JPS61152692A - アンスラサイクリン化合物１１−デオキシルベオマイシンａおよびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔／〕発明の背景 本発明は、新規なアンスラサイクリン化合物およびその
用途に関する。

制癌性抗生物質としてのアンスラサイクリン化金物は医
薬として重要な位置を占めておシ、既に各種のものが提
案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが大きいから、アンスラサイクリン化合物につい
てもそのアグリコン部分および糖部分の種類または置換
基において既存のものと異なる化合物に対しては不断の
希求があるといえよう。

Ｃｍ）発明の概要 本発明は、上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明によるアンスラサイクリン化合物ｌ／
−デオキシルベオマイシンＡ　（／／　−ｄ＠ｏｘｙｒ
ｕ−ｂ＠ｏｍｙｃ１ｎ　Ａ　）は、下式で示されるもの
である。本発明はこの化合物の酸付加塩にも関する。

本発明による抗腫瘍剤は、下式で示されるアンスラサイ
クリン化合物ｌ／−デオキシルベオマイシンＡまたはそ
の酸付加塩を有効成分とするものである。

弘“ＣＨ。

マイシン人 ｌ）化学構造 本発明によるアンスラサイクリン化合物ｌ／−デオキシ
ルベオマイシン人は、上記の式（Ａ）で示される化学構
造を有する。

この化学構造は、下記のようくして決定されたものであ
る。

すなわち、／／−デオキシルペオマイシンＡのプロトン
核磁気共鳴スペクトルは２弘ｒｐｐｍのシグナルを除い
て既知のルベオマイシンＡ　（Ｙ、Ｏｇａｖｎｉｓｔ、
　＊１．　Ｊ、Ａ、　ｊ４ｃ　９３１　（／　９１　／
　）　）のスペクトルと完全に一致する。また、炭素１
３核出気共鳴スペクトルは／〜ｔ＆位、１０ｈ　ｚ／２
６位はアクラシノマイシノンＡに、その他の部分はルベ
オアイシンＡＫ一致する。紫外部可視部吸収スペクトル
より、へタージヒドロキシアンススキノン構造、の存在
が明らかであるため、本化合物はルペオマイシンＡのｌ
ｌ−デオキシ体と推定された。元素分析およびＦＡＢ　
（Ｆａａｔ　Ａｔｏｎｏ　Ｂｏｍｂａｒｄｍ＠ｎｔ　）
マススペクトルより決定された分子式〇５５ＨＩＮＯｔ
２　もこの推定構造を支持している。

さらに、ｌｌ−デオキシルベオマイシンＡをＯ１ｌ規定
塩酸でｉｏｏ℃／ｌＯ分間加水分解することによシ、ア
グリコン部分と糖部分としてダウノサミンイシノン（Ｇ
、Ｃａａａｉｎ＠ｌｌｉ　ｓｔ、ａｌ、　　Ｊ、Ａ、　
　ｉｔ。

／７ｔ（／りｒＪ））と同定された。また、ｌｌ−デオ
キシルベオマイシンＡを／多硫酸中室温で１時間放置す
ると、弘−０−デメチル−７／−デオキシダウノマイシ
ノンとダウノサずンよシ成る４ｃｍｏ−デメチル−／／
−デオキシダウノマイシン（Ｇ、　Ｃｍ−５ａｉｎ＠ｌ
ｌｉ　　ｓｔ、ａｌ、　　Ｊ、Ａ、ＪＪ　　／７６　（
／りｒａ　））を得る。以上の解析結果より、ｌｌ−デ
オキシルペオマイシンＡの構造は上記式（Ａ）の通シ決
定された。

コ）物理化学的性状 アンスラサイクリン化合物ｌ／−デオキシルベオマイシ
ン人の物理化学的性状のいくつかを示せば、下記の通シ
である。

（１）外観：赤褐色粉末 （２）元素分析：　　Ｃ一旦一　エ　−９−分析値　　
　Ａ１．＃　　４．ｌＩｊ　　λ、＃　　Ｊｏ、Ｏｒ計
算値　　　ｔ／、に’ｔ　　４．４ｔ２　２−／７　２
？、ｒＪ（Ｃ５５ＨｕＮＯｔ２） （３）融点：　ｉｏｚ〜／１０℃ ／チ （４）　　紫外部可視部吸収スペクトルλｍａｘ　ｎｒ
ｎ　（Ｅ、。）第１図に示した通シである ０、０／Ｎ　　ＭＣＩ　−ＭｅＯＨ ココ６（コ１３）、２ｊ７（／７り、ｊｆｊ（７λ）、
４ｃコ♂（♂≠） ０．０／Ｎ　　ＮａＯＨ−Ｍｅａ！（ ２ＪＪ（Ｊｕり、ｘｒｔ　（＋、ｒ）、５ｉｒ（ｔｒ）
、（５）比旋光度：　（（Ｘ　）ｎ１＋　７　ｒ’　　
（Ｃ＝０．　／　、ＷｉａＯＨ）（６）　　ＦＡＢマス
スペクトル二　叫４　ｔ≠≠　（Ｍ＋Ｈ）”（分子量計
算値：６≠３．７） （７）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム法）第一図に
示した通シである。

（８）フロトン核磁気共鳴スペクトル （弘００メガヘルツ、重クロロホルム中）第３図に示し
た通りである。

（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル （７００メガヘルツ、重クロロホルム中）第弘図に示し
た通シである９゜ αα　溶解性 酸性水、塩基性水、メタノール、エタノール、ｎ−フロ
パノール、ｎ−ブタノール、アセトン、シ 酢酸エチル、クロロホルム可溶 水、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルに不溶 なお、ｌｌ−デオキシルペオマイシン人はメタノール溶
液中で黄色であるが、アルカリ性で紫色に変色する。

αＤ　Ｒｆ値 １／−デオキシルベオマイシン人のシリカゲルプレート
上での種々の溶媒におけるＲｆ値は、下記の通シである
。

展開系　　　　町山口 クロロホルム−メタノール：ベンゼン　　　０．／ｌ＝
７！Ｊ：ｊ クロロホルム：メタノール：酢酸　　　　　ｏ、ｉ。

＝１００　！　／ｒ　：　０．ｊ クロロホルム：メタノール：アンモニア水ｏ、ａ弘＝　
１００　：　／Ｊ−：　０．コ （メルク社［シリカゲル６０Ｆ２ｎＪ　　プレート使用
） この化合物は糖部分に−ａアミノ基を有するので、その
酸付加塩があシブる。この場合の酸としては、酸および
硫酸が代表的なものとして挙げられる。

ｔｉ−テオキシルベオマイシンＡの製造ｌ）概要 アンスラサイクリン化合物／／−デオキシルベオマイシ
ンＡは現在のところ微生物の培養によってのみしか得ら
れていなｈが、類縁化合物の合成化学的または微生物学
的修飾によって製造することも、あるいは全合成化学的
に製造することもできよう。

微生物の培養による場合の菌株としては、アクチノマジ
ュラ属に属するｌｌ−デオキシルベオマイシンＡ生成能
を有するものが使用される。

具体的には、アクチノマジニツ・ロゼオビオラセエＲｕ
ｙｏｂｘがｌｔ−デオキシルベオマイシンＡを生産する
ことが本発明者らＫよって明らかにされて込るが、その
他の菌株については抗生物質生産菌単離の常法によって
適当なものを分離することが可能である。また、Ａ、ロ
ゼオビオラセエＲｕ７０ｔ２を含めて／／−デオキシル
ベオマイシン人生産菌を放射線照射その他の処理に付し
て、ｌｌ−デオキシルベオマイシン人生産能を高める余
地も残されている。

、２）　Ｒｕ７０４２株 アンスラサイクリン化合物／／−デオキシルベオマイシ
ンＡ生産能を有するアクチノマジ具う属の菌株として本
発明者らの見出して込るＲｕ　７０　Ａ　２は、下記の
内容のものである。

（１）由来および寄託番号 Ｒｕ７０６２株は福岡県嘉穂郡嘉穂町大字小野谷の野菜
畑で採取した土壌から分離されたＲ２０株を紫外線照射
処理（死滅率タッチ）シて得られたものであシ、昭和ｊ
９年／コ月ｌ弘日に工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されて「微工研菌寄第ｒｏｏｒ号」の番号を得てい
る。

（２）菌学的性状および生理学的性質 国際放線菌命名委員会Ｃｌ５Ｐ）の方法便覧に従りて行
なった本菌株の特徴づけは、下記の通シである。

Ａ）形態 顕微鏡および電子顕微鏡による観察を行なって親株Ｒ２
０株と比較した結果は、第１表に示す通りである。

Ｒ２０株に特徴的である密な小螺旋状を呈する胞子鎖と
疑似胞子舜はＲｕ　７０４２株にも観察されたが、８２
０株で観察された胞子鎖を覆う円筒状シースおよび粘質
状物質は観察されない。

Ｂ）各種培地上での培養性状 各種培地上で２７℃／３週間培養したときの性状は、第
２表に示す通シである。

ル寒天培地でのみ良好に生育する。また、Ｒ２０株で観
察される培地中の色素は、Ｒｕ　７０＆λ株では観察さ
れないが、裏面の特徴的な赤系統の色素はＲＸ株と同様
にｐＨによシ変色した。

Ｃ）生理的性質および炭素源の利用性 常法に従って生理的性質および炭素源の利用性を試験し
た結果は、第３表に示す通シである。

生理的性質では、両菌株にほとんど差異が認められなか
った。Ｒｕ　７０６−株は、Ｒ２０株に比べて生育温度
範囲が多少低くなりていることと脱脂乳をペプトン化し
ないという点だけが異な４炭素源の利用性は％　Ｒｕ７
（７／；コ株はプリドハム・ゴトリープ寒天培地上で生
育が貧弱であル、判定が微妙であるが、Ｒ２０株とはか
なシの差異が認められた。

第１ｉｉ！ｉ　　　形態の比較 第２表　培養性状の比較 本本塩基性で紫に変色する 第３表　生理的性状の比較 Ｄ）考案 以上の結果を要約すると、　Ｒｕ　７０４２株は親株で
ある８２０株とは以下の点で性状が異なる。

（１１胞子鎖にシースおよび粘買状物質が観察されない
。

（２）気菌糸の生育が貧弱で、培地中−色素を産生じな
い。

（３）　　生育温度範囲が低く、脱脂乳をペプトン化し
ない。

（４）　　プリドハム・ゴトリープ培地で生育が貧弱ｆ
、ｉＪ、Ｌ−アラビノース、ｉ−イノシトールおよびＤ
−フラクトースを利用しない。

したがって、Ｒｕ　７０６２株は上記性質を有する８２
０株の一変異株とし、アクチノマジ為う・ロゼオビオラ
セエ（Ａｃ、ｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　　ｒｏｓ＠ｏｖｉ
ｏｌａｃ＠ａ　）　Ｒｕ７０６２と命名し、他の菌株と
区別する。

Ｊ）　培養／／ノーデオキシルペオマイシンＡ　ノ生産
アンスラサイクリン／／−デオキシルベオマイシンＡは
、アクチノマジュラ属に属する／／−デオキシルベオマ
イシンＡ生産菌な適当な培地で好気的って製造すること
ができる。

培地は、／ｌ−デオキシルベオマイシンＡ生産菌が利用
しうる任意の栄養源を含有するものであシうる。具体的
には１例えば、炭素源としてグルコース、シュークロー
ス、マルトース、スメーチ。

および油脂類などが使用でき、窒素源として大豆粉、綿
実粕、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵母エキス、お
よびコーンスチープリカーなどの有機物並びにアンモニ
ウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸
ナトリウム、および塩化アンモニウム等の無機物が使用
できる。また。

必！！に応じて１食塩、塩化カリウム、リン酸塩。

重金属塩など無機塩類を添加することができる。

発酵中の発泡を抑制する為に、常法に従つて適当な消泡
剤、たとえばシリコーンを添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物買の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は８℃〜ＩＡ５℃が適当であるが、３５℃
〜、？７℃が好ましい。この方法での生産量は、振盪培
養１通気攪拌培養共にμ日〜！日で最高に達する。

このようくして／／−デオキシルベオマイシンＡの蓄積
された培養物が得られる。培養物中では、１／−デオキ
シルペオマイシンＡはその一部は培養Ｆｉｇ存在するが
、その大部分は菌体中に存在する。

このような培養物からｌ／−デオキシルベオマイシンＡ
を採取するには１合目的的な任意の方法が利用可能であ
る。その一つの方法は、抽出の原理に基くものであって
、具体的には、たとえば、培養Ｆ液中の７ノーデオキシ
ルベオマイシンＡＫついてはこれを水不混和性の７ノー
デオキシルペオマイシンＡ用溶媒（前記参照）例えば酢
酸エチル、りｃＩｃ２ホルム、ブタノール等で抽出する
方法（培養Ｐ液は中性ないし微塩基性であると抽出効率
が良好である）、あるいは菌体内の／ｌ−デオキフルペ
オマイシンＡｋついては濾過、遠心分離等で得たａ体ｓ
体をクロロホルム、酢酸エチル、ブタノール、メタノー
ル、エタノール、アセトン、塩酸溶液または酢酸溶液な
どで処理して回収することができる。菌体を分離せず忙
培養物そのままを上記の抽出操作に付すこともできる。

適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範曙に入れるこ
とができる。

培養物からｌノーデオキシルペオマイシン人を採取する
他の方法の一つは、吸着の原理に基くものであって、既
に液状となっている１１−デオキシルベオマイシン人含
有物１例えば培養ｒ液あるいは上記のよ５［、て抽出操
作を行なうことｋよって得られる抽出液、を対象として
、適当な吸着剤、例えば活性炭、アルミナ、シリカゲル
、「ダイヤイオンＨＰ２ｏ」（三菱化成社製）、「セフ
ァデックスＬＨ：ｗ」（ファルマシア社製）等、を用い
たカラムクロマトグラフィー、液体クロマドグシフイー
、その他によって目的ｌ／−デオキシルベオマイシンＡ
を吸着させ、その後溶離させることによって、／／−デ
オキシルベオマイシンＡを得ることができる。このよ５
にして得られた／／−デオキシルベオマイシンＡ溶液を
減圧濃縮乾固すれば、／／−デオキシルペオマイシンへ
の粗標品が得られろ。

このようにして得られろｌノーデオキシルペオマイシン
Ａの粗標品をさらに精製するためには、上記の抽出法お
よび吸着法を必要に応じて組合せて必要回数実施すれば
よい。例えば、シリカゲル、「セファデックスＬＨＩＪ
、弱酸性イオン交換樹脂、活性炭などの吸着剤またはゲ
ル濾過剤を用いたカラムクａマトグ２フィー、適当な溶
媒を用いた液体クロマトグラフィー、および向流分配法
を適宜組合わせて実施することができる。具体的には、
例えば、粗標品を少量のクロロホルムに溶解し、シリカ
ゲルカラムを用いて、適当な溶媒で展開して活性成分を
溶出させ、溶出液を減圧濃縮後。

更に［セファデックスＬＨ２０Ｊカラムで溶出させると
、　／／−デオキシルベオマイシン人が単一物質として
分離される。

／／−デオキジルベオマイジンＡの用途本発明によるア
ンスラサイクリン化合物１／−デオキシルペオマイシン
Ａは、制癌活性を有ししかも毒性が低いという点で医薬
として有用な化合物である。

ｌ）生理活性 （ＩＪ　　抗腫瘍性 ／／−デオキシルペオマイシンＡは、実験動物の白血病
に対して著しい抗腫瘍作用を示した。例えば、ＣＤＦ１
マウスに対してＰ　３１１白血病細胞の懸濁液１ＸＩＯ
６ケ／マウスを腹腔内に移植し、移植後よＦＢ１日目ε
５日目とに／／−デオキシルベオマイシンＡを腹腔内に
投与した。３０日間観察を行ない、生理食塩水を投与し
た対照詳のマウスの生存日数な／ＤＯとした延命率（船
で効果を示すと、下記の通りでおうた。

ダ　　　　　　　　　　　　　１６ｊ ｒ　　　　　　　　　　　　　　　／７コ／Ａ　　　　
　　　　　７コ１ ３−　　　　　　　　　２４Ａ” 憂毒性症状発現のためｄａｙ　／のみ投与さらに、ＣＤ
Ｆ、マウスに対してＰａｆｔ　白血病細胞の懸濁液／ｘ
１０６ケ／マウスを腹腔内に移植し、移植後より１８目
とｊ６目とに／／−デオキシルペオマイシンＡを静脈内
に投与した。３０日間観察を行ない生理食塩水を投与し
た対照詳のマウスの生存日数な１００とした延命率（４
）で効果を示すと、下記の通りであった。

ｌ　　　　　　　　　　タｒ λ　　　　　　　　　　タｒ ≠　　　　　　　／ＤＯ Ｉｒ　　　　　　　ｌｌＯ ／Ａ　　　　　　　　／４７ （２）　　急性毒性（ＬＤ５ｏ　） ／／　−７’オキシルベオマイシンＡのマウス腹腔内注
射によるＬＤ５Ｑは、３０’９　／　Ｑ以上であった。

コ）抗腫瘍剤 このよう忙、本発明のアンスラサイクリン化合物／／−
デオキシルベオマイシンＡは動物の腫瘍。

特に悪性腫瘍に対して抗腫瘍性を示すことが明らかにさ
れた。

したがって１本発明の／／−デオキシルベオマイシンＡ
は抗腫瘍剤ないし腫瘍治療剤として使用することができ
る。

抗腫瘍剤としてのｌノ−デオキシルペオマイシンＡは合
目的的な任意の投与経路で、また採用投与経路によって
決まる剤屋で、投与することができる。薬剤としては製
薬上許容される担体ないし希釈剤で希釈された形態がふ
つうである。

抗腫瘍剤としての１１−デオキシルベオマイシンＡを実
際に投与する場合には、これを注射用蒸留水または生理
食塩水化溶解して注射する方法が代表的なものの一つと
して挙げられる。異体的には、動物の場合は腹腔内注射
、皮下注射、静脈または動脈への血管内注射および局所
投与等の注射による方法が、ヒトの場合は静脈または動
脈−１の血管内注射または局所投与等の注射による方法
がある。

／／−デオキシルペオマイシン人の投与量は、動物試験
の結果および種々の情況を勘案して、連続的または間け
つ的に投与したときに総投与量が一定量を越えないよう
に定められる。具体的な投与量は、投与方法、患者また
は被処理動物の状況、例えば年令１体重、性別、感受性
１食餌、投与時間、併用する薬剤、患者またはその病気
の程度に応じて変化することはいうまでもなく、また一
定の条件のもとにおける適量と投与回数は、上記の指針
を基として専門医の適量決定試験によって決定されなけ
ればならない。

実験例 以下において「憾」は「ｗ／ｖ　４　Ｊである。

実施例１ （１）　　種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分をｌリットルの水に
溶解して、ｐＨ７，２に調製したものである。

ポリペプトン　　　　　ｌ憾 モラセス　　　　　　　ｌ憾 肉エキス　　　　　　　１４ 上記培地／ｊｒＩｔｌを大型試験管に分注殺菌し、アク
チノマジュラ・ロゼオピオラセエＲｕ７０ｔ２　ラスラ
ントよりｌ白金耳接種し、３７°Ｃにて７２時間試験管
振盪機により振盪（２３Ｏｒｐｍ　）　Ｌ、たものを種
母とした。

（２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分なｌリットルの水に
溶解して＋　ｐＨ７，≠に調整したものである。

ブドウ糖　　　　　　　　　　２・”鴫大豆粉　　　　
　　　　　　　／、ｊｔ４乾燥酵＠　　　　　　　　　
　０．２４炭酸カルシウム（沈降性）Ｏ０参鴫 上記培地／リットルを１００ｎｌずつ１００−の三角フ
ラスコに分注殺菌したもの−、上記種母／ｄを添加し、
ロータリーシェーカー（コｓｏ　ｒｐｍ　）を用いて３
７℃にてφ日間回転培養を行なった。

（３１／／−デオキシルペオｉイシンＡの採取培養後、
培養液を濾過して、菌体とＰ液とを分離する。菌体な３
００−のアセトンで２回抽出し、濃縮してアセトンを留
去する。濃縮液をｐＨｒ、！Ｋｉ！ＩＩ整し、コθθｄ
のりａａホルムで３回反復抽出する。この抽出液を濃縮
後、６倍量のｎ−ヘキサンを加えて生じた沈殿物を乾燥
すると、黄色粉末、３０ｒｌｌを得る（ｌノーデオキシ
ルペオマイシンＡ粗標品）。

実施側御 実施例１で得られた／／−デオキシルペオマイシンＡ粗
標品３０ダをシリカゲル１カラムＣ２ｘ、ｙｏｔ：ｔｎ
）Ｋてクロロホルム−メタノール−水（コｏｏ：ｘ：ｌ
）で展開する。／／−デオキシルベオマイシンＡを含む
フラクシ曹ンを濃縮し、蒸留水３ｏ−に分散する。ｐＨ
Ｌ！に調整した後、３０ｍ１のクロロホルムで３回反復
抽出する。濃縮後、０．／４酢酸−メタノールで平衡化
した［トヨパールＨＷＩＡ０ＦＪ（東洋曹達社！Ｊ１）
カラムコ×ｓｏαにのせて、クロマトグラフィーな行な
う。溶出液を濃縮乾固するト、ｌｌ−デオキシルペオマ
イクンＡ粉末を１ｏＩｎ９ｐ＋る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ｌｌ−デオキシルベオマイシ／Ａ（７）紫外
部可視部吸収スペクトルを模写したグラフである。 ハ・・０．０１　Ｎ　ＨＣｌ−メタノール中コ・−０，
０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール中第２図は、ｌｌ−デオ
キシルベオマイシｙＡ１７）赤外吸収スペクトルを模写
したグラフである。 ｇｊ図は、ｌｌ−デオキシルベオマイシ／Ａの１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを模写シタ、ｌ−２：５：ある。 第μ図は、ｌノーデオキシルベオマイシ／Ａの１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルを模写したグラフである。 出願人代理人　　　猪　股　　　　清 手続補正書 昭和６０年５月１０日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式で示されるアンスラサイクリン化合物１１−デ
   オキシルベオマイシンＡまたはその酸付加塩 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ２、下式で示されるアンスラサイクリン化合物１１−デ
   オキシルベオマイシンＡまたはその酸付加塩を有効成分
   とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）