その結果、
ＢＥ−５２４４０類はヒト腫瘍細胞に対しても強い増殖
阻害活性を示し、その５０％増殖阻止濃度は第１表の通
りであった。

【００１３】

【表１】上述したようにＢＥ−５２４４０類はマウス及びヒト
の腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、
本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として
有用である。つぎに、ＢＥ−５２４４０類の製造法につ
いて説明する。本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−５２４４０
類の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性
物質ＢＥ−５２４４０類を生産するものならばいずれで
も良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙
げられる。１．形態Ａ５２４４０株は、よく伸長し分岐する基生菌糸と気
菌糸を形成し輪生岐および菌糸の分断は認められない。
胞子鎖（＜５０個）は気菌糸上に形成され、その型は螺
旋型である。胞子の形状は、ほぼ球形でその直径は１．
０〜１．２μｍ位であり、その表面はややしわ状であ
る。胞子のう、鞭毛胞子及び菌核等の特殊な器官は観察
されない。２．各種寒天平板培地における培養性状（２８゜Ｃ、１
４日間培養）を第２表に示す。

【００１４】

【表２】３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培養）１２゜Ｃ；生育せず３１゜Ｃ；生育良好、気菌糸形成良好１６゜Ｃ；生育普通、気菌糸形成普通３３゜Ｃ；生育良好、気菌糸形成良好１９゜Ｃ；生育良好、気菌糸形成普通３５゜Ｃ；生育良好、気菌糸形成不良２３゜Ｃ；生育良好、気菌糸形成良好３８゜Ｃ；生育普通、気菌糸形成せず２８゜Ｃ；生育良好、気菌糸形成良好４３゜Ｃ；生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陰性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陽性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陰性（ＩＳＰー１、ＩＳＰー６、ＩＳＰー７倍地）（６）食塩耐性食塩含有量７％以下で生育（イースト・麦芽寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。

【００１５】Ｄーグルコース＋ラフィノースーＤーキシロース＋Ｄーマンニトール＋Ｌーアラビノース＋イノシトール＋Ｌーラムノース＋サリシン＋Ｄーフルクトース＋シュクロース＋Ｄーガラクトース＋６．細胞壁組成ＬＬージアミノピメリン酸が検出された。以上の菌学的
諸性質よりＡ５２４４０株は放線菌ストレプトミセス
属に属すると考えられる。したがってＡ５２４４０株
をストレプトミセス・エスピーＡ５２４４０（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ５２４４０）と称す
ることとした。

【００１６】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥ
ＲＭＰ−１５２９６である。

【００１７】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−５２
４４０類を生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若
しくは紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマ
スタード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若し
くはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接
触、形質転換、形質導入又は接合などの通常用いられる
菌種変換処理方法によりＢＥ−５２４４０類生産菌を変
異させた微生物である。

【００１８】本発明のＢＥ−５２４４０類を製造するに
あたり、ＢＥ−５２４４０類の生産菌株を栄養源含有培
地に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−５
２４４０類を含む培養物が得られる。栄養源としては、
放線菌の栄養源として公知のものが使用できる。例え
ば、炭素源としては、市販されているブドウ糖、麦芽
糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独
又は混合物として用いられる。窒素源としては、市販さ
れている大豆粉、コーンステイープリカー、グルテンミ
ール、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプ
トン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱
脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなど
が単独又は混合物として用いられる。無機塩としては、
市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化
カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸
ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用することができ
る。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、モリブデン酸などの重金属塩を微量添加することも
できる。また、発泡の激しい場合には消泡剤として、例
えば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オクタデカノー
ルなどの高級アルコール類、各種シリコン化合物などを
適宜添加してもよい。これらのもの以外でも、該生産菌
が利用し、ＢＥ−５２４４０類の生産に役立つもの例え
ば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホ
ウ酸ナトリウムなど、いずれも使用することができる。

【００１９】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１６〜３８℃が適当であるが、好ましくは２
３〜３３℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８時間〜２４０時間、好ましくは７
２時間〜１６８時間である。培養物から目的とするＢ
Ｅ−５２４４０類を採取するには、微生物の生産する代
謝物から採取するのに通常使用される分離手段が適宜利
用することができる。ＢＥ−５２４４０類は菌体中に存
在するので、菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出
法、イオン交換樹脂法又は吸着もしくは分配クロマトグ
ラフィー法及びゲル濾過法などを単独又は組み合わせて
行なうことにより精製できる。好ましい分離精製の例と
して次の方法が挙げられる。まず培養液を濾過し、菌体
を得る。得られた菌体をメタノールまたはアセトンなど
の有機溶媒を用いて抽出する。得られた粗抽出物につい
て、水ー酢酸エチル系で分配を行ない、酢酸エチルを留
去後得られる残留物についてシリカゲルクロマトグラフ
ィー（クロロホルム／メタノールで溶出）などを行なう
ことにより、ＢＥ−５２４４０類を粉末もしくは固体と
して得ることができる。

【００２０】本発明の化合物ＢＥ−５２４４０類は腫
瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発
明化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態として
は各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液
もしくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げら
れる。

【００２１】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コールもしくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。

【００２２】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量
％、好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含
む。液状製剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、
ピーナッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の油など液
状製剤において通常用いられる適当な添加剤を使用し、
懸濁液、シロップ剤又は注射剤などの形態として製造さ
れる。特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又は皮下
注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射
用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射用）、生理
食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液
体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウムなどの水溶
液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）
など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００２３】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量
％の有効成分を含む。又、経口投与の懸濁剤又はシロッ
プ剤などの液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を
含む。

【００２４】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投
与回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ない
し５回である。

【００２５】

【発明の実施の形態】

【００２６】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。実施例１ＢＥ−５２４４０類の製造斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ５２４４０株をグル
コース０．２％、デキストリン２％、ミートミール０．
５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉０．１％、乾燥
酵母０．０５％、硫酸マグネシウム０．０２５％、臭化
ナトリウム０．０２５％、塩化ナトリウム０．２５％、
リン酸水素二カリウム０．０５％、硫酸第一鉄０．００
０２％、塩化第二銅０．００００４％、塩化マンガン
０．００００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫
酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウム０．０００
０８％及びモリブデン酸ナトリウム０．０００２４％か
らなる培地（ｐＨ７．２）１１０ｍｌを含む５００ｍ
ｌ容の三角フラスコ３本に接種し、２８℃で４８時
間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この
培養液を２ｍｌずつ上記の培地を１１０ｍｌ含む５００
ｍｌ容の三角フラスコ１００本に接種し、２８℃で１２
０時間回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

【００２７】このようにして得られた培養液（約１０
Ｌ）から濾過により菌体を分離後、菌体にメタノール
（３Ｌｘ２）を加えて抽出し、抽出液を減圧下に濃縮し
て酢酸エチル（２Ｌｘ２）を加えた。得られた酢酸エチ
ル抽出液を減圧下に濃縮し、残留物にエタノール５０ｍ
ｌを加え不溶部を２．４８ｇ得た。この不溶部をクロロ
ホルム２０ｍｌに溶かし、シリカゲル（メルク社製）の
クロマト用カラム（３．０Ｘ５４ｃｍ）を用いてクロロ
ホルム／メタノール（４０：１）で溶出し、ＢＥ−５２
４４０Ａを含む画分を得、この画分を濃縮することによ
り析出してきた沈殿を濾過し、ＢＥ−５２４４０Ａを白
色粉末として１．９７ｇ得た。またＢＥ−５２４４０Ｂ
を含む画分を濃縮乾固後メタノール１ｍｌに溶かし、ト
ヨパールＨＷ−４０Ｓ（ＴＯＹＯＰＥＡＲＬＨＷ−４
０Ｓ、東ソー社製）のクロマトグラフィー用カラム
（２．０ｘ５０ｃｍ）を用いてメタノールで溶出し、Ｂ
Ｅ−５２４４０Ｂを含む分画を濃縮乾固することにより
ＢＥ−５２４４０Ｂを２７．５ｍｇ得た。

【００２８】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。製剤例１本物質（ＢＥ−５２４４０Ａ）１０（部）重質酸化マグネシウム１５乳糖７５を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。製剤例２本物質（ＢＥ−５２４４０Ａ）４５（部）澱粉１５乳糖１６結晶性セルロース２１ポリビニルアルコール３蒸留水３０を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。製剤例３製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。

【００２９】

【発明の効果】本発明のＢＥ−５２４４０類は、マウス
及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効果を示すこ
とから、医薬の分野で癌の治療剤として有用である。

【００３０】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者小尻勝久茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内 (72)発明者須田寛之茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】構造式【化１】［式中、Ｒは式：−ＣＯＯＣＨ₃又は式：−ＣＨ₂ＯＨで
表される基を示す］で表される化合物。
【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に属し、請求項１記載の構造式［Ｉ］で表され
る化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、構造式［Ｉ］の化合物を採取することを特徴
とする請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化合物の
製造法。
【請求項３】請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化
合物を産生する能力を有する微生物が、ストレプトミセ
ス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）であ
る請求項２記載の製造法。
【請求項４】請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化
合物を有効成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤。
【請求項５】請求項１記載の構造式［Ｉ］で表される化
合物を産生する能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物又はその変異
株。
【請求項６】微生物が、ストレプトミセス・エスピー
Ａ５２４４０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ
５２４４０）である請求項５記載の微生物又はその変異
株。