JPH11255798A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−６６４０８類及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】本発明は新規な一般式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂はそれぞれ独立にアセトキシ基又は水
素原子を示す｝で表される化合物類に関する。 【効果】本発明の化合物は、マウス及びヒトの腫瘍細胞
に対して強い増殖抑制効果を示すことから、医薬の分野
で癌の治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を示す新規化合物、その製造法及びその用途並びに
該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。

【０００３】このような状況下、癌治療の分野において
は常に新規抗腫瘍性物質の開発が求められている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記一
般式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は新規な一般式［Ｉ］

【０００７】

【化２】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂はそれぞれ独立にアセトキシ基又は水
素原子を示す］で表される化合物、その製造法及びその
用途並びに該化合物を産生する能力を有することを特徴
とするアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）
属に属する微生物に関するものである。

【０００８】なお、抗腫瘍効果及び生産菌株アクチノプ
ラネス エスピー Ａ ６６４０８株に因んで、一般式
［Ｉ］で表される化合物は、Ｒ₁、Ｒ₂が共にアセトキシ
基である化合物をＢＥ−６６４０８Ａ、Ｒ₁がアセトキ
シ基、Ｒ₂が水素原子である化合物をＢＥ−６６４０８
Ｂ、Ｒ₁、Ｒ₂が共に水素原子である化合物をＢＥ−６６
４０８Ｃと称し、またこれらを総称してＢＥ−６６４０
８類と称する。

【０００９】以下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物
質ＢＥ−６６４０８類の物理化学的な性状を示す。

【００１０】下記にＮＭＲ測定における略号の意味を示
す。 ｓ ：シングレット ｄ ：ダブレット ｔ ：トリプレット ｑ ：カルテット ｍ ：マルチプレット ｂｒ：ブロード Ｊ ：カップリング定数 Ｈｚ：ヘルツ

【００１１】ＢＥ−６６４０８Ａの物理化学的性状 性状 ；淡黄色粉末 分子式 ；Ｃ₇₂Ｈ₉₂Ｎ₁₂Ｏ₂₆ 質量分析 ；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）⁺
：実測値 １５４１．６３２８、 計算値 １５４
１．６３２４ 比旋光度 ；［ α ］²⁰ _D −５９．６°（ｃ
０．５，ＣＨＣｌ₃）紫外部吸収スペクトル； λ_max（ＭｅＯＨ） ｎｍ（ε）：２１５（９１，００
０）， ２３１（８９，１００）， ２４８ ｓｈ（４
６，３００）， ３０６（８，８００）， ３５９
（１０，３００） λ_max［０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ （１：９）］
ｎｍ （ε）：２１５（７８，８００）， ２３２（８
０，６００）， ２４５ ｓｈ（５８，６００）， ３
１１（１０，２００）， ３３６（８，９００）， ３
６０（１１，１００） λ_max［０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ（１：９）］
ｎｍ （ε）：２５０（８４，５００）， ３０６
（７，９００）， ３９８（１３，１００） 赤外部吸収スペクトル； ν_max（ＫＢｒ）ｃｍ^-1 ：
３５１８， ３３８５，２９７０， １７３６， １６
４９， １５２５， １４５０， １３７７，１２４
０， １１６３， １０８６， １０２２， ８９３，
７７１， ６０８¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル （５００
ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃） δ ０．８５（３Ｈ，
ｓ）， ０．８５（３Ｈ， ｄ， Ｊ＝７．０Ｈｚ），
０．８８（３Ｈ， ｄ， Ｊ＝７．０Ｈｚ）， １．
９４（１Ｈ， ｍ）， ２．０４（３Ｈ， ｓ），
２．０７（３Ｈ， ｓ）， ２．１６−２．２８（２
Ｈ， ｍ），２．９６（３Ｈ， ｓ）， ３．００（１
Ｈ， ｓ）， ３．３８（３Ｈ，ｓ）， ３．５９（１
Ｈ， ｄ， Ｊ＝１６．５Ｈｚ）， ３．９７（１Ｈ，
ｂｒｄ， Ｊ＝１５．０Ｈｚ）， ４．０１（１Ｈ，
ｄ， Ｊ＝１８．０Ｈｚ）， ４．２５（１Ｈ， ｂｒ
ｄ， Ｊ＝１１．０Ｈｚ）， ４．４１（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝６．０， １８．０Ｈｚ）， ４．５６（１Ｈ，
ｂｒｄ， Ｊ＝１５．０Ｈｚ）， ５．０８（１Ｈ，
ｂｒｓ）， ５．３２（１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ＝６．
１Ｈｚ）， ５．４８（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１１．０Ｈ
ｚ），５．５９（１Ｈ， ｓ）， ５．６４（１Ｈ，
ｂｒｓ）， ５．６８（１Ｈ，ｂｒｓ）， ５．７２
（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１６．５Ｈｚ）， ７．４７−
７．５３（２Ｈ， ｍ）， ７．６４（１Ｈ， ｓ），
７．６９−７．７６（２Ｈ， ｍ）， ８．８０（１
Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ＝６．０Ｈｚ）， ９．４１（１
Ｈ， ｄ， Ｊ＝６．１Ｈｚ）， １１．６（１Ｈ，
ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル （１２５ＭＨｚ， ＣＤＣｌ
₃） δ １６．２（ｑ）， １６．５（ｑ）， １
８．３（ｑ）， ２０．８（ｑ）， ２０．８（ｑ），
２８．０（ｔ）， ３２．８（ｑ）， ３４．８
（ｑ）， ３５．３（ｄ）， ４１．８（ｔ）， ４
６．９（ｔ）， ４９．０（ｔ）， ５０．３（ｄ），
５６．８（ｄ）， ５７．８（ｄ）， ６２．５
（ｔ）， ６６．０（ｄ）， ６６．１（ｄ）， ７
７．０（ｓ）， １２０．４（ｄ）， １２６．４
（ｄ）， １２７．２（ｄ）， １２８．５（ｄ），
１２９．１（ｄ），１３２．０（ｓ）， １３４．３
（ｓ）， １４１．４（ｓ）， １５３．７（ｓ），
１６７．６（ｓ）， １６７．９（ｓ）， １６７．９
（ｓ）， １６８．９（ｓ）， １６９．４（ｓ），
１６９．５（ｓ）， １６９．８（ｓ）， １７０．８
（ｓ） 溶解性 ；クロロホルム、アセトン、ジメチルスルホキ
シドに溶け易く、メタノール、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 Ｒｆ値 ；０．５２ ［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：トルエン−酢酸エチル−メタノー
ル（５：５：１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性、よう素反応 陽性

【００１２】ＢＥ−６６４０８Ｂの物理化学的性状 性状 ；淡黄色粉末 分子式 ；Ｃ₇₀Ｈ₉₀Ｎ₁₂Ｏ₂₄ 質量分析 ；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］ｍ／ｚ（Ｍ＋
Ｈ）⁺ ：実測値 １４８３．６２５５、計算値 １４
８３．６２６９ 比旋光度 ；［ α ］²⁰ _D −５５．６°
（ｃ ０．５，ＣＨＣｌ₃）紫外部吸収スペクトル； λ_max（ＭｅＯＨ） ｎｍ （ε）：２１４（８４，９
００）， ２３０ （８４，３００）， ２４８ ｓｈ
（４２，９００）， ３０８（１０，０００），３５８
（１１，４００） λ_max［０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ （１：９）］
ｎｍ （ε）：２１３（７９，４００）， ２３１（８
０，３００）， ２４５ ｓｈ（５６，５００）， ３
０９（１１，９００）， ３３５（１０，５００），
３６０ （１２，６００） λ_max［０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ （１：９）］
ｎｍ （ε）：２５０（８３，２００）， ３０５
（８，９００）， ３９９（１３，５００） 赤外部吸収スペクトル； ν_max（ＫＢｒ）ｃｍ^-1 ：
３５２３， ３３７４，２９６８， １７３８， １６
４９， １５２４， １４４８， １３７３，１２３
９， １１６４， １０９５， １０２２， ８９３，
７７５， ６０８¹Ｈ − ＮＭＲスペクトル （５
００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃） δ ０．８２−
０．９０（１８Ｈ， ｍ）， １．７０（１Ｈ，
ｍ）， １．８１（１Ｈ， ｍ）， １．９４（４Ｈ，
ｍ）， ２．０４（３Ｈ， ｓ）， ２．０７（３
Ｈ， ｓ）， ２．０９（３Ｈ， ｓ），２．１６−
２．３２（２Ｈ， ｍ）， ２．９６（６Ｈ， ｓ），
３．０１（１Ｈ， ｓ）， ３．０６（１Ｈ，
ｓ）， ３．３４（３Ｈ， ｓ）， ３．３８（３Ｈ，
ｓ）， ３．５６（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１６．８Ｈ
ｚ）， ３．５９（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１６．５Ｈ
ｚ）， ３．８１（１Ｈ， ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈ
ｚ）， ３．９５−４．０７（４Ｈ， ｍ）， ４．１
８（１Ｈ， ｍ）， ４．２５（１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ
＝１１．３Ｈｚ）， ４．３９（２Ｈ，ｍ）， ４．５
８（１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ＝１４．３Ｈｚ）， ５．０
７（１Ｈ， ｂｒｓ）， ５．３２（２Ｈ， ｂｒｄ，
Ｊ＝５．８Ｈｚ）， ５．４５−５．６０（５Ｈ，
ｍ）， ５．６６−５．７４（５Ｈ， ｍ）， ７．４
９（４Ｈ， ｍ）， ７．６３（１Ｈ， ｓ）， ７．
６４（１Ｈ， ｓ）， ７．７０（２Ｈ， ｍ），
７．７４（２Ｈ， ｍ）， ８．７３（１Ｈ，ｂｒｄ，
Ｊ＝５．２Ｈｚ）， ８．７８（１Ｈ， ｂｒｄ，
Ｊ＝５．２Ｈｚ）， ９．４１（２Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ
＝５．８Ｈｚ）， １１．６（１Ｈ，ｓ）， １１．７
（１Ｈ， ｓ）¹³ Ｃ − ＮＭＲスペクトル （１２５ＭＨｚ， ＣＤ
Ｃｌ₃） δ １６．２（ｑ）， １６．２
（ｑ）， １６．３（ｑ）， １６．５（ｑ）， １
８．３（ｑ）， １８．５（ｑ）， １８．９（ｔ），
２０．８（ｑ）， ２０．８（ｑ）， ２０．９
（ｑ），２５．０（ｔ）， ２７．９（ｔ）， ３２．
９（ｑ）， ３２．９（ｑ）， ３４．７（ｑ）， ３
４．８（ｑ）， ３５．２（ｄ）， ３５．３（ｄ），
４１．８（ｔ）， ４１．８（ｔ）， ４３．７
（ｔ）， ４６．９（ｔ）， ４８．８（ｔ）， ４
８．９（ｔ）， ５０．３（ｄ）， ５０．４（ｄ），
５６．７（ｄ）， ５７．６（ｄ）， ５７．７
（ｄ）， ５７．８（ｄ）， ６２．４（ｔ）， ６
２．５（ｔ）， ６６．１（ｄ）， ６６．３（ｄ），
６７．２（ｄ）， ７７．０（ｓ）， ７７．０
（ｓ）， １２０．３（ｄ）， １２０．３（ｄ），
１２６．３（ｄ），１２６．３（ｄ）， １２７．１
（ｄ）， １２７．２（ｄ）， １２８．５（ｄ），
１２８．５（ｄ）， １２９．１（ｄ）， １２９．１
（ｄ）， １３２．０（ｓ）， １３２．０（ｓ），
１３４．３（ｓ）， １３４．３（ｓ）， １４１．４
（ｓ）， １４１．４（ｓ）， １５３．６（ｓ），
１５３．６（ｓ）， １６７．６（ｓ）， １６７．６
（ｓ）， １６７．７（ｓ），１６７．８（ｓ）， １
６７．９（ｓ）， １６７．９（ｓ）， １６８．７
（ｓ）， １６８．９（ｓ）， １６９．４（ｓ），
１６９．５（ｓ）， １６９．７（ｓ）， １６９．７
（ｓ）， １６９．８（ｓ）， １７０．８（ｓ），
１７０．９（ｓ） 溶解性 ；クロロホルム、アセトン、ジメチルスルホキ
シドに溶け易く、メタノール、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 Ｒｆ値 ；０．４８ ［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：トルエン−酢酸エチル−メタノー
ル（５：５：１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性、よう素反応 陽性

【００１３】ＢＥ−６６４０８Ｃの物理化学的性状 性状 ；淡黄色粉末 分子式 ；Ｃ₆₈Ｈ₈₈Ｎ₁₂Ｏ₂₂ 質量分析 ；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］ｍ／ｚ（Ｍ＋
Ｈ）⁺ ：実測値 １４２５．６２２１、計算値 １４
２５．６２１４ 比旋光度 ；［ α ］²⁰ _D −４７．２°
（ｃ ０．５，ＣＨＣｌ₃）紫外部吸収スペクトル； λ_max（ＭｅＯＨ） ｎｍ （ε）：２１６（８２，５
００）， ２３１ （８１，７００）， ２４８ ｓｈ
（４０，５００）， ３００（７，６００），３６０
（９，４００） λ_max［０．１Ｎ ＨＣｌ − ＭｅＯＨ （１：
９）］ ｎｍ （ε）：２１４（７５，７００）， ２
３１（７６，８００）， ２４５ ｓｈ （５３，３０
０）， ３１０（１０，３００）， ３３４（９，１０
０）， ３６０（１１，３００） λ_max［０．１Ｎ ＮａＯＨ − ＭｅＯＨ （１：
９）］ｎｍ （ε）：２５０（７９，７００）， ３０
５（７，０００）， ３９８（１２，１００） 赤外部吸収スペクトル； ν_max（ＫＢｒ）ｃｍ^-1 ：
３５２１， ３３７９，２９６２， １７３６， １６
４９， １５２４， １４５０， １３７７，１２４
４， １１６７， １０９９， １０２０， ８９１，
７７３， ６０８¹Ｈ − ＮＭＲスペクトル（５０
０ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃） δ ０．８３（３Ｈ，
ｓ）， ０．８６（３Ｈ， ｄ， Ｊ＝６．７Ｈｚ），
０．８７（３Ｈ， ｄ， Ｊ＝６．７Ｈｚ）， １．
７０（１Ｈ， ｍ）， １．８４（１Ｈ， ｍ），
１．９１−２．００（３Ｈ， ｍ）， ２．１０（３
Ｈ， ｓ），２．９６（３Ｈ， ｓ）， ３．０５（１
Ｈ， ｓ）， ３．３５（３Ｈ，ｓ）， ３．５７（１
Ｈ， ｄ， Ｊ＝１６．８Ｈｚ）， ３．８２（１Ｈ，
ｂｒｄ， Ｊ＝１２．５Ｈｚ）， ３．９９（１Ｈ，
ｂｒｄ， Ｊ＝１１．６Ｈｚ）， ４．０６（１Ｈ，
ｄ， Ｊ＝１７．７Ｈｚ）， ４．２０（１Ｈ，ｍ），
４．３６（１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝５．５， １７．７
Ｈｚ）， ５．３２（１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ＝６．１Ｈ
ｚ）， ５．５３（１Ｈ， ｂｒｓ），５．５６（１
Ｈ， ｄ， Ｊ＝１１．６Ｈｚ）， ５．５７（１Ｈ，
ｓ），５．６９（１Ｈ， ｂｒｓ）， ５．７２（１
Ｈ， ｄ， Ｊ＝１６．８Ｈｚ）， ７．４９（２Ｈ，
ｍ）， ７．６３（１Ｈ， ｓ）， ７．６８−７．
７６（２Ｈ， ｍ）， ８．７２（１Ｈ， ｂｒｄ，
Ｊ＝５．５Ｈｚ）， ９．４３（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝
６．１Ｈｚ）， １１．７（１Ｈ， ｓ）¹³ Ｃ − ＮＭＲスペクトル （１２５ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ₃） δ １６．２（ｑ）， １６．４（ｑ）， １
８．５（ｑ），１９．０（ｑ）， ２０．８（ｑ），
２５．０（ｔ）， ３２．９（ｑ）， ３４．７
（ｑ）， ３５．２（ｄ）， ４１．９（ｔ）， ４
３．７（ｔ）， ４８．８（ｔ）， ５０．４（ｄ），
５７．６（ｄ）， ５７．８（ｄ）， ６２．４
（ｔ）， ６７．３ （ｄ）， ７７．０（ｓ）， １
２０．３（ｄ）， １２６．３（ｄ）， １２７．１
（ｄ）， １２８．５（ｄ）， １２９．１（ｄ），
１３２．０（ｓ），１３４．３（ｓ）， １４１．４
（ｓ）， １５３．７（ｓ）， １６７．６（ｓ），
１６７．７（ｓ）， １６７．９（ｓ）， １６８．８
（ｓ），１６９．７（ｓ）， １６９．７（ｓ），
１７０．９（ｓ） 溶解性 ；クロロホルム、アセトン、ジメチルスルホキ
シドに溶け易く、メタノール、水に溶けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 Ｒｆ値 ；０．４６ ［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：トルエン−酢酸エチル−メタノー
ル（５：５：１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性、よう素反応 陽性

【００１４】ＢＥ−６６４０８類の生物学的活性（抗腫
瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−６６４０８類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻害作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
試験は、ＢＥ−６６４０８類をジメチルスルホキシドに
溶解後、逐次ジメチルスルホキシドで希釈し、更に牛胎
児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２０μＭの２
−メルカプトエタノールを含む）で１０倍希釈して検液
とした。細胞増殖阻害の検定は、１ｘ１０³個の腫瘍細
胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＰＲＭＩ
１６４０培地、２０μＭの２−メルカプトエタノールを
含む）１００μｌに対し上記検液５μｌを加えた。３７
℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法に
より対照群と比較した。

【００１５】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ ２６に対す
る抗腫瘍試験は、ＢＥ−６６４０８類をジメチルスルホ
キシドに溶解後、逐次ジメチルスルホキシドで希釈し、
更に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地で１０
倍希釈したものを検液とした。細胞増殖阻害の検定は、
１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血
清１０％含有ＰＲＭＩ１６４０培地）１００μｌに対し
上記検液５μｌを加えた。３７℃で７２時間、５％ Ｃ
Ｏ₂下で培養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．
４％スルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を
用いて細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長
として５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比
較した。その結果、ＢＥ−６６４０８類は両癌細胞に対
し、強い増殖阻害活性を示し、５０％増殖阻害濃度は第
１表の通りであった。

【００１６】更に、ＢＥ−６６４０８類のヒト癌細胞に
対する抗腫瘍活性を試験管内で試験した。細胞は、ヒト
大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒ
ト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用培地は、
全ての癌細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４
０培地を用いた。 ＢＥ−６６４０８類をまずジメチル
スルホキシドに溶解後、逐次ジメチルスルホキシドで希
釈し、次に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地
で１０倍希釈して検液とした。癌細胞増殖阻害の検定
は、１ｘ１０³個の癌細胞を含む細胞培養用の培地１０
０μｌを９６穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２
４時間、５％ ＣＯ₂下で培養した後、上記検液５μｌ
を加えた。更に７２時間培養後、細胞を５０％トリクロ
ロ酢酸で固定し、以下ｃｏｌｏｎ ２６細胞と同様の方
法を用い対照群と比較検討した。その結果、 ＢＥ−６
６４０８類はヒト腫瘍細胞においても強い増殖阻害活性
を示し、その５０％増殖阻害濃度は第１表の通りであっ
た。

【００１７】

【表１】 上述したようにＢＥ−６６４０８類はマウス及びヒトの
腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻害作用を示す。したがっ
て、本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤と
して有用である。

【００１８】次に、ＢＥ−６６４０８類の製造法につい
て説明する。

【００１９】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−６６４０８類
の製造に使用する微生物は、抗腫瘍性物質ＢＥ−６６４
０８類を生産するものならばいずれでも良いが、例えば
以下の菌学的性状を有する微生物、即ち、Ａ ６６４０
８株を用いることができる。 １．形態 Ａ ６６４０８株は気菌糸を着生せず、分岐する基生菌
糸に生ずる胞子のう柄の先端に胞子のうを１個ずつ形成
する。胞子のうの表面は平滑でその形状は亜球形〜不規
則型であり、大きさは４．０〜５．０×５．０〜７．０
μｍ位である。胞子のうには多数の胞子が内蔵され、成
熟した胞子のうを水中に投じると胞子が放出され、その
胞子は遊走性を示す。

【００２０】

【表２】

【００２１】

【表３】

【００２２】

【表４】

【００２３】

【表５】 ６．菌体成分 細胞壁からは、ｍｅｓｏージアミノピメリン酸およびグ
リシンが検出され、細胞壁タイプはＩＩ型であると考え
られる。また、分類上特徴ある全菌体糖成分はアラビノ
ースおよびキシロースであり、糖パターンはＤ型であっ
た。

【００２４】以上の菌学的諸性質によりＡ ６６４０８
株は放線菌アクチノプラネス属に属すると考えられる。
したがってＡ ６６４０８株をアクチノプラネス エス
ピーＡ ６６４０８（Αｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ ｓ
ｐ． Ａ ６６４０８）と称することとした。尚、本菌
株は通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄
託されており、受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−１６５３９で
ある。

【００２５】本発明のアクチノプラネス エスピ− Ａ
６６４０８（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ ｓｐ． Ａ
６６４０８）株の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外
線などの照射処理、例えばナイトロジェンマスタード、
アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリンもしくはＮ−メ
チル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転
換、形質導入又は接合などの通常用いられる菌種変換処
理方法によりアクチノプラネス エスピ− Ａ６６４０
８株を変異させた微生物である。

【００２６】

【発明の実施の形態】本発明のＢＥ−６６４０８類を製
造するにあたり、ＢＥ−６６４０８類の生産菌株を栄養
源含有培地に接種して好気的に発育させることにより、
ＢＥ−６６４０８類を含む培養物が得られる。栄養源と
しては、放線菌の栄養源として公知のものが使用でき
る。例えば、炭素源としては、市販されているブドウ
糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンな
どが単独又は混合物として用いられる。窒素源として
は、市販されている大豆粉、コーンステイープリカー、
グルテンミール、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿
実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂
米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナト
リウムなどが単独又は混合物として用いられる。無機塩
としては、市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウ
ム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用する
ことができる。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、モリブデン酸などの重金属塩を微量添加
することもできる。また、発泡の激しい場合には消泡剤
として、例えば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オク
タデカノールなどの高級アルコール類、各種シリコン化
合物などを適宜添加してもよい。これらのもの以外で
も、該生産菌が利用し、ＢＥ−６６４０８類の生産に役
立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホ
ン酸（ＭＯＰＳ）又はホウ酸ナトリウムなどであれば、
いずれも使用することができる。

【００２７】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１４〜４１℃が適当であるが、好ましくは２３
〜３３℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は２６４時間〜３８４時間、好ましくは２
８８時間〜３６０時間である。培養物から目的とするＢ
Ｅ−６６４０８類を採取するには、微生物の生産する代
謝物から採取するのに通常使用される分離手段を適宜利
用することができる。

【００２８】ＢＥ−６６４０８類は菌体中に存在するの
で、菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオ
ン交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグラフィー
法及びゲル濾過法などを単独又は組み合わせて行なうこ
とにより精製できる。

【００２９】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノール又はアセトンなどの有機溶媒を用いて
抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチル
で分配を行ない、酢酸エチル層を留去後、得られる残留
物について逆相カラムクロマトグラフィーを行なう。Ｂ
Ｅ−６６４０８類を含む画分を減圧下で濃縮し、再度逆
相カラムクロマトグラフィ−をおこなうことにより、Ｂ
Ｅ−６６４０８Ａ，ＢおよびＣをそれぞれ得ることがで
きる。

【００３０】本発明の化合物ＢＥ−６６４０８類は腫瘍
細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明
化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては
各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤若しくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液
若しくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げら
れる。

【００３１】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ン若しくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウム若しくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コール若しくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロース若しくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。

【００３２】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３３】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油若しくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤又は注射剤などの形態とし
て製造される。

【００３４】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又
は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例え
ば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
などの水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈
内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００３５】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００３６】また、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤な
どの液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３７】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。

【００３８】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。 実施例ＢＥ−６６４０８類の製造法 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ ６６４０８株をグ
ルコース０．１％、デキストリン（ＭＳ−３６００）２
％、魚粉０．５％、コーングルテンミール１％、酵母エ
キス０．１％、ＭＯＰＳ ０．５％、硫酸マグネシウム
０．０５％、塩化ナトリウム０．１％、塩化カルシウム
０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第二銅
０．００００４％、塩化マンガン０．００００４％、塩
化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０．００００８
％、ホウ酸ナトリウム０．００００８％、及びモリブデ
ン酸ナトリウム０．０００２４％からなる培地（ｐＨ
７．０）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラスコ
３本に接種し、２８℃で４８時間、回転振盪機（毎分１
８０回転）上で培養した。この培養液を２ｍｌずつ上記
の培地を１１０ｍｌ含む５００ｍｌ容の三角フラスコ２
００本に接種し、２８℃で１２日間回転振盪機（毎分１
８０回転）上で培養した。

【００３９】上記の培養により得られた培養液（約２０
Ｌ）から濾過により菌体を得た。この菌体にメタノール
（４Ｌ）を加え、攪拌後濾過した。この操作をもう一度
繰り返した後、残渣の菌体にアセトン（４Ｌ）を加え攪
拌後濾過を行なった。これらのメタノール、アセトン抽
出液をあわせて減圧下で濃縮後、水（２Ｌ）を加え、２
Ｌの酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル画分を減圧
下に濃縮乾固し、メタノール（２Ｌ）に溶解した後、等
量のｎ−ヘキサンで２回洗浄した。このメタノール層を
減圧下に濃縮することにより、ＢＥ−６６４０８Ａ，
Ｂ，Ｃを含む粗精製物を８．０ｇ得た。これをシリカゲ
ルのカラム（メルク社製キーゼルゲル６０、３．３φｘ
６０ｃｍ）に供し、トルエン−酢酸エチル−メタノール
（１００：１００：１及び５０：５０：１）で洗浄後、
トルエン−酢酸エチル−メタノール（３０：３０：１）
で溶出した。溶出液を濃縮乾固後、ＯＤＳカラム（資生
堂社製カプセルパック Ｃ₁₈ ＵＧ−１２０、２．０φ
ｘ２５ｃｍ）を使用して高速液体クロマトグラフィーを
行なった。移動相に、水−メタノール−テトラヒドロフ
ラン（２５：７５：１）を用いて、流速 １４ｍｌ／ｍ
ｉｎで溶出することによりＢＥ−６６４０８Ａ（６３．
８ｍｇ）、ＢＥ−６６４０８Ｂ（１２．６ｍｇ）および
ＢＥ−６６４０８Ｃ（１４．３ｍｇ）を得た。以下に本
発明の化合物の製剤例を示すが、本発明の化合物の製剤
は本製剤例に限定されるものではない。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−６６４０８Ａ）１０部、重質酸化マグネ
シウム１５部及び乳糖７５部を均一に混合して、３５０
μｍ以下の粉末状又は細粒状の散剤とする。この散剤を
カプセル容器に入れカプセル剤とした。

【００４０】製剤例２ 本物質（ＢＥ−６６４０８Ａ）４５部、澱粉１５部、乳
糖１６部、結晶性セルロース２１部、ポリビニルアルコ
ール３部及び蒸留水３０部を均一に混合した後、破砕造
粒して乾燥し、次いで篩別して直径１４１０〜１７７μ
ｍの大きさの顆粒剤とした。

【００４１】製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。

【００４２】製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。

【００４３】製剤例５ 本物質（ＢＥ−６６４０８Ａ）０．６部、非イオン系界
面活性剤２．４部、生理的食塩水９７部を加温混合して
からアンプルに入れ、滅菌を行って注射剤を作製した。

【００４４】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−６６４０８類
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。

【００４５】

フロントページの続き (72)発明者 平山 美央子 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 吉成 智子 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂はそれぞれ独立にアセトキシ基又は水
   素原子を示す］で表される化合物。
2. 【請求項２】アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎ
   ｅｓ）属に属し、一般式［Ｉ］で表される化合物を産生
   する能力を有する微生物又はその変異株を培養し、その
   培養物から一般式［Ｉ］で表される化合物を採取するこ
   とを特徴とする、一般式［Ｉ］で表される化合物の製造
   法。
3. 【請求項３】一般式［Ｉ］で表される化合物を産生する
   能力を有する微生物が、アクチノプラネス エスピー
   Ａ ６６４０８（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ． Ａ
   ６６４０８）又はその変異株である請求項２記載の製
   造法。
4. 【請求項４】一般式［Ｉ］で表される化合物を有効成分
   とする抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】一般式［Ｉ］で表される化合物を産生する
   能力を有することを特徴とするアクチノプラネス（Ａｃ
   ｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属に属する微生物。
6. 【請求項６】アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎ
   ｅｓ）属に属する微生物が、アクチノプラネス エスピ
   ー Ａ ６６４０８（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ ｓ
   ｐ． Ａ ６６４０８）又はその変異株である請求項５
   記載の微生物。