JPS62270527A - ４１８１−２物質及びその誘導体を有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規抗腫瘍剤に関する。

従米■辣詣 微生物が産生ずる物質については多数の化合物が単離さ
れ、医薬品として開発されている。しかし、後記する本
発明で有効成分とする化合物はもちろん当該化合物の基
本骨格を有する化合物についても、これまで抗腫瘍作用
を有することは知られていない。

発明の開示 本発明は、後記一般式（Ｉ＞で表わされる化合物を有効
成分とする抗腫瘍剤に係る。

本発明者らは、種々の微生物が産生ずる物質の抗腫瘍活
性について研究を進めていたところ、ス］・レプトミセ
ス属に属するある種の微生物を培養して得られる物質お
よびその物質に化学修飾を加えた化合物に、優れた抗腫
瘍作用を見い出し、本発明を完成するに至った。

本発明抗腫瘍剤の有効成分は、下記一般式（１，）で表
わされる。

（Ｉ＞ （式中、Ｒ１及びＲ２は同−又は相異なって水素原子、
アルキル基又はアシル基を示す。）一般式（Ｉ＞で示さ
れる化合物において、Ｒ１及びＲ２で定義されるアルキ
ル基としては、炭素数１〜５の直鎖状もしくは分校状の
アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、ｔ−アミル基等を例示することができる。また
アシル基としては、炭素数２〜５の例えばアセデル基、
プロピオニル基、ブチリル基、バレリル基等を挙げるこ
とができる。

次に、前記一般式（工）で表わされる化合物の製造方法
について説明する。

一般式（Ｉ＞で示される化合物のうち、置換基Ｒ１及び
Ｒ２が共に水素原子で置換された化合物（以下４１８’
ｌ−２物質と称する。）は、微生物の培養により得るこ
とができる。すなわち、４１８１−２物質の生産能力を
右する菌株（以下４、　’Ｉ　８１−２物質生産菌と称
する。）を適当な条件下で培養することによって、菌体
または培養液から採取することができる。

更に、本発明有効成分のアシル誘導体又はアルキル誘導
体は、４１８１−２物質を原料として通常用いられるア
シル化反応またはアルキル化反応により合成することが
できる。例えば有機溶媒の存在下又は非存在下、アンモ
ニア或いはピリジン、［・リエチルアミン等の有機塩基
類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の金属水酸化
物、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩類、
酸化銀等の金属酸化物等の無機塩基の存在下、または非
存在下に４１８１−２物質とアシルハライドまたはアル
コールとのエステル体を反応させることにより、アシル
誘導体を得ることができる。また、アルキルハライド、
アルキルエステルを同様の条件で反応させることにより
アルキル誘導体を得ることができる。

有機溶媒としては、ヘキサジ等の炭化水素類、クロロホ
ルム等のハロゲン系炭化水素類、エチルエーテル、ジオ
キサン等のエーテル類、アセトン等のケトン類、ベンゼ
ン、トルエン等の芳香族炭化水素類、ニトロメタン、ジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の非プロ
トン性極性溶媒を単独であるいは、複数混合して使用す
ることができる。また上記塩基類は必要に応じ溶媒とし
ても使用できる。

４１８１−２物質の製造に用いる菌株としては、４１８
１−２物質を生産できる菌株であれば、どのような菌株
でも良いが、−例として本発明者らが分離したストレゾ
１〜ミセス属に属する４１８１菌株が挙げられる。この
４１８１−菌株は、本発明者らが中華人民共和国四用省
峨媚山（ウーメイシャン）の土壌から新たに分離したス
トレプトミセス属に属する菌株であり、通商産業省工業
技術院微生物工業技術研究所に受託番号［微工研条奇第
１０１０号Ｊ　（ＦＦＲＭ　　ＢＰ−１０’ＩＯ＞とし
て寄託されている。この菌株の菌学的性質は次の通りで
ある。

菌学的諸性質 （ａ）形態 胞子形成菌糸の分校法：単純分枝。

胞子形成の形態：直状（胞子の形は円筒状）。

胞子の数：１０胞子以上。

胞子の表面構造：平滑。

胞子の大きさ二〇、８〜１．ＯＸ１．１〜１．５ミクロ
ン。

鞭毛胞子の有無：無。

胞子のうの有無：無。

胞子柄の着生位置：気菌糸。

菌核形成性の有無：無。

（ｂ）各種培地における生育状態を第１表に示す。

（ｃ）生理的諸性質 １）生育温度範囲：２６〜３０℃の温度範囲で良好に生
育する。４０１上の温度範 囲では生育しない。

２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラチン培
地）：陽性（３週間以上）。

３）ミルクの凝固：陰性。

ミルクのペプトン化：陽性。

４）メラミン様色素の生成：チロシン寒天（ＩＳＰ−７
培地）及びペプトン・酵 母エキス・鉄寒天培（ＩＳＰ−７培地）培地上で陰性。

５）硫化水素の産生：陰性。

６）スターチの加水分解（スターチ寒天培地）：陽性。

７）硝酸塩の還元；陰性。

８）セルロースの分解性：陽性。

（ｄ）炭素厚の利用性（ブリードハム・ゴ］・リーブ寒
天培地、ｌ５Ｐ−９培地） １−−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース
、Ｄ−７ラクトース、イノシトール、１−−ラムノース
、ラフィノース、Ｄ−マンニトール、シュークロース、
スターチ、Ｄ−マンノース、マル］〜−ス、Ｄ−ソルビ
トール、セルロース、イヌリンのいずれの炭素源をも良
く利用して生育する。

（ｅ）菌体組成 ベラカー（Ｂｅｃｋｅｒ　）らの方法［アプライ・マイ
クロバイオロジー（Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　
　）、１２．４２１〜４２３　（１９６４）］により分
析した結果、Ｌ　Ｌ−型のジアミノピメリン酸及び少量
のグリシンが検出された。

以上の菌学的性質から本４１８１菌株は基中菌糸より多
数の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し、ジアミノピメ
リン酸がＬＬ−型であり、鞭毛胞子や胞子のうを形成し
ない性質を有することより、スｊ・レプトミセス属に属
する菌株であることは明らかである。よって本菌株をス
トレプトミセススピーシーズ４　１　８　１　（ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ。

１、　１　８　１　＞と称することとした。

本発明の４１８１−２物質を例えば上記のようなストレ
プトミセス属に属するス］・レプトミセス・スピーシー
ズ４　１　８　１　（　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓ
ｐｅｃｉｅｓ。

４、　１　８　１　”）又はその各種変異株を適当な培
地に培養することによって製造する場合について説明す
る。

培養方法は原則的には一般微生物の培養方法に準するが
、通常は液体培養による撮盪培養法、通気撹拌培養法な
どの好気的条件下で行なうのが良い。培養に用いられる
培地としては、ストレゾ１〜ミセス属に属する４１８１
−２物質生産菌が利用できる栄養源を含有する培地であ
ればよい。

すなわち、合成培地、半合成培地あるいは天然培地を用
いることができる。培地の組成は炭素源としてグルコー
ス、シュークロース、フラグｔ−　−ス、グリセリン、
デキストリン、澱粉、糖蜜、コーン・ステイープ・リカ
ー、有機酸等が単独又は組合せで用いられる。窒素源と
してはファーマメディア、ペプトン、肉エキス、酵母エ
キス、大豆粉、カビイン、アミノ酸、尿素等の有機窒素
源、硝酸すｌ・リウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素
源が単独又は組合せで用いられる。ナ］〜リウム塩、カ
リウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その仙の重金属
塩等も必要に応じて添加される。

また、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆油、亜麻仁
油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール、
ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン
化合物等の消泡剤を適宜添加してもよい。

培地のｌ）Ｈは、やや酸性ないし中性付近で培養を行な
うのが好ましい。培養温度は４１８”ｌ−２物質生産菌
が通常２０〜３７°Ｃ程度の温度下で生育するので、通
常２０〜３７°Ｃ１特に好ましくは２７〜３０℃付近に
保つのが良い。培養時間は液体培養の場合、２〜５日間
程度を行なうと４１８１−２物質が生成蓄積される。

以上述べた培養条件から使用生産菌株の種類や特性、外
部の条件などに応じてそれぞれの最適条件を適宜選択、
調節して適用することができる。

この培養により生産された４１８１−２物質を単離する
には発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行なう
ことができる。例えば溶媒抽出、液体交換、あるいは結
晶化等の各種手段を単独または任意の順序に組合せて用
いることができる。

詳しくは、培養して得られた培養物中に蓄積された４．
　１　８　１−２物質は培養炉液と菌体に含有されるの
で、遠心分離又は濾過等の手段で培養炉液と菌体に分離
した後、得られた菌体についてはアセ１ヘン、メタノー
ルなどの溶媒にて目的物質を抽出する。又得られた＝１
．　１　８　１−２物質を含む培養炉液については、水
と混合しない酢酸エチル、クロロホルム、ブタノール等
の溶媒を用いて４１８１−２物質を有機溶媒層に転溶さ
せ、得られた溶媒層に芒硝を加え、脱水後、溶媒を減圧
下で留去すれば４１８１−２物質を含む粗抽出物を得る
ことができる。必要があれば、塩酸又は硫酸にてｐ　Ｉ
−１を調節したり、又工業用食塩等を加えることにより
抽出効率を高くしたり、■マルジョン防止などの方法を
講じることができる。

更に精製するためには通常の脂溶性低分子物質の精製手
段を適用できる。すなわちシリカゲル、アルミナ、マク
ロポーラス非イオン系吸着樹脂等の吸着剤による種々の
吸着クロマトグラフィーが使用できるが、溶出溶媒クロ
ロホルム／メタノールの混合溶媒系を用いるシリカゲル
クロマトグラフィーが最も有効に利用できる。又、更に
精製を必要とする場合には上記のクロマトグラフィーを
くり返すか、あるいはクロロホルルム、メタノ−ル、ア
セ］・ン等の溶媒を用いる再結晶等の手段を適宜くみあ
わせて行なうことにより高純度の４１８１−２物質を単
離、精製することができる。

本発明の４１８１−２物質及びその誘導体を有効成分と
する抗腫瘍剤は、ヒト及び動物用抗腫瘍剤たる医薬とし
て、治療目的に応じて各種の投与形態を採用できる。該
形態としては、例えば経口剤、注射剤、単剤等のいずれ
でも良く、之等投与形態は、夫々当業者に公知慣用の製
剤方法により製造できる。経口用固型製剤を調製する場
合は、本発明有効成分に賦形剤、必要に応じて結合剤、
崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後
、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル
剤等を製造することができる。注射剤を調製する場合は
、本発明有効成分にｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、等
張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉
内、静脈内用注射剤を製造することができる。単剤を調
製する場合には、本発明有効成分に基材、更に必要に応
じて界面活性剤等を加えた後、常法により単剤を製造す
ることができる。

錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤を製造する際に用いら
れる賦形剤としては、例えば乳糖、蔗糖、デンプン、タ
ルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶セルロース、メ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリセ
リン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等が、結合
剤としてはポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル
、エチルセルロース、アラビアゴム、シェラツク、白糖
等が、滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウム、タル
ク等が、その他、着色剤、崩壊剤等は通常公知のものを
用いることができる。尚錠剤は周知の方法によりコーテ
ィングしても良い。

単剤を製造する際の基材としては、例えばカカオ脂、ポ
リエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸トリグリセラ
イド、ライテップゾル（登録商標ダイナマイトノーベル
社）等の油脂性基材を用いることができる。

上記の各投与単位形態中に配合されるべき本発明有効成
分の量はこれを適用すべき患者の症状ににり或いはその
剤型等により一定ではないが、一般に投与単位形態当り
経口剤では０．０４〜７１ｍｙ、注射剤では０．００４
〜２ｍｇ、単剤では０．０４〜＝１　ｊｎｇとするのが
望ましい。又、上記投与形態を有する薬剤の１日当りの
投与量も症状等に応じ一概に決定できないが、通常的０
．００４〜１２ｍｇとするのが好ましい。

次に本発明の有効成分の製造例を示ず。

精製工程中の有効物質の確認は、４．　”ｌ　８　’１
−２物質により増殖抑制作用のみられるスタフィロコッ
カス・アウレウス　２０９　Ｐ　（５ｔａｐＨｖｌＯｃ
ｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ　　２０９Ｐ）　、ザルシナ・
ルティアＡＴＣＣ９３４１（Ｓａｌｃｔｎａ　１ｕｔｅ
ａ　　ＡＴＣＣ９３４、１）等の微生物を用いたバイオ
アッセイ＝　１７− 法及びバイオ・オートグラフ法、又はヒト鼻咽腔癌由来
の株化培養細胞（ＫＢ細胞）に対する殺細胞効果を調べ
ることにより行なった。

製造例　１ ４、１８１−２物質［化合物（１）］の製造グルコース
０．１％、ポリペプトン０．１％、肉エキス０．３％、
酵母エキス０．５％、溶性デンプン２．４％、炭酸カル
シウム０．２％よりなる培地（１）Ｈ７，Ｏ＞１００ｍ
１２を５００ｎ１２の三角フラスコに分注、滅菌後、ス
トレプ］〜ミセス・ス＝　１８− ビーシーズ４１８１株（微工研条奇第１０１０号）を−
白金耳間接種し、２７°Ｃで１８時間回転振盪培養した
（毎分、１８０回転、振幅１０ｒｍ）。次にグリセロー
ル４．０％、ファーマメディア１．０％、塩化す（・リ
ウム０．２％、硫酸マグネシウム０．２％、炭酸カルシ
ウム０．２％よりなる培地（ｐＨ７，０＞を５００ｍＱ
の三角フラスコに１００ｍＱずつ分注し、滅菌後、上記
の種菌を５％の割合で加え、２７°Ｃ１９６時間回転振
盪培養した。培養終了後、培養液（７，４Ｌｐｌ−１７
，４）を採取し、遠心、濾過後、菌体をメタノール（約
１９）で３回連続仙用した。得られた抽出液は減圧下で
留去後、酢酸エチル（０，３９）で３回撹拌抽出した。

又培養液については希塩酸でｐＨ３に調整し、酢酸エチ
ル（０，ｉ）で３回撹拌抽出した。先の国体の抽出区分
とこの酢酸エチル抽出区分とを合せ、水で洗浄し、無水
硫酸すトリウムで乾燥後、減圧濃縮して褐色の油状物質
（６，４２ｇ＞を得た。この油状物質を酢酸エチル（０
，３９）に溶解後、ｎ−ヘキサン（０，５Ｑ）を、添加
して得られた沈澱物を乾固して４１８１−２物質を含む
赤褐色の粗粉末（８０１ｍｇ＞を得た。

この粉末をクロロホルム（約１０ｍＱ）に溶解しシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（メルク社製、キーゼル
ゲル、５．９Ｘ１９ｃｍ）に吸着させ、クロロホルム（
１，ｌ）で洗浄後、次いでクロロホルム：メタノール で溶出した、クロロホルム：メタノール溶出区分の４１
８１−２物質を含む活性画分を集め、溶媒を留去後、夕
日ロホルムーアセトンより再結晶し、乾固して赤橙色粉
末（８３ｍ！ｊ）を得た。

融点　＞２６０’Ｃ（分解）。

’ｌー１ーＮＭＲスペクトルを第１図に示す。紫外吸収
スペクトルを第２図に示す。赤外吸収スペクトルを第３
図に示す。

製造例　２ 化合物（ＩＩ）の合成 （ＩＩ） ４１８１−２物質２９Ｑ？、りｎロホルム１５ｍ（２、
ピリジン１５ｍＧの溶液に水冷下無水酢酸７．５ｍ（！
を滴下した。滴下後室温で一夜撹拌した。反応液を濃縮
し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メ゛
ルク社製、キーゼルゲル、５．９×１９ｃｍ）に付し、
クロロホルム−メタノール（５０　：　１　’）で溶出
し、溶出液を濃縮乾固して上記ジアセチル誘導体２８ｍ
Ｆ！（収率８３％）を得た。

融点　２０８〜２１２°Ｃ（分解）。

’ｌ−ＩＮＭＲスペクトルを第４図に示す。

製造例　３ 化合物（ＩＩＩ）の合成 （ＩＩＩ） ４１８’Ｌ−２物質（Ｉ）１００ｍｓをりｏロホルムー
メタノール（１０：１）の混合溶媒１００ｍＱに溶解し
、酸化銀４５．２＃Ｉｇついでメチルアイオダイド２７
．６＃ｌｊＦを加え室温で一夜撹拌した。

反応液を濾過し、ろ液を濃縮後、シリカゲルカラムク目
マ［・グラフィー（メルり社製、キーゼルゲル、５．９
ｘ１９ｒａ＞に付し、クロロホルムで溶出し、溶出液を
濃縮乾固して上記メチルエーテル体２０ｍ１＜収率１９
．５％）を得た。

融点　＞３００℃（分解）。＋　Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を第５図に示す。

製造例　４ 化合物（ＩＶ　’）の合成 （ＩＶ） 製造例３で（ｑだメチルエーテル化合物４．０ｍｇ、ク
ロロホルム２Ｏｎ＋Ｌピリジン２０ｍＱの溶液に氷冷下
無水酢Ｗ１１０ｍ（２を滴下した。滴下後製造例２と同
様に操作して、上記モノアセチル体３５ｍｙ（収率８１
．６％）を得た。

融点　２２０〜２２５℃（分解）。

’　Ｈ−ＮＭＲスペクトルを第６図に示す。

〈薬理試験〉 次に本発明抗腫瘍剤の抗腫瘍効果及び毒性の薬理試験結
果を示す。

（ａ）抗腫瘍活性試験 試験動物としてＢＡＬＢ／ＣとＤＢＡ／２の交配第一マ
ウス（ＢＤＦ／マウス）を用い、ＤＢＡ／２マウス由来
の白血病Ｐ３８８細胞の１０６個の腹腔内移植をした。

０．２％ツイーン８０の生理食塩水溶液に懸濁させた化
合物（Ｉ）〜（ＩＶ）３　ｍｇ　／　Ｋｙを一群６匹の
マウスに翌日−同腹腔内投与し、平均生存日数を求め、
これらを無処置対照　２４一 群と比較して下式に従い、延命増加率（％）を算出した
。結果を第２表に示す。

第　　　２　　　表 マウス白血病に対する延命効果 ＝　２５− （ｂ）急性毒性試験 ｄｄＹ系雄性マウス（体重２５ｇ）を使用し、化合物（
Ｉ）　〜（ＩＶ）を０．２％ツイーン８０（Ｄ生理食塩
水溶液に５ｉ！！濁し、腹腔内投与により、５０％致死
泄１０５　ｏ　　（ＩｒＩｇ／ＫＦＩ）をアップタウン
法により求めた。結果を下記第３表に示す。

第　　　３　　　表 ｊス下、本発明化合物を用いた製剤例を挙げる。

製剤例　１　錠剤 化合物（Ｉ）　　　　　　　　　　　　４ｍｇ乳糖　　
　　　　　　　　　　　　４３ｍｇトウモロコシデンプ
ン　　　　　　５０ｍ５結晶セルロース　　　　　　　
　　５０ｍ１ヒドロキシプロピルセルロース　　１５ｍ
３タルク　　　　　　　　　　　　　　　２ｍ３ステア
リン酸マグネシウム　　　　　２ｍ９エチルセルロース
　　　　　　　　３０１１１ｇ脂肪酸グリセリンエステ
ル　　　　　２ｍｙＪヒチタン　　　　　　　　　　　
　　２ｍＦＪ１錠当り　　　　　　　　　２００７Ｆ１
ｇ上記配合割合で錠剤を調製した。

製剤例　２　顆粒剤 化合物（ＩＴ）　　　　　　　　　　　　　　２ｍｇマ
ンニトール　　　　　　　　　　７３８ｍｙトウモロコ
シデンプン　　　　　　１００ｍｇ結晶セルロース　　
　　　　　　　１００ｆｆｉｆｆヒドロキシプロピルセ
ルロース　　　５０ｍｇタルク　　　　　　　　　　　
　　　　１ｏｍｉ１包当り　　　　　　　　　１０００
ｍｇ」−記配合割合で顆粒剤を調製した。

製剤例　３　細粒剤 化合物（ＩＩＩ　）　　　　　　　　　　　　　４．　
ｍｓマンニトール　　　　　　　　　　７１６ｍｇ１〜
ウモ日コシデンプン　　　　　　１００ｍｇ結晶セルロ
ース　　　　　　　　　１００ｍｇヒドロキシプロピル
セルロース　　　７０ｍｇタルク　　　　　　　　　　
　　　　　１０ｍぴ１包中１１０００Ｉｎ 上記配合割合で細粒剤を調製した。

製剤例　４　カプセル剤 化合物（ＩＶ）　　　　　　　　　　　　　１■乳糖　
　　　　　　　　　　　　　９９ｍｙトウモロコシデン
プン　　　　　　９７ｍｙ結晶セルロース　　　　　　
　　　５０ｍぴタルク　　　　　　　　　　　　　　　
２ｍｇステアリン酸マグネシウム　　　　　１１ｒＧ１
カプセル当り　　　　　　２５０ｍｇ上記配合割合でカ
プセル剤を調製した。

製剤例　５　注射剤 化合物（Ｉ＞　　　　　　　　　　　０．０４．ｍｆｉ
注射　蒸留　　　　　　　　　　　　　適量１管中　　
　　　　　　　　　　　２ｍＱ上記配合割合で注射剤を
調製した。

製剤例　６　単剤 化合物（ＩＩ　）　　　　　　　　　　　　　　１　ｍ
ｇウイテツプゾールＷ−３５１４９９＃Ｉｇ１個当り　
　　　　　　　　　１５００＃Ｉｇ上記配合割合で単剤
を調製した。

【図面の簡単な説明】

第１図に、４１８１−２物質（化合物（■））のＤＭＳ
Ｏ−ｄ６中で測定した’１」−ＮＭＲスペク（〜ルの結
果を、第２図に紫外吸収スペクトルの結果を、第３図に
赤外吸収スペクトルの結果をそれぞれ示ず。また、第４
図に化合物（ｎ）を、第５図に化合物（ＩＩＩ）を、第
６図に化合物（ＩＶ）をそれぞれ重クロロホルム中で測
定した’ｌ−！−ＮＭＲスペクトルの結果を示す。 く以　上）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［１］一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は同一又は相異なつて水素原
   子、アルキル基又はアシル基を示す。）で表わされる４
   １８１−２物質及びその誘導体を有効成分とする抗腫瘍
   剤。 ［２］Ｒ＿１、Ｒ＿２が共に水素原子である特許請求の
   範囲第１項記載の抗腫瘍剤。