JPS59148795A - アントラサイクリン化合物、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、新規なアントラサイクリン化合物、その製造
法およびその用途に関する。

制癌抗生物質としてのアントラサイクリン化合う 物は医薬として重要な位置を占めており、既に各種のも
のが提案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが大きいから、アントラサイクリン化合物につい
てもそのアグリコン部分および糖鎖部分の糖の種類また
は置換基において既存のものと異なる化合物に対しては
不断の希求があるといえよう。

発明の重要 本発明は、上記の希求に応えろものである３、すなわち
、本発明によるアントラサイクリン化合物セリルビシン
（５ｅｒｉｒｕｂｉｃｉｎ　）または酸付加塩は、式（
１）で示されるものまたはその酸付加塩である。

本発明によるアントラサイクリン化合物セリルビシンの
製造法は、適当な培地にストレプトミセス属のセリルビ
シン生産能を有する菌株を好気的に培養し、培養物から
本化合物ｋ＝採取すること、を特徴とす・るものである
。

本発明による抗原瘍剤は、式（１）で示されるアントラ
サイクリン化合物セリルビシンまたはその酸付加塩を有
効成分とするものである。

本発明によるダラム陽性菌感染症治療剤は、式（１）で
示されろアントラサイクリン化合物セリルビシンまたは
その酸付加塩を不動成分とするものである１゜ （式中Ｒは 本発明によるアントラサイクリン化合物であるセリルビ
シンは、式（１）で示される化学＄、ＭＪを有する１、
セリルビシンはその糖部分にジメチルアミノ基を有する
から、セリルビシンは酸付加塩をつくることができる。

付加塩をつくるべき酸としては、ハロゲン化水素酸類（
たとえば塩酸）、硫酸、酒石酸等がある。

化学構造の決定 セリルぎシンを０．ＩＮ塩酸に溶解後、８５℃で３０分
間加温することにより加水弁胴し、たものを、クロロホ
ルムで抽出することにより、黄色のアグリコンヲ得た。

得られたアグリコンは、シリカゲルプレート上でのＲｆ
値、マススペクトルＣ％３７０（Ｍり）、核磁気共ｌ′
１時スペクトル（第１図）、紫外部可視部吸収スペクト
ル（第２図）および融点（１３５°±２℃）、よりＨａ
ｎｓ　Ｂｒｏｃｋｍａｎｎ　　らが報告（Ｃｈｅｍｉｓ
ｃｈｅ　Ｂｅｒｉｃｈｔｅ　１０１．１３４１〜１３４
８　（１９６８））しているα−シトロマイジノン（α
−０１ｔｒｏｍｙｃｉｎｏｎｅ：式（２））であること
が判った。

α−シトロマイジノン 一方、加水分解後の水溶性部分を炭酸銀で中和後、シリ
カゲルプレート上で（ｎ−ブタノール：酢酸：水−４：
　１’　：　１　）の溶媒系で展開して、構成糖を調べ
た。糖の同定は、ｐ−アニスアルデヒド−硫酸を展開後
のシリカゲルプレートに噴霧し、８０℃で約５分間加熱
後の発色■、たスポットの色調、および標Ｗ拭料とのＲ
ｆ値の比較、により行った。

その結果、セリルビシンの構成糖は、ロドプシン、２−
デオキシフコースおよびシネルロースＢであり、かつそ
れらがは′ぼ等モルづつ含まれていることが判った。

次に、５％Ｐｄ　／　ＢａＳＯ４を触媒とＬ２て常温常
圧で３θ分間接触青元を行なったところ、セリルピシン
カラシネルロースＢ、２−デオキシフコ、−スオよびロ
ドプシンからなるトリサツカライドの遊離が認められた
。一方、この反応により得られた、新たな黄色のグリコ
サイドをシリカゲルプレートを用いて精製した。このグ
リコサイドは、ＦＤ−マススペクトルにより％７５２（
Ｍ＋１・）のピークが得られたことおよび塩酸加水分解
で措成成分を調へろとｒ−シトロマイジノン、ロドプシ
ン、２−デ万キシフコースおよびシネルロースＢである
ことが判り、式（３）に示寸様なアントラサイクリン・
グリコシドであることが判った。

以上の結果ならびに本発明の化学物質の赤外吸収スペク
トル（第４図）、ＮＭＲスペクトル（第５図〕、および
ＦＤ−マススペクトルで％１１６５（Ｍ＋１１）のピー
クが得られブこことより、セリルビシンの構造は式（１
）の通りに決定さねた。

何）外　観　　黄色粉末 （ロ）元素分析値（％） 実験値　０：６０，７１　　　　Ｈ：　　７，１５Ｎ　
：　　２．４０　　　０　：　２９，７４計算値　０：
６１，８４　　　　Ｈ：６゜９２Ｎ　：　　２．４０　
　　０　：　２８，３３（但し　Ｃ６ＯＨ８ｏＮ２０２
、として）（ハ）分子量　　１１６５．２９ に）融点　１６５〜１６９℃ （ホ）比旋光度　〔α’］＝−５２°±３°（Ｃ：０．
１．０ＨＣ１３中）（へ）紫外部可視部吸収スペクトル
（メタノール中）第３図に示した通りであり、またその
内容は第１表に示し、た）うりである。

第１表 一−バ１シ上□□七□−一一一一−−一〜（ト）赤外線
吸収スペクトル（Ｋ　Ｂｒ　錠）第４図（（示した通り
である。

（ホ）核磁気共鳴スペクトル（２５０ＭＨｚｉクロロホ
ルム中） 第５図に示した通りである。

（す）溶解性 セリルビシンはメタノール、アセトン、酢酸エチル、ク
ロロホルム、アセトニトリルおよびジメチルスルホキシ
）”　（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ）　Ｋ　可溶、ｙｋ、ｎ−一＼
キサン、石油エーテルには難溶である。なお、セリルビ
シンはメタノール溶液では黄色を呈しているが、アルカ
リ性溶液では赤紫色を呈する。

し）その他 セリルビシンはニンヒドリン反応は陰性で、フェーリン
グ溶液を還元゛しなｌハ。

なお、セリルビシンのシリカゲルプレート上で各種溶Ｕ
系で展開した際のＲｆ値は第２表に示した通りである。

第２表 １）概要 アントラサイクリン化合ノ吻セリルビシンは現在のとこ
ろ微生物の培養ｒ（よってのみしか得られてい７（いが
、炉縁ｆヒ合物の合成「ヒ学的または微生物学的修飾に
よって製造することも、あるいは全合成化学的に製造す
ることもできょう。

微生物の培養による場合の菌株としては、ストレプトミ
セス属に属するアントラサイクリン化合物セリルビシン
生成能を有するものが使用されろ。

具体的には、本発明者らの分離したストレプトミセス・
シアネウスＭＧ３４４−　ｈ７４９　株がセリルビシン
を生産することが本発明者らによって明らかにされてい
るが、その他の菌株については抗生物質生産、７″−５
単喘の常法によって適当なものを自然界より分ｌ！′１
することが回部である。また、Ｓ、シアネウスＭＧ３４
４−　］ＩＦ、！９株を角めてセリルビシン生産菌を放
射線処理その他の処理に付して、セリルビシン生産龍を
高める余地も残されている。

２　）　　ＭＧ３４４−１１Ｆ４ｇ株 アントラサイクリン化合物セリルビシン生産能を有する
ストレプトミセス属の菌株とし、て木発明者ｐ）の見出
ｔ、でいろＭＧ、３４４−　ｈＦ　４．９　；昧は、下
記の内容のものである。

（１）由来および寄託番号 Ｓ、シアネウスＭＯ３１Ｌ−１−ｈＦ　４９株は昭和５
５年８月に微生物化学研究所において構内の土塊より分
離された放線菌であって、昭和５７年６月２８日に工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託されて、「微工研菌
寄第６６０５号」の番号を得ている。

（２）菌学的性状 Ａ、形態 ＭＧ３４４−　ｈＦ’　４９株は、顕微鏡丁で分岐した
基中菌糸よりかぎ状あるいはらせん状の気菌糸を形成し
、輪生枝はみとめられない。成熟した胞子鎖は１０個以
上の胞子の連鎖がみとめられ、胞子の大きさは、０．４
〜０．６　ｘ　Ｏ，８〜１．０ミクロン位で胞子の表面
はとげ状である。

Ｂ、各種培地における生育状態 下記において色の記載について〔〕内に示す標準ハ、コ
ンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｏｏ
ｎｔａ、１ｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ
ｍｅｒｉｃａ）のカラー−ハーモニイ・マニュアル（Ｃ
ＯユＯｒ　ｈａｒ−ｍｏｎｙ　ｍａｎｕａｌ）に従った
ものである。

（イ）シュクロース・硝酸基寒天培地（２７℃培養）に
ぷ赤紫〔９ユｅ、　Ｒａ５ｐｂｅｒｒｙ）の発育上に白
色の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は紫色をお
びる。

（ロ）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
）黄味赤［６，１ａ、　Ｌｔ　０ｏｒａユＲｅｄ　〜６
　ｐｃ、　Ｐａ、ｐｒｉｋａ、］の発育上に明るい青味
灰［ＩＢｅｃ、Ｌｔ　Ａｑｕａ　］の気菌糸を着生し、
溶解性色素は赤味なおびる。

（ハ）グリセリン・アスパラギン寒天培地（’　ｌ５Ｐ
＝培地５：２７℃培養） 灰味紫〔９１ｇ、　Ｒｏｓｅ　Ｐｌｕｍ　’：ｌの発育
上に白〜灰白〜明るい青味法の気菌糸を着生し、溶解性
色素はみとめられない。

に）スターチ・無機基寒天培地（ｌ５Ｐ−培地４：２７
℃培養） うすピンクの発育上に白〜灰味育緑（１９１ｅ。

Ｔｕｒｑｕｏｉｓｅ　Ｇｒｅｅｎ　）の気菌糸を着生し
、溶解性色素はピンク色をおびる程度である。

匝）チロシン寒天培地（ｌ５Ｐ−培地７：２７℃培養）
明るい茶〜暗い茶の発育上に灰白〜明るい青味法の気菌
糸を着生し、溶解性色素はかすかに茶色味をおびる。

（へ）栄養寒天培地（２７℃培養） 入味赤紫（８１ｅ、　Ｒｏｓｅ　Ｗｉｎｅ　）の発育上
に明るい紫味灰の気菌糸を着生■５、茶の溶解性色素を
産生ずる。

（ト）イースト・麦芽寒天培地（ｌ５Ｐ−培地２：２７
℃培養） 入味赤紫［９ｎｅ、　Ｒａ５ｐｂｅｒｒｙ　〕の発育上
に白〜紫味白〜青昧日の気菌糸を着生し、溶解性色素は
みとめられない。

（イ）オートミール寒天培地（ｌ５Ｆ−培地３：２７℃
培養） うすピンク〜にぶ紫［１０ｐｃ　、　Ｆｕｃｈｓｉａ　
Ｐｕｒｐｌｅ　］の発育上に明るい゛青味灰〜灰味青緑
〔２１ユｉ　、　Ｄｋ　ＪａｄｅＧｒａｙ　〕の気菌糸
を着生し、溶解性色素は赤味をおびる程度である。

（１のグリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）灰味
紫［９１ｅ、　Ｒａｅｐｂｅｒｒｙ　〕の発育上に白色
の気菌糸をわずかに着生し１、溶解性色素は紫色をおび
ろ。

し）スターチ寒天培地（２７℃培養） 発育は、にび入味赤紫［７１／２１ｅ、　Ｒｏｓｅ　Ｗ
ｉｎｅ　：］。

気菌糸は着生せず、溶解性色素は紫色をおびる。

四リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）うす紫の発育上
に白色の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は紫色
をおひる程度である。

（３）セルロースＣＰ紙片添加合成府、２７℃培養）発
育はみとめられたい。

（プゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）ではうす黄の発育上に
白色の気菌糸をわずか処着生し、茶の溶解性色素を産生
ずる。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培
養）では無色〜うす黄の発育上にピンク白の気菌糸を着
生し７、暗い茶の溶解性色素を産生する。

０）脱脂牛乳（３７℃培養） ビンクル灰味赤の発育上に白色の気菌糸をわずかに着生
し、溶解性色素は茶色味をおびる程度である。

（３）生理的性質 Ａ、諸性質 ａ、生育温度範囲 グルコース・アスパラギン寒天を用いて、２０　℃。

２４℃、２７℃、３０’Ｃ１３７℃および５０　℃の各
温度で試験の結果、５０℃を除いて何れの温度でも発育
したが、最適温度は３０〜３７℃付近と思われる。

ｂ、ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン：２０’Ｃ培
養、グルコース・ペプトン・ゼラチン：２７℃培養）単
純ゼラチンの場合は培養後５日目頃がら液化が始まった
が、グルコース・ペプトン・ゼラチンでは培養後２週間
を経過しても液化がみられず、３週間目頃より弱い液化
をみとめるようになった。

その作用は単純ゼラチンで中等度−弱い方、グルコース
・ペプトン・ゼラチンでは弱いものと思われる。

Ｃスターチの加水分解（スターチ無機塩寒天培地および
スターチ寒天培地。何れも２７℃培養）培養後３日目頃
から氷解性がみとめられ、その作用は中等度〜弱い方で
ある。

ｄ、脱脂牛乳の凝固ペプトン化（脱脂牛乳。３７℃培養
） 培養後３日目頃より凝固が始まり、７日目頃に凝固完了
後、ペプトン化が始まる。その作用は中等度である。

ｅ、メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・プ
ロス（ＩＳＰ−培地１）、ペプトン・イースト・鉄寒天
（Ｍ′−培地６）、チロシン寒天（収−培地７）。何れ
も２７℃培養） 何れの培地でも色素生成がみとめられろ。

ｆ、炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリーブ・寒天培
地（■征−培地９）。２７℃培養）Ｌ−アラビグース、
Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラ％ユクロー
ス、イノシント、Ｌ−ラムノース、ラフィノースおよび
Ｄ−マンニットを何れも利用して発育する。

ｇ、　＋）ンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天：２７
℃培養） 培養後７日目頃から発育周辺のリンゴ酸石灰の溶γ１η
がみとめられたが、その作用は弱い方である。

ｂ、硝酸塩の還元反応（１，０％硝酸カリ含有ペプトン
水（ｌ５Ｐ−培地８）：２７℃培養）陽性である。

ＢＦ結論および新菌株としての同定 以上の性状を要約すると、ＭＧ３４４−　ｈＦ４９株は
ストレプトミセス、（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｅ）　属
に楓し、細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピメリン酸
はＬＬ−型である。また、胞子のうをみとめず、気菌糸
はらせん形成を有し、輪生枝はみられず、胞子の表面は
とげ状である。種々の培地でうすビンクル灰味赤紫ある
いは黄味赤の発育上に白〜明るい青味灰〜灰味青緑の気
菌糸を着生１．１、溶解性色素は紫または赤味をおびろ
。なお、発育の裏側はｐＨインディケータ−を示して、
ＩＮ　−ＮａＯＨの添加により紫色から青味紫あるいは
青色に変化する。メラニン様色素は陽性、蛋白分解力は
中等度−弱い方、ヌターチの氷解性も中等度−弱い方で
ある。

これらの性状より既知菌種を検索すると、ストレプトミ
セス・シアネウス（Ｓｔｒθｐｔｏｍｙｃｅｓｃｙａｈ
ｅｕｓ）　〔Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｐａｌ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　ＳｙＳｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ、　？Ｐｒ２２巻、第２９０　’ｉ、　　１９７
２年（文献１）、Ｗａ、ｋｓｒｐａｎ　０）　Ｔｈｅ　
ＡＣｊ１ｎＯｍ７ＣθｊＥＨＦ　、第２巻、第１９９頁
、１９６１年（文献２）、Ｂａｒｇｅｙ’Ｅ３Ｍａｎｕ
ａｌＯｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ　、　第７版、第７５７頁、１９５７年お
よび同第８版、第８２２頁、１９７４年（文献３）〕が
もっとも近縁の種とし、てあげらねろ。

次に、ＭＧ３４４−　ｈＦ　４９株とストレプトミセス
・シアネウスの文献記載の性状を比較し表に示す。

第　　：う　　表 第　３　表（つづき） 表１（みられろように、ＭＯ（う４４−ｈＦ４９株とス
トレプトミセス・シアネウスとは、硝ｒ？　＋Ｈの還元
反応を除いて、はぼ一致し、た性状を示す。硝酸塩の還
元反応は放線菌の賜金は安定な性状とはみなしが１ｔく
、この性質の異同から両者を区別することはすし、い。

従って、ＭＧ３４４−　ｂｙ４ｇ株はストレプトミセス
・シアネウスに極めて近縁の種と考えられ、これらの点
より本発明者らはＭＧ３４４−　ｈＦ４９株をストレブ
トミセス・シアネウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃ
ｙａｎｅｕｓ）ＭＧ３４４−　ｈＦ４９と同定した。

３）培養／セリルビシンの生産 アントラサイクリン化合物セリルビシンは、ストレプト
ミセス属（（属するセリルビシン生産菌を適当な培地で
好気的に培養し１、培養物から目的物を採取することに
よって９Ｊすることができる。

培地は、セリルビシン生産菌が利用しうる任意の栄養源
を含有するものでありうる。具体的には、たとえば、炭
？［とじてグリセリン、グルコース、シュークロース、
マルトース、テキストリン、スクーチ、油脂類などが使
用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、肉エキス、ペプ
トン、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンスチープリカ
ーなどの有櫻物並びにアンモニウム塙または硝酸塩、た
とえは、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化
アンモニウム等の無機物が使用できる。また、必要に応
じて、食塩、塩化カリウム、りん酸塩、重金属塩などの
無機塩類を添加することができる。

発、酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な
消泡剤、たとえばシリコーン等を適宜添加することもで
きる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は２０〜３５℃が適当であるが、２５〜３
０℃が好ましい。この方法でセリルビシンの生産量は、
撮盪培養、通気攪拌培養共に３〜７日で最高に達する。

このようにして、セリルビシンの蓄積された培養物が得
られる。培養物中では、セリルビシンはその一部は菌体
中にも存在するが、その大部分は培養Ｐ液中に存在する
。

このような培養物からセリルビシンを採取するには、合
目的的な任意の方法が利用可能である。

その一つの方法は、抽出の原理に基（ものであって、具
体的には、たとえば、培養ｆ液中のセリルビシンについ
てはこれを水不混和性のセリルビシン用溶媒（前記参照
）たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、ブ
タノール等で抽出する方法（培養ｆ液は中性ないし微塩
基性であると抽出効率が良好である）、あるいは菌体内
のセリルビシンについては濾過、遠心分離等で得た菌体
集体全酢酸エチル、クロロホルム、メタノール、エタノ
ール、ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、塩
酸溶液、酢酸溶液などで処理し、て回収することができ
る。菌体を分離せずに培養物をそのま〜上記抽出操作に
付すこともできる。菌体を破壊し、てから抽出に付すこ
ともできろ。向流分配法も抽出の範時に入れることがで
きる。

培養物からセリルビシンを採取する他の方法の一つは、
吸着の原理に甚くものであって、既に液状となっている
セリルビシン含有物、たとえば培養Ｐ液あるいは上記の
ようにして抽出操作を行なうことによって得られる抽出
液を対象として、適当な吸着剤、たとえば活性炭、アル
ミナ、シリカゲル、［セファテックスＬＨ２０Ｊ（ファ
ルマシア社）等、を用いたカラムクロマトグラフィー、
液体クロマトグラフィーその他によって目的セリルビシ
ンを吸着させ、その後溶離させることによって、セリル
ビシンを得ることができる。このようにして得られたセ
リルビシン溶液を減圧濃縮乾固すればセリルビシンの粗
標品が赤色粉末として得られる。

このようにして得られるセリルビシンの粗標品をさらに
精製するためには、上記抽出法および吸着法を必要に応
じて相合せて必要回数実施し、必要（（応じて再結晶を
行なえはよい。たとえば、シリカゲル、「セファデック
スＬＨ２０Ｊ、弱酸性イオン交換樹脂、「ダイヤイオン
ＨＰ２０Ｊ　（三菱化成製）などの吸着剤や、ゲルｆ過
桿１を用いたカラムクロマトグラフィー法、適当な溶製
、を用いた液体クロマトグラフィー、向流分配法および
薄層クロマトグラフィー法筈な組合にせて実施すること
ができる。具体的には、たとえば、セリルビシンの粗粉
末を少量のクロロホ友−に溶解し、７リカ／ ゲルカラムを用いて適当な溶媒で展開すると各有効成分
が分かれて溶出［１、目的の活性区分をまとめ減圧濃縮
後、更に薄層クロマトグラフィーで目的成分をかきとる
ことにより、はぼ単一物質として得ることができる。ま
た、更に純化するためには、高速液体クロマトグラフィ
ーや、適当な溶媒からの晶析により結晶とし７てイ（）
る方法を用いろことができる。

セリルビシンの用途 本発明によるアントラサイクリン化合物セリルビシンは
、制癌活性および抗菌活性を有するので、医苓と１．て
有用・な（ｌｊ合物である。

１）生理活性 （１）抗腫瘍性 ＣＤ　’Ｆ１マウスにＬ　１２１（ｌ　　白血病細胞の
軒鴛液１×１０５個／マウスを腹腔内に移植ｔ、移Ｍ後
より薬剤を腹腔内に０．２５　ｍユずつ１０日間注射し
た。３０日間観察を行ない、生理食塩水を投与しまた対
照群のマウスの生存日数を１００として延命率（係）で
効果を示す。

第４表 （２）急性毒性 本発明のセリルビシンのマウス腹腔内−回注射によるＬ
Ｄ、ｏ値は、１０〜２Ｑｍｇ／ｋｇ　である。

（３）培養癌細胞に対する作用 本発明によるセリルビシンは、］、＋２１０培養細胞の
増殖を非常に低濃度で阻止する。高分子合成の内ＲＮＡ
合成が特に低濃度で阻止されており、実験動物腫瘍に対
する治療効果が裏付けられた。

第５表 ＤＮＡ合成　　　１　　０．４６ ＲＮＡ合成　　　Ｉ　　　Ｏ，０８６ （４）抗菌作用 本発明によるセリルビシンの抗菌力を寒天希釈法により
求めた最小増殖阻止濃度（ＭＩＯ）は、次表に示し、た
通りである。

第６表 噛 被　　験　　醒　　　　　：　　　ＭｌＧ（μｇ／ｍｌ
　）２）抗腫瘍剤 このように、本発明のアントラサイクリン化合物セリル
ビシンはヒトを含む動物の腫瘍、特に悪性腫瘍、に対し
て抗１１’Ｊ！　４％活性を示すことが明らかにされた
。

従って、本発明のセリルビシンまたはその酸付加塩は抗
腫瘍剤ないし腫瘍治療剤として使用することができる。

杭（ｐ４瘍剤とし２てのセリルビシンまたはその酸付加
塩は合目的的な任意の投与経路で、また採用投与経路１
でよって決まる剤型、で、投与することができる。薬剤
としては＃契止許容さｈる担体ないし希釈剤で希釈され
た形態がふつうである。たとえば、本発明のセリルビシ
ンまたはその酸付加塩は、単独で、あるいは担体たとえ
ばマルトース、ラクトースとの混合物として、或いは無
毒性のコンプレックスたとえばデオキシリボ核酸とのコ
ンプレックスとして、投与することができる。その場合
のデオキシリボ核酸としては、たとえば分生胸腺、ヒー
ラ細胞、酵母等の動物または微生物の菌体等から抽出し
たものを用いることができる。

本発明のセリルビシンまたはその酸付加塩を実際に検力
する場合には、これを注射用蒸留水または生理食塩水に
溶解して注射する方法が代表的なものの一つとして挙げ
られる。具体的には、動物の場合は腹腔的注射、皮下注
射、静脈または動脈への血管内注射および局所投与等の
注射による方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血
管内注射または局所投与等の注射による方法がある。投
与量は動物試験の結果および種々の情況を勘案して、連
続的または間けつ的に投与したときに総投与嘲が一定量
を越えないように定められる。具体的な投与骨は、投与
方法、患者または被処理動物の状況、たとえば年令、体
重、性別、感受性、食餌、投与時間、併用する薬剤、患
者またはその病気の程度に応じて変化することはいうま
でもな（、一定の条件の下における適量と投与回数は上
記の指針を基とし、て専門医の適量決定試験によって決
定されなければならない。

３）ダラム陽性菌感染症治療剤 本発明のセリルビシンは前記の生理活性データから明ら
かなように制癌性抗生物質であり、具体的にはセリルビ
シンまたはその酸付加塩はダラム陽性菌に対して抗菌性
を示すところより、ブドウ球菌症、ジフテリア、肺炎等
に対して有効な抗生物質として使用することができる。

その場合の剤型および投与量については、上記の抗腫瘍
剤に関して説明したところが妥当じ、その他投与回数、
剤型等はすべて上記に述べたと同じ注意をもって決定す
ることができる。

実験例 実施例１ （１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成のものである。

ガラクトース　　　　　　２　係 デキストリン　　　　　　　２　％ バクトソイトン（商標）　　　　１　　受コーンスチー
ブリカ−０，５％ 炭酸カルシウム　　　　　０．１　ｑｂ（殺菌前ｐＨ７
，４） 上記培地１００ｍユを５００　ｍｌ容三角フラスコに分
注殺菌したものへ、ストレプトマイセス・シアネウスＭ
Ｇ３４４−　ｈＦ　４ｇのスラントより１白金耳接種し
、ロータリーシェーカー上で、２７℃にて７２時間撮と
う培養したものを種母とした。

（２）培養 使用した培地は、下記の組成のものである。

デキストリン　　　　　　　３　係 グルコース　　　　　　　　　０．３　ｑｂトーストソ
ーヤ（大豆粉簡標名）２　循環化コバルト　　　　　　
　０．１２騎炭酸カルシウム　　　　　　０．３％ ３０リツトル容ジヤーフアメンターに上記培地１５−Ｉ
Ｊットルを入れて殺菌したものに、上記種母を５００ｍ
１接ｆ４Ｌ−１１５０ｒｐｍで攪拌しながら１５リット
ル／分の通気下に２７℃で９０時間培養した。

（３）セリルビシンの採取 得られた培養液を１過し７、Δｊ液をｐＨ８，０に調整
後、酢酸ブチル１０リツトルによる抽出に付し、抽出液
の上面を濃縮して、油状物質２０　ｇを得た。これを少
量のクロロホルムに溶解し、１００　ｇ、のシリカゲル
（メルク社「キーゼルゲル６０Ｊ）のカラムに吸着させ
、クロロホルム−メタノールの比率を少しずつ変化させ
ながら、段階的に溶出し、セリルビシンが溶出された区
分を濃縮して、セリルビシンの赤色粗粉末１７５ｍｇを
得た。

実施例２ 実施例１で得られた赤色粗粉末ｉｏｏｍｇを少量のクロ
ロホルムに溶解後、厚さ０．２５ｍｍで２０．　Ｘ　２
０　ｃｍのシリカゲルの薄層（メルク社「キーゼルゲル
６０Ｆ′２５４　Ｊ　）　１０枚に吸着させ、クロロホ
ルム−メタノール−濃アンモニア水り１００　：　５　
：　０．０２混液にて展開Ｉ７、分離したセリルビシン
区分をかきとり、クロロホルム−メタノール−１０：１
の混液でシリカゲルより溶出し、た。このようにして得
た両分を濃縮後、クロロホル゛ムーメタノールー１＝１
混液にて平衡化ｔ７た「セファデックスＬ　Ｈ２０Ｊカ
ラム１、Ｏｘ２０ｃｍを同じ組成の混液にて通過させ、
減圧乾固後、セリルビシンの黄色粉末を１．５ｍｇを得
た。

更に、ウォーターズ社の高速液体クロマトグラフィーを
用い、次に示す条件でセリルビシンを単一物質とし２て
１．１ｍｇｍシイた。

カラム：センシューパックＮ５０１Ｂ　　および汎Ｒｅ
パック０ＤＳ−１１７２を２本面列につｆ【ぐ 溶媒系ニアセトニトリル：０−３ＭＭ酸アンモニウムバ
ッファー（ｐＨ２，５）　−２０：　１流　速：　６１
１１　／分 上記条件でセリルビシンは９．２分に溶出される。

【図面の簡単な説明】

第１図はセリルビシンのアグリコンの核磁気共鳴スペク
トル、第２図は同紫外部可視部吸収スペクトル（メタノ
ール中濃度１０μｇ／ｍｌ）を示す図である。 第３図はセリルビシンの紫外部可視部吸収スペクトル（
メタノール中濃度加μｇ／ｍｌ）を、第４図は同赤外線
吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）　を、Ｊ５図は同核磁気共
鳴スペクトル（２５０メガヘルツ、重クロロホルム中）
を、示す図である。 第２図および３図において、曲線１〜３ばそれぞれ下記
の意味を持つ。 １・・・メタノール中 ２＝−０，１Ｎ　　ＨＣ！１　−９０％メタ／　−ル中
３−０．１Ｎ　　ＮａＯＨ−９０％　メタノール中出願
人代胛人　　　猪　　股　　　　清稜瀬市稜西４−６−
７ ０発　明　者　内田丈士 横浜市鶴見区岸谷４−２２−１８岸 谷第１社宅１０２ ０発　明　者　井本正哉 浦和市常盤７−１８−１４北浦和社 宅１０１ 手続補正書 昭和５９年２月、３　［〕 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和郭年　特許願　第１９３４１号 その製造法およびその用途 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 財団法人微生物化学研究会 ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄　′８、補正の内容 （１）明細書第９頁第３行「ことが判り、」を、下記の
通りに補正する。 「ことが判った。γ−シトロマイジノンの構造は７−位
および１〇−位の置換基に関して議論があって、前記Ｂ
ｒｏｃｋｍａｎｎらの報告によると７−位にＯＨが結合
したものであるか（１〇−位は非置換）あるいは１０−
位にＯＨが結合したものであるか（７−位は非置換）の
いずれかであるとされており、一方最近の総説である有
機合成化学部会誌、第４０巻、第２−１９頁（特に第７
頁）および「医薬と微生物生産（下）」第３０１頁（（
株）学会出版センター昭和５７年１２月加日発行）によ
ると１０−位にＯＨが結合したもの（７−位は非置換）
とされているのであるが、ＩＨ−ＮＭＲ等の解析を行な
ったところｒ−シトロマイジノンの構造は７−位に０１
（が結合したもの（１〇−位は非置換）であることが判
った。従って、このグリコサイドは」 （２）同第９頁の式（３）の化合物を、・下記の通りに
補正する。 受託番号変更届 昭和５８年８月Σ日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第１９３４１号 ２、発明の名称 アントラサイクリン化合物、その 製造法およびその用途 ３、手続をした者 事件との関係　特許出願人 財団法人微生物化学研究会 ４代理人 工業技術院微生物工業技術研究所 ６、旧寄託番号 微工研菌寄第６６０５号 ９、添付書類の目録 ｔｌ）　　新受託番号を証明する書面（写）　１通　　
〜・。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式で示されるアントラサイクリン化合物セリルビ
   シン（Ｓｅｒｉｒｕｂｉｃｉｎ）またはその酸付加塩。 倉　　　　　　（１） ２、適当な培地にストレプトミセス属のアントラサイク
   リン化合物セリルビシン生成能を有する菌株を好気的に
   培養し、培養物からアントラサイクリン化合物セリルビ
   シンを採取することを特徴とする式（１）で示されるセ
   リルビシンの製造法。 ３、式（１）で示されるアントラサイクリン化合物セリ
   ルビシンデたはその酸付加塩を有効成分とする、抗腫瘍
   剤。 （式中Ｒは ４０式（１）で示されるアントラサイクリン化合物セリ
   ルビシンまたはその酸付加塩を有効成分とする、ダラム
   陽性菌感染症治療剤。