JPH01149791A - 化合物ｔａｎ−９９９、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 級鼠上Δ秤且分」 本発明は細菌、真菌等の感染症および悪性腫瘍の治療剤
として有用な新規化合物ＴＡＮ−９９９（以下ｒＴＡＮ
−９９９Ｊと略称することもある）およびその製造法に
関する。

従来の技術 本発明の化合物に最も類似の抗生物質としてスタウロス
ポリン［Ｓ　ｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＡＭ　−２２
８２）−ジャーナル・オブ・アンティビオティクス（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、３０
巻、２７５頁、１９７７年およびＪ、Ｃ，Ｓ、ケミカル
・コミュニケーション（Ｊ、Ｃ，Ｓ、Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍ
ｍ、　）、８００頁、１９７８年］が挙げられるが、こ
の化合物とＴＡＮ−９９９とはメトキシ基の存否が異な
り、ＴＡＮ−９９９は新規化合物である。また生物活性
に関しては、この系統のアルカロイド化合物にプロティ
ンキナーゼの阻害作用［ジャーナル・オブ・アンティビ
オティクス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ）、３４巻、１０５９頁、１９８６年；同３５巻
、７０６頁、１９８７年］や血小板凝集抑制作用［アグ
リカルチエラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　　ａｎｄ　　Ｂ　ｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）、５０巻、２７２
３頁、１９８６］が認められることが最近報告されてい
る。

発明が解決しようとする問題 マクロファージなどの食細胞は、通常生体内において外
来の異物や老廃物を食食、消化し、無毒化して排除する
のみならず、腫瘍細胞に対する増殖抑制作用、種々の活
性物質の産生による生体機能の制御、免疫の成立と発現
など極めて多様な能力を有し、生体防御に重要な役割を
果たしている。

近年、細菌、真菌、ウィルス等の感染、悪性腫瘍および
その治療、臓器移植における免疫抑制剤の投与等によっ
て宿主の食細胞やリンパ球等の機能が低下すると、感染
やその他の諸疾患に対する抵抗力が衰え、種々の病気に
罹患しやすくなり、また重篤化することが医療分野で大
きな問題となっている。これらの問題を克服するために
、当分野ではマクロファージ等の食細胞機能の賦活作用
を有する新規な化合物あるいはそれらの化合物を合成す
るための中間原料が求められている。

問題熱を解決するための手段 本発明者らは、かかる現状に鑑みて、新たな観点からマ
クロファージ賦活物質の研究を重ねた。

その結果、土壌から分離された多数の微生物中、ある種
の微生物が適宜の培地に培養することによって、マウス
由来培養系マクロファージを活性化して、形態を著しく
変化させる作用を有する化合物を培地中に蓄積しうろこ
とを知り、この化合物を単離し、その物理化学的および
生物学的性質から、当該化合物が新規化合物であること
を確かめ、これをＴＡＮ−９９９と称することにした。

また、該微生物がノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉ
ｏｐｓｉｓ）属に属することが判明した。本発明者らは
、これらの知見に基づいてさらに研究を重ね、本発明を
完成するにいたった。

すなわち本発明は、（１）ＴＡＮ−９９９またはその塩
、および（２）ノカルディオプシス属に属するＴＡＮ−
９９９生産菌を培地に培養し、培養物中にＴＡＮ−９９
９を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
ＴＡＮ−９９９の製造法を提供するものである。

本発明方法で使用されるＴＡＮ−９９９を生産する菌と
しては、ノカルディオプシス属に属し、ＴＡＮ−９９９
を産生ずる能力を有する微生物であればいずれのもので
もよい。その例としては、土壌より分離されたＣ−７１
４２５株が挙げられ、本菌株の菌学的性質は下記のとお
りである。なお、各種培地上の性質はとくに指示しない
限り、２８℃で１４日間培養し、常法に従って観察した
ものであり、色調はカラー・ハーモニー・マニュアル（
Ｃｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）第４版［
コンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃ
ｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍ
ｅｒｉｃａ）、１９５８年発行］によった。

１、形態 気菌糸および胞子の形成は、酵母エキス・麦芽エキス寒
天、澱粉無機塩寒天、グリセロール・アスパラギン寒天
等の培地上で中程度に認められる。

気菌糸の分枝は単純分岐で、車軸分岐は認められず、そ
の先端には、屈曲状に胞子の連鎖が認められる。菌束糸
、菌核、胞子のう等の特殊な構造は認められない。電子
顕微鏡による観察では、胞子の表面は平滑であり、胞子
の形は卵形ないし円筒形であり、それらの大きさは０．
３〜０．６Ｘ０゜７〜１．２ミクロンで、通常１０個以
上連鎖する。

また、これらの胞子は運動性を示さない。

２、各種分類培地上の性質（２８°Ｃ，１４日間培＃） ■）蔗糖硝酸塩寒天培地 生育：良好 気菌糸；中程度、白色 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜ライト・タ
ン（３ｇｃ） 可溶性色素：なし ２）酵母エキス・麦芽エキス寒天培地 生育：良好 気菌糸：中程度、白色 裏面の色ニライト・ウィート（２ｅａ）〜ライト・アン
バー（３ｉｃ） 可溶性色素：なし ３）オート・ミール寒天培地 生育：良好 気菌糸：中程度、白色 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜ライト・ウ
ィート（２ｅａ） 可溶性色素；なし ４）澱粉無機塩寒天培地 生育　良好 気菌糸：中程度、白色 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜メイズ（２
ｇａ） 可溶性色素：なし ５）グリセロール・アスパラギン寒天培地生育：良好 気菌糸・中程度、白色 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜メイズ（２
ｇａ） 可溶性色素：なし ６）グルコース・アスパラギン寒天培地生育：良好 気菌糸：中程度、白色 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜メイズ（２
ｇａ） 可溶性色素：なし ７）ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地生育：中程度 気菌糸：着生せず 裏面の色；ハニー・ゴールド（２ｉｃ）可溶性色素：な
し ８）チロシン寒天培地 生育；良好 気菌糸：中程度、白色 裏面の色ニライト・ライ−）　（２ｅａ）〜ライト・ゴ
ールド（２ｉｃ） 可溶性色素：なし ９）カルシウム・マレイド寒天培地 生育：中程度 気菌糸：貧弱、白色〜パール（２ｂａ）裏面の色コライ
ト・アイポリ−（２ｃａ）可溶性色素：なし ３、生理的性質 １）生育温度：　ＩＯ℃〜３４℃ 至適温度：　１７°Ｃ〜３０°Ｃ ２）ゼラチンの液化：陽性 ３）澱粉の加水分解：陽性 ４）ミルクのペプトン化；陽性 ５）ミルクの凝固：陰性 ６）硝酸塩の還元：陽性 ７）メラニン様色素の生成：陰性 ８）炭素源の利用性： Ｄ−ソルビトール＋　　シュークロース＋ｉ−イノシト
ール＋　ラクトース　　＋Ｄ−マンノース　士　ラフィ
ノース　＋Ｄ−キノロース　　十　　トレハロース　　
＋Ｌ−アラヒノース＋　マンノース　　＋Ｄ−カラクト
−ス＋　可溶性澱粉　　十り−グルコース　＋　グリセ
ロール　＋Ｄ−フラクトース士　メリビオース　＋ラム
ノース　　　士　マルトース　　　＋セルロース　　　
−　　リボース　　　＋無添加　　　　− 基礎培地：ブリードハムとゴヅトリーブ寒天培地 ４、全菌体の加水分解中のジアミノピメリン酸および糖
の分析 本菌は、全菌体の加水分解物中にメソ−ジアミノピメリ
ン酸を含有し、アラビノースおよびマジュロースを含ま
ない。

以上の分類学的性質を要約すると、Ｃ−７１４２５株は
、■気菌糸先端が屈曲状を呈し、胞子表面は平滑である
、■菌束糸を形成せず、運動性胞子を生成しない、■発
育色調は、淡黄色ないし黄褐色を呈し、気菌糸は白色で
ある、■菌体よりメソ−ジアミノピメリン酸が検出され
るが、アラビノースやマジュロースは検出されないこと
に上り本菌は細胞壁タイプ■で糖型はＣ型に帰属する。

以上の性質をもとに、アール・イー・ブッファナン・ア
ンド・エヌ・イー・ギボンス編、バーシーズ・マニュア
ル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロノー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｒＤｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版、
１９７４年および同第９版、１９８６年に従って菌種の
検索を行った結果、上記Ｃ−７１４２５株は、ノカルデ
ィオプシス属に属することが判明したので、本菌をノカ
ルディオプシス・ニス・ピー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉ
ｓ　ｓｐ、）Ｃ−７１４２５と命名した。

Ｃ−７１４２５株は昭和６２年１１月１１日に財団法人
発酵研究所（■Ｆｏ）に受託番号Ｉ　ＦＯ−１４６７３
として、また本菌は昭和６２年１１月１８日に通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（ｐＲｔ）に受託番
号ＦＥＲＭ　　Ｐ−９７１３としてそれぞれ寄託されて
いる。

ノカルディオプシス属に属するＴＡＮ−９９９の生産菌
は、他の放線菌の場合と同様に、たとえば紫外線乏エッ
クス線、放射線等の照射、単胞子分離、種々の変異処理
、その他の手段で変異させることかでき、このような変
異株あるいは自然に得られる突然変異株であっても、上
記した分類学的性状との比較において実質的に別種とす
るに足らず、しかも当該化合物を生産する性質を有する
ものはすべて本発明方法に利用し得る。

当該化合物生産菌の培養に用いられる培地は該菌が利用
し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが
、大量に処理するときには液体培地を用いるのかより適
当である。培地には、当該化合物生産菌が同化し得る炭
素源、窒素源、無機物質、微ｍ栄養素が適宜配合される
。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ糖、
麦芽糖、デキストリン、鱗粉、グリセリン、マンニトー
ル、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、ラード浦、チ
キン油など）、ｎ−パラフィンその他が、窒素源として
は、たとえば肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉
、コーン・ステイープ・リカー、ペプトン、綿実粉、廃
糖蜜、尿素、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム
、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウムなど）その他が用いられる。さらにナトリウム、カ
リウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む塩類、鉄
、マンガン、亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩類
、リン酸、ホウ酸などの塩類や酢酸、プロピオン酸など
の有機酸の塩類が適宜用いられる。その他、アミノ酸（
例、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン
、メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例、ジペプ
チド、トリペプチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ５、Ｂ
２、ニコチン酸、Ｂ１２、Ｃなど）、核酸類（例、プリ
ン、ピリミジン、その誘導体など）等を含有させてもよ
い。もちろん、培地のｐＨを調節する目的で無機または
有機の酸、アルカリ類、緩衝剤等を加え、あるいは消泡
の目的で油脂類、界面活性剤等の適量を添加して差し支
えない。液体培養に際しては、培地のｐＨは中性付近、
特に１）Ｔ（約６〜８が好ましい。培養温度は約２４℃
〜３０°Ｃ１培養時間は約４８時間〜１２０時間が好ま
しい。

培養の経過に伴って生産されるＴＡＮ−９９９の力価は
マウス由来培養系マクロファージＭｍ１を被検細胞とす
る液体希釈法に従って定量される。

通常、約２〜３日間の培養でＴＡＮ−９９９の生産量は
最高に達する。

培養物から目的とする化合物ＴＡＮ−９９９を採取する
には、ＴＡＮ−９９，９が塩基性で脂溶性を示す化合物
であるから、この性質を利用する一般的手段で採取する
ことができる。

培養物中ＴＡＮ−９９９は菌体および濾液中に含まれる
ので、培養液をｐ）１６ないし１１、好ましくはｐＨ８
ないしＩＯに調整後、水と混和しない有機溶媒、たとえ
ばジクロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケト
ンあるいはイソブタノールなどを加え、活性物質を抽出
する方法が用いられる。また、培養液中に水と混和する
有機溶媒、たとえばアセトンあるいはメタノールなどを
加え、撹拌、抽出し、不溶物を濾去後、抽出液中の有機
溶媒を減圧下留去し、得られた水溶液を前記抽出法に付
すかあるいは吸着性樹脂たとえばアンバーライトＸＡＤ
−ＩＩ（ローム・アンド・ハース社製、米国）、ダイア
イオンＨＰ−２０（三菱化成社製、日本）またはアンバ
ーライト５Ｐ−２０７（三菱化成社製、日本）などを用
いたクロマトグラフィー法に付す方法が有利に用いられ
る。なお、吸着性樹脂を用いたカラムから目的の活性物
質を溶出するには、水または含水溶媒、たとえば含水メ
タノール、含水アセトンなどが有利に用いられる。かく
して得られた抽出液あるいは溶出液を減圧下濃縮すると
、ＴＡＮ−９９９を含有する組物質が得られる。

組物質をさらに精製し、純粋なＴＡＮ−９９９を得るに
は種々のクロマトグラフィー法が有利に用いられる。担
体としてはシリカゲル、セルロース、セファデックスＬ
　Ｈ−２０（ファルマシア社製、スウェーデン）などが
用いられ、これらは通常カラムクロマトグラフィー法で
行われる。カラムから活性物質を溶出するには適当な有
機溶媒たとえば酢酸エチル、ンクロロエタン、アセトン
、メタノールなどの単独あるいは混合溶媒が用いられろ
。溶出液を濃縮し、冷所で放置するか、濃縮残渣を適当
な結晶化溶媒たとえばジエチルエーテル、酢酸エチル、
メタノールあるいはこれらの混合液で溶解し、冷所で放
置すると、ＴＡＮ−９９９の結晶が得られる。

ＴＡＮ−９９９は塩基性物質なので、適当な鉱酸で処理
することによってＴＡＮ−９９９の塩が得られる。これ
らは自体公知の方法によって調製される。塩の種類とし
てはたとえば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩などが挙げられ
る。

かくして、後記の実施例２で得られたＴＡＮ−９９９の
物理化学的性質はつぎのとおりである。

１）外観：無色結晶 ２）融点：　ｍｐ２２１　’Ｃ（分解点）３）比旋光度
：［α］も１＋４２°（Ｃ０，５、ＤＭＦ中）４）マス
・スペクトル測定値：　ｍ／Ｚ　４９６（Ｍ”、ＥＩ−
ＭＳ法） ５）元素分析値＝（％） 実測値、　Ｃ，６８，５９，Ｈ，５，６４，Ｎ、１０．
８６計算値、　Ｃ，６８，９０，Ｈ，５，７８，Ｎ、１
１．０８゜０．１４．２４＊ （＊水０．５モルを含むとして計算） ６）分子式：　Ｃｔｅ１４ｔｓＮ４０＋７）紫外部吸収
（ＵＶ）スペクトル：メタノール中、 第１図、λｍａｘ　ｎｍ（Ｅ　ｊＺ）２４５（６３０）
、２９６（１２＋５）、３４１（３９４）、３５２（肩
）、添付の第１図参照。

８）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：　ＫＢｒ中、第２
図％　ｖｍａｘ　ｃｍ＝、主な吸収３４３０．２９５０
．１６８０．１５９０．１４６０．１４２０．１３６０
．１３２０．１２９０．１２６０、＋２１０．１１２０
．１０４０．８４０．８００．７６０．６４０．６００ 添付の第２図参照。

９）１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：３００　Ｍ
　Ｈｚ％ＣＤ　ＣＱｙ中、δｐｐｍ　Ｊ　（Ｈｚ）９．
４０（ｄ、Ｊ−７，８）、７．７５（ｄ、Ｊ＝８．５）
、７．４６（ｔ）、７．４６（ｄ）、７．３５（ｔ）、
７．２７（ｄ、Ｊ＝８．０）、６．９６（ｄｄ、Ｊ＝２
．０）、６．５３（ｄ、Ｊ＝５．６）、６．２８（ｓ）
、４．９６　（２Ｉ（、ｑ＋Ｊ＝１７）、３．９５（３
Ｉ−Ｉ、ｓ）、３．８７（ｄ、Ｊ＝３゜５）、３．４４
（３Ｈ，ｓ’）、３　、３５　（ｍ）、２．７５（ｄｄ
。

Ｊ＝１４．７，４．０）、２．３８（ｍ）、２．３３（
３Ｈ，ｓ）、１．５７（３Ｈ，ｓ）。

１０）”ＣＮＭＲスペクトル＋７５ＭＨｚ。

ＣＤＣＣｊ中、δｐｐｍ １７３．８１ｓ、　　１５７．４９ｓ、　　１４１．０
４ｓＳ　１３６．６７ｓ、１３１．４８ｓ、１３０．６
３ｓ、１２７．０９ｓ、１２６．５０ｄ、　　１２４．
８８ｄＳ　１２３゜５５ｓ、　　１２０．９４ｄ、　　
Ｉ　　１９．６５ｄ１１１８．９２ｓ、Ｉ　　１ｇ、５
８ｓ、１１４．８８ｓ、１１４．２４ｓ、１０７．９４
ｄ、１０６．８９ｄ、１００．７２ｄ。

９１．０６ｓ、８４．２６ｄ１８０．Ｉ２ｄ、５７．２
４ｑ、　　５５．７８ｑ、　　５０．３６ｄ、　　４５
．９２ｔ、　　３３．３８ｑ、３０．２９ｔ、２９．６
９ｑ、　　（ただし、Ｓ：シングレット（ｓｉｎｇｌｅ
ｔ）、ｄ：ダブレット（ｄｏｕｂｌｅｔ）、Ｌニトリブ
レット（ｔｒｉｐｌｅｔ）、ｑ：カルチット（ｑｕａｒ
ｔｅｔ）） １１）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体−シリ
カゲル６０　Ｐ　２５４（メルク社製、西独） 展開溶媒：酢酸エチル：メタノール（９６：４）Ｒｆ＝
０．１１ １２）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体
：　ＯＤＳカラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　Ａ３１２、山村
化学研究新製） 移動相：　５５％アセトニトリル７ｏ、ｏ　１Ｍリン酸
バッファー（ｐＨ６，３） 流速：２ｍρ／ｍｉｎ 検出：２５４ｒ＋ｎ＋ Ｒｔ＝　６　、０　（ｍｉｎＸスタウロスポリン：Ｒｔ
＝６．３ｍ１ｎ） １３）呈色反応： 陽性：ニンヒドリン、エールリッヒ、ドラーゲンドルフ
、バートンおよびブリ ーフ、リーバツク反応 １４）物質の区分： 塩基性脂溶性物質 以上述べた物理化学的性状およびＮＭＲスペクトルの種
々の解析（ＣＯＳＹ法、Ｉ８　１３Ｃコリレーション（
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）法、Ｃ０ＬＯＣ法およびＮ０
ＥＳＹ法）によってＴＡＮ−９９９の化学構造は下記式
と決定された。

■ Ｎ＋１ ■ Ｃ１（３ ＴＡＮ−９９９の生物活性はっぎの実験によって示すこ
とができる。

先ず、マウスの培養系マクロファージＭｍｌ細胞に対す
る作用を第１表に示す。

第１表 ＴＡＮ−９９９の培養系マクロファージ活性化作用 能 →−：陽性、±：陽性であるが微弱、−二陰性薬剤を含
むギフト培地（日本製薬製、日本）中、５％Ｃ０２下で
３７°Ｃ，３日間培養後、細胞形態を観察した。

また、ＴＡＮ−９９９５ｎｇ／ｍ０．の存在下で２日間
培養したマウス培養系マクロファージＭｍｌおよびＪ７
７４Ａ−１のラテックス粒子食合能は、薬剤無添加の場
合に比べて約９倍および１２倍にそれぞれ増強していた
。次にＣ５７ＢＬ／６（１０週退会雌）マウスに１０％
プロテオース・ペプトン（デイフコ社製、米国）液を腹
腔内投与し、４日目に腹腔細胞を採取し、この中からプ
ラスティック接着性細胞を集め、これをマクロファージ
として用い、ＴＡＮ−９９９のマウス、マクロファージ
に対する作用を調べた。その結果、ＴＡＮ−９９９０、
１ｎｇ／好存在下で２日間培養［１０％（Ｖ／Ｖ）牛胎
児血清（ライツタカー・エム・ニー・バイオプロダクツ
社製、米国）含有ＲＰＭＩ　　１６４０培地（ライツタ
カー・エム・ニー・バイオプロダクツ社製、米国）コし
たマクロファージのザイモザン（ジクマ社製、米国）に
対する貧食能依存性活性酸素放出能（ルミノール依存性
化学発光法で測定）は薬剤無添加の場合に比べて約２倍
に増強していた。

次に、ＴＡＮ＝９９９のマウス腫瘍細胞に対する増殖阻
害作用を第２表に示す。

準主表 ＴＡＮ−９９９の腫瘍細胞増殖阻害作用以上の物理化学
的性状および生物学的性状から明らかなように、ＴＡＮ
−９９９は新規化合物であり、マクロファージを活性化
し、腫瘍細胞に対する強い増殖抑制作用を示すので、医
薬、動物薬として有用な物質である。

化合物（１）を抗腫瘍剤として用いる場合、希釈剤、賦
形剤、担体などと混合して、薬剤学的に許容される製剤
と（２、経口的または非経口的に投与する。

例えば、注射剤として用いる場合は、化合物（■）の塩
を水溶性注射剤と１．て、成人１日当たり０゜Ｉ　ｍ９
／　ｋｇ〜Ｉ　Ｏｍ９／　ｋｇを静脈から投与する。　
　、Ｘ胤倶 以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明す
るが、これによって本発明が限定されるものではない。

なお、培地におけるパーセント（％）は、とくに断りの
ない限り重量／容量パーセントを表わす。

実施例１ 酵母エキス、麦芽エキス斜面寒天培地に培養したノカル
ディオプシス・ニス・ピーＣ−７１４２５（Ｉ　ｒ’Ｏ
−１４６７３、ＦＥＲＭ　　Ｐ−９７１３）を２００順
容三角フラスコ内のグルコース２％、可溶性澱粉３％、
生大豆粉１％、コーン・ステイープ・リカー１％、ペプ
トン０．５％、ＮａｃＱｏ、３％、Ｃａ００３０．５％
を含む４０７１１１２の種培地（ｐＨ７、０）に接種し
、２８℃、４８時間回転振盪機上で培養し、前培養液を
得た。得られた前培養液の５１１Ｑを２０００＋１２容
坂ロフラスコ内の５０（ＪｒｔｒＱの種培地に移植し、
２８℃、４８時間往復振盪機上で培養し、種培養液を得
り。この種培養液５００ｍ（を種培地（上記種培地と同
一組成）３０Ｑを含む５０１２容ステンレス・スチール
・タンクに移植し、通気３０１２／分、撹拌２８０回転
／分、内圧Ｉｋｇ／ａｍ”の条件で培養した。得られた
培養液の５Ｑを２００Ｑ容ステンレス・スチール・タン
ク内のグルコース０．５％、デキストリン５％、脱脂大
豆粉３．５％、Ｃａ　ＣＯ３０、７％を含むＩ２０Ｑの
主培地（ｐｉ（７，０）に移植し、２８℃、通気＋２０
Ｃ／分、撹拌１８０回転／分、内圧１に９／Ｃｍ２の条
件で９６時間培養した。

実施例２ 実施例１によって得られた培養液＋１０ρを希水酸化ナ
トリウム溶液でｐＨ９に調整後、酢酸エチルｌｌ０Ｃを
加え、６０分間撹拌し、溶液中にハイフロス−パーセル
４　、５　ｋｇを加えて濾過した。

得られた抽出酢酸エチル層８０Ｑを水２５１２で洗った
後、濃縮し、油状の濃縮物をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（シリカゲル：５０９）に付した。

酢酸エチル・メタノール（９０：１０）の溶出液を濃縮
後、冷保するとＴＡＮ−９９９の淡黄色結晶１゜１ｇが
得られた。また、結晶母液およびシリカゲルクロマトグ
ラフィーにおける回収フラクションを集め、濃縮し、濃
縮液を再シリカゲルクロマトグラフィーに付し、上記と
同様に処理してＴＡＮ−９９９の結晶５８８ｒ！ｙを得
た。

実施例３ 実施例２で得られたＴＡＮ−９９９の結晶１００ｍ９を
クロロフ中ルム３０ｍｇに溶解し、塩酸ガスを導入した
溶液中に沈澱が生じ、これを濾取し、ＴＡＮ−９９９モ
ノ塩酸塩８７ｍｇが得られた。

［α］Ｄ−１２，８°（ＣＯ，５，ＭｅＯＨ中）元素分
析（Ｃ２ｅ　Ｈ２８Ｎ　４・１．５ＨＣ］・２．５Ｈ２
０として） 実測値：　Ｃ，５９，１１，Ｈ，６，００；　Ｎ、９．
５４．　ＣＩ、９．００計算値：　Ｃ，５８，４１，Ｈ
，５，８３，Ｎ、９．４０．　ＣＩ、８．９２

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、化合物ＴＡＮ−９９９のＵＶス
ペクトルおよびｒＲスペクトルをそれぞれ示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記式（ I ）で示される化合物ＴＡＮ−９９９
   またはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ）
2. （２）ノカルディオプシス属（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉ
   ｓ）に属する化合物ＴＡＮ−９９９生産菌を培地に培養
   し、培養物中にＴＡＮ−９９９を生成蓄積せしめ、これ
   を採取することを特徴とする化合物ＴＡＮ−９９９の製
   造法。
3. （３）化合物ＴＡＮ−９９９またはその塩を含有してな
   るマクロファージ賦活化剤。