JPH0272167A - Ｂｕ―３８６２ｔ抗腫瘍性抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は新規な抗腫瘍性抗生物質及びその生産及び回収
方法に関する。

〈従来の技術及び発明が解決すべき課題〉本発明は構造
（式） るＢＵ−３８６２Ｔのジアセテート誘導体（ＩＩ）及び
ジヒドロ訪導体ＧＩＩ）を提供するものである。

ジアセテート ジヒドロ 本発明の化合物に構造が関連している抗腫瘍性抗生物質
■ は知られていない。

を有するＢＵ−３８６２ＴＣＩ）と名付けられた新規な
発酵〈課題を解決するための手段〉 生産物を提供するものである。さらに次に示す構造を有
す本発明は構造式： 粂培地からのＢＵ−３８６２７の回収によって得られる
。

ＢＵ−３８６２Ｔのアセチル化によって製造される式：
を有する、ここでＢＩＪ−３８６２Ｔと名付けた。０［
規な抗腫瘍性抗生物質及び、ＥＵ−３８６２Ｔの製造、
単離及び精製方法に関する。

本発明の抗生物質はストレプトミセス　ヒゲロスコピカ
ストレフトミセス　ヒゲロスコピカス（Ｓｔｒｓｐｔｏ
ｍｙｃａｓ■ 但し、４ｏ＝ＣＢ、ＣＯ−である、を有するＢＵ−３８
６２Ｔのジアセチル誘導体とＢＵ−３８６２Ｔの接触水
素化で製造される式： ５３７０９）又はその突然使異株又は変異株のＨＵ３８
６２７°生産菌株の、水性栄養素培地中、深部好気性条
件下での該培養培地中の該微生物による実質セＶのＢＵ
３８６２Ｔが生産される迄の発酵及び、所望によっては
培■ を有するＢＵ−３８６２Ｔのジヒドロ誘導体が提供され
る。

ＢＵ−３８６２Ｔ及びそのジアセチル誘導体及びジヒド
ロ誘導体は実験動物腫瘍系、例えばマウスのＢＩ３黒色
腫に対して阻害活性を示す。

本発明のＢＵ−３８６２Ｔ抗生物質はストレプトミセス
ヒゲロスコピカスのＢＵ−３８６２Ｔ生産菌株の発酵に
よって生産される。

Ｐ２４７−７１と名付けられた好ましいＢＵ−３８６２
Ｔ生産菌株はフイリツビンのミンダナオ島のダバオＣＤ
ａ＊α０）のＡ　ｐ　ｏ山のタマリンドの根の近くで蒐
集された土壌試料から単離された。この菌株の生物学的
に純粋な培養菌はＴｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ
　ＣＣ５１ｔｓｒ　ＣｏＬＬｇｃ−１ｉｏ＊、　Ｒｏｃ
ｋｖｉＬｌｍ、　Ｍ　ａｒｙｌａｎｄに寄託され、その
恒久的微生物コレクションはＡｉ’ＣＣ５３７０９と名
付けられた。

菌株Ｐ２４７−７１について行なわれた分類学的研究の
結果は、この菌株がストレプトミセス族そして種群スト
レプトミセス　ヒゲロスコピカスに属することを示す。

菌株Ｐ２４７−７１は次の性質を有している。

形態 基質菌糸と気菌糸の両方が形成される。それらは長く、
よく分岐して短かいフィラメントに分裂しない。有節胞
子の連鎖が気　菌糸上に生れる。胞子連鎖及び胞子形態
は次の通りである；１）２乃至８回転しているらせん状
胞子連鎖、２）単軸分枝した単胞子、３）非線形又は樽
形（０，５−０，７Ｘ０．５−１．２μ９％）の胞子、
及び４）シわのある又は平滑な胞子装飾。

胞子の５、運動性胞子及び１核は認められない。

培養的及び生理学的特徴 菌株Ｐ２４７−７１は殆んどの記述培地で艮（生長する
。

吸湿性の黒色パッチを有する灰色の気菌糸がＩＳＰ／１
６６培地以外のＩＳＰ寒天培地で認められる。白色乃至
淡黄色がかった灰色の気　菌糸かツアペックのシューク
ロースーナイトレー）Ｑ天上で形成される。恭賀菌糸は
無色又は黄色がかった褐色から灰色がかった黄色である
。メラニン及び他の拡散性色素は生産されない。殆んど
の糖が生長に利用される。培養的及び生理学的０ｔＩｌ
ｌ！をそれぞれ表１及び２にボす。

菌株Ｐ２４７−７１の形態学的、培養的及び生理学的特
徴はこの菌株がスプレブトミセス族に属し７℃いること
をボしている。Ｐｒｉｄｈａｍ及びＴｒｇｓｎｓデ　の
ａ己＋Ｗｌ−（Ｐ　ｒｉｄん６ｍ。

１°、Ｇ、ａｎｄ　　１１．Ｄ、Ｔｒａｍ％ｇｒ：Ｇｅ
ｎｕｓ　　ＳｔｒａｐｔｏｍｙｃｍｍＷａｋｓｍａｎ　
ａｎｄ　ｌ１ａｎｒｉｅｉ、１９４３．ｐ、７４８　８
２９゜Ｉｎ　　）らノ３′、Ｂｕ　Ｃんａｎａｎ　　ａ
ｎｄ　　Ｎ　、Ｅ、Ｇｉｂｂｏｎｓ　　　（ｇｄ、）。

Ｂａｒｇ　−１ｖ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　　ｏｆ　　
Ｉ）ａｔａｒｍｉｎａｔｉｖａＢａｃｔａｒｔｏｔｏｇ
ｙ、８ｔｈ　　ａｄ、１９７４．Ｔｈａ　ＷｉＬｌｉａ
ｍａ＆　Ｗｉ　Ｌｋｉｎｓ　Ｃ’ｏ　、　、Ｈａｔ　ｔ
　ｉｍｏｒｇ　、　）によれば、この菌株の生長な特徴
は次のように要約される：１）灰色の気菌糸、２）らせ
ん状の胞子連鎖、３）メラノイドの無いこと、及び４）
平滑な胞子壁装飾である。胞子形成した気菌糸の吸湿性
変化はこの菌株の明確な性質である。菌株Ｐ２４７−７
１の王Ｍ％＜１．及び衣１及び２Ｖこ示したものはそｎ
をストレプトミセスヒゲロスコピカスに分類している。

本発明は上述の特に好ましい菌株Ｐ２４７−７１及び上
記の記述に完全に該当する微生物を使用することのみに
限定するものでは無いことを址解さｎだい。常法例えば
Ｘ線照射、紫外線照射、窒素マスタード（屋素イペリッ
ト）での処坤、ファージ露出等でつくり田される該微生
物の他のＢＵ−３８６２Ｔ８Ｅ産性変異株も特に包含す
るものとする〇ｌシ２ 菌株Ｐ２４７−７１の生理学的特徴 率　基礎培地ニブリントノ・ムーゴットリーブ（Ｐｒｉ
ｄｈａｍ−ゼラチン　　　　　　　　士 でん粉：溶性でん粉　　　　十 じゃがいもでん粉　十 牛乳凝結　　　士 ペプトン化　十 生産性： ナイトレートリダクターゼ　− チロシナーゼ 耐性： リゾテーム、　０．０１％（Ｗ／Ｖ）−０，００１％（
Ｗ／Ｖ）　− ＮａＣ’ｌ、Ｌ％　　６％（Ｗ／Ｖ）　　＋７％　　（
Ｗ／Ｖ）　　− ｐＨ５，５−ＩＯ，５十 ５．０及び１１．０　　　　− 温度二 生長範囲　２ 非生長　　１ 最進生＊　３ ０℃−３９℃ ７℃及び４１℃ ７℃−３９゛Ｃ グリセロール　　＋ Ｄ−アラビノース　士 Ｌ−アラビノース　＋ Ｄ−キシロース　　土 Ｄ−リボース　　　＋ Ｌ−ラムノース　　＋ Ｄ−グルコース　＋ Ｄ−ガラクトース＋ Ｄ−フルクトース　＋ Ｄ−マンノース　　− Ｌ−ソルボース　　− シュークロース　士 ラクトース　　　　＋ セロビオース　　士 メリビオース　　　士 トレハロース　　　士 ラフィノース　　　＋ Ｄ−メレジトース　− 溶性でん粉　　　　士 セルロース　　　　− ズルシトール　　　− イノシトール　　十 〇−マンニトール＋ Ｄ−ソルビトール− サリシン　　　　＋ Ｇｏｔｔｌｉａｂ　）Ｎ地（−１ＳＰ　　Ｎｏ、９培地
）ストレフトミセスヒゲロスコピカスのＢＵ−３８６２
７生産頃株、好ましくはストレプトミセスヒゲロスコピ
カス菌株Ｐ２４７−７Ｌ（ＡＴＣＣ５３７０９）のｔＶ
ｆ像を有する菌株又はその変異株の緑部好気性条件下の
水性栄養素培地中での培養によりＢＵ−３８６２７が生
産される。この微生物は質化口Ｊ能な尿素源、例えばグ
リセロール、Ｄ−リボース、Ｌ−７ムノース、Ｄ−グル
コース、　Ｉ）−フルクトース、シュークロース、ラク
トース、メルビオース、Ｄ−マンニトール又は耐性でん
粉、を含有する栄養素培地で生長する。栄養素培地は資
化ｏＴ能な窒素源例えは魚粉、ペプトン、大豆（粗）＠
、ピーナツ（粗）紛、綿実（粗）粉又はとうもろこし浸
漬液も含んでし・る心安がある。栄養素の無機塩も培地
中に包言し℃よい。かかる塩は、ナトリクムイオン、カ
リウムイオン、アンモニウムイオン、カルシウムイオン
、ｑｉｒ吸イオン、硫酸イオン、塩化物イオン、臭化物
イオン、硝酸イオン、炭酸イオン又は類似のイオンを１
ｉえ得る通常の塩から成る。

ＭＵ−３８６２Ｔの生産はこの微生物の満足すべき生長
を実施でさる温度例えば２０℃乃至３９℃のいずれでも
付えるが、Ａ當約２８℃の温度で実施される。

フラスコ又はさまざまの容積の実験室的又は産業用発酵
槽で発酵を実施する。タンク発酵を行なう時は、Ｗ＋１
頃培％中にり（り吊すのが望ましい。この方法で１古性
な移ｉ涼を得たのち、ＢＵ−３８６２７の大規模生産用
の発酵タンクに無菌的に移植する。生長力ある移植系を
つ（り出す培地は、生産用淑生物の良好な生長か得られ
る限り、タンクで利用されたものと同一か、異なるもの
であろう。

一般にＢＵ−３８６２Ｔの最適の生産は約４日の培養期
間後に達成される。

ＨＵ−３８６２Ｔは培養培地から回収して、常法の溶媒
抽出及びクロマトグラフィーの方法で実質上純粋な形で
単離でざる。下又の実施例２は適切な単離及び積装方法
を示している。

ＢＵ−３８６２Ｔのジアセテー１導体（■）は不活性有
機浴媒中で通常のアセチル化刑例えは無水酢酸とＢＵ−
３８６２Ｔを反応さゼて得る。典型的方法を実施例３に
ボす。ＢＵ−３８６２Ｔのジヒドロ誘導体■は実施例４
に不才よ５にＢＵ−３８５２Ｔの接触水素化で製造さｎ
る。

ＨＵ−３８６２Ｔは無色の粘層住固体として得られた。

こｎはジメナルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、
メタノール、エタノール、酢酸エチル及びクロロホルム
に容易に溶けるが水、ベンゼン及び他の有機溶媒には火
の上不溶である。

１１Ｕ−３８６２Ｔは沃素、モリブデン酸アンモニウム
−硫（ｆｉ（ＡＭＳ）及びリドン−スミス（Ｒｙｄｏｎ
ａ−５ｍｉ　ｔｈ）試薬に正の反応を示したが、ニンヒ
ドリン、アントロン及び堪化第２鉄試験には負であった
。ＢＵ−３８６２１の物坤化字的性状を表３に要約する
。この化合物は特有のＵＶ及び′ｓＣ−１ｆＭＲスペク
トルをそｎ（′ｎ図１１２及び３にホ丁。

ＩＪＵ−３８６２Ｔの構造検討 ＢＵ−３８ｂ２ＴはＩＲスペクトルで３３００　（ヒド
ロキシ）、１７２０（カルボニル）、１６５０及び１５
３０ｏｎ−’＜アミド）の強い吸収を有し、この仇生物
質がペプチド（１〜造であることを示し又いる。ｒｓＣ
−Ｎ、’＋ＩＲは２０個の炭素を示し、こｔしらは２個
のＣ−ＣＨ，、１個の−ｃ−ｃ仏、８１蒔す≦！２．３
個の−Ｃ１ｉ、　１個の〉９く、１個の〉Ｃ“−ＣＨ，
及び３個のＣ−０炭素と同定された。ＩＪＵ−３８６２
Ｔの分子式は微量分析、マススペクトルデータ（（Ａｆ
十／／）＋：ｍ／ｌ　　３９９）及び”Ｃ−ＮＭＲ分析
にょつｉ　”２０ｕ３４”！”６　と決定しり、　３４
１１Ｗノア”Ｏ）　ンカ’ｕ−ＮＭＲで測定された。■
水の添加で次第にビ０失する２個のダブレットプロトン
（６７，０３と６．４８　ｐｐｍ、ＣＤＣ１，）は２１
１６１の−Ｎｔｌ−ＣＯ基であると指定した。ブロード
な２個のシングレットプロトン（δ４．８３と４７９）
及びＡＢ型ダブレットプロトン（δ３．３５と３．１２
、）：５，０１ｌｔ）はそれぞれ、エキソメチレン（−
（（、’ｌｌ、　）　Ｃ’＝ＣＩＩ、　）プロトのプロ
トンの４１粘は正文に示す部分的構造に到達するＩＨ−
′１ｉｃＯ５Ｙ実験できめられた。部分的構造の連結は
さらに、’Ｃ’−１７／　Ｃ’Ｏ５Ｙ及びＩｓ（：　　
Ｉｆｆロングレンジｃ’　ｏ　ｓ　ｙ実験で求ゆられた
。正文に示すように解析が行なわれてＢＵ−３８６２Ｔ
の全体構造が決定された。この構造のさらなる証拠かそ
のマススペクトルと分解実験で与えられた。

Ｅｌ−ＭＳスペクトルはｍ７ｇ　　１２７　（イン−オ
クタノイル）、２１４（イソ−オクタノイル−セリル）
及び３２５（イソ−オクタン４ルーセリル−４，５−ジ
デヒドロロイシル）に沢山のフラグメントイオンを示し
てこの構造を裏付けた。酸加水分解でＢＵ−３８６２Ｔ
はｌｄのアミノ酸とｌ橿の脂肪酸を生じた。単離したア
ミノ酸はＨＰＬＣでＬ−セリンと同定され、脂肪酸はメ
チルエステルのガスクロマトグラフィーでインオクタン
酸と同定された。ピリジン中での無水酢酸の処理でＢＵ
−３８６２Ｔはジアセテート誘導体を与えた。パラジウ
ム活性炭上の水素化でＢＵ−３８６２１は２種の還元生
成物、ジヒドロ−ＢＵ−３８６２１゛及びテトラヒドロ
−ＢＵ−３８６２Ｔを与え、その構造はスペクトルデー
タから決定された。ジアセテート化合物及びジヒドロ化
合物は生物学的活性を保持しているが、テトラヒドロ化
合物は活性を失なっていた。

ｌノＵ−３８５２Ｔは１．２−エポキシ−２−ヒドロキ
シメチル−４−（Ｎ−インオクタノイル−Ｌ−セリルア
ミノ）−６−メテルーヘブトー６−エンー３−オンと命
名でき、エボギシドとエキソメチレン基を有するａ籍の
ペプチドである。

ＢＵ−３８６２Ｔの部分的構造 ジヒドロ−ＢＵ−３８６２Ｔ −一÷　ｌ＃−ＩＨロングレンジ −・−）　　”Ｃ−’Ｈロングレンジ ＢＵ−３８６２７及び、ジアセチル−、ジヒドロ−及び
テトラヒドロ−ＢＵ−３８６２Ｔを数種のマウス及びヒ
トの腫瘍細胞系に対するインビトロ細胞毒性及び／又は
マウスでのインビボ抗肺瘍活性について試験した。マイ
トマイシンＣをインビトロ及びインビボ実験のいずれで
も基準化合物として使用した。Ｆｘｏ−Ｆｘｏ（マウス
黒色腫）、Ｌ３８８（マウス白血病）、Ｌ１２１０（マ
ウス白血病）及びｒｓｌ　ｏ　ａ　ａ　ｒ　（ヒト結、
直腸癌）細胞をウシ胎児血清（ＦＣ５１０％）及びカナ
マイシン（６０ｍａｒｔ／ｒｎｔ）　ヲ含りイーグルス
ＭＥＭ培地（ＡｉＥＭ）中で、セしてＩＩＣＴ−１１６
（ヒト結腸癌）細胞をＦｅ２（１０％）、ペニシリン（
１００ｘ／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００ｍｃ
ｇ／ｍｌ）を含むマツコイ（Ａｉａｃｃｏｙ）の５Ａ培
地中で、対数曲縁的にｊ’＋ｆｆ５’ｌｃＭｆＥ長させ
、取ッテ１．５　Ｘ　１０ζ１．２　Ｘ　１０’、１．
２Ｘ１０’、２．５ｘｌＯｓ及び３．０Ｘ１０″細胞／
ａに調整層ｆｆ：、験物質と９６穴又は２４穴の組織培
養プレートに接種し５　％　ｔ’υ２インキュベータ中
で３７℃で７２時間培養した。Ｂｌ６−／１０、Ｊυｏ
ａａｒ　、及びＩＩ　ＣＴ−１１６細胞に対する細胞毒
性は０．００６％ニュートラルレッド溶液で生存細胞を
染色後、５４０ｎｍでの比色法で６１１１足した。他方
Ｐ３８８及びＬ１２１０細胞に対する細胞宿性は生存細
弓、１を＃ｆ数して決定した。結果を表４に要約した。

マイトマイシンＣ′に比しｉ、Ｂ（、’−３８６２１は
マウス及びヒト腫瘍細胞の両刀に対して遥かに強力な細
胞感性効果をポした。

その効力はＩＣ１゜値を用いて比較するとマイトマイシ
ンＣの約５（Ｊ−１２０培であった。ジアセチル及びジ
ヒドロ誘棒体は、マウス及びヒトの内方の腫瘍細胞にＳ
い℃、等しい細胞４性効果を示し、ＢＵ−３８６２Ｔの
約半分の効力であった。他方、テトラヒドロ誘導体は上
記の化合物Ｊ−りも著るしく活性が低かった。

高分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ及び蛋白質）合成に対するＢＵ
−３８６２１の阻害作用は培養系マウスＢ１６−Ｆ１ｏ
黒色＋１ｉ１！ｍ胞テｄｌｌｌ定Ｌ　？、：。Ｂ　ｌ　
６−Ｆ　１　（ｎｕ　（１０５個ａ胞／ａｌ）をＢＵ−
３８６２Ｔと３７℃で３．５時間（ＤＮＡ合成について
）又は４時間（ＲＮＡ及び蛋白質合成）培養した。放射
性同位元素で標關した前駆物質、ｘＨ−チミジン、１４
Ｃ−ウリジン又は３ｕ−ロイシンを培養混合液に加え更
に３０分（ＤＮＡ合成）、又は６０分（ＲＮＡ及び蛋白
質合成）培養しへ冷却した５％トリクロロｃ′ｒＦ−酸
溶液で洗浄後、膝ｇｊ細胞の酸不溶画分中の放射能を液
体シンチレーションカウンタ中で測定した。表５に示す
ようにＢｌ）　−３８６２ＴはＤＮＡ及び蛋白質合成の
両刀を等しく阻害し、ＩＣ，。

値で比較するとその効力はＲＩＶＡ合成に対する効力よ
りも１００倍以上大きかった。

ＢＵ−３８６２Ｔ及びジアセチル及びジヒドロ誘導体の
インビボ仇＠瘍活性は腫瘍細胞を移植したＢＤＦ、　　
又はＣ’　ｌ）Ｆ、　　マウスで両足した。雄のＢＤＦ
、　　マウスに０．５１の１０％メラニン性黒色黒Ｂ　
１６　ｂｒｇｉを腹腔内Ｋｇ、橿し、そして雌のＣＩ）
Ｆア　マウスには１０’個のリンパ性白血病Ｌ１２１Ｏ
細胞又は１０”個のリンパ性白血病／’３８８ａノ泡を
含む０．４紅の希釈腹水を腹腔内に接種した。試験化合
物は次の４つの異なった投与スケジュール：第１．２及
び３日に１日１回宛（ＱＩ）Ｘ３）、第１．４及び７日
に１日１回宛（ＱａＤｘ３）、第１．５及び９日Ｖｃ１
日１回宛（Ｑ４Ｄｘ３）及び第１及び９日に１日１回宛
ＣＣＩＤＸ９）、マウスの腹腔内に投与した。表６に示
す通り、ｆｌＵ−３８６２１はＢｌ６黒色腫に対してす
ぐれた治療効果を示した。

Ｑ４ＤＸＥ投与スケジュールは、ＢＵ−３８６２Ｔの効
力（最小有効用量）はマイトマイシンＣと同等であった
。最高ＴｌＣ値及び化学療法係数（最適用量の最小有効
用量に対する比）でそれぞれ比較すると、この化合物は
連続的投与スケジュールＣＱＤＸ９）よりも間欠投与ス
ケジュール（Ｑ４ＤＸ３）でよジ良い抗腫瘍活性と広い
治療法範囲を示した。ジアセチル及びジヒドロ誘導体は
両方ともＱ４Ｄｘ３投与スケジュールで有意な抗Ｈ−１
６黒色肺活性を示したが、表７に下すように最小有効用
量で示すと母化合物の約添以下の活性であった。他万、
ＢＵ−３８６２Ｔの抗白血病油性はむしろ弱かった。こ
の化合物はＬ１２１０白血病に対し最大音が１４５％と
弱いＶＬｊ’ｔ４活性を示し、試験した投与量ではＰ３
８８白血病を移植したマウスの生存時間の有意な延長を
示さなかった（衣８及び９）。

上記のデータが示すようにＢＵ−３８６２Ｔ及びそのジ
ヒドロ及びジアセチルｆＩｊ４体は唾乳類の悪性腫瘍例
えばＢ２Ｏ黒色腫の阻害用の抗腫瘍剤として有用である
。

本発明の範囲内には、活性成分として腫瘍阻害有効量の
ＢＵ−３８６２Ｔ、ジヒドロ−ＢＵ−３８６２Ｔ又はジ
アセチル−ＢＵ−３８６２Ｔを含有する医薬組成物（抗
腫瘍剤）も包含するものである。かかる抗腫瘍剤には他
の活性な抗＠瘍剤も含有し得るし、所望の投与ルートに
対し１適切な医薬の形態に形成し得る。かかる組成物の
例には経口投与用の固体組成物例えば錠剤、カプセル、
丸薬、粉本、顆粒、経口投与用の液体組成物例えば溶液
、懸濁液、シロップ又はエレキセル及び非経口投与用の
配合例えば滅菌溶液、懸濁液又はエマルションがある。

使用直前に滅菌水、生理的食塩水又は他の適切な滅菌し
た注射用媒体に俗解でさる滅菌した固体組成物の形態で
も製造でざる。

抗腫瘍剤として用いる、所定の咄乳動物の宿主について
のＢＵ−３８６２Ｔ又はそのジヒドロ−又はジアセチル
−誘導体の最適の投与量と投与法については当業者によ
って容易に確かめられる。もちろん、使用される化合物
の実際上の用量は、配合した特定の組成物、適用法及び
特定された部位、宿主及び投与すべき疾病によって変る
ことを理解されたい。年令、体重、性別、食飼、投与時
刻、投与方法、排泄速度、患者の条件、薬剤配合組成、
反応感応性及び疾病のひどさを含めた薬の作用に影響す
る多くの因子を配慮する。

以下の実施例は例示の目的のみに供するものであって、
本発明の軛囲を限定しようとするものでは無い。

〈実施例〉 実施例１゜ ３％大豆粗粉（Ｎｉｋｋｏ　５ａｉｙｓ　）、０．５％
ファルマメデイ７［Ｐｈａｒｍａｍａｄｉａ］（Ｔｒａ
ｄａｒａ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　）、　３チグルコース、０．
１％酵母抽出物（Ｕ、イｇｓｔαｌ）及び０．３％Ｃ′
αｃ、’ｏ、から成ジ、ｐｕを７．０に調節して滅菌し
た栄養培地の植付けに、ストレプトミセスヒゲロスコピ
カス菌株Ｎｏ、Ｐ２４７　７１の良（生長した斜寒天培
養物を用いた。

この栄養培地を回転式振盪機（２００デア惧）を用い、
２８°Ｃで４日培養し、生長分の５＃＋７を栄養培地と
同一の組成を有する１００ｍＪの発酵培地を有する５０
０ＪＩ４’の三角フラスコに移植した。発酵は回転式振
盪機上で振盪しつつ２８゛Ｃで４〜５日実施した。

発酵液（ブイヨン）中の抗腫瘍性抗生物質の生成はＢＩ
３黒色肺細胞に対するインビトロ細胞毒性で測定した。

発酵はタンク発酵槽でも実施した。フラスコ発酵の住長
力ある培養物の２１部分を１２０Ａ’の発酵媒体を有す
る２００１のタンク発＃槽に移した。発酵は２５　Ｏｒ
ｐｍで撹拌し、１２０１７ｇ１ｎのエアレーション速度
で２８℃で実施した。

約９０時間の発酵後、抗＠瘍性抗生物質画度は５０μ？
／セの最高値に達した。

実施例２゜ ＥＵ−３８６２Ｔの単離とｆ４製 実施例１の一般的なり法で得られた発酵液（ブイヨン）
（２３Ａ！、　ｐＨ７，４）をシャープンス型遠心分離
器（Ｋｏｋｗａα％Ｎｏ、４）で菌糸体ケークと上澄み
液に分離した。菌糸体ケークをメタノール（６））で抽
出した。濾過で不浴分を除去後、メタノール性抽出液を
真空中で水性溶液にａ縮した。この水性溶液と発＃液（
ブイヨン）の上澄。

み液を合併して、酢酸エチル（２０Ａ’）で抽出した。

抽出液を真空蒸発乾固して２１．ＬＰの粗抗生物質複合
体を得た。

この粗製固体を、塩化メチレンで前況浄しであるシリカ
ゲルカラム（φ４．０Ｘ７５Ｃｒｎ）にかけて、段階的
にメタノール濃度を増す（２−１０％Ｖ／Ｖ）塩化メチ
レン−メタツル混合物で展開した。１６黒色腫に対する
細胞ｍ９：とＴＬＣプレート上での沃素との変色反応と
で溶出液をモニターした。２％メタノールで溶出した第
１の沃素陽性画分を３市集してセファデック、＜（Ｓａ
ｐｈａｄａｚ）ＬＨ−２０クロマトグラフイーでさらに
精製した。精製した成分はそのスペクトルデータかも９
−メチルストレプティミイドン（９−ｍｓｔｈｙｔ−５
ｔｒａｐｔｉｍｔｄｏｎｇ　［：５ａｉｔｏ、Ｎ、；Ｆ
。

Ｋｉｔａｍ＃１Ｍ、Ｋｉｋｗｅｈｉ　　ａｎｄ　ＩＶ、
１ａｈｉｄａ：５ｔｘｔｉｉａｓｏｎ　ａ　ｎｅｗ　ａ
ｎｔｉｖｉｒａ！　　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ、９−ｍｓ
ｔｈｙｌｓｔｒｇｐｔｉｍｔｄｏｎｅ、１．Ｐルｙａｉ
ｃｏｅん−ｍｔｃａｌａｎｄ　　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
　　ｐｒｏｐａｒｔｉｅａ、Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｙ２７：２０６−２１４．１９７４）と同定された。５
％メタノールで溶出した第２の沃素陽性画分を捕集して
真空蒸発し′″ｃＢＵ−３８６２Ｔの半純粋固体を得た
。これを酢酸エテル−メタノール混合物を用いてシリカ
ゲル上のさらにクロマトグラフィーにかけた。５０：Ｉ
Ｖ／Ｖ比の混合物を用いた溶離で１６黒色腫に対して強
力な細胞毒性を示す活性な両分が得られた。真空濃縮後
、残渣をメタノール溶離を用いたセファデックスＬＨ−
２０クロマトグラフィーでさらに精製したＢＵ−３８６
２−Ｔの均質な固体（３４１ｍｇ）を得た。

実施例３゜ ジアセチル−ＢＵ−３８６２Ｔの製造 ＢＵ−３８６２Ｔ（１０ｍｙ）を無水酢＠（０，１Ｍ）
と無水のピリジン（０，５１Ｍ）と１８時間室温で撹拌
した。反応混合物を酢酸エチル（１０１ｄ）で稀釈し、
そして溶液を希ＨＣノ（１０Ｍ）と仄に水（ｌｏｍ）で
洗った。有機溶液をＮ−５Ｏ，で乾燥し、真空蒸発して
油状のジアセチルＢＵ−３８６２Ｔ（１３■）を得た。

物理化学的性状は正文の表１０及び１工に示した。

夷　施　例　・１ ベクトル（４００ＭＢｍ　）である。

第３図はＣＤＣ１，中のＢＵ−３８６２Ｔの”Ｃ−ＮＭ
Ｒメタノール（１０ｍｚ）に浴かしたＢＵ−３ｓ　６２
７’（３０Ｉｎｙ　）を常圧、２０％　Ｐｄ／　ｅ　（
１５ｍ９）の存在下で２０時間水素化した。反応混合物
を濾過し、′濾過を減圧下で蒸発させて２棟の水素化生
成物の混合物（２７■）を得た。調製ｆｆ４　Ｔ　Ｌ　
Ｃ（Ｓ　ｉＵｚ　、　Ｃ’１ｉｚＣ６ｘ　ＭｇＱＩＩ　
＝　９．Ｉ　Ｖ　／　Ｖ　）　テ分ｍの上、セファデッ
クスＬＨ−２Ｑクロマトグラフィーで積装してジヒドロ
ＨＵ−３８６２１Ｃ１３，４叩）とテトラヒドロＭＵ−
３８６２ＴＣ４，７■）を得た。物理化学的性質は衣１
０及び１１に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図はＢＵ−３８６２Ｔの赤外吸収スペクトル（ＫＢ
ｒ）を示す。 第２図はＣ’ＤＣ１，中のＢＵ−３８６２ｒｏ）ｌｕ　
ｎＭｔイススペクトル（１００Ｍｕπ〕である。 ブリストルーマイヤーズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する化合物ＢＵ−３８６２Ｔ。 ２、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 但しＡｃはＣＨ＿３ＣＯ−を表わすものとする、を有す
   るジアセチル−ＢＵ−３８６２Ｔ。 ３、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するジヒドロ−ＢＵ−３８６２Ｔ。 ４、ストレプトミセスヒグロスコピカスのＢＵ−３８６
   ２Ｔ−生産菌株を資化可能な炭素及び窒素源を含有する
   水性栄養素培地中、深部好気性条件下で該培養培地中の
   該微生物により実質量のＢＵ−３８６２Ｔが生産される
   迄培養し、次に該培養培地から該ＢＵ−３８６２Ｔを回
   収することを特徴とする式： ▲数式、化学式、表等があります▼ のＢＵ−３８６２Ｔの生産方法。 ５、ＢＵ−３８６２Ｔ生産菌株がストレプトミセスヒグ
   ロスコピカスＡＴＣＣ５３７０９又はその変異株又は突
   然変異株である請求の範囲第４項に記載の方法。 ６、資化可能な炭素及び窒素源を含有する水性栄養素培
   地中での培養で回収可能な量のＢＵ−３８６２Ｔを生産
   し得る、微生物ストレプトミセスヒグロスコピカスＡＴ
   ＣＣ５３７０９の生物学的に純粋な培養菌。 ７、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ のＢＵ−３８６２Ｔを不活性有機溶媒中で、アセチル化
   剤と反応させることを特徴とする式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 但しＡｃはＣＨ＿３ＣＯ−を表わすものとする、のジア
   セチル−ＢＵ−３８６２Ｔの製造方法。 ８、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ のＢＵ−３８６２Ｔを接触水素化することを特徴とする
   式：▲数式、化学式、表等があります▼ のジヒドロ−ＢＵ−３８６２Ｔの製造方法。 ９、請求の範囲第１項に記載のＢＵ−３８６２Ｔ、請求
   の範囲第２項に記載のジアセチル−ＢＵ−３８６２Ｔ又
   は請求の範囲第３項に記載のジヒドロ−ＢＵ−３８６２
   Ｔを有効成分とする抗腫瘍剤。