JPH08143569A - 抗腫瘍物質ｂｅ−４３４７２類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 一般式 【化１】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はヒドロキシ基を、Ｒ²は水素
原子又はメチル基を示す］で表される化合物又はその薬
学的に許容しうる塩及びその製造法。 【効果】本発明に係る化合物は腫瘍細胞の増殖を強く阻
害し、医薬の分野で有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍作
用を有する新規化合物群、その製造法及びその用途並び
に該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。

【０００３】このような状況下、癌治療の分野において
は常に新規抗腫瘍物質の開発が求められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍物質を提供することを
目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍物質が充分
に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍効果
を発揮する化合物を提供することが本発明が解決しよう
とする課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、一般式
［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示すこと
を見いだして本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は新規な一般式［１］

【０００７】

【化４】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はヒドロキシ基を、Ｒ²は水素
原子又はメチル基を示す］で表される化合物又はその薬
学的に許容しうる塩、その製法及び用途、並びに式
［Ｉ］の化合物を産生する能力を有するストレプトミセ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に関
するものである。

【０００８】以下に本発明に係る新規な抗腫瘍性物質Ｂ
Ｅ−４３４７２類の物理化学的な性状を示す。

【０００９】ここで、一般式［Ｉ］のＲ¹がヒドロキシ
基であり、Ｒ²が水素原子である化合物をＢＥ−４３４
７２Ａ、Ｒ¹及びＲ²が水素原子である化合物をＢＥ−４
３４７２Ｂ、Ｒ¹がヒドロキシ基であり、Ｒ²がメチル基
である化合物をＢＥ−４３４７２Ｃ、Ｒ¹が水素原子で
あり、Ｒ²がメチル基である化合物をＢＥ−４３４７２
Ｄとそれぞれ称する。

【００１０】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を示
す。

【００１１】ｓ ： シングレット ｄ ： ダブレット ｔ ： トリプレット ｑ ： カルテット ｍ ： マルチプレット ｂｒ： ブロード Ｊ ： カップリング定数 Ｈｚ： ヘルツＢＥ−４３４７２Ａの物理化学的性状 性状 ；黄橙色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₂Ｈ₂₄Ｏ₁₀ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５６９．１４４３ 計算値 ５６９．１４４７ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋５０１°（ｃ １．０，ＤＭ
ＳＯ） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２
３０，２６２，２８５（ｓｈ），３６０，４１５ 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３５００，
２９２６，２３６２，１６２５，１５８３，１４５６，
１２７５，１２１１，１０９２，８１４，６１１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ
ｐｐｍ：１３．９（１Ｈ，ｓ），１２．６（１Ｈ，
ｓ），１１．９（１Ｈ，ｓ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝７．６Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．９Ｈ
ｚ），７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．４
６（１Ｈ，ｂｒ，ｓ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ），６．９６（１Ｈ，ｂｒ，ｓ），６．９１（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝
６．７Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１８．０Ｈ
ｚ），２．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１８．０Ｈｚ），２．
３９（３Ｈ，ｓ），１．６２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈ
ｚ），１．４３（３Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１９０．３（ｓ），１８６．９（ｓ），１８
１．８（ｓ），１７５．７（ｓ），１６２．４（ｓ），
１６１．７（ｓ），１５７．５（ｓ），１４８．２
（ｓ），１３８．１（ｓ），１３７．７（ｄ），１３
７．４（ｓ），１３４．６（ｓ），１３２．４（ｓ），
１３０．６（ｄ），１２４．４（ｄ），１２１．５
（ｄ），１２０．５（ｄ），１１９．９（ｓ），１１
９．１（ｄ），１１８．４（ｄ），１１６．７（ｓ），
１１４．２（ｓ），１１３．３（ｓ），１０２．０
（ｓ），８４．７（ｓ），８４．０（ｄ），７３．１
（ｓ），６０．５（ｓ），４２．１（ｔ），２５．５
（ｑ），２２．０（ｑ），１６．９（ｑ） 溶解性；メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１２】酸性、中性、塩基性物質の区別；弱酸性物
質 Ｒｆ値；０．５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄使
用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：
１）］ また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールア
ミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン
塩、プロカイン塩等の脂肪族アミン塩、例えばＮ，Ｎ−
ジベンジルエチレンジアミン塩等のアラルキルアミン
塩、例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソ
キノリン塩等の複素芳香族アミン塩、例えばテトラメチ
ルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベン
ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルア
ンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メ
チルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモ
ニウム塩等の第４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リ
ジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。

【００１３】ＢＥ−４３４７２Ｂの理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₂Ｈ₂₄Ｏ₉ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５５３．１５０１ 計算値 ５５３．１４９８ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋６１２°（ｃ １．０，ＤＭ
ＳＯ） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２
３０，２６２，２８５（ｓｈ），３６０，４１５ 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４２７，
２９２７，２３６２，１６１６，１５８３，１４５６，
１２７３，１０８４，８１４，６１１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ
ｐｐｍ：１４．４（１Ｈ，ｓ），１２．７（１Ｈ，
ｓ），１２．０（１Ｈ，ｓ），７．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝７．６Ｈｚ），７．５５−７．６０（３Ｈ，ｍ），
７．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．０６（１
Ｈ，ｂｒ，ｓ），６．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．３，
１．８Ｈｚ），５．０１（１Ｈ，ｍ），２．８５（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ），２．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１６．５Ｈｚ），２．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈ
ｚ），２．４２（３Ｈ，ｓ），１．６６（３Ｈ，ｄ，Ｊ
＝６．８Ｈｚ），１．４０（３Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１８９．４（ｓ），１８６．８（ｓ），１８
２．０（ｓ），１７８．１（ｓ），１６２．５（ｓ），
１６１．８（ｓ），１５６．０（ｓ），１４７．９
（ｓ），１４３．５（ｓ），１３７．５（ｄ），１３
７．０（ｓ），１３４．３（ｓ），１３２．６（ｓ），
１２７．７（ｄ），１２４．３（ｄ），１２１．５
（ｄ），１２１．４（ｓ），１２０．４（ｄ），１１
９．１（ｄ），１１８．８（ｄ），１１７．３（ｓ），
１１４．４（ｓ），１１３．０（ｓ），１０２．０
（ｓ），８０．９（ｄ），７１．１（ｓ），６５．１
（ｄ），５６．３（ｓ），４４．４（ｔ），２９．７
（ｑ），２４．７（ｑ），２２．０（ｑ） 溶解性；メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１４】酸性、中性、塩基性物質の区別；弱酸性物
質 Ｒｆ値；０．５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄使
用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：
１）］ また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールア
ミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン
塩、プロカイン塩等の脂肪族アミン塩、例えばＮ，Ｎ−
ジベンジルエチレンジアミン塩等のアラルキルアミン
塩、例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソ
キノリン塩等の複素芳香族アミン塩、例えばテトラメチ
ルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベン
ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルア
ンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メ
チルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモ
ニウム塩等の第４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リ
ジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。

【００１５】ＢＥ−４３４７２Ｃの理化学的性状 性状 ；黄色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₃Ｈ₂₆Ｏ₁₀ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５８３．１６２４ 計算値 ５８３．１６２１ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋３２０°（ｃ ０．５，ＤＭ
ＳＯ） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２
２５，２６０，３６０赤外部吸収スペクトル；（ＫＢ
ｒ，ｃｍ^-1）３４８７，２９３７，１６６６，１６０
８，１５９１，１４５８，１３２７，１２７５，１２３
０，１０４７，８１２，６０６¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ
ｐｐｍ：１３．９（１Ｈ，ｓ），１１．９（１Ｈ，
ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６
５（１Ｈ，ｂｒ，ｓ），７．４９−７．５４（２Ｈ，
ｍ），７．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．０
８（１Ｈ，ｂｒ，ｓ），６．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
７．９，１．５Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．
７Ｈｚ），４．００（３Ｈ，ｓ），３．００（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１８．０Ｈｚ），２．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
８．０Ｈｚ），２．４６（３Ｈ，ｓ），１．６７（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．３７（３Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１９０．６（ｓ），１８２．９（ｓ），１８
１．０（ｓ），１７５．３（ｓ），１６１．６（ｓ），
１６０．２（ｓ），１５７．４（ｓ），１４６．１
（ｓ），１３７．８（ｓ），１３７．７（ｄ），１３
７．７（ｓ），１３４．９（ｓ），１３４．０（ｓ），
１２９．３（ｄ），１２０．５（ｄ），１２０．３
（ｄ），１１９．５（ｓ），１１９．４（ｓ），１１
８．９（ｄ），１１８．８（ｄ），１１８．７（ｓ），
１１８．５（ｄ），１１３．４（ｓ），１０１．９
（ｓ），８４．５（ｓ），８４．４（ｄ），７２．８
（ｓ），６０．５（ｓ），５６．３（ｑ），４２．１
（ｔ），２５．５（ｑ），２２．２（ｑ），１６．９
（ｑ） 溶解性；メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１６】酸性、中性、塩基性物質の区別；弱酸性物
質 Ｒｆ値；０．５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄使
用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：
１）］ また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールア
ミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン
塩、プロカイン塩等の脂肪族アミン塩、例えばＮ，Ｎ−
ジベンジルエチレンジアミン塩等のアラルキルアミン
塩、例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソ
キノリン塩等の複素芳香族アミン塩、例えばテトラメチ
ルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベン
ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルア
ンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メ
チルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモ
ニウム塩等の第４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リ
ジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。

【００１７】ＢＥ−４３４７２Ｄの理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₃Ｈ₂₆Ｏ₉ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５６７．１６３２ 計算値 ５６７．１６５５ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋２０４°（ｃ ０．２５，Ｄ
ＭＳＯ） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２
２６，２６０，３６０（ｓｈ），３７０，３９０（ｓ
ｈ） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３４５２，
２９２７，１６６８，１６１０，１４５８，１３２７，
１２７５，１２３２，１０４７，８１０，６０６¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ
ｐｐｍ：１４．４（１Ｈ，ｓ），１２．０（１Ｈ，
ｓ），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６
９（１Ｈ，ｂｒ，ｓ），７．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
７．９，１．２Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
９Ｈｚ），７．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），
７．１１（１Ｈ，ｂｒ，ｓ），６．９１（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝７．９，１．２Ｈｚ），４．９８（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ
＝６．７，５．２Ｈｚ），４．０２（３Ｈ，ｓ），２．
８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ），２．７３（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ），２．４７（３Ｈ，ｓ），
２．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），１．６４（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．３９（３Ｈ，ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ：１８９．５（ｓ），１８３．１（ｓ），１８
０．８（ｓ），１７８．２（ｓ），１６１．６（ｓ），
１６０．２（ｓ），１５５．６（ｓ），１４５．９
（ｓ），１４３．４（ｓ），１３７．５（ｄ），１３
７．２（ｓ），１３４．８（ｓ），１３３．６（ｓ），
１２６．４（ｄ），１２０．６（ｓ），１２０．４
（ｄ），１２０．２（ｄ），１１９．７（ｓ），１１
９．４（ｓ），１１９．３（ｄ），１１８．８（ｄ），
１１８．５（ｄ），１１３．０（ｓ），１０２．１
（ｓ），８０．７（ｄ），７１．３（ｓ），６５．３
（ｄ），５６．４（ｓ），５６．３（ｑ），４４．４
（ｔ），２９．６（ｑ），２４．８（ｑ），２２．１
（ｑ） 溶解性；メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け易く、水に溶けにくい。

【００１８】酸性、中性、塩基性物質の区別；弱酸性物
質 Ｒｆ値；０．５［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄使
用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（１０：
１）］ また本発明化合物は塩の形で存在することができ、その
ような塩としては例えばナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールア
ミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン
塩、プロカイン塩等の脂肪族アミン塩、例えばＮ，Ｎ−
ジベンジルエチレンジアミン塩等のアラルキルアミン
塩、例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソ
キノリン塩等の複素芳香族アミン塩、例えばテトラメチ
ルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベン
ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルア
ンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メ
チルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモ
ニウム塩等の第４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リ
ジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。

【００１９】ＢＥ−４３４７２類の生物学的活性（抗腫
瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−４３４７２類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
作用試験は、ＢＥ−４３４７２類をジメチルスルホキシ
ドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２
０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え検液
とした。１×１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地
（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地、２０ｍ
Ｍの２−メルカプトエタノールを含む）５０μｌを９６
穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、５％
ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液を５０μｌを加え、
３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定
法により対照群と比較した。

【００２０】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ ２６に対す
る抗腫瘍試験は、ＢＥ−４３４７２類をジメチルスルホ
キシドに溶解した後ジメチルスルホキシドで逐次希釈し
てから、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地に
加え検液とした。１×１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培
養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地）
１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃
で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液１
００μｌを加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培
養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．４％スルホ
ローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を用いて細胞
から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長として５５
０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比較した。そ
の結果、ＢＥ−４３４７２類は両腫瘍細胞に対し、強い
増殖阻止活性を示し、５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は
第１表の通りであった。

【００２１】更に、ＢＥ−４３４７２類のヒト腫瘍細胞
に対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。細胞は、ヒ
ト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及び
ヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用培地
は、全ての腫瘍細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地を用い、上記のマウス大腸癌細胞ｃｏｌｏ
ｎ ２６細胞に対する抗腫瘍試験と同様の方法を用いて
測定した。その結果、ＢＥ−４３４７２類はヒト腫瘍細
胞に対しても強い増殖阻害活性を示し、その５０％増殖
阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。

【００２２】

【表１】 上述したようにＢＥ−４３４７２類はマウス及びヒトの
腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本
発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有
用である。

【００２３】次にＢＥ−４３４７２類の製造法について
説明する。

【００２４】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−４３４７２類
の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物
質ＢＥ−４３４７２類を生産するものならばいずれでも
良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙げ
られる。 １．形態 Ａ４３４７２株は、よく伸長し分岐する基生菌糸と気菌
糸を形成し、輪生岐及び菌糸の分断は認められない。気
菌糸上には胞子の長い連鎖（１０〜５０個）を作り、そ
の形態は、らせん状である。胞子の表面は平滑で大きい
が１．２〜０．９×０．９〜０．６μｍの卵形であり、
胞子のう、鞭毛胞子、及び菌核等の特殊な器官は観察さ
れない。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 各種寒天平板培地において、２８℃、１４日間培養した
結果を第２表に示す。

【００２５】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） １０℃： 生育せず １５℃： 生育良好、気菌糸形成せず １８℃： 生育良好、気菌糸形成僅少 ２２℃： 生育非常に良好、気菌糸形成良好 ２６℃： 生育及び気菌糸形成非常に良好 ２９℃： 生育及び気菌糸形成非常に良好 ３７℃： 生育非常に良好、気菌糸形成良好 ４０℃： 生育及び気菌糸形成良好 ４３℃： 生育及び気菌糸形成良好 ４８℃： 生育せず ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陽性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含有量１０％以下で生育 （チロシン寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。炭素源の利用能
の結果を第３表に示す。

【００２６】

【表３】 ６．細胞壁組成 ＬＬ−ジアミノピメリン酸とグリシンが検出された。

【００２７】以上の菌学的諸性質よりＡ４３４７２株は
放線菌ストレプトミセス属に属すると考えられる。した
がってＡ４３４７２株をストレプトミセス エスピー
Ａ４３４７２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ４
３４７２）と称することとした。

【００２８】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１４４７８である。

【００２９】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−４３
４７２類を生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若し
くは紫外線等の照射処理、例えばナイトロジェンマスタ
ード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくは
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変
換処理方法によりＢＥ−４３４７２類生産菌を変異させ
た微生物である。

【００３０】本発明のＢＥ−４３４７２類を製造するに
あたり、ＢＥ−４３４７２類の生産菌株を栄養源含有培
地に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−４
３４７２類を含む培養物が得られる。栄養源としては、
放線菌の栄養源として公知のものが使用できる。炭素源
としては例えば、市販されているブドウ糖、麦芽糖、デ
ンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混
合物として用いられる。窒素源としては、例えば市販さ
れている大豆粉、コーンステイープリカー、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、
魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機ア
ンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物
として用いられる。無機塩としては、例えば市販されて
いる炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、
硫酸マグネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム
又は各種リン酸塩等を使用することができる。その他必
要に応じて、例えば鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、モ
リブデン酸等の重金属塩を微量添加することもできる。
また、発泡の激しい場合には消泡剤として、例えば大豆
油若しくは亜麻仁油等の植物油、例えばオクタデカノー
ル等の高級アルコール類、又は各種シリコン化合物など
を適宜添加してもよい。これらのもの以外でも、該生産
菌が利用し、ＢＥ−４３４７２類の生産に役立つもの例
えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホ
ウ酸ナトリウムなどであれば、いずれも使用することが
できる。

【００３１】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養等のいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１５〜４３℃が適当であるが、好ましくは２２
〜３７℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８時間〜２４０時間、好ましくは７２
時間〜１６８時間である。培養物から目的とするＢＥ−
４３４７２類を採取するには、微生物の生産する代謝物
から採取するのに通常使用される分離手段を適宜利用す
ることができる。

【００３２】ＢＥ−４３４７２類は培養濾液中及び菌体
中に存在するので、培養濾液又は菌体より通常の分離手
段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着若し
くは分配クロマトグラフィー法及びゲル濾過法などを単
独又は組み合わせて行なうことにより精製できる。

【００３３】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノール又はアセトン等の有機溶媒を用いて抽
出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチル分
配を行ない、酢酸エチルを留去後得られる抽出物につい
てシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／メタ
ノールで溶出）などを行なうことにより、ＢＥ−４３４
７２類を粉末又は固体として得ることができる。

【００３４】本発明の化合物ＢＥ−４３４７２類は腫瘍
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明
化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤若しくは液剤等の経口剤、又は例えば溶液若
しくは懸濁液等の殺菌した液状の非経口剤が挙げられ
る。

【００３５】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物として、例えば乳糖若しくはブドウ糖等
の糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米等のデン
プン類、例えばステアリン酸等の脂肪酸類、例えばメタ
ケイ酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カル
シウム等の無機塩類、例えばポリビニルピロリドン若し
くはポリアルキレングリコール等の合成高分子類、例え
ばステアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネ
シウム等の脂肪酸塩類、例えばステアリルアルコール若
しくはベンジルアルコール等のアルコール類、例えばメ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチル
セルロース若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロー
ス等の合成セルロース誘導体類、又は、水、ゼラチン、
タルク、植物油、アラビアゴム等通常用いられる添加物
が挙げられる。

【００３６】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末等の固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、好
ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３７】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油若しくはゴマ油等の植物由来の油
など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を使
用し、懸濁液、シロップ剤若しくは注射剤等の形態とし
て製造される。

【００３８】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又
は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例え
ば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
等の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内
注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００３９】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００４０】又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤等の
液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００４１】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。

【００４２】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるもの
ではない。

【００４３】実施例１：ＢＥ−４３４７２類の製造法 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４３４７２株をグル
コース０．１％、デキストリン２．０％、魚粉０．５
％、グルテンミール１．０％、酵母エキス０．１％、塩
化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、
硫酸亜鉛０．００００８％、塩化カルシウム０．０５
％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第一銅０．０００
０４％、塩化マンガン０．００００４％、塩化コバルト
０．００００４％、ほう酸ナトリウム０．００００８
％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％、３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％からな
る培地（ｐＨ６．８）１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の
三角フラスコ４本に接種し、２８℃で７２時間、回転振
盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液を２
ｍｌずつ上記の培地を１００ｍｌを含む５００ｍｌ容の
三角フラスコ１００本に接種し２８℃で９６時間、回転
振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

【００４４】このようにして得られた培養液（１０Ｌ）
から濾過により菌体を分離し、この菌体にメタノール８
Ｌを加え、数時間攪拌後、菌体を濾去し、メタノール抽
出液を得た。メタノール抽出液のメタノールを減圧下に
留去し、残渣に脱イオン水６００ｍｌを加え、６Ｎ Ｈ
ＣｌでｐＨ２に調整後、酢酸エチル３Ｌを加えて抽出し
た。水層にメチルエチルケトン３Ｌを加えて再び抽出
し、酢酸エチル抽出液と合わせた。得られた有機層を減
圧下に濃縮乾固した。残渣にクロロホルム８００ｍｌを
加えて溶解した後にシリカゲルのクロマト塔（３．０×
３５ｃｍ）にかけ、クロロホルム／メタノールの混合溶
媒（５０：１→１０：１）で順次溶出した。溶出した活
性画分を減圧下に濃縮乾固し、ＢＥ−４３４７２Ａ、Ｂ
Ｅ−４３４７２Ｂ、ＢＥ−４３４７２Ｃ及びＢＥ−４３
４７２Ｄを含む混合物１．８５ｇを得た。

【００４５】実施例２：ＢＥ−４３４７２類の製造法 実施例１で得られた混合物１．８５ｇのうち５００ｍｇ
をクロロホルム６．２５ｍｌとメタノール６．２５ｍｌ
に溶解し、ＯＤＳカラム（富士シリシア社製、ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｒｅｘ^TM ＯＤＳ ＤＵ０００５ＭＴ，２０×
２５０ｍｍ）に０．５ｍｌずつ２５回に分けてかけ、
０．１％のトリフルオロ酢酸を含む８５％メタノールを
移動相とする分取高速液体クロマトグラフィーに付し、
ＢＥ−４３４７２Ａを含む画分、ＢＥ−４３４７２Ｂを
含む画分、ＢＥ−４３４７２Ｃを含む画分、及びＢＥ−
４３４７２Ｄを含む画分を得た。それぞれの画分を減圧
下に濃縮乾固し、ＢＥ−４３４７２Ａの黄橙色粉末を１
７０ｍｇ、ＢＥ−４３４７２Ｂの赤褐色粉末を６１．６
ｍｇ、ＢＥ−４３４７２Ｃの黄色粉末を１２７ｍｇ、及
びＢＥ−４３４７２Ｄの赤褐色粉末を５３．４ｍｇ得
た。

【００４６】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。

【００４７】製剤例１ 本物質（ＢＥ−４３４７２類） １０部 重質酸化マグネシウム １５部 乳糖 ７５部 を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。

【００４８】製剤例２ 本物質（ＢＥ−４３４７２類） ４５部 澱粉 １５部 乳糖 １６部 結晶性セルロース ２１部 ポリビニルアルコール ３部 蒸留水 ３０部 を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。

【００４９】製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。

【００５０】製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。

【００５１】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４３４７２類
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。

【００５２】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 鈴木 肇 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はヒドロキシ基を、Ｒ²は水素
   原子又はメチル基を示す］で表される化合物又はその薬
   学的に許容しうる塩。
2. 【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
   ｅｓ）属に属し、一般式［Ｉ］ 【化２】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はヒドロキシ基を、Ｒ²は水素
   原子又はメチル基を示す］で表される化合物を産生する
   能力を有する微生物又はその変異株を培養し、一般式
   ［Ｉ］で表される化合物を採取し、要すれば薬学的に許
   容しうる塩とすることを特徴とする一般式［Ｉ］で表さ
   れる化合物又はその薬学的に許容しうる塩の製造法。
3. 【請求項３】微生物又はその変異株が、ストレプトミセ
   ス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）で
   ある請求項２記載の製造法。
4. 【請求項４】一般式：［Ｉ］ 【化３】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はヒドロキシ基を、Ｒ²は水素
   原子又はメチル基を示す］で表される化合物又はその薬
   学的に許容しうる塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】一般式［Ｉ］で表される化合物を産生する
   能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
   ｅｓ）属に属する微生物又はその変異株。
6. 【請求項６】微生物が、ストレプトミセス エスピー
   Ａ４３４７２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ４
   ３４７２）である請求項５記載の微生物又はその変異
   株。