JPH02229189A - 新規物質イノスタマイシン、その使用および製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 技術分野 本発明は新規物質に関し、より具体的にはイノシトール
リン脂質代謝回転阻害活性および抗腫瘍活性を有する新
規生理活性物質イノスタマイシンに関する。

先行技術 抗腫瘍性物質に関しては既に多数のものが医薬として実
用化されているが、これらは薬効および副作用の点て必
ずしも満足できるものではなく、より優れた新規な抗腫
瘍物質に関しては不断の希求があるのが現状である。

なわち、本発明による抗腫瘍剤およびイノシトールリン
脂質代謝回転阻害剤は、次式（１）で示される化合物イ
ノスタマイシンまたはその塩を有効成分とするものであ
る。

本発明は、更にまた、この物質の製造法に関する。すな
わち、本発明による次式（Ｉ）で示される化合物イノス
タマイシンの製造法は、ストレプトミセス属に属し、イ
ノスタマイシンの生産能を有する菌株を適当な培地で好
気的に培養し、その培養物よりイノスタマイシンを得る
こと、を特徴とするものである。

また、イノシトールリン脂質代謝回転は、種々の細胞増
殖因子やｒａＳ，ＳｒＣ等の癌遺伝子によって活性化さ
れる細胞内情報伝達機構であり、この活性化が細胞増殖
や癌化に密接に関与していると考えられる〔ザイエンス
（Ｓｃｉｅｎｃｅ．　２３１　４０７〜４１０　（１９
８６））、〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリ−（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　２６１　４
９７８〜　４９８５　（１９８Ｂ）　〕。それゆえ、イ
ノシトールリン脂質代謝回転の阻害物質は、制癌活性が
期待され、更に細胞増殖の機構解明の道具あるいは試薬
としても有用である。

〔発明の概要〕 要旨 本発明は上記の希求に応えることを目的とし、新規物質
イノスタマイシンを提供することによりこの目的を達成
しようとするものである。

すなわち、本発明による化合物イノスタマイシンは、次
式（Ｉ）で示されるものである。本発明は、また、この
化合物の塩にも関するものである。

本発明は、また、この物質の使用に関する。す坊一呈 本発明による新規物質イノスタマイシンおよびその塩は
、抗腫瘍活性と共にイノシトールリン脂質代謝回転阻害
活性を有しており、抗腫瘍剤として有用であると共に、
イノシトールリン脂質代謝回転阻害剤として、すなわち
癌化あるいは動脈硬化などにおける細胞増殖の機構解明
の手段として、有用である。

〔発明の具体的説明〕

新規物質イノスタマイシン 化学構造 本発明による新規物質イノスタマイシンは、前記の式（
Ｉ）で示される化学構造を有する。

イノスタマイシンの化学構造は、プロトン核磁気共鳴ス
ペクトル、炭素１３核磁気共鳴スペクトル、赤外部吸収
スペクトル、質量分析スペクトルを詳細に検討すること
によって前記の通り決定された。

物理化学的性状 以下にイノスタマイシン・ナトリウム塩の物理化学的性
状を示す。

（１）外　　観　無色結晶 （２）比旋光度　＋２．４度（ｃｏ．５ＣＨＣ１３） （３）溶解性　メタノール、エタノール、クロロホルム
、アセトンに可溶、水、ヘキサンに難溶。

（４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４」
使用） クロロホルムーメタノール（２０　：　１）０．４３ （５）マススペクトル（ＳＩＭＳ）　　ｍ／ｚ７２３（
Ｍ＋Ｎａ） 赤外部吸収スペクトル　第１図に示す。

プロトン核磁気共鳴スペクトル　第２図に示す。

す。

（９）分子式 （１０）元素分析 実験値 Ｃ：６２． Ｈ：９． ０：２４． Ｎａ：　　３． （ｌ１）融　　点 炭素１３核磁気共鳴スペクトル　第３図に示Ｃ３８Ｈ６
７０１１Ｎａ 計算値 ９９％　　Ｃ：６３．１３％ ３７％　　Ｈ：９．３４％ １１％　　Ｏ：２４．３４％ ５４％Ｎａ：３．１８％ １８１−１８２℃ （　Ｃ　ｓｇＨ　８７０　１１Ｎ　ａ　）として本発明
による化合物は遊離のカルボキシル基を有するから、そ
の塩が存在する。その場合の塩としては、例えばナトリ
ウム、カリウム、ルビジウムなどのアルカリ金属、ある
いはカルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属
、などの金属塩類、アンモニウム塩、あるいはアミン塩
がある。

イノスタマイシンの製造 概要 イノスタマイシンは現在のところ微生物の培養によって
のみ得られているが、類縁化合物の合成化学的修飾によ
って製造することも、あるいは全合成化学的に製造する
こともできよう。また、遺伝子工学的手法によることも
できよう。即ち、イノスタマイシン産生遺伝子を適当な
微生物に組み込み、この様な形質転換微生物を培養し、
この培養物から得ることも可能である。

微生物の培養による場合の菌株としては、例えばストレ
プトミセス属に属するイノスタマイシン生産能を有する
ものが使用される。具体的には、本発明者らの分離した
ストレプトミセス・エスピ−ＭＨ８１６−ＡＦ１５がイ
ノスタマイシンを生８　一 産することが本発明者等によって明らかにされているが
、その他の菌株については、抗生物質生産菌単離の常法
によって適当なものを自然界より分離することが可能で
ある。また、ストレプトミセス・エスビーＭＨ８１６−
ＡＦ１５を含めてイノスタマイシンの生産菌を放射線照
射その他の変異処理に付して、イノスタマイシンの生産
能を高める余地も残されている。更に遺伝子工学的手法
によるイノスタマイシンの生産も可能であることは前記
したところである。

生産菌ＭＨ８１６−ＡＦ１５株 イノスタマイシン生産能を有するストレプトミセス属の
菌株として本発明者らの見出しているＭＨ８１６−ＡＦ
１５株は、下記の内容のものである。

１．由来および寄託番号 この生産菌は、昭和６０年１０月に、財団法人微生物化
学研究所によって、世田谷区等々力の土壌より分離され
た放線菌でＭＨ８１６−ＡＦ１５の菌株番号が付された
。

このＭＨ８１６−ＡＦ１５株は、昭和６３年１１月２２
日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて［微
工研菌寄第１０３９８号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１　０３９
８）］の番号を得ている。

２．菌学的性状 ＭＨ８　１．　６−ＡＰ　１　５株の菌学的性状は、以
下のとおりである。

１）形態 ＭＨ８１６−ＡＰ１５株は顕微鏡下で分技した基中菌糸
より気菌糸を伸長する。気菌糸は螺旋を形成し、輪生技
及び胞子嚢は認められない。成熟した胞子は約０．６〜
０．７Ｘ０．７〜１．０ミクロン位の大きさを示し、そ
の表面はとげ状であり、胞子の連鎖は１０〜５０個程度
である。

２）各種培地における生育状態 ＭＨ８１．６−ＡＦ　１．５株を各種培地で培養した結
果は（１）〜（１４）に示すとおりである。なお、色の
記載について〔　〕内に示す標準は、コンティナー・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔａ］ｎｃｒ
　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｒ／ｍｅｒｉｃａ）のカ
ラ＊　ハー　モニー　●７−ユアル（Ｃｏｌｏｒ　ｈａ
ｒｍｏｎｅｙ＋ｎａｎｕａｌ）を用いた。

（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７゜Ｃ培養）
無色〜うす黄Ｎ　Ｉ／２　ｉｃ，　Ｌｔ　Ａｎｔｉｑｕ
ｅ　Ｇｏｌｄ　）の発育上に、白〜明るい灰（２ｄｃ，
　Ｎａｔｕｒａｌ　〕の気菌糸を着生する。溶解性色素
は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
） 少量のうす黄　１：１　］／２　ｅａ，　Ｌｔ　Ｙｅｌ
ｌｏｗ　〕の発育上に、うず黄［：１　１／２　ｅａ．
，　Ｌｔ　Ｙｅｌｌｏｗ　〕の気菌糸をうつすらと着生
ずる。溶解性色素は認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ培地
５、２７゜Ｃ培養） 黄茶［４ｐｅ，　Ｏｒａｎｇｅ　Ｒｕｓシ−４ｎｅ，　
ＬｕｇｇａｇｅＴａｎ　］の発育上に、うす黄〔ｌ　Ｉ
／２　ｅａ，　ＬｔＹｅｌｌｏｗ）−明るい灰［２ｄｃ
，　Ｎａｔｕｒａｌ　）の気菌糸を着生する。溶解性色
素は認められない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ一培地４、１
〕 ２７℃培養） 無色のわずかな発育」二に、白〜明るい灰［２ｄｃＮａ
Ｌｕｒａｌ　］の気菌糸を着生ずる。溶解性色素は認め
められない。

（５）チロンン寒天培地（Ｉ　ＳＰ一培１ｔ！！７、２
７℃培養） 暗い黄Ｄｐｇ，　Ｇｏｌｄｅｎ　Ｂｒｏｗｎ）−黄茶Ｃ
４ｐｇＤｋ　Ｌｕｇｇａｇｅ　Ｔａｎｌの発育上に、黄
味白（１１／２ｅａＬｔ　Ｙｅｌｌｏｗ　）−明るい灰
［２ｃｂ，　Ｉｖｏｒｙ　Ｔｉｎｌｊの気菌糸を肖生ず
る。溶解性色素は認められない。

（６）栄養寒天培地（２７゜Ｃ培養） 黄［２ｐｃ，　Ｂｒｉｔｅ　ｇｏｌｄｌの発育上に、黄
味白Ｃ２ｃａ　　Ｌｔ　Ｉｖｏｒｙ）の気菌糸を着生す
る。溶解性色素は認められない。

（７）イースト・麦芽寒天培地（Ｉ　ＳＰ−培地２、２
７゜Ｃ培養） 暗い黄［３ｐｃ，　Ａｍｂｅｒ　〕〜黄茶［４　ｎｅ．
ｌ−ｕｇｇａｇｅＴａｎ　］の発育］二に、明るい灰［
１　ｄｃ，　Ｐｕｔｔｙ　〕の気菌糸を比較的豊富に着
生する。溶解性色素は認められない。

〕２　ー （８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７゜
Ｃ培養） 無色〜うす黄（　１．　ｌ．／２　Ｃａ，　Ｃｒｅａｎ
＋　３の発育上に、白〜明るい灰［２ｄｃ，　Ｎａｔｕ
ｒａｌ　］の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められ
ない。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７゜Ｃ培養）発
育は黄［２ｎｃ：　Ｂｒｉｔｅ　Ｇｏｌｄ）　−にぶ黄
［］．　ｌ．／２　ｎｃ：　Ｇｏｌｄ：ｌであり、気菌
糸は着生しない。

溶解性色素も認められない。

（１０）スターチ寒天培地（２７℃培養）生育は非常に
悪く、無色の発育上にほんのわずかに白の気菌糸を着生
する。溶解性色素は認められない。

（１１）リンゴ酸石灰寒天培地（２７゜Ｃ培養）発育は
極めて悪く無色であり、気菌糸は着生しない。溶解性色
素も認められない。

（１２）セルロース（冫戸紙片添加合成液、２７℃培養
）培養後２１日間観察したか、生育は認められなかった
。

（１３）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）、グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）共に、発育は無
色〜うす黄であり、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認
められない。

（ｌ４）脱脂牛乳（３０℃培養） ３７℃培養では３週間の観察でも生育は認められない。

３０℃培養では、発育はうす黄であり、気菌糸は着生せ
ず、溶解性色素も認められない。

３）生理的性質 （１）生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコス］，０％
、Ｌ−アスパラギン０．０５％、Ｋ２ＨＰＯ４　０．０
５％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）を用い、２０゜Ｃ
１２４゜Ｃ１２７℃、３０°０１３７℃および５０°Ｃ
の各温度で試験した結果、３７℃および５０℃以外の温
度で発育したが、生育至適温度は、２７℃〜３０℃付近
と思われる。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７゜
Ｃ培養） １５％単純ゼラチン培地では、培養後２１日間観察した
が、液化を認めなかった。

グルコース・ペブトン・ゼラチン培地では、培養後１４
日目頃から液化が始まったが、その作用は弱いものであ
る。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養）スターチ
・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに培養後２１
日間観察したが、氷解性は認められなかった。

（４）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化（脱脂牛乳、３０℃
培養） 前項に記載したように、本菌株は３７゜Ｃで生育を認め
ず、３０’Ｃ培養で試験した。

３０℃では培養後３日目頃より生育が始まり、１４日目
頃より凝固が認められる。凝固開始と同時にペプトン化
が認められた。その作用は中等度〜弱い方である。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、ＩＳＰ一培地１、ペプトン・イースト鉄寒天培
地、ＩＳＰ＝培地６、チロシン寒天培地、ＩＳＰ一培地
７、いずれも２７℃培養）いずれの培地でも陰性である
。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ＩＳＰ一培地９、２７℃培養）Ｄ−グルコース、ラ
ムノース、イノシトールを利用して生育する。Ｄ−キシ
ロースは利用しない。

Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース、シュクロス、ラ
フィノース、Ｄ−マンニトール、ラクトスはおそらく利
用しないと思われる。イノシトールを利用して非常に良
く生育するのは、本菌株の特徴であろう。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２７゜
Ｃ培養） 前項に記載したように、培養後２１日間観察したが生育
は極めて悪く、リンゴ酸石灰の溶解は認められなかった
。

１６　一 （８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリ含有ペプト
ン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）培養後７日目、１
４日目、２１日目のいすれも陰性である。

（９）セルロースの分解（冫戸紙片添加合成液、２７℃
培養） 前項に記載したように、生育を認めなかった。

以上の性状を要約すると、ＭＨ８１６ ＡＦ１５株の気菌糸は、螺旋を形成し、輪生技及び胞子
嚢は認められない。成熟した胞子鎖は１０〜５０個程度
の胞子を着生し、その表面はとげ状を呈する。

種々の培地でうす黄〜黄茶の発育上に、うす黄〜明るい
灰の気菌糸を着生する。溶解性色素はいずれの培地でも
認められず、メラニン色素の生成も陰性である。蛋白分
解力は、中等度〜弱い方で、スターチの氷解性、硝酸塩
の還元反応も認められない。Ｄ−グルコース、ラムノー
ス、イノシトルを利用して生育し、なかでもイノシトー
ルの利用は顕著であった。

なお、細胞壁に含まれる２．６−ジアミノピメリン酸は
ＬＬ型である。

これらの性状より、ＭＨ８１６−ＡＦ１５株は、ストレ
プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に属する放線
菌と考えられる。本菌株に類似の既知菌種を検索したが
、該当するものを見川せず、気菌糸の形態、及びメラニ
ン色素を生成しない性質に主眼をおいて、類似する４種
の閑について検討した。すなわち、ストレプトミセス・
ナタレンンス （ＳＬｒｃｐＬｏｍｙｃｅｓ　　ｎａｔａｌｃｎｓｉｓ
，文献Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ
　　ｏｆ’　　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ，　２　２巻、３２３頁、１９７２年、特許公
報昭和３６−１０６９６）　、ストレプトミセス・ビリ
ドジアスタテイクス（　Ｓｔ　ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｖ
ｉ　ｒｉｄｏｄｉａｓＬａＬｉｃｕｓ，文献１ｎｔｅｒ
ｎａｔ＋Ｏｎａ＋Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　ＳｙｓＬｅｍ
ａＬｉｃ　１３ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，　１　９巻、
５００頁、１９６９年）、ストレプトミセス・アルハダ
ンクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ａｌｂａｄｕｎ
ｃｕｓ，文献Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｒＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｔｏ＋ｏ
ｇｙ　，　２　２巻、２６９頁、１９７２年）及びス１
・レプトミセス・グリゼオフラブス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　　ｇｒｉｓｅｏｆ’ｌａｖｕｓ，文献Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｙｓｔ
ｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、１９巻、４３
３頁、１９６９年）である。このうち、ＭＨ８１６−Ａ
Ｆ１５株とストレプトミセス・ナタレンシス以外の菌と
は、気菌糸及び発育の色、糖の利用等より、明確に区別
される。又、最も類似していると思われるストレプトミ
セス・ナタレンシスについては、種々の性状を比較検討
し、その結果が次表に示されている。

表から明らかな様に、ＭＨ８１６−ＡＦ１５株とストレ
プトミセス・ナタレンシスはスターチの加水分解、蛋白
分解作用、硫酸塩の還元反応及びラムノース、Ｄ−マン
ニトール、ラク１・−スの利用等の点で大きく異なって
いる。

よって、ＭＨ８　１．　６−ＡＦ　Ｌ　５株をス１・レ
プ１・ミセス●エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
ｓｐ．）　ＭＨ８］６−ＡＦ］５と命名するものとする
。

培養／イノスタマイシンの生産 イノスタマイシンは、ストレプトミセス属に属するイノ
スタマインン生産菌を適当な培地で好気的に培養し、そ
の培養物から目的物を採取することによって製造するこ
とが出来る。培地は、イノスタマイシン生産菌か利用し
うる任意の栄養源を含有するものでありうる。具体的に
は、例えば、炭素源としてグルコース、ガラクトース、
グリセロール、デキストリン、シュークロース、マルト
ス、スターチおよび油脂類などが使用でき、窒素源とし
て大豆粉、綿実粕、乾燥醇母、酵母エキスおよびコーン
スティープリカーなどの有機物並びにアンモニウム塩ま
たは硝酸塩、例えば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム
および塩化アンモニウムなとの無機物が利用できる。ま
た必要に応して、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩
化カリウム、燐酸塩、重金属塩なと無機塩類を添加する
ことができる。醗酵中の発泡を抑制する為に、常法にし
たかって適当な消泡剤、例えばシリコーン油を添加する
こともできる。

培養方法としては、一般に用いられている抗生物質の生
産方法と同じく、好気的液体培養法か最も適している。

培養温度は２ｔＤ−３０９Ｃが適当であるが、２５−３
０°Ｃが好ましい。この方法でイノスタマイシンの生産
量は、振とう培養、通気攪はん培養共に培養６日間で最
高に達する。

このようにして、イノスタマイシンの蓄積された培養物
が得られる。この培養物中では、イノスタマインンは培
ａ＞戸液中にも菌体にも存在する。

このような培養物からイノスタマイシンを採取するには
、合口的的な任意の方法が利用可能である。そのひとつ
の方法は抽出の原理に基づくものであって、具体的には
、培養冫戸液中のイノスタマイシンについてはこれを水
不混和性のイノスタマイシン用溶剤、例えば酢酸エチル
なとで抽出する方法、あるいは菌体内のイノスタマイン
ンについては遠心分離なとで得た菌体集体をメタノール
、アセトンなとで処理して同収する方法などかある。

菌体を分離せずに培養物そのままを上記の抽出操作に付
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範ちゅうに入れる事かできる。

培養物からイノスタマイシンを採取する他のひとつの方
法は吸着の原理に基づくものてあっ−Ｃ、既に液状とな
っているイノスタマイシン含有物、例えば培養冫戸液あ
るいは上記のようにして抽出操作を行なうことによって
得られる抽出液、を対象として、適当な吸着剤、例えば
シリカゲル、活性炭なとを用いて口的のイノスタマイシ
ンを吸るさせ、その後、適当な溶媒にて溶離させること
によってイノスタマイシンを得る事かできる。このよう
にして得られたイノスタマイシン溶液を減圧濃縮乾固す
れば、イノスタマイシン粗標品が得られる。

このようにして得られるイノスタマイシンの粗標品を更
に精製する為には、上記の抽出法および吸着法にゲル枦
過法、高速液体クロマ１・グラフィ、自流分配法などを
必要に応して組み合わせて必要回数行なえばよい。具体
的には、例えば、イノスタマイシン粗標品をヘキザン−
アセトニトリル系で向流分配クロマ１・グラフィーを行
なうことによりイノスタマイシンの純品が得られる。

イノスタマイシンの用途 本発明による化合物イノスタマイシンは、抗腫瘍活性お
よびイノシトールリン脂質代謝回転阻害活性を有すると
いう点で有用である。

生物活性 イノスタマイシンは、腫瘍細胞に対して細胞増殖抑制活
性を示した。例えばマウス白血病細胞Ｌ　１　２　］−
　０細胞を５Ｘ１０４個／ｍｌとなるように１０％仔牛
血清を含むＲＰＭＩ　　１．６４０培地に浮遊させ、種
々の濃度のイノスタマイシンと共に３７°Ｃて２口間培
養した後の■Ｃ５ｏ値は、０．１７μｇ　／　ｍ＋であ
った。またイノスタマイシンは、イノシトールリン脂質
代謝回転、すなわち癌遺伝子や増殖因子により活性化さ
れ細胞増殖、癌化および癌形質の維Ｆ，＋７に重要な役
割を演じている代謝回転、をも阻害する。例えば３Ｘ１
０”個／ｍ＋となるようなヒト上皮性力ルシノーマ細胞
Ａ４３１は、上皮性細胞増殖囚子ＥＧＦによりイノシト
ールリン脂質代謝回転が急速に促進される〔バイオケミ
ストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２０　［ｉ２８
０−Ｅｉ２ｇＢ　（１９８１）　）。イノスタマインン
は濃度依．存的にこのイノシトールリン脂質代謝回転を
阻害し、ＩＣ５ｏ値は０．５２μｇ／ｍｌであった。

一方ＩＣＲマウスの皮下に２×１０６個／マウスのエー
リッヒ・カルシノーマ細胞を移植し、移植１日後より本
発明によるイノスタマイシンの溶液を０．２５’ｍｌず
つ９日間腹腔内に注射した。

１５日目に固形癌重量を測定し、その結果が下表に示さ
れている。

投与量　　　結　　果 μｇ／マウス／日　固形癌重７４　（ｍｇ＝！：ＳＤ）
　　阻害率（％）０　　　　　　　　１１６４±２９５
　　　　　００．９８　　　　　　５８７±２９６　　
　　４９３．９　　　　　　　５３７±２８９　　　　
　５３１５．６　　　　　　　３７２＋１６９　　　　
　６８６２．５　　　　　　　４０１±１３７　　　　
　６５イノスタマイシン投与群では、０．９８〜６２．
５１１ｇ／マウス／日で制癌効果が示されている。

上記のように、本発明によるイノスタマイシンは、抗腫
瘍性およびイノシトールリン脂質代謝回転阻害活性を示
すことが明らかにされた。従って、本発明によるイノス
タマイシンは抗腫瘍剤およびイノシトールリン脂質代謝
回転阻害剤として使用することができる。また本発明に
よる化合物は、このイノシトールリン脂質代謝回転阻害
活性によって、動脈硬化などの循環器系疾患などの治療
剤として使用できる可能性をも有している。

抗腫瘍剤 抗腫瘍剤としての本発明化合物は合Ｉ］的的な任意の投
与経路で、また、採用投与経路によって決る剤型で、投
与することができる。薬剤としては、製薬上許容される
担体あるいは希釈剤で希釈された形態が普通である。

抗腫瘍剤として本発明化合物を実際に投与する場合には
、これらを注射用蒸溜水または生理食塩水に溶解して注
射する方法か代表的なもののひとつとして挙げられる。

具体的には、動物の場合には腹腔内注射、皮下注射、静
脈または動脈への血管内注射および注射による局所投与
なとの方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内
注射または注，射による局所投与などの方法かある。

本発明化合物の投与量は、動物試験の結果および種々の
状況を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに
総投与量が一定量を越えないように定められる。具体的
な投与間は、投与方法、患者または被処理動物の状況、
たとえば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、
併用する薬剤、２７　一 患者またはその病気の程度に応じて変化することは言う
までもなく、また一定の条件のもとにおける適量と投与
回数は、上記指針をちととして専門医の適量決定試験に
よって決定されなければならない。具体的には、成人一
日あたり、０．００１〜０．１ｇ程度である。

イノシトールリン脂、質代謝回転阻害剤イノシトールリ
ン脂質代謝回転阻害剤としての本発明化合物は、癌化あ
るいは動脈硬化などにおける細胞増殖の機構解明のため
の試薬として用いられると共に、動脈硬化などの循環器
系疾患の治療剤として使用できる可能性を有しているも
のであり、該試薬に用いる場合には、たとえば癌細胞、
動脈硬化組織細胞などの増殖の活発な細胞の培養液中に
、必要に応じて種々の細胞増殖因子（例えばＥＧＦＳＰ
ＤＧＦなど）と組み合わせて、そのまま、あるいは安定
剤などを加えた水溶液あるいは粉末などの形態で任意の
濃度で加えるなどして用いることができる。

実験例 実施例 １）種母の調整 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解してｐＨ７．４に調整したものである。

ガラクトース　　　　　　２０ｇ デキストリン　　　　　　２０ｇ バクトソイトン　　　　　１０ｇ コーンスティーブリ力−　　５ｇ 硫酸アンモニウム　　　　　２ｇ 炭酸カルシウム　　　　　　２ｇ （殺菌前　ｐＨ７．４） 上記培地１００ｍｌを５００ｍｌのイボ付き三角フラス
コヘ分注し、殺菌後、ストレプトミセス・エスピーＭＨ
８１　６−ＡＦ１　５をスラントより１白菌耳接種し、
３０℃にて５目間振とぅ培養したものを種母とした。

２）使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの
水に溶解して、ｐＨ７．４に調整したちのてある。

グリセロール　　　　　　２０ｇ デキス１・リン　　　　　　２０ｇ バクトソイトン　　　　　　コＯｇ イーストエキス　　　　　　３ｇ 硫酸アンモニウム　　　　　２ｇ 炭酸カルンウム　　　　　　２ｇ （殺菌前　ｐＨ７．４） 上記培地１１０ｍｌを５００ｍｌ溶三角フラスコに分注
殺菌した物へ、上記種母３％を添加し、２７℃にて６日
間培養を行なった。

３）イノスタマイシンの採取 上記の条件で培養後、培養液（５リットル）を罎過し、
冫戸液を等量の酢酸エチルで抽出する。菌体はアセトン
で抽出後、アセトンを除き酢酸エチルで抽出し、酢酸エ
チル層を集め濃縮乾固する。

これを少量のクロロホルムに溶解し、不溶物を除いた後
、シリカゲル（メルク社製「キーゼルゲル」）のカラム
（４　ｃｍφＸ１．５ｃｍ）に吸着させ、クロロホルム
ーメタノール（１００：１）で溶出する。活性フラクシ
ョンを濃縮乾固し、アセＩ・ニトリルを添加し、その不
溶性画分をヘキサンージク口口メタンで結晶化すること
によりイノスタマイシンの結晶４２．２ｍｇを得る。

【図面の簡単な説明】

第１図はイノスタマイシン●ナトリウム塩のＫＢｒディ
スク法による赤外吸収スペクトルを模写したものである
。 第２図及び第３図はそれぞれイノスタマイシン・ナトリ
ウム塩の重クロロホルム中における５００ＭＨｚプロト
ン及び１２５ＭＨｚ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模
写したものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）で示される化合物イノスタマイシンま
   たはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ２、次式（ I ）で示される化合物イノスタマイシンま
   たはその塩を有効成分とするイノシトールリン脂質代謝
   回転阻害剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ３、次式（ I ）で示される化合物イノスタマイシンま
   たはその塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ４、ストレプトミセス属に属し、イノスタマイシンの生
   産能を有する菌株を適当な培地で好気的に培養し、その
   培養物より化合物イノスタマイシンを得ることを特徴と
   する、次式（ I ）で示されるイノスタマイシンの製造
   法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）