JPH08239379A - 新規物質ｋｒ２８２７誘導体、その製造法および使用 - Google Patents
新規物質ｋｒ２８２７誘導体、その製造法および使用Info
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- JPH08239379A JPH08239379A JP4456695A JP4456695A JPH08239379A JP H08239379 A JPH08239379 A JP H08239379A JP 4456695 A JP4456695 A JP 4456695A JP 4456695 A JP4456695 A JP 4456695A JP H08239379 A JPH08239379 A JP H08239379A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗腫瘍作用を有する新規な化合物、その製造
法およびその用途を提供する。 【構成】 次式（Ｉ）で示される、ＫＲ２８２７誘導体
（ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ）。 【化１】 （式中、Ｒはメチル基またはエチル基を表す） ストレプトミセス属に属しＫＲ２８２７誘導体の生産能
を有する菌株を培養して該誘導体を産生させ、その培養
物よりＫＲ２８２７誘導体を採取することを特徴とす
る、上記式（Ｉ）で示される化合物の製造法。上記式
（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含んでなる抗
腫瘍剤。上記のＫＲ２８２７誘導体は強い抗腫瘍作用を
有している。
法およびその用途を提供する。 【構成】 次式（Ｉ）で示される、ＫＲ２８２７誘導体
（ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ）。 【化１】 （式中、Ｒはメチル基またはエチル基を表す） ストレプトミセス属に属しＫＲ２８２７誘導体の生産能
を有する菌株を培養して該誘導体を産生させ、その培養
物よりＫＲ２８２７誘導体を採取することを特徴とす
る、上記式（Ｉ）で示される化合物の製造法。上記式
（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含んでなる抗
腫瘍剤。上記のＫＲ２８２７誘導体は強い抗腫瘍作用を
有している。
Description
【０００１】〔発明の背景〕
【産業上の利用分野】本発明は新規物質に、更に詳しく
はストレプトミセスに属する菌株Ｒ２８２７−２株によ
って生産されうる抗腫瘍性を有する新規物質ＫＲ２８２
７誘導体、その製造法および使用に関する。
はストレプトミセスに属する菌株Ｒ２８２７−２株によ
って生産されうる抗腫瘍性を有する新規物質ＫＲ２８２
７誘導体、その製造法および使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】抗腫瘍物質に関してはすでに多数のもの
が医薬として実用化されている。また、本発明化合物に
関連する物質として特開昭６３−２０３６７６号公報
に、レプトマイシンＢの類似体であるＫＲ２８２７（Ａ
およびＢ）が開示されている。一般に化学物質の生理活
性はその化学構造に依存するところが大きいため、抗腫
瘍性を有する新規な化合物に関しては不断の希求がある
といえよう。
が医薬として実用化されている。また、本発明化合物に
関連する物質として特開昭６３−２０３６７６号公報
に、レプトマイシンＢの類似体であるＫＲ２８２７（Ａ
およびＢ）が開示されている。一般に化学物質の生理活
性はその化学構造に依存するところが大きいため、抗腫
瘍性を有する新規な化合物に関しては不断の希求がある
といえよう。
【０００３】〔発明の概要〕
【発明が解決しようとする課題】本発明は、抗腫瘍作用
を有する新規な化合物を提供することを目的とするもの
である。
を有する新規な化合物を提供することを目的とするもの
である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、土壌から
分離したストレプトミセス・エスピーＲ２８２７−２株
の培養物から、抗腫瘍作用を有する新規物質ＫＲ２８２
７誘導体を見出し、この知見をもとに本発明を完成させ
るに至った。すなわち、本発明による新規化合物ＫＲ２
８２７誘導体は次式（Ｉ）で示されるものである。
分離したストレプトミセス・エスピーＲ２８２７−２株
の培養物から、抗腫瘍作用を有する新規物質ＫＲ２８２
７誘導体を見出し、この知見をもとに本発明を完成させ
るに至った。すなわち、本発明による新規化合物ＫＲ２
８２７誘導体は次式（Ｉ）で示されるものである。
【化２】 （式中、Ｒはメチル基またはエチル基を表わす） また、本発明による上記化合物の製造法は、ストレプト
ミセス属に属しＫＲ２８２７誘導体の生産能を有する菌
株を培養して該誘導体を産生させ、その培養物よりＫＲ
２８２７誘導体を採取することを特徴とするものであ
る。本発明はまた、この化合物の使用（抗腫瘍剤）にも
関する。すなわち、本発明による抗腫瘍剤は、上記化合
物を有効成分として含んでなるものである。
ミセス属に属しＫＲ２８２７誘導体の生産能を有する菌
株を培養して該誘導体を産生させ、その培養物よりＫＲ
２８２７誘導体を採取することを特徴とするものであ
る。本発明はまた、この化合物の使用（抗腫瘍剤）にも
関する。すなわち、本発明による抗腫瘍剤は、上記化合
物を有効成分として含んでなるものである。
【０００５】〔発明の具体的説明〕ＫＲ２８２７誘導体 １）定義 本発明による新規物質ＫＲ２８２７誘導体は、前記の式
（Ｉ）で表される。Ｒの種類によって本発明は２種類存
在する。本明細書では、Ｒがメチル基であるものをＫＲ
２８２７Ｃ、またＲがエチル基であるものをＫＲ２８２
７Ｄと呼ぶものとする。 ２）化学構造 本発明による新規物質ＫＲ２８２７誘導体（ＫＲ２８２
７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ）は、式（Ｉ）で示される化
学構造を有するが、これらの化学構造は、各種機器分析
スペクトルにより決定されたものである。 ３）物理化学的性状 第１表は、本発明ＫＲ２８２７誘導体である化合物ＫＲ
２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの物理化学的性状を示
すものである。
（Ｉ）で表される。Ｒの種類によって本発明は２種類存
在する。本明細書では、Ｒがメチル基であるものをＫＲ
２８２７Ｃ、またＲがエチル基であるものをＫＲ２８２
７Ｄと呼ぶものとする。 ２）化学構造 本発明による新規物質ＫＲ２８２７誘導体（ＫＲ２８２
７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ）は、式（Ｉ）で示される化
学構造を有するが、これらの化学構造は、各種機器分析
スペクトルにより決定されたものである。 ３）物理化学的性状 第１表は、本発明ＫＲ２８２７誘導体である化合物ＫＲ
２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの物理化学的性状を示
すものである。
【表１】 第２表は、本発明化合物の構造決定の根拠となったＫＲ
２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの炭素１３核磁気共鳴
スペクトルのシグナルの帰属を示すものである。 第２表 ＫＲ２８２７ＣとＫＲ２８２７Ｄの炭素１３核シグナルの帰属 炭素核 ＫＲ２８２７Ｃ ＫＲ２８２７Ｄ (ppm) (ppm) １ １６３．９ １６４．０ ２ １２１．５ １２１．６ ３ １４４．７ １４４．７ ４ ２９．９ ３０．０ ５ ７８．５ ７８．８ ６ １２５．３ １２４．７ ７ １３０．６ １２９．９ ８ １２９．３ １３５．４ ９ １３８．９ １３７．１ 10 ３２．１ ３２．１ 11 ４０．６ ４０．７ 12 １２７．５ １２７．６ 13 １３５．３ １３５．４ 14 １３６．１ １３６．１ 15 １２８．３ １２８．３ 16 ４５．５ ４５．６ 17 ２１５．５ ２１５．６ 18 ４６．５ ４６．５ 19 ７４．２ ７４．３ 20 ３３．１ ３３．１ 21 ４４．０ ４４．１ 22 １３３．９ １３３．９ 23 １２０．３ １２０．４ 24 １３．２ １３．４ 8-メチル ２０．２ − 8-エチル − ２６．３、１３．４ 10-メチル ２０．６ ２０．７ 14-メチル １２．９ １３．０ 16-メチル １６．１ １６．２ 18-メチル １２．２ １２．２ 20-メチル １３．９ １４．０ 22-メチル １５．２ １５．２
２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの炭素１３核磁気共鳴
スペクトルのシグナルの帰属を示すものである。 第２表 ＫＲ２８２７ＣとＫＲ２８２７Ｄの炭素１３核シグナルの帰属 炭素核 ＫＲ２８２７Ｃ ＫＲ２８２７Ｄ (ppm) (ppm) １ １６３．９ １６４．０ ２ １２１．５ １２１．６ ３ １４４．７ １４４．７ ４ ２９．９ ３０．０ ５ ７８．５ ７８．８ ６ １２５．３ １２４．７ ７ １３０．６ １２９．９ ８ １２９．３ １３５．４ ９ １３８．９ １３７．１ 10 ３２．１ ３２．１ 11 ４０．６ ４０．７ 12 １２７．５ １２７．６ 13 １３５．３ １３５．４ 14 １３６．１ １３６．１ 15 １２８．３ １２８．３ 16 ４５．５ ４５．６ 17 ２１５．５ ２１５．６ 18 ４６．５ ４６．５ 19 ７４．２ ７４．３ 20 ３３．１ ３３．１ 21 ４４．０ ４４．１ 22 １３３．９ １３３．９ 23 １２０．３ １２０．４ 24 １３．２ １３．４ 8-メチル ２０．２ − 8-エチル − ２６．３、１３．４ 10-メチル ２０．６ ２０．７ 14-メチル １２．９ １３．０ 16-メチル １６．１ １６．２ 18-メチル １２．２ １２．２ 20-メチル １３．９ １４．０ 22-メチル １５．２ １５．２
【０００６】ＫＲ２８２７誘導体の製造 概要 本発明によるＫＲ２８２７誘導体（ＫＲ２８２７Ｃおよ
びＫＲ２８２７Ｄ）は現在のところ微生物の培養によっ
てのみ得られているが、類似化合物の合成化学的修飾ま
たは微生物学的修飾によって製造することも、あるいは
全合成化学的に製造するものできよう。微生物の培養に
よる場合の菌株としてはストレプトミセス属に属するＫ
Ｒ２８２７Ｃ、あるいはＫＲ２８２７Ｄ生産能を有する
ものが使用される。具体的には、本発明者らの分離した
ストレプトミセス・エスピーＲ２８２７−２株（Strept
omyces sp. KR2827-2）が、ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ
２８２７Ｄを生産することが本発明者らによって明らか
にされている。その他の菌株については、抗生物質生産
菌単離の常法によって適当なものを自然界より分離する
ことが可能である。また、ストレプトミセス・エスピー
Ｒ２８２７−２株を含めてＫＲ２８２７ＣあるいはＫＲ
２８２７Ｄの生産菌を放射線照射その他の変異処理に付
して、ＫＲ２８２７ＣあるいはＫＲ２８２７Ｄの生産能
を高める余地も残されている。更にまた、遺伝子工学の
発達した現在、このＲ２８２７−２株のＫＲ２８２７誘
導体の合成に関与する遺伝子を導入した他の微生物によ
るＫＲ２８２７誘導体の生産も可能である。
びＫＲ２８２７Ｄ）は現在のところ微生物の培養によっ
てのみ得られているが、類似化合物の合成化学的修飾ま
たは微生物学的修飾によって製造することも、あるいは
全合成化学的に製造するものできよう。微生物の培養に
よる場合の菌株としてはストレプトミセス属に属するＫ
Ｒ２８２７Ｃ、あるいはＫＲ２８２７Ｄ生産能を有する
ものが使用される。具体的には、本発明者らの分離した
ストレプトミセス・エスピーＲ２８２７−２株（Strept
omyces sp. KR2827-2）が、ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ
２８２７Ｄを生産することが本発明者らによって明らか
にされている。その他の菌株については、抗生物質生産
菌単離の常法によって適当なものを自然界より分離する
ことが可能である。また、ストレプトミセス・エスピー
Ｒ２８２７−２株を含めてＫＲ２８２７ＣあるいはＫＲ
２８２７Ｄの生産菌を放射線照射その他の変異処理に付
して、ＫＲ２８２７ＣあるいはＫＲ２８２７Ｄの生産能
を高める余地も残されている。更にまた、遺伝子工学の
発達した現在、このＲ２８２７−２株のＫＲ２８２７誘
導体の合成に関与する遺伝子を導入した他の微生物によ
るＫＲ２８２７誘導体の生産も可能である。
【０００７】ＫＲ２８２７−２株 ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ生産能を有するス
トレプトミセス属の菌株として、本発明者らの見出して
いるＲ２８２７−２株は、下記の内容のものである。 １）由来及び寄託番号 Ｒ２８２７−２株は群馬県高崎市宮原町で採取した土壌
より分離されたものであり、平成７年２月２４日に工業
技術院生命工学工業技術研究所に寄託されてＦＥＲＭ
ＢＰ−５０１８の番号を得ている。 ２）菌学的性状 ＫＲ２８２７−２株の菌学的性状は、以下の通りであ
る。 （１）形態 よく分枝した基生菌糸から気菌糸は単純分枝する。その
先端は波状、かぎ状、あるいは不完全ならせん状を呈す
るが、シュクロース／硝酸塩寒天培地上ではらせん状の
ものも多く観察される。電子顕微鏡下では胞子鎖は１０
〜１５個の連鎖をなし、胞子表面は平滑で、形は円筒形
または楕円形、大きさは０．７〜０．９×０．９〜１．
３μｍである。胞子のう、鞭毛胞子、菌核などの特殊形
態は認められない。 （２）各種培地の生育状態 ＫＲ２８２７−２株を各種培地に摂氏２７度、３週間培
養した結果は、第３表に示す通りである。 （３）生理的性質 Ｒ２８２７−２株の生理的性質は、第４表に示す通りで
ある。
トレプトミセス属の菌株として、本発明者らの見出して
いるＲ２８２７−２株は、下記の内容のものである。 １）由来及び寄託番号 Ｒ２８２７−２株は群馬県高崎市宮原町で採取した土壌
より分離されたものであり、平成７年２月２４日に工業
技術院生命工学工業技術研究所に寄託されてＦＥＲＭ
ＢＰ−５０１８の番号を得ている。 ２）菌学的性状 ＫＲ２８２７−２株の菌学的性状は、以下の通りであ
る。 （１）形態 よく分枝した基生菌糸から気菌糸は単純分枝する。その
先端は波状、かぎ状、あるいは不完全ならせん状を呈す
るが、シュクロース／硝酸塩寒天培地上ではらせん状の
ものも多く観察される。電子顕微鏡下では胞子鎖は１０
〜１５個の連鎖をなし、胞子表面は平滑で、形は円筒形
または楕円形、大きさは０．７〜０．９×０．９〜１．
３μｍである。胞子のう、鞭毛胞子、菌核などの特殊形
態は認められない。 （２）各種培地の生育状態 ＫＲ２８２７−２株を各種培地に摂氏２７度、３週間培
養した結果は、第３表に示す通りである。 （３）生理的性質 Ｒ２８２７−２株の生理的性質は、第４表に示す通りで
ある。
【表２】 第４表 生育温度範囲 摂氏２０〜３７度 メラニン様色素 チロシン寒天培地 陰性 ペプトン／イースト／鉄寒天培地 陰性 トリプトン／イースト液体培地 陰性 スターチの加水分解 陽性 ゼラチンの液化 弱い陽性 脱脂乳の凝固 陰性 脱脂乳のペプトン化 陽性 硝酸塩の還元能 陰性 （４）炭素源の利用性 Ｒ２８２７−２株の炭素源の利用能（プリドハム／ゴト
リーブ寒天培地上）は、第５表に示す通りである。 第５表 Ｄ−グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ シュクロース ± Ｄ−キシロース ± ｉ−イノシトール − Ｄ−マンニトール − Ｄ−フラクトース ＋ ラムノース − ラフィノース − セルロース − Ｄ−マンノース ＋ トレハロース ＋ メリビオース − Ｄ−リボース ＋ サリシン − ＋：利用する、±：利用が疑わしい、−：利用しない （５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成アミノ酸の一つであるジアミノピメリン酸を
分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され
た。以上の菌学的性状から、Ｒ２８２７−２株はストレ
プトミセス属に属すると判断され、以下のような特徴を
有する。 （イ）気菌糸は波状、かぎ状、あるいは不完全ならせん
状ないしらせん状を呈し、胞子は円筒形あるいは楕円形
でその表面は平滑である。 （ロ）種々の培地で、ピンク味白〜茶味灰の気菌糸を形
成する。 （ハ）裏面の色は、茶紫〜黄味茶〜赤味茶〜暗い赤味橙
である。 （ニ）可溶性色素およびメラニン様色素を生成しない。 以上の結果から、本発明者らはＫＲ２８２７−２株をス
トレプトミセス・エスピーＲ２８２７−２（Streptomyc
es sp. Ｒ２８２７−２）と命名する。
リーブ寒天培地上）は、第５表に示す通りである。 第５表 Ｄ−グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ シュクロース ± Ｄ−キシロース ± ｉ−イノシトール − Ｄ−マンニトール − Ｄ−フラクトース ＋ ラムノース − ラフィノース − セルロース − Ｄ−マンノース ＋ トレハロース ＋ メリビオース − Ｄ−リボース ＋ サリシン − ＋：利用する、±：利用が疑わしい、−：利用しない （５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成アミノ酸の一つであるジアミノピメリン酸を
分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され
た。以上の菌学的性状から、Ｒ２８２７−２株はストレ
プトミセス属に属すると判断され、以下のような特徴を
有する。 （イ）気菌糸は波状、かぎ状、あるいは不完全ならせん
状ないしらせん状を呈し、胞子は円筒形あるいは楕円形
でその表面は平滑である。 （ロ）種々の培地で、ピンク味白〜茶味灰の気菌糸を形
成する。 （ハ）裏面の色は、茶紫〜黄味茶〜赤味茶〜暗い赤味橙
である。 （ニ）可溶性色素およびメラニン様色素を生成しない。 以上の結果から、本発明者らはＫＲ２８２７−２株をス
トレプトミセス・エスピーＲ２８２７−２（Streptomyc
es sp. Ｒ２８２７−２）と命名する。
【０００８】培養／ＫＲ２８２７誘導体の生産 本発明によるＫＲ２８２７誘導体（ＫＲ２８２７Ｃおよ
びＫＲ２８２７Ｄ）は、ストレプトミセス属に属するＫ
Ｒ２８２７誘導体生産菌を適当な培地で好気的に培養
し、培養物から目的物を採取することによって製造する
ことができる。培地は、ＫＲ２８２７誘導体生産菌が利
用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。具体
的には例えば、炭素源としてグルコース、シュクロー
ス、マルトース、スターチおよび油脂類などが使用で
き、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキ
スおよびコーンスティープリカーなどの有機物ならびに
アンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの無機
物が利用できる。また必要に応じて、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、燐酸塩、重金属塩など無機塩類を添加す
ることができる。発酵中の発泡を抑制するために、常法
に従って適当な消泡剤、たとえばシリコーン油を添加す
ることもできる。培養方法は、一般に行われている抗生
物質の生産方法と同じく、好気的液体培養法が最も適し
ている。培養温度は、摂氏２０〜３７度が最も適当であ
るが、摂氏２５〜３０度が好ましい。この方法でＫＲ２
８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの生産量は、振盪培養、
通気攪拌培養共に培養５日間で最高に達する。このよう
にしてＫＲ２８２７誘導体（ＫＲ２８２７ＣおよびＤ）
の蓄積された培養物が得られる。培養物中では、ＫＲ２
８２７誘導体はその一部は培養濾液中に存在するが、そ
の大部分は菌体中に存在する。このような培養物からＫ
Ｒ２８２７誘導体を採取するには、合目的的な任意の方
法が利用可能である。その一つの方法は抽出の原理に基
づくものであって、具体的には、たとえば培養ろ液中の
ＫＲ２８２７誘導体については、これをＫＲ２８２７誘
導体用溶媒（前記参照）、例えば酢酸エチルなどで抽出
する方法、あるいは菌体内のＫＲ２８２７誘導体につい
ては濾過、遠心分離などで得た菌体集体をメタノール、
エタノール、アセトンで処理して回収する方法などがあ
る。菌体を分離せずに培養物そのままを上記抽出操作に
付すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽
出の範疇に入れることができる。培養物からＫＲ２８２
７誘導体を採取する他の一つの方法は、吸着の原理に基
づくものであって、すでに液状になっているＫＲ２８２
７誘導体含有物、例えば培養濾液、あるいは上記のよう
にして抽出操作を行うことによって得られる抽出液を対
象として、適当な吸着剤、例えばシリカゲル、活性炭、
ダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学社製）などを用いて目
的のＫＲ２８２７誘導体を吸着させ、その後、適当な溶
媒にて溶離させることによりＫＲ２８２７誘導体溶液
（ＫＲ２８２７ＣおよびＤ）を得ることができる。この
様にして得られたＫＲ２８２７誘導体溶液を減圧濃縮し
乾固すれば、ＫＲ２８２７ＣおよびＤの粗標品が得られ
る。このようにして得られるＫＲ２８２７誘導体粗標品
をさらに精製するためには、上記の抽出法および吸着法
にゲル濾過法、高速液体クロマトグラフィーなどを必要
に応じて組み合わせて必要回数行えば良い。たとえば、
シリカゲルなどの吸着剤、セファデックスＬＨ２０（フ
ァルマシア社製）などのゲル濾過剤を用いたカラムクロ
マトグラフィー、ＹＭＣパック（山村化学社製）などを
用いた高速液体クロマトグラフィーを適宜組み合わせて
実施することができる。具体的には、例えば、ＫＲ２８
２７誘導体粗標品を少量のメタノールに溶解し、セミ分
取用高速液体クロマトグラフィー（山村化学社製「ＹＭ
ＣパックＤ−ＯＤＳ−７」）に付し、メタノール−水
（４：１）で展開する。各ピークを分取し、それぞれを
凍結乾燥するとＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの
純品が得られる。
びＫＲ２８２７Ｄ）は、ストレプトミセス属に属するＫ
Ｒ２８２７誘導体生産菌を適当な培地で好気的に培養
し、培養物から目的物を採取することによって製造する
ことができる。培地は、ＫＲ２８２７誘導体生産菌が利
用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。具体
的には例えば、炭素源としてグルコース、シュクロー
ス、マルトース、スターチおよび油脂類などが使用で
き、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキ
スおよびコーンスティープリカーなどの有機物ならびに
アンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの無機
物が利用できる。また必要に応じて、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、燐酸塩、重金属塩など無機塩類を添加す
ることができる。発酵中の発泡を抑制するために、常法
に従って適当な消泡剤、たとえばシリコーン油を添加す
ることもできる。培養方法は、一般に行われている抗生
物質の生産方法と同じく、好気的液体培養法が最も適し
ている。培養温度は、摂氏２０〜３７度が最も適当であ
るが、摂氏２５〜３０度が好ましい。この方法でＫＲ２
８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの生産量は、振盪培養、
通気攪拌培養共に培養５日間で最高に達する。このよう
にしてＫＲ２８２７誘導体（ＫＲ２８２７ＣおよびＤ）
の蓄積された培養物が得られる。培養物中では、ＫＲ２
８２７誘導体はその一部は培養濾液中に存在するが、そ
の大部分は菌体中に存在する。このような培養物からＫ
Ｒ２８２７誘導体を採取するには、合目的的な任意の方
法が利用可能である。その一つの方法は抽出の原理に基
づくものであって、具体的には、たとえば培養ろ液中の
ＫＲ２８２７誘導体については、これをＫＲ２８２７誘
導体用溶媒（前記参照）、例えば酢酸エチルなどで抽出
する方法、あるいは菌体内のＫＲ２８２７誘導体につい
ては濾過、遠心分離などで得た菌体集体をメタノール、
エタノール、アセトンで処理して回収する方法などがあ
る。菌体を分離せずに培養物そのままを上記抽出操作に
付すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽
出の範疇に入れることができる。培養物からＫＲ２８２
７誘導体を採取する他の一つの方法は、吸着の原理に基
づくものであって、すでに液状になっているＫＲ２８２
７誘導体含有物、例えば培養濾液、あるいは上記のよう
にして抽出操作を行うことによって得られる抽出液を対
象として、適当な吸着剤、例えばシリカゲル、活性炭、
ダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学社製）などを用いて目
的のＫＲ２８２７誘導体を吸着させ、その後、適当な溶
媒にて溶離させることによりＫＲ２８２７誘導体溶液
（ＫＲ２８２７ＣおよびＤ）を得ることができる。この
様にして得られたＫＲ２８２７誘導体溶液を減圧濃縮し
乾固すれば、ＫＲ２８２７ＣおよびＤの粗標品が得られ
る。このようにして得られるＫＲ２８２７誘導体粗標品
をさらに精製するためには、上記の抽出法および吸着法
にゲル濾過法、高速液体クロマトグラフィーなどを必要
に応じて組み合わせて必要回数行えば良い。たとえば、
シリカゲルなどの吸着剤、セファデックスＬＨ２０（フ
ァルマシア社製）などのゲル濾過剤を用いたカラムクロ
マトグラフィー、ＹＭＣパック（山村化学社製）などを
用いた高速液体クロマトグラフィーを適宜組み合わせて
実施することができる。具体的には、例えば、ＫＲ２８
２７誘導体粗標品を少量のメタノールに溶解し、セミ分
取用高速液体クロマトグラフィー（山村化学社製「ＹＭ
ＣパックＤ−ＯＤＳ−７」）に付し、メタノール−水
（４：１）で展開する。各ピークを分取し、それぞれを
凍結乾燥するとＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄの
純品が得られる。
【０００９】ＫＲ２８２７誘導体の用途 本発明による化合物ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７
Ｄは、抗腫瘍活性を有するという点で有用である。 （１）生物活性 ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄは、腫瘍細胞に対
して増殖抑制活性を示した。例えばラット正常線維芽細
胞３Ｙ１を各種癌遺伝子で形質転換させた細胞を、１０
％熱非働仔牛血清および０．１％グルコースを含むダル
ベッコ変法イーグル培地中において、種々の濃度のＫＲ
２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄとともに、摂氏３７度
で３日間培養した後のＩＣ50値（ng／ml）は、第６表に
示す通りであった。
Ｄは、抗腫瘍活性を有するという点で有用である。 （１）生物活性 ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄは、腫瘍細胞に対
して増殖抑制活性を示した。例えばラット正常線維芽細
胞３Ｙ１を各種癌遺伝子で形質転換させた細胞を、１０
％熱非働仔牛血清および０．１％グルコースを含むダル
ベッコ変法イーグル培地中において、種々の濃度のＫＲ
２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄとともに、摂氏３７度
で３日間培養した後のＩＣ50値（ng／ml）は、第６表に
示す通りであった。
【表３】 （２）抗腫瘍剤 このように本発明のＫＲ２８２７誘導体は、動物の腫
瘍、特に悪性腫瘍（癌化した線維芽細胞など）に対して
抗腫瘍性を示す事が明らかにされた。したがって、本発
明化合物は、抗腫瘍剤ないし腫瘍治療剤として用いるこ
とができる。抗腫瘍剤としての本発明化合物は合目的的
な任意の投与経路で、または採用投与経路によって決ま
る剤型で、投与することができる。薬剤としては、製薬
上許容される担体ないし希釈剤で希釈された形態が普通
である。薬剤の形態としては、具体的には、注射剤、懸
濁剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、軟膏剤、クリ
ーム剤等がありうる。また、担体あるいは希釈剤の具体
例としては通常用いられる溶剤（生理食塩水など）、可
溶化剤（ポリソルベートなど）、等張化剤（果糖な
ど）、保存剤（安息香酸など）、抗酸化剤（トコフェロ
ールなど）、賦形剤（アラニンなど）、結合剤（ヒドロ
キシプロピルセルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸
マグネシウムなど）、安定剤（デキストランなど）があ
げられる。抗腫瘍剤として本発明化合物を実際に投与す
る場合には、これを注射用蒸留水または生理食塩水など
に溶解して注射する方法が代表的なものの一つとして挙
げられる。具体的には、動物の場合は、腹腔内注射、皮
下注射、静脈または動脈への血管内注射および局所投与
などの注射による方法が、ヒトの場合は、静脈または動
脈への血管内注射および局所投与などの注射による方法
がある。また動物の場合もヒトの場合も経口での投与
（上記錠剤、顆粒剤、カプセル剤など）も可能である。
本発明の化合物の投与量は、動物試験の結果および種々
の情況を勘案して、連続的または間欠的に投与したとき
に総投与量が一定量を越えないように定められる。具体
的な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の情
況、例えば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時
間、併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて
変化することは言うまでもなく、また一定条件のもとに
おける適量と投与回数は、上記指針を基として専門医の
適量決定試験によって決定されねばならない。具体的に
は、成人１日あたり２〜１００mg程度、好ましくは１０
〜５０mg程度を１〜１０回程度分割して投与することが
望ましい。
瘍、特に悪性腫瘍（癌化した線維芽細胞など）に対して
抗腫瘍性を示す事が明らかにされた。したがって、本発
明化合物は、抗腫瘍剤ないし腫瘍治療剤として用いるこ
とができる。抗腫瘍剤としての本発明化合物は合目的的
な任意の投与経路で、または採用投与経路によって決ま
る剤型で、投与することができる。薬剤としては、製薬
上許容される担体ないし希釈剤で希釈された形態が普通
である。薬剤の形態としては、具体的には、注射剤、懸
濁剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、軟膏剤、クリ
ーム剤等がありうる。また、担体あるいは希釈剤の具体
例としては通常用いられる溶剤（生理食塩水など）、可
溶化剤（ポリソルベートなど）、等張化剤（果糖な
ど）、保存剤（安息香酸など）、抗酸化剤（トコフェロ
ールなど）、賦形剤（アラニンなど）、結合剤（ヒドロ
キシプロピルセルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸
マグネシウムなど）、安定剤（デキストランなど）があ
げられる。抗腫瘍剤として本発明化合物を実際に投与す
る場合には、これを注射用蒸留水または生理食塩水など
に溶解して注射する方法が代表的なものの一つとして挙
げられる。具体的には、動物の場合は、腹腔内注射、皮
下注射、静脈または動脈への血管内注射および局所投与
などの注射による方法が、ヒトの場合は、静脈または動
脈への血管内注射および局所投与などの注射による方法
がある。また動物の場合もヒトの場合も経口での投与
（上記錠剤、顆粒剤、カプセル剤など）も可能である。
本発明の化合物の投与量は、動物試験の結果および種々
の情況を勘案して、連続的または間欠的に投与したとき
に総投与量が一定量を越えないように定められる。具体
的な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の情
況、例えば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時
間、併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて
変化することは言うまでもなく、また一定条件のもとに
おける適量と投与回数は、上記指針を基として専門医の
適量決定試験によって決定されねばならない。具体的に
は、成人１日あたり２〜１００mg程度、好ましくは１０
〜５０mg程度を１〜１０回程度分割して投与することが
望ましい。
【００１０】
（１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解してｐＨ７．２に調整したものである。 可溶性デンプン １０ｇ 廃糖蜜 １０ｇ ポリペプトン １０ｇ 肉エキス １０ｇ 上記培地１００mlを５００mlのイボ付三角フラスコへ分
注し、殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＲ２８２７
−２株をスラントより１白金耳接種し、摂氏２７度にて
３日間振盪培養したものを種母とした。 （２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分１リットルの水に溶
解して、ｐＨ７．２に調整したものである。 グリセロール ２５ｇ 廃糖蜜 １０ｇ カゼイン ５ｇ ポリペプトン １ｇ 炭酸カルシウム ４ｇ 上記培地を３０リットルずつ５０リットル容ジャーファ
ーメンターに分注殺菌したものへ、上記種母６００mlを
添加し、摂氏２７度にて４日間、２００rpm 、３０リッ
トル／分の通気攪拌培養を行った。 （３）ＫＲ２８２７誘導体の採取 上記条件での培養後、培養液（６０リットル）を濾過
し、菌体を２０リットルのアセトンで抽出した。抽出液
を濃縮後（１リットル）、１リットルの酢酸エチルで２
回抽出し、濃縮乾固した。これを１００mlのクロロホル
ムに溶解し不溶物を除いた後、シリカゲル（和光純薬製
「ワコーゲルＣ２００」）のカラム（直径６cm×長さ５
０cm）に吸着させ、ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で
溶出させた。活性フラクションを濃縮し、セファデック
スＬＨ−２０（ファルマシア社製）のカラム（直径２cm
×長さ５０cm）に付し、メタノールで展開した。得られ
た活性フラクションを濃縮後、セミ分取用高速液体クロ
マトグラフィー（山村化学社「ＹＭＣパックＤ−ＯＤＳ
−７」、直径２cm×３０cm）に付し、メタノール−水
（４：１）、流速１９．８ml／min で展開した。保持時
間２４．４分および３２．９分のピークを分取し、濃縮
乾固すると無色油状のＫＲ２８２７Ｃ（８０mg）および
ＫＲ２８２７Ｄ（５６mg）を得た。
溶解してｐＨ７．２に調整したものである。 可溶性デンプン １０ｇ 廃糖蜜 １０ｇ ポリペプトン １０ｇ 肉エキス １０ｇ 上記培地１００mlを５００mlのイボ付三角フラスコへ分
注し、殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＲ２８２７
−２株をスラントより１白金耳接種し、摂氏２７度にて
３日間振盪培養したものを種母とした。 （２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分１リットルの水に溶
解して、ｐＨ７．２に調整したものである。 グリセロール ２５ｇ 廃糖蜜 １０ｇ カゼイン ５ｇ ポリペプトン １ｇ 炭酸カルシウム ４ｇ 上記培地を３０リットルずつ５０リットル容ジャーファ
ーメンターに分注殺菌したものへ、上記種母６００mlを
添加し、摂氏２７度にて４日間、２００rpm 、３０リッ
トル／分の通気攪拌培養を行った。 （３）ＫＲ２８２７誘導体の採取 上記条件での培養後、培養液（６０リットル）を濾過
し、菌体を２０リットルのアセトンで抽出した。抽出液
を濃縮後（１リットル）、１リットルの酢酸エチルで２
回抽出し、濃縮乾固した。これを１００mlのクロロホル
ムに溶解し不溶物を除いた後、シリカゲル（和光純薬製
「ワコーゲルＣ２００」）のカラム（直径６cm×長さ５
０cm）に吸着させ、ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で
溶出させた。活性フラクションを濃縮し、セファデック
スＬＨ−２０（ファルマシア社製）のカラム（直径２cm
×長さ５０cm）に付し、メタノールで展開した。得られ
た活性フラクションを濃縮後、セミ分取用高速液体クロ
マトグラフィー（山村化学社「ＹＭＣパックＤ−ＯＤＳ
−７」、直径２cm×３０cm）に付し、メタノール−水
（４：１）、流速１９．８ml／min で展開した。保持時
間２４．４分および３２．９分のピークを分取し、濃縮
乾固すると無色油状のＫＲ２８２７Ｃ（８０mg）および
ＫＲ２８２７Ｄ（５６mg）を得た。
【００１１】
【発明の効果】本発明によるＫＲ２８２７誘導体（すな
わち、ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ）は強い抗
腫瘍作用を有している。
わち、ＫＲ２８２７ＣおよびＫＲ２８２７Ｄ）は強い抗
腫瘍作用を有している。
【図１】ＫＲ２８２７Ｃのメタノール中（２０μｇ／m
l）での紫外部吸収スペクトルを模写したもの。
l）での紫外部吸収スペクトルを模写したもの。
【図２】ＫＲ２８２７Ｄのメタノール中（２０μｇ／m
l）での紫外部吸収スペクトルを模写したもの。
l）での紫外部吸収スペクトルを模写したもの。
【図３】ＫＲ２８２７ＣのＫＢｒディスク法による赤外
吸収スペクトルを模写したもの。
吸収スペクトルを模写したもの。
【図４】ＫＲ２８２７ＤのＫＢｒディスク法による赤外
吸収スペクトルを模写したもの。
吸収スペクトルを模写したもの。
【図５】ＫＲ２８２７Ｃの重クロロホルム中における５
００メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
００メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
【図６】ＫＲ２８２７Ｄの重クロロホルム中における５
００メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
００メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
【図７】ＫＲ２８２７Ｃの重クロロホルム中における１
２５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
２５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
【図８】ＫＲ２８２７Ｄの重クロロホルム中における１
２５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
２５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写し
たもの。
Claims (3)
- 【請求項１】次式（Ｉ）で示される新規物質ＫＲ２８２
７誘導体。 【化１】 （式中、Ｒはメチル基またはエチル基を表す） - 【請求項２】ストレプトミセス属に属しＫＲ２８２７誘
導体の生産能を有する菌株を培養して該誘導体を産生さ
せ、その培養物よりＫＲ２８２７誘導体を採取すること
を特徴とする、請求項１記載の化合物の製造法。 - 【請求項３】請求項１記載の化合物を有効成分として含
んでなる抗腫瘍剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4456695A JPH08239379A (ja) | 1995-03-03 | 1995-03-03 | 新規物質ｋｒ２８２７誘導体、その製造法および使用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4456695A JPH08239379A (ja) | 1995-03-03 | 1995-03-03 | 新規物質ｋｒ２８２７誘導体、その製造法および使用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08239379A true JPH08239379A (ja) | 1996-09-17 |
Family
ID=12695055
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4456695A Pending JPH08239379A (ja) | 1995-03-03 | 1995-03-03 | 新規物質ｋｒ２８２７誘導体、その製造法および使用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08239379A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004045602A1 (ja) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Japan Science And Technology Agency | マトリックスメタロプロテアーゼ−9の産生を阻害するための薬剤 |
| WO2009008508A1 (ja) | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Microbial Chemistry Research Foundation | スルフォスチン、及びスルフォスチン関連化合物を有効成分とした抗腫瘍剤 |
| CN114540212A (zh) * | 2020-11-26 | 2022-05-27 | 浙江珲达生物科技有限公司 | 一种链霉菌及其发酵产乐普霉素b的方法 |
-
1995
- 1995-03-03 JP JP4456695A patent/JPH08239379A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004045602A1 (ja) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Japan Science And Technology Agency | マトリックスメタロプロテアーゼ−9の産生を阻害するための薬剤 |
| WO2009008508A1 (ja) | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Microbial Chemistry Research Foundation | スルフォスチン、及びスルフォスチン関連化合物を有効成分とした抗腫瘍剤 |
| CN114540212A (zh) * | 2020-11-26 | 2022-05-27 | 浙江珲达生物科技有限公司 | 一种链霉菌及其发酵产乐普霉素b的方法 |
| CN114540212B (zh) * | 2020-11-26 | 2023-11-03 | 浙江珲达生物科技有限公司 | 一种链霉菌及其发酵产来普霉素b的方法 |
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