JPH03197481A

JPH03197481A - 抗腫瘍性物質ｂｅ―１０９８８

Info

Publication number: JPH03197481A
Application number: JP33893089A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Oka; 岡　博史; Hiroyuki Suda; 寛之須田; Akira Okura; 大倉　彬; Kenji Kawamura; 健二河村; Kotaro Funaishi; 船石　興太郎; Masanori Okanishi; 岡西　昌則
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1989-12-27
Filing date: 1989-12-27
Publication date: 1991-08-28

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は医薬の分野で有用であり、さらに詳細には腫瘍
細胞の増殖を阻害し、制癌効果を発揮する新規化合物、
その製法及びその用途並びに該新規物質を産生ずる新規
な微生物に関するものである。

従来の技術癌化学派法の分野においては、プレオマイシン（Ｂｌｅ
ｏｍｙｃｉｎ）及びアドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙ
ｃｉｎ）等の多くの微生物代謝産物を臨床的に応用する
ことが試みられ、またこれらは実際に臨床において使用
されている。しかしながら、様々な種類の腫瘍に対して
その効果は必ずしも充分ではなく、また臨床上これらの
薬剤に対する腫瘍細胞の耐性現象が明らかにされるにつ
れ、その臨床的応用性は複雑化している〔第４７回日本
癌学会総会記事、１２頁〜１５頁（１９８８年）参照］
。

発明が解決しようとする課題このような状況においては、常に新規制癌物質の開発が
臨床上求められている。即ち、既存の制癌物質に対する
耐性を克服する目的であり、また既存の制癌物質が充分
に効果を発揮できない種類の癌に対して有効性を示す物
質が求められている。

課題を解決するための手段本発明者らは、抗腫瘍性物質について微生物代謝産物を
広くスクリーニングした結果、後記の新規物質が優れた
抗腫瘍作用を示すことを見い出して本発明を完成した。

即ち、本発明は式で表される新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８又はそ
の医薬として許容しうる塩、その製造法及びその抗腫瘍
剤としての用途並びに該抗腫瘍性物質を産生− する新規微生物に関するものである。

本発明に係わる化合物について、その理化学的性状を以
下に示す。

ＢＥ−１０９８８の理化学的性状性状　暗赤色アモルファス状固体若しくは結晶分子式：
Ｃ，、Ｈ，。Ｎ４０，　Ｓ元素分析値　理論値炭素５１．６５％、水素３．３３％
実測値炭素５１．５９％、水素３．３１％融点・２７０
℃まで明瞭な分解点（融点）を示さない。

マススペクトル二ＥＩマススペクトルを第１図に示す。

（３０２，Ｍ”）Ｕ■スペクトル・メタノール中（１０ＩＩｇ／＋ｎｅ）
で測定したＵｖスペクトルを第２図に示す。

ＩＲスペクトル：　ＫＢｒ錠剤法によるＩＲスペクトル
を第３図に示す。

Ｈ−ＮＭＲスペクトル，ｄ６−ジメチルスルホキシド中
で測定した゛Ｈ一ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を
第４図に示す。

”Ｃ−ＮＨＲスペクトル：ｄ８−ジメチルスルホキシド
中で測定した”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル（７５ＭＨｚ）
を第５図に示す。

溶解性・水に溶けにくく、シメチルホルムアミド又はジ
メチルスルホキシドなどの有機溶媒に易溶。

酸性、中性、塩基性物質の区別：塩基性物質Ｒｆ値　０
．４７　［メルク社製、キーザルゲル６０Ｆ２，４使用
，展開溶媒；クロロホルム／メタノール／酢酸（１００
：１０：１）］呈色反応：過マンガン酸カリウム反応陽性ＢＥ−１０９
８８の生物学的活性抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８のマウス実験腫瘍細胞に
対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
て試験を行った。Ｐ３８８腫瘍細胞に対するｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏの抗腫瘍作用試験は、ＢＥ−１０９８８をまずジ
メチルスルホキシドに溶解したのち、２０％にジメチル
スルホキシドを含む細胞培養用培地（２０％ＤＭＳＯー
ＲＰκＩ１６４０培地）で逐次希釈し、２．５Ｘ１０゜
個の腫瘍細胞を含む細胞培養用培地（修生血清１０％含
有ＲＰＭＩ１６４０培地）ｚｏｏ４ｇに対し２μεを加
えた。３７℃で７２時間、５％ＣＯ２下で培養したのち
、コールタ−カウンターにて生存する細胞数をカウント
し、対照群と比較した。その結果、ＢＥ−１０９８８は
Ｐ３８８腫瘍細胞に対し、強い増殖阻止作用を示し、そ
の腫瘍細胞の増殖を５０％阻止する濃度（ＩＣ，。）は
Ｐ３８８／Ｓ細胞に対して０．５３μＨであった。また
、Ｐ３８８ハ細胞に対するＢＥ−１０９８８のＩＣ，。

は０．４０μＨであった。

ここにおいてＰ３８８／Ｓは通常のマウス白血病細胞の
一種であり、Ｐ３８８／Ｖ細胞は制癌物質ビンクリスチ
ンに対して耐性を獲得したＰ３８８白血病細胞である。

更に、ＢＥ−１０９８８は制癌物質アドリアマイシンに
対して耐性を獲得したＰ３８８ハ細胞に対しても増殖阻
止効果を示し、その５０％増殖阻害濃度（ＩＣＳ。）は
２．０μＮであった。

上述したように、本発明のＢＥ−１０９８８は、マウス
実験癌細胞に対し、顕著な増殖阻止作用を示す。

従って、本発明は温血哺乳動物の腫瘍の治療剤として有
用である。

本発明はまた、本発明化合物を抗腫瘍剤として７− 使用する場合、有効量の本発明化合物単独又は有効量の
本発明化合物及び不活性且つ薬学的に許容しろる担体か
ら成る医薬組成物として使用される。

この医薬組成物は、本発明の化合物と不活性な薬学的担
体とを組み合わせて製造され、各種の処方で経口的、非
経口的若しくは局所的に投与される。適切な組成物の例
としては、錠剤、カプセル、丸剤、粉末、顆粒等の経口
投与用の固形組成物、溶液、サスペンション、エマルジ
ョンのような経口投与用の液体組成物を包含する。また
、使用直前に滅菌水、生理的食塩水若しくは他の注射用
滅菌溶剤に溶解しつる滅菌組成物の形で製造することも
できる。

本発明化合物の医薬として許容しうる塩とは、例えば塩
酸又は硫酸等の無機酸の塩が挙げられる。

本発明の化合物の実際に好ましい投与量は、使用される
化合物の種類、配合された組成物の種類、適用頻度及び
治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍によって変化するこ
とに注意すべきである。−日当りの成人−人当りの投与
量は、経口投与の場合、８１０ないし５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは
静脈内注射の場合、１日当り１０ないしｌｏｏｍｇであ
る。なお、投与回数は投与方法及び症状により異なるが
、１回ないし数回である。

本発明化合物であるＢＥ−１０９８８の製造法について
説明する。

本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８の製造に使用す
る微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質ＢＥ１０９８
８を産生するものならばいずれでも良いが、例えば以下
の菌学的性状を有する微生物を挙げることができる。

１、形態本菌株は、顕微鏡下で、良く発達した気菌糸の先端より
２０個以上の分節胞子を着生し、直状および屈曲状に伸
びている。輪生子および菌糸の分断は認められない。胞
子の大きさは幅０．８〜１．０μＭ、長さ１．０〜１．
６μｍ位の円筒状でであり、胞子の恒鞭毛胞子および菌
核等は観察されない。胞子の表面は平滑またはこぶ状で
ある。

２、培養性状各種寒天平板培地で、２８℃で１４日間培養した結果を
第１表に示す。

（以下余白）３、生育温度（ベネット寒天培地、１４日間培養）１２
“Ｃ；生育は不良で気菌糸を形成せず２０℃：生育およ
び気菌糸形成は良好２８℃：生育および気菌糸形成は良好３７℃：生育および気菌糸形成は良好４５°Ｃ１生育せず４、生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　陽性（グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの
加水分解　　　　　　　　　陽性（スターチ・無機塩寒
天培地）（３）脱脂牛乳の凝固　　　　　　　　　　　陰性（ス
キムミルク培地）（３）脱脂牛乳のペプトン化　　　　　　　　陽性（ス
キムミルク培地）（４）メラニン様色素の生成　　　　　　　　陰性（５
）食塩耐性　　　　食塩含有量７％以下で生育（イース
ト・麦芽寒天培地）５、炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地として、下記各
種糖を添加して、２８℃、１４日間培養した。

その結果を第２表に示す。

第２表６、細胞壁のアミノ酸ＬＬ−ジアミノピメリン酸及びグリシンが検出された。

以上の菌学的性状により、本菌株は放線菌ストレプトミ
セス属に分類され、バーシーズ・マニュアル・オブ・デ
ターミナテイブ・バクテリオロジー第８版、１９７４年
（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　８ｔｈ　
Ｅｄｉｔｉｏｎ、　１９７４）および放線菌の同定実験
法（日本放線菌学会編）などの文献検索によると、スト
レプトミセス・キサントシデイカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ｘａｎｔｈｏｃｉｄｉｃｕｓ）が近縁な種と
して挙げられる。しかし、本菌株とはＤ−キシロース、
Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノースの利用能が異なり、
また各種寒天平板培地上での培養性状における菌糸の色
などの点で、ストレプトミセス・キサントシディカスは
うすい黄色が基調であり、本菌株とは異なる。従って、
本菌株は新菌株であり、本菌株をストレプトミセス・エ
スピー　・ＢＡ−１０９８８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｓｐ、　ＢＡ−１０９８８）と称する。

なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されており、その微工研受託番号は微工研菌
寄第１０４９０号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０４９０）である
。

本発明で使用する抗腫瘍性物質１３Ｅ−１０９８８を産
生する微生物の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外線等
の照射処理、例えばナイトロジエン・マスク−ド、アザ
セリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ−メチル
−Ｎ゛−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等
の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転換、形
質導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処理方法に
より抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８産生菌を変異させた
微生物である。

本発明のＢＥ−１０９８８を製造するにあたり、ＢＥ１
０９８８の生産菌株を栄養源含有培地に接種して好気的
に発育させることにより、ＢＥ−１０９８８を含む培養
物が得られる。栄養源としては、放線菌の栄養源として
公知のものが使用できる。例えば、炭素源としては、市
販されているブドウ糖、グリセリン、麦芽糖、デンプン
、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物と
して用いられる。窒素源としては、市販されている大豆
粉、コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エキス、
綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、無機アンモニウム
塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物として用い
られる。無機塩としては、市販されている炭酸カルシウ
ム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム
又は各種リン酸塩などを使用することができる。その他
必要に応じて、鉄、マンガン又は亜鉛などの重金属塩を
微量添加することもできる。また、発泡の著しい時には
、消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁油等の植物油
、オクタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコ
ン化合物等を適宜添加しても良い。これらのもの以外で
も、該生産菌が利用し、ＢＥ−１０９８８の生産に役立
つものであれば、いずれも使用することができる。

培養方法としては、一般の微生物代謝産物の生産方法と
同様に行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液
体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振盪培養又は通
気培養などのいずれを実施してもよいが、特に振盪培養
又は深部通気撹拌培養が好ましい。培養温度は２０℃〜
３７“Ｃが適当であるが、好ましくは２５°Ｃ〜３０℃
である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時
間は２４時間〜１９２時間、好ましくは４８時間〜１２
０時間である。

培養物から目的とするＢＥ−１０９８８を採取するには
、微生物の生産する代謝物の培養物から採取するのに通
常使用される分離手段が適宜利用される。ＢＥ１０９８
８は培養濾液中及び菌体中に存在するので、培養濾液又
は菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン
交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグラフィー法
及びゲル濾過法等を単独又は組合せて行うことにより精
製できる。また高速液体クロマトグラフィーや薄層クロ
マトグラフィーなども抽出精製に利用可能である。

好ましい分離−精製の例としては次の方法が挙げられる
。まず培養液を酢酸エチル等の有機溶媒抽出し、溶媒を
留去して得られる粗物質についてシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーを行ない、次に高速液体クロマトグラフ
ィーなどの分離手段を用いて精製すれば、ＢＥ−１０９
８８を暗赤色の粉末として得ることができる。

次に実施例を挙げ、本発明を具体的に説明する。

しかしながら、本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段はもちろん、本発明によって明ら
かにされたＢＥ−１０９８８の性状に基づいて、公知の
手段を用いてＢＥ−１０９８８を生産、濃縮、抽出、精
製する方法すべてを包括する。

来旌桝斜面寒天培地に培養した放線菌ＢＡ−１０９８８株をグ
ルコース０．１％、デキストリン２．０％、コーングル
テンミール１．０％、魚粉０．５％、酵母エキス０．１
％、塩化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０
５％、塩化カルシウム０．０５％、硫酸第一鉄０．００
０２％、塩化第一銅０．００００４％、塩化マンガン０
．００００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸
亜鉛ｏ、ｏｏｏｏａ％、ホウ酸ナトリウムｏ、ｏｏｏｏ
ｓ％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％及び
３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％か
らなる培地（ｐＨ６，７）１００ｍｇを含む５００ｍＱ
容の三角フラスコ４本に接種し、２８℃で７２時間、回
転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

この培養液を２ｄずつ、上記の培地を１００ｍｅ含む５
００ｍＱ容の三角フラスコ１００本に接種し、２８℃で
１２０時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養し
た。

得られた培養液１０ｆｉをの酢酸エチル（５Ｑで２回抽
出）ＩＯＱを用いて抽出し、酢酸エチル抽出液を減圧下
に濃縮してＢＥ−１０９８８を含む粗物質をシリカゲル
カラムクロマトグラフィー（３Ｘ　３０ｃｍ　）にかけ
、クロロホルム−酢酸エチルの混合溶媒（１；１がら１
３まで段階的に酢酸エチルの量を増やして溶出）で順次
溶出することにより、ＢＥ−１０９８８を含む分画を得
た。この分画を減圧下に濃縮することにより、粗物質３
７４ｍｇを得た。この粗物質をジメチルホルムアミド−
メタノール（１：１）の混合溶媒２００＋ｎＱ、を用い
て溶解し、逆相系の分取高速液体クロマトグラフィー（
充填剤：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　０ＤＳ−１０／２０、カ
ラム。

５　Ｘ　５０ａｎ、展開溶媒：２４％アセトニトリル、
流速１００ｍＡ／ｍ１ｎ）により精製し、ＢＥ−１０９
８８の分画的２．２Ｑを得た。この分画を４℃に３日間
放置すると、ＢＥ−１０９８８の暗赤色の沈殿を生じた
のでこれを濾取し、ＢＥ’−１０９８８４５ｍｇを得た
。

丼更二軌米本発明に記載するＢＥ−１０９８８は、既存の制癌剤に
耐性を有する腫瘍細胞に対しても該制癌剤に耐性を獲得
していない細胞と同程度の増殖阻止効果を有することか
ら、医薬の分野で癌の治療剤とじて有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＢＥ−１０９８８のＥＴマススペクトルの図
である。第２図は、メタノール中におけるＢＥ−１０９
８８の紫外部及び可視部の吸収スペクトルの図である。第３図は、ＢＥ−１０９８８のＫＢｒ錠剤法による赤外
吸収スペクトルの図である。第４図は、ＢＥ−１０９８
８のｄ。ジメチルスルホキシド中における３００ＭＨｚ　’Ｈ−
ＮＭＲスペクトルの図である。第５図は、ＢＥ−１０９
８８のｄ。ジメチルスルホキシド中における７５ＭＨｚ　”Ｃ−Ｎ
ＮＲスペクトルの図である。ｌ＃許ｔＨ願人　　萬有製薬株式会社

Claims

【特許請求の範囲】

（１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８又はその医薬
として許容しうる塩。
（２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８又はその医薬
として許容しうる塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
（３）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８又はその医薬
として許容しうる塩の製造に際し、抗腫瘍性物質ＢＥ−
１０９８８を産生する微生物又はその変異株を培養して
抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８を蓄積させ、採取するこ
とを特徴とする製法。
（４）ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓｓｐ．）ＢＡ−１０９８８株又はその変異株を
培養することを特徴とする第３請求項記載の製法。
（５）抗腫瘍性物質ＢＥ−１０９８８を産生する能力を
有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
属に属する微生物又はその変異株。
（６）ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓｓｐ．）ＢＡ−１０９８８株又はその変異株で
あることを特徴とする第５請求項記載の微生物。