JPH09241257A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−４１９５６類及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規な抗腫瘍剤の創製。 【解決手段】一般式 【化１】 ［式中，Ｒは、式

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍
作用を発揮する新規化合物、その製造法及びその用途並
びに該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。

【０００３】このような状況下、癌治療の分野において
は常に新規抗腫瘍性物質の開発が求められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記一
般式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は新規な一般式

【０００７】

【化３】 ［式中、Ｒは、式

【０００８】

【化４】 を示す］で表される化合物、その製造法及び用途、並び
に一般式［Ｉ］の化合物を産生する能力を有するストレ
プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｉｍｙｃｅｓ）属に属する微
生物に関するものである。

【０００９】一般式［Ｉ］の化合物は、その抗腫瘍効果
及び産生菌株ストレプトミセス・エスピー Ａ４１９５
６株に因んで、抗腫瘍性物質ＢＥ−４１９５６と命名さ
れた。

【００１０】以下に、本発明に係る新規な抗腫瘍性物質
ＢＥ−４１９５６類の物理化学的な性状を示す。

【００１１】ここで、一般式［Ｉ］のＲが式

【００１２】

【化５】 で表される化合物をＢＥ−４１９５６Ａ，式

【００１３】

【化６】 で表される化合物をＢＥ−４１９５６Ｂ、式

【００１４】

【化７】 で表される化合物をＢＥ−４１９５６Ｃと称する。

【００１５】以下にＮＭＲ測定における略号の意味を示
す。 ｓ ： シングレット ｄ ： ダブレット ｔ ： トリプレット ｑ ： カルテット ｍ ： マルチプレット ｂｒ ： ブロード Ｊ ： カップリング定数 Ｈｚ ： ヘルツＢＥ−４１９５６Ａの物理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｏ₈ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ４１７．１５５２ 計算値 ４１７．１５４９ 紫外部吸収スペクトル λ ｍａｘ；（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２３９（９６００），３００（１０９００），
４６９（３１００） 赤外部吸収スペクトル ； ν ｍａｘ（ＫＢｒ，ｃｍ
^-1）３４４２， １６４５，１６０３，１４３１，１３
９０，１２９６，１０９２，１０３４， ８９１，６１
１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｌ₃、５００ＭＨｚ）
δ ｐｐｍ：１２．２（１Ｈ，ｓ），７．１２（１Ｈ，
ｓ），７．０７（１Ｈ，ｓ），５．７１（１Ｈ，ｓ），
５．６４（１Ｈ，ｍ），５．６０（１Ｈ，ｓ），４．３
１（１Ｈ，ｍ），３．９３（３Ｈ，ｍ），３．７４（１
Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．２， ４．３Ｈｚ），３．６５（１
Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），２．２９（１Ｈ， ｔ，
Ｊ＝４．６Ｈｚ），１．９４−２．０４（２Ｈ，
ｍ），１．９６（３Ｈ， ｓ），１．４４−１．６０
（３Ｈ，ｍ），０．９６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｌ₃、１２５ＭＨｚ）
δ ｐｐｍ：１８６．８（ｓ）， １８４．６（ｓ），
１５８．５（ｓ）， １５７．０（ｓ），１４４．２
（ｓ）， １３９．６（ｓ）， １３５．５（ｄ），
１３１．２（ｓ）， １２２．３（ｓ）， １１４．３
（ｄ）， １１２．８（ｓ）， ９９．９（ｄ）， ９
３．７（ｄ）， ８１．３（ｄ）， ７２．９（ｄ），
７０．８（ｔ）， ６２．６（ｄ）， ６２．６
（ｔ）， ３４．８（ｔ）， ２０．３（ｑ）， １
８．０（ｔ）， １３．７（ｑ） 溶解性；クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホキ
シド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別； 中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性ＢＥ−４１９５６Ｂの物理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｏ₈ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ４１７．１５７５ 計算値 ４１７．１５４９ 紫外部吸収スペクトル λ ｍａｘ；（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２３９（１０１００），３０１（１１８０
０），４６８（３４００） 赤外部吸収スペクトル ； ν ｍａｘ（ＫＢｒ，ｃｍ
^-1）３４４２， １６４５，１６０２，１４２９，１３
９０，１２９６，１０９３，８９１， ６１１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｌ₃、５００ＭＨｚ）
δ ｐｐｍ：１２．２（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，
ｓ），７．０１（１Ｈ，ｓ），５．９０（１Ｈ，ｓ），
５．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．５，３．１Ｈｚ），
５．６１（１Ｈ，ｓ），４．２６（１Ｈ，ｍ），４．２
０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，５．８Ｈｚ），４．１４
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，７．０Ｈｚ），３．８２−
３．８８（２Ｈ， ｍ），３．６８（１Ｈ，ｍ），２．
７４（１Ｈ，ｂｒｓ），１．９０−２．０４（２Ｈ，
ｍ），１．９７（３Ｈ，ｓ），１．４２−１．６５（３
Ｈ，ｍ）， ０．９６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｌ₃、１２５ＭＨｚ）
δ ｐｐｍ：１８７．６（ｓ），１８４．５（ｓ），１
５８．７（ｓ）， １５７．１（ｓ），１４４．４
（ｓ），１３９．８（ｓ），１３５．３（ｄ）， １３
１．３（ｓ），１２２．４（ｓ），１１４．４（ｄ），
１１３．０（ｓ），９９．９（ｄ），９８．６（ｄ），
７７．４（ｄ），７２．９（ｄ）， ７１．６（ｄ），
６７．０（ｔ），６３．３（ｔ），３４．８（ｔ），
２０．３（ｑ），１８．０（ｔ），１３．７（ｑ） 溶解性；メタノール、ジメチルスルホキシド等の有機溶
媒に溶け易く、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性ＢＥ−４１９５６Ｃの物理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｏ₈ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ４１７．１５３１ 計算値 ４１７．１５４９ 紫外部吸収スペクトル λ ｍａｘ；（ＭｅＯＨ，ｎｍ
（ε））２３９（９５００），３０１（１０９００），
４６６（３１００） 赤外部吸収スペクトル ； ν ｍａｘ（ＫＢｒ，ｃｍ
^-1）３４１９， １６４５，１６０５，１４２７，１３
８９，１２９６，１０９３，８９１， ６１１¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｌ₃、５００ＭＨｚ）
δ ｐｐｍ： １２．２（１Ｈ， ｓ）， ７．１４
（１Ｈ， ｓ）， ６．９５（１Ｈ， ｓ），６．１７
（１Ｈ， ｓ）， ５．６５（１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝
９．８， ３．４Ｈｚ）， ５．６１（１Ｈ， ｓ），
４．２０（２Ｈ， ｍ）， ４．１１（１Ｈ，
ｍ）， ３．９２（１Ｈ， ｍ）， ３．８７（１Ｈ，
ｍ）， ３．７１（１Ｈ， ｍ）， ２．４３（１
Ｈ， ｄ， Ｊ＝５．０Ｈｚ）， １．９８（１Ｈ，
ｍ）， １．９７（３Ｈ， ｓ）， １．８５（１Ｈ，
ｔ， Ｊ＝５．８Ｈｚ）， １．４５−１．６２（３
Ｈ， ｍ）， ０．９６（３Ｈ，ｔ， Ｊ＝７．０Ｈ
ｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｌ₃、１２５ＭＨｚ）
δ ｐｐｍ：１８７．９（ｓ），１８４．７（ｓ），１
５８．６（ｓ），１５７．０（ｓ）， １４４．９
（ｓ），１３９．７（ｓ），１３４．１（ｄ），１３
１．３（ｓ）， １２２．３（ｓ），１１４．３
（ｄ），１１３．０（ｓ），９９．９（ｄ）， ９８．
１（ｄ），７６．５（ｄ），７２．９（ｄ），７１．３
（ｄ）， ６７．１（ｔ），６３．３（ｔ），３４．８
（ｔ），２０．３（ｑ），１８．０（ｔ），１３．７
（ｑ） 溶解性；クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホキ
シド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性ＢＥ−４１９５６類の生物学的活性（抗腫瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−４１９５６類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
作用試験は、ＢＥ−４１９５６類をジメチルスルホキシ
ドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有 ＲＰＭＩ１６４０培地
（２０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え
検液とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培
地（牛胎児血清１０ ％含有ＲＰＭＩ １６４０培地、
２０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む） ５０μ
ｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時
間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液を５μｌを
加え、３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴ
Ｔ測定法により対照群と比較した。

【００１６】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ ２６に対す
る抗腫瘍作用試験は、ＢＥ−４１９５６類をジメチルス
ルホキシドに溶解した後ジメチルスルホキシドで逐次希
釈してから、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ １６４０
培地に加え検液とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む
細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有 ＲＰＭＩ １６
４０培地）１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注
し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上
記の検液１００μｌを加え、３７℃で７２時間、５％Ｃ
Ｏ₂下で培養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．
４％スルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を
用いて細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長
として５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比
較した。その結果、ＢＥ−４１９５６類は両腫瘍細胞に
対し、強い増殖阻止活性を示し、５０％増殖阻害濃度は
第１表の通りであった。

【００１７】更に、ＢＥ−４１９５６類のヒト腫瘍細胞
に対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。細胞は、ヒ
ト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及び
ヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用培地
は、全ての腫瘍細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地を用い、上記のマウス大腸癌細胞 ｃｏ
ｌｏｎ ２６と同様の方法を用いて測定した。その結
果、ＢＥ−４１９５６類はヒト腫瘍細胞に対しても強い
増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻止濃度は第１表
の通りであった。

【００１８】

【表１】 上述したように ＢＥ−４１９５６類はマウス及びヒト
の腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、
本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として
有用である。次いで、ＢＥ−４１９５６類の製造法につ
いて説明する。本発明の抗腫瘍性物質 ＢＥ−４１９５
６類の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍
性物質 ＢＥ−４１９５６類を生産するものならばいず
れでも良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物
が挙げられる。 １．形態 Ａ４１９５６株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し輪生岐および菌糸の分断は認められない。気菌
糸上には胞子の長い連鎖（５０個以上）を作り、その形
態は、直線状である。胞子の表面は平滑で大きさが１．
５〜１．０×０．７〜０．５μｍ位の円筒状であり、胞
子のう、鞭毛胞子および菌核等の特殊な器官は観察され
ない。 ２．各種寒天平板培地における培養性状（２８℃、１４
日間培養）

【００１９】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培養） ２℃；生育せず ２２℃；生育及び気菌糸形成非常に良好 ４℃；生育僅少、気菌糸形成せず ２６℃；生育及び気菌糸形成非常に良好 ９℃；生育良好、気菌糸形成せず ２９℃；生育及び気菌糸形成非常に良好 １１℃；生育良好、気菌糸形成せず ３５℃；生育僅少、気菌糸形成せず １５℃；生育および気菌糸形成良好 ３７℃；生育せず １８℃；生育および気菌糸形成非常に良好 ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陰性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陽性 （ＩＳＰ−１、ＩＳＰ−６、ＩＳＰ−７） （６）食塩耐性 食塩含有量７％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種糖を添加して２８℃ １４日間培養した。 Ｄーグルコース ＋ ラフィノース ＋ Ｄーキシロース ＋ Ｄーマンニトール ＋ Ｌーアラビノース ＋ イノシトール ＋ Ｌーラムノース ＋ サリシン ＋ Ｄーフルクトース ＋ シュクロース ＋ Ｄーガラクトース ＋ ６．細胞壁組成 ＬＬージアミノピメリン酸とグリシンが検出された。 以上の菌学的諸性質よりＡ４１９５６株は放線菌ストレ
プトミセス属に属すると考えられる。したがってＡ４１
９５６株をストレプトミセス・エスピー Ａ４１９５６
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ４１９５６）と
称することとした。

【００２０】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１４４４５である。

【００２１】本発明で使用する抗腫瘍性物質 ＢＥ−４
１９５６類を生産する微生物の変異株は、例えば Ｘ線
若しくは紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェン
マスタード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若
しくは Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン （ＮＴＧ） 等の変異誘起剤による処理、ファ
ージ接触、形質転換、形質導入又は接合などの通常用い
られる菌種変換処理方法によりＢＥ−４１９５６類生産
菌を変異させた微生物である。

【００２２】本発明のＢＥ−４１９５６類を製造するに
あたり、ＢＥ−４１９５６類の生産菌株を栄養源含有培
地に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−４
１９５６類を含む培養物が得られる。栄養源としては、
放線菌の栄養源として公知のものが使用できる。例え
ば、炭素源としては、市販されているブドウ糖、麦芽
糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独
又は混合物として用いられる。窒素源としては、市販さ
れている大豆粉、コーンステイープリカー、グルテンミ
ール、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプ
トン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱
脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなど
が単独又は混合物として用いられる。無機塩としては、
市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化
カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸
ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用することができ
る。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、モリブデン酸などの重金属塩を微量添加することも
できる。また、発泡の激しい場合には消泡剤として、例
えば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オクタデカノー
ルなどの高級アルコール類、各種シリコン化合物などを
適宜添加してもよい。これらのもの以外でも、該生産菌
が利用し、ＢＥ−４１９５６類の生産に役立つもの例え
ば ３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホ
ウ酸ナトリウムなどであれば、いずれも使用することが
できる。

【００２３】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は ９〜２９℃が適当であるが、好ましくは１８
〜２９℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８ 時間〜１９２時間、好ましくは７
２時間〜１４４時間である。培養物から目的とするＢＥ
−４１９５６を採取するには、微生物の生産する代謝物
から採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用す
ることができる。

【００２４】ＢＥ−４１９５６類は菌体中に存在するの
で、菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオ
ン交換樹脂法又は吸着もしくは分配クロマトグラフィー
法及びゲル濾過法などを単独又は組み合わせて行なうこ
とにより精製できる。

【００２５】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノールまたはアセトンなどの有機溶媒を用い
て抽出する。得られた粗抽出物について、水ー酢酸エチ
ル系で分配を行ない、酢酸エチルを留去後得られる残留
物についてシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホル
ム／メタノール／酢酸エチルで溶出）などを行なうこと
により、ＢＥ−４１９５６類を粉末もしくは固体として
得ることができる。

【００２６】本発明の化合物ＢＥ−４１９５６類は腫瘍
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明
化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液
もしくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げら
れる。

【００２７】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コールもしくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。

【００２８】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には ０．１〜１００重量
％、好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。液
状製剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、ピーナ
ッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の油など液状製剤
において通常用いられる適当な添加剤を使用し、懸濁
液、シロップ剤又は注射剤などの形態として製造され
る。特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又は皮下注
射で投与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射用
蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射用）、生理食
塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液体
（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウムなどの水溶
液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）
など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００２９】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００３０】又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤など
の液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３１】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ ｍｇである。なお、投
与回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ない
し５回である。以下に、実施例を挙げて本発明を具体的
に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定される
ものではない。

【００３２】

【発明の実施の形態】

【００３３】

【実施例】

実施例１ＢＥ−４１９５６類の製造法 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４１９５６株をグル
コース０．１％、デキストリン２．０％、魚粉０．５
％、グルテンミール１．０％、酵母エキス０．１％、塩
化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム ０．０５
％、硫酸亜鉛０．００００８％、塩化カルシウム０．０
５％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第一銅０．００
００４％、塩化マンガン０．００００４％、塩化コバル
ト０．００００４％、ほう酸ナトリウム０．００００８
％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％、３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％からな
る培地（ｐＨ ６．８）１１０ ｍｌを含む５００ｍｌ
容の三角フラスコ２本に接種し、２８℃で４８時間、回
転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液
を２ｍｌずつ上記の培地を１１０ｍｌを含む５００ｍｌ
容の三角フラスコ５０本に接種し２８℃で１４４時間、
回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

【００３４】このようにして得られた培養液（約５Ｌ）
から濾過により菌体を分離し、この菌体にメタノール５
Ｌを加え、数時間攪拌後、菌体を濾去し、メタノール抽
出液を得た。メタノール抽出液のメタノールを減圧下に
留去し、残渣に脱イオン水６００ｍｌを加え、２−ブタ
ノン（７５０ｍｌｘ３）を加えて抽出した。得られた２
−ブタノン抽出液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲ
ル（メルク社製）のクロマトグラフィー用カラム（３．
０ｘ４２ｃｍ）を用い、クロロホルム／メタノールの混
合溶媒（３０：１）で溶出した。溶出した活性画分を減
圧下に濃縮乾固し、ＢＥ−４１９５６類を含む混合物８
７５．３ｍｇを得た。次いで、シリカゲル（メルク社
製）のクロマトグラフィー用カラム（３．０ｘ３０ｃ
ｍ）を用い、ヘキサン／酢酸エチルの混合溶媒（１：
５）で溶出し、ＢＥ−４１９５６Ａを含む画分を１５
０．４ｍｇ、ＢＥ−４１９５６ＢおよびＣを含む画分を
２０．４ｍｇ得た。ＢＥ−４１９５６Ａを含む画分をメ
タノール２ｍｌに溶かし、トヨパールＨＷ−４０Ｓ（Ｔ
ＯＹＯＰＥＡＲＬ ＨＷ−４０Ｓ、東ソー社製、３．０
ｘ５０ｃｍ）のカラムを用いメタノールで溶出する事に
より、ＢＥ−４１９５６Ａを９１．９ｍｇ得た。またＢ
Ｅ−４１９５６ＢおよびＣを含む画分をクロロホルム１
ｍｌに溶かしローバーカラムＤＩＯＬ（メルク社製、２
５ｘ３１０ｍｍ）を用い、クロロホルムで溶出し、ＢＥ
−４１９５６ＢおよびＣをそれぞれ７．６ｍｇ、１０．
７ｍｇを得た。以下に本発明の化合物の製剤例を示す
が、本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるもの
ではない。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−４１９５６Ａ） １０（部） 重質酸化マグネシウム １５ 乳糖 ７５ を均一に混合して、３５０ μｍ以下の粉末状又は細粒
状の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセ
ル剤とした。 製剤例２ 本物質（ＢＥ−４１９５６Ａ） ４５（部） 澱粉 １５ 乳糖 １６ 結晶性セルロース ２１ ポリビニルアルコール ３ 蒸留水 ３０ を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。 製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。 製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。 製剤例５ 本物質（ＢＥ−４１９５６Ａ） ０．６（部） 非イオン系界面活性剤 ２．４ 生理的食塩水 ９７ を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なって注
射剤を作成した。

【００３５】

【発明の効果】本発明のＢＥ−４１９５６類は、マウス
及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効果を示すこ
とから、医薬の分野で癌の治療剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 319:04） (Ｃ０７Ｄ 407/04 311:92 317:20） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ０７Ｍ 7:00 (72)発明者 岡部 隆義 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 【化１】 ［式中、Ｒは、式 【化２】 を示す］で表される化合物。
2. 【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
   ｅｓ）属に属し、請求項１記載の一般式［Ｉ］の化合物
   を産生する能力を有する微生物又はその変異株を培養
   し、一般式［Ｉ］で表される化合物を採取することを特
   徴とする一般式［Ｉ］で表される化合物の製造法。
3. 【請求項３】微生物が、ストレプトミセス・エスピー
   Ａ４１９５６（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ
   ４１９５６）又はその変異株である請求項２記載の製造
   法。
4. 【請求項４】請求項１記載の一般式［Ｉ］で表される化
   合物又はそれらの薬学的に許容しうる塩を有効成分とす
   る抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】請求項１記載の一般式［Ｉ］の化合物を生
   産する能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
   ｍｙｃｅｓ）属に属する微生物又はその変異株。
6. 【請求項６】微生物が、ストレプトミセス・エスピー
   Ａ４１９５６（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ
   ４１９５６）又はその変異株であるである請求項５記載
   の微生物又はその変異株。