JPS6212227B2

JPS6212227B2 -

Info

Publication number: JPS6212227B2
Application number: JP53062899A
Authority: JP
Inventors: Masaru Kotani; Satoshi Yaginuma; Masatoshi Tsujino; Naoki Muto; Satoru Saito
Original assignee: Toyo Jozo KK
Current assignee: Toyo Jozo KK
Priority date: 1978-05-25
Filing date: 1978-05-25
Publication date: 1987-03-17
Also published as: KR830000720A; KR830001688B1; JPS54154792A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は優れた植物病原菌糸状菌の生育阻害作
用および制ガン性を示す新規抗生物質Ａ―11079
―Ｂ_1bならびにその製法に関するものである。さらに詳しくは新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1b
産生放線菌であるアンピユラリエラ・エス・ピ
ー・Ａ 11079（Ampullariella sp.A 11079）を
培地に培養し、その培養物から新規抗生物質Ａ―
11079―Ｂ_1bを採取する新規抗生物質Ａ―11079―
Ｂ_1bの製法ならびに該抗生物質に関するものであ
る。本発明の新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bは下記
の物理化学的性質を有する弱塩基性化合物であ
る。元素分析実験値Ｃ＝49.96 Ｈ＝5.00 Ｎ＝26.43 理論値Ｃ＝50.19 Ｈ＝4.97 Ｎ＝26.60 分子量（マススペクトルよりの値） 263 分子式 C₁₁H₁₃N₅O₃ 融点（熱分析計よりの値） 216℃ 〓〓〓〓〓
施光度〔α〕^２０ _Ｄ＝−157℃（Ｃ＝0.45％、H₂O）紫外部吸収スペクトル水溶液中で測定した抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1b
（濃度14γ／ml）の紫外線吸収スペクトルは第１
図に示す通りであつてλmax263mμ、Ｅ^１％_１cm＝
602.1に極大吸収を有する。また、同一濃度にお
けるPH３での紫外部吸収スペクトルにおいては、
λmax261mμ、Ｅ^１％_１cm＝566.4に極大吸収を有し、
さらに同一濃度におけるPH10での紫外部吸収スペ
クトルにおいてはλmax263mμ、Ｅ^１％_１cm＝595.0の
極大吸収を有する。赤外部吸収スペクトル KBr法による抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの赤外
部吸収スペクトルは第２図に示す通りであつて、
3360、3200、2920、1640、1600、1570、1480、
1415、1370、1330、1300、1250、1205、1160、
1115、1080、1050、1005、910、850、790、730cm
^-1の各波長に吸収帯を有する。核磁気共鳴スペクトル重ジメチルスルホキサイド中100MHzにおける
抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの核磁気共鳴スペクト
ルは第３図に示す通り（内部基準DSS）溶解性水、ジメチルスルホキサイド、ジメチルホルム
アミド、酢酸、水性アセトンに可溶性、酢酸エチ
ル、クロロホルム、ベンゼン、ヘキサンに不溶
性、呈色反応過マンガン酸カリウム脱色反応、過ヨーソ酸反
応、アニスアルデヒドは陽性、塩化第二鉄反応、
ニンヒドリン反応、アニリンフタレート反応、モ
ーリツシユ反応、フエーリング反応は陰性、酸塩基の区別弱塩基性色性状白色 Rf値（東京化成社製シリカゲルｆ使用）ｎ―ブタノール：酢酸：水（６：１：１） Rf＝0.36 ｎ―ブタノール：濃アンモニア水：水（10：
0.5：２） Rf＝0.27 ｎ―プロパノール：濃アンモニア水：水：
（10：１：１） Rf＝0.41 アセトン：水（10：１） Rf＝0.34 酢酸エチル：メタノール：水（10：２：１） Rf＝0.21 クロロホルム：メタノール：酢酸（10：２：
１） Rf＝0.17 これらの物理化学的性質などより、抗生物質Ａ
―11079―Ｂ_1bの平面構造として、次式にて示さ
れる構造であることが確認された。次に、新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの生物学
的性質について述べる。植物病原糸状菌の生育阻害作用新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの100γ／ml溶液
はHelminthosporium oryzae Ｍ 0306に対し
18.9mm径の阻止帯を有した。制ガン性マウス白血病のL1210腫瘍細胞の10⁶個をBDF₁
マウスに腹腔内投与し、翌日から１日１回５日間
本発明の新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1b（各々
0.16mg／Kg、0.32mg／Kg、0.63mg／Kg、1.25mg／
Kg、2.5mg／Kg、5.0mg／Kgを投与した）を腹腔内
投与した。対照群を10匹、薬剤投与群を各群７匹
として行なつた。その結果第４図に示す通りで、
また第４図中の縦軸は生存率を示し、横軸は日数
を示すもので、15日間の観察において、対照群の
平均生存日数7.4日に比較して、抗生物質Ａ―
11079―Ｂ_1b0.16mg／Kgの薬剤投与群は158％の延
命を示し、0.32mg／Kgの薬剤投与群は170％の延
命を示し、2.5mg／Kg、５mg／Kgの薬剤投与群は
15日目まで全例生存した。同様に、エールリツヒ腹水癌、ザルコーマ
180、p388白血病、ラツトの吉田肉腫に対して
も、著しい延命効果を示した。急性毒性抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bのマウスにおける急
〓〓〓〓〓
性毒性は腹腔内投与で13.7mg／Kgであつたが、５
mg／Kg14日間の連続投与では死亡例はなかつた。用法、用量急性白血病においては、１日５〜20mgを生理食
塩水に溶解して１日１回、７日間程度静脈内投与
する。同様に、慢性白血症、消化器癌、肺癌、子
宮癌、乳癌、悪性リンパ腫に有効に使用される。上記の諸性質より本物質は、その構造上アデニ
ン骨格を有し、かつアデニン構造以外の部分に３
個の水酸基の存在することが明らかであり、かつ
C₁₁H₁₃N₅O₃の組成式を持つ化合物で、構造上ア
デニン構造と３個の水酸基を有する化合物は、今
までに何んら報告されていないことより、本物質
たる抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bは新規な化合物と
認められる。なお、本発明の抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bは、
通常医薬的に許容される鉱物や有機酸との塩類の
形でも使用でき、例えば塩酸塩、酢酸塩、酒石酸
塩、クエン酸塩、コハク酸塩などの塩類の形で使
用できる。また、本発明の新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1b
産生の放線菌は、新瀉県中頚城郡妙高高原町のネ
ギ畑の土壤より分離した放線菌であつて、アンピ
ユラリエラ（Ampullariella）属に属するもので
あつて、アンピユラリエラ・エス・ピーＡ―
11079と称する（微工研寄託申請書受理番号第
4494号、微生物受託番号微工研菌寄第4494号、
FERM―ＰNo.4494）のものであつて、以下にそ
の菌学的諸性状について述べる。〔〕形態的性状スターチ・無機塩寒天培地上で、30℃、10〜15
日間培養し、確察した所見は次の通りである。基生菌糸は曲線状で分枝をもつて伸長し、直径
0.5〜0.8μであり、未発育の気菌糸をわずかに形
成する。基生菌糸より生じた胞子のう柄に胞子のうを着
生し、胞子のうの形は円柱状ないしビン状で、大
きさ５〜15×10〜25μであり、中に多数の胞子の
う胞子がたてに平行に連鎖して配列されている。胞子のう胞子は水中で運動性を有する遊走子で
あり、形は棒状で、大きさは0.5〜1.0×1.0〜2.0
μであり、極性でふさ状の鞭毛を有している。〔〕ジアミノピメリン酸組成全菌体分析によるジアミノピメリン酸はメゾー
及びヒドロキシ型が検出された。〔〕各種培地上における生育状態各種培地上で、30℃、20日間培養し、観察した
所見は第１表に示した通りである。スターチ・無
機塩寒天培地およびオート・ミール寒天培地上で
未発育の気菌子がわずかに形成される以外は、気
菌糸の形成は認められない。色の表示はカラー・
ハーモニー・マニアル（Color Harmony
Manual）第４版、1958年（Container
Corporation of America）による色の分類に従
つたものである。

【表】〓〓〓〓〓

【表】〔〕生理学的性質生理学的諸性状は以下に示す通りである。１炭素源の資化性

【表】

【表】〓〓〓〓〓

【表】２生育温度範囲：10〜45℃ ３脱脂牛乳：ペプトン化及び凝固ともに陽性４メラニン様色素の生成：チロシン寒天培地；陰性ペプトン・イースト・鉄寒天培地；陽性５澱粉の加水分解：陽性６セルロースの加水分解：陰性７カゼインの加水分解：陽性８ゼラチンの液化：陽性９チロシンの分解：陰性 10 キサンチンの分解：陰性 11 ヒポキサンチンの分解：陰性 12 硫化水素の生成：陰性 13 硝酸塩の還元：陰性上述のことより、本菌Ａ 11079株の性状をま
とめれば、分枝をもつた基生菌糸より生じた胞子
のう柄に胞子のうを着生し、胞子のうは円柱状な
いしビン状で、胞子のう胞子の配列が縦に平行に
並んでおり、胞子のう胞子は棒状で、ふさ状の極
毛を有し、メゾジアミノピメリン酸を含有してい
るもので、そこでバージーズ・マニユアル・オ
ブ・デイタミネイテイブ・バクテリオロジー
（Berger′s manual of determination
bacteriology）第８版1974年第707〜708頁のアク
チノプラナセア（Actinoplanaceae）の検索表に
て検索した結果、アンピユラリエラ属に属するも
のと同定され、以上のことより本菌をアンピユラ
リエラ・エス・ピー・Ａ 11079と命名したもの
である。本発明の新規抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bは下記
の如くして得られる。即ち例えば、上記のアンピ
ユラリエラ・エス・ピーＡ 11079株を培地に培
養する。この場合用いられる培地は人工培地でも
天然培地でもよく、また固体培地または液体培地
でもよいが、特に大量生産のためには液体培地が
適当である。培地成分としては抗生物質Ａ―
11079―Ｂ_1b生産菌が同化しうる炭素源、窒素
源、無機塩類、その他が用いられる。例えば炭素
源としてはグルコース、シユクロース、グリセリ
ン、可溶性スターチ、糖密などが挙られ、また窒
素源としてはペプトン、コーンスチープリカー、
大豆粉、肉エキス、米ヌカ、カゼイン水解物、硝
酸塩、アンモニウム塩などが挙られ、その他の無
機塩類としては食塩、リン酸塩、カルシウム、マ
グネシウム、鉄、マンガンなどの微量栄養物を適
宜に添加してもよい。また必要な場合には消泡剤
としてシリコーン油、大豆油などの動植物鉱物油
などを添加してもよい。これら栄養物質を含有す
る培地に生産菌株を培養するには表面培養法でも
よいが液体培養法でもよい。液体培養法を行なう
場合には、通気撹拌培養するのが有利であり、こ
の場合の培養温度は使用する菌の最適の温度25〜
30℃付近、また培養日数は条件によつて多少異な
るが通常２〜４日程度であり、さらに培地のPHは
中性ないし弱酸性のほぼ中性付近に保つのがよ
い。このようにして得られた培養物は、抗生物質Ａ
―11079―Ｂ_1bを含有しているものであつて、こ
の培養物から目的とする本抗生物質を採取するに
は、微生物の生産する代謝産物をその微生物の培
養物から採取するのに通常使用される分離手段が
適宜利用され得る。例えば本抗生物質は水溶性弱
塩基性の物質であるから、例えばその培養液を
適宜の吸着剤に接解せしめて有効成分を吸着さ
せ、次いで適宜の溶媒で溶出せしめてなる分別採
取する手段が有利に利用される。吸着剤としては
活性炭、陽イオン交換樹脂、活性アルミナ、シリ
〓〓〓〓〓
カゲルなどが用いられ、溶出溶媒は使用する吸着
剤によつて異なるが水溶性有機溶媒の含水溶液例
えば含水メタノール、含水アセトン、含水ジオキ
サンなどや酸、アルカリもしくは塩の水溶液など
が適宜用いられる。さらに、本抗生物質の弱塩基
性物質の性質を利用して電気的に分離精製に応用
することができる。例えばアンバーライトIRC―
50（商品名：ローム・アンド・ハース社製）、ア
ンバーライトIR―120（商品名）あるいはダウエ
ツクス50（商品名：ダウケミカル社製）などの陽
イオン交換樹脂に吸着させ、これを適当な酸、ア
ルカリもしくは塩の水溶液を用いて有効成分を溶
出することができる。また吸着剤とイオン交換樹脂との組合せにて分
離、採取、精製してもよく、例えば培養液を陽
イオン交換樹脂アンバーライトIR―120（商品
名）にチヤージして有効成分を吸着させ、これを
アルカリ水溶液、例えば3.7Nアンモニウア水に
て溶出して、その活性画分を得、これを中性ない
し弱塩基性にPH調整した後活性炭にチヤージして
吸着し、その後70％メタノールなどの溶出溶媒に
て溶出し、さらにこれを陰イオン交換樹脂アンバ
ーライトIRA―410（商品名）にチヤージして、
水にて溶出せしめ、有効成分を含む区分を集めて
濃縮し、粗製物を得た後、これをシリカゲルの吸
着クロマトグラフイーにて精製する。以上のような各方法で分離、精製された結果
は、再結晶法にて純化される。得られた抗生物質
Ａ―11079―Ｂ_1bが単一物質であることは、再結
晶により単一の融点を示し、各種溶媒系でのペー
パークロマトグラフイー、薄層クロマトグラフイ
ー、紙電気泳動などで単一のスポツトを示す。
即ち263mμの光線を吸収して単一の吸収像を与
える。本抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bは抗カビ性、制ガ
ン性を有している有用な化合物であり、さらに本
化合物は新規な核酸関連化合物であるため、各種
核酸系生理活性物質の合成中間体としても有用な
化合物である。次に実施例を挙げて本発明を説明するが、これ
に限定するものではない。実施例１グルコース２％、スターチ２％、イーストエキ
ス１％、カゼイン水解物１％、炭酸カルシウム
0.2％を含有する培地（PH6.5）100mlを500ml容三
角フラスコに分注し、120℃、15分間蒸気殺菌
し、本培地２本に、アンピユラリエラ・エス・ピ
ーＡ 11079株の斜面培養よりの一白金耳を接種
し、30℃、４日間振盪培養を行なつた。次いでこ
れを、上記と同一の組成の蒸気殺菌した培地20
を含有する30容ジヤーフアーメンターに移植
し、30℃、48時間、300rpm、毎分20の無菌空
気の条件下通気撹拌培養し、さらにこの培養物は
種母として、グルコース４％、大豆粉１％、肉エ
キス0.4％、ペプトン0.4％、イーストエキス0.1
％、食塩0.25％、炭酸カルシウム0.1％の液体培
地200（PH6.5）に移植し、180rpm、毎分130
の通気量の条件下30℃、40時間通気撹拌培養を行
なつた。次いで得られた培養物約200を過
し、液および水洗液を合して約140を得た
（培養力価57mcg／ml）。さらにこの溶液を陽イオ
ン交換樹脂アンバーライトIR―120（H⁺型）（商
品名）20のカラムにチヤージせしめて有効成分
を吸着せしめた後約100の水で洗浄し、次いで
3.7Nアンモニア水で溶出を行ない、最初の30
を捨て、次の90を回収し、これを6N塩酸にて
PH８に調整し、この溶液を活性炭４のカラムに
チヤージし、水洗した後、70％メタノール液90
にて溶出し、得られた溶出液を約1.5まで減圧
濃縮し、これを陰イオン交換樹脂アンバーライト
IRA―410（OH^-型）（商品名）10にチヤージ
し、次いで水で溶出し、この溶出液を減圧濃縮
し、低温下放置して析出せしめ、これを取し、
抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bを含有する粗物質41.8
ｇ（純度約12％）を得た。次いで、この粗物質41.8ｇを、あらかじめｎ―
ブタノール：28％アンモニア水：水（10：0.2：
１）にて充填したシリカゲルカラム約２（径
8.3×40cm）にチヤージして、上記と同一の溶媒
を用いて溶出し、１フラクシヨン150mlずつ分画
して活性フラクシヨンNo.24〜52を得、これを併合
し、濃縮した後低温にて放置して、その析出物を
取して抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの粗結晶2.6ｇ
（収率32％）を得た。次いでこれを、約60.0mlの熱水に溶解し、これ
を室温下放置して抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの白
色針状結晶が析出し、これを取して、抗生物質
Ａ―11079―Ｂ_1bの結晶2.01ｇ（収率25.2％）を得
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た。また本物質のマススペクトル（日立製作所製マ
ススペクトロメーター使用）は、分子ピーク
263、基準ピーク136を示すものであつた。さらに本物質を無水酢酸：ピリジン（１：１）
の混合物中に加えて室温下―昼夜反応せしめて、
本物質のテトラアセチル誘導体（このマススペク
トルは分子ピーク431、基準ピーク136であつた）
を得た。またこのアセチル誘導体においてこのテ
トラアセチル誘導体以外に、ペンタアセチル誘導
体（分子量473）の生成が微量認められた。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの紫外部吸
収スペクトルを示し、第２図は抗生物質Ａ―
11079―Ｂ_1bの赤外部吸収スペクトルを示し、第
３図は抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bの核磁気共鳴ス
ペクトルを示し、第４図は抗生物質Ａ―11079―
Ｂ_1bのL1210細胞に対する効果を示した図を示
す。〓〓〓〓〓

Claims

【特許請求の範囲】１下記構造式で示される新規抗生物質Ａ―
11079―Ｂ_1bまたはその医薬的に許容される塩。２資化性の炭素源および窒素源ならびに無機物
質を含む培地にアンピユラリエラ属に属する抗生
物質Ａ―11079―Ｂ_1b産生菌を接種し、培養後、
その培養物より抗生物質Ａ―11079―Ｂ_1bを採取
することを特徴とする新規抗生物質Ａ−11079−
Ｂ_1bの製法。３アンピユラリエラ属に属する産生菌がアンピ
ユラリエラ・エス・ピー・A11079である特許請
求の範囲第２項記載の新規抗生物質Ａ―11079―
Ｂ_1bの製法。