JP2890125B2 - 化合物ｔａｎ―１３０７およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は真菌感染症の治療剤として有用な新規抗生物
質TAN−1307およびその塩ならびにそれらの製造法に関
する。

従来の技術 本発明の新規抗生物質TAN−1307はその物理化学的お
よび生物学的データなどから新規アミノ酸系抗生物質で
あり、以下に記載する式［Ｉ］で示される構造を有して
おり、このような抗真菌性抗生物質は未だ報告されてい
ない。

発明が解決しようとする課題 真菌によって惹起される疾病は抗生物質あるいは合成
抗菌剤投与による治療法の発達によってかなり克服され
ている。しかし、従来の真菌性抗生物質は毒性（副作
用）が強いものが多く、またそれらを長期あるいは大量
に投与することによる起因菌の変化（菌交代現象）ある
いは耐性菌の出現（耐性化現象）などは現在の真菌感染
症治療医学分野で大きな問題となっている。これらの問
題を克服するために、当分野では、常に毒性（副作用）
が弱く、新規骨格を有し、新しい生物活性を示す抗生物
質、あるいはそれらを合成するための中間原料などが求
められている。

課題を解決するための手段 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多
数の微生物を土壌より分離し、その生産する抗生物質を
分離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物質
を生産すること、該微生物がストレプトミセス属に属す
る菌種であること、該抗生物質が新規な抗生物質である
ことを確かめ、これを化合物TAN−1307と称することに
した。

本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を
重ねた結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）化合物TAN−1307またはその塩およ
び（２）ストレプトミセス（Streptomyces）属に属し、
化合物TAN−1307を生産する能力を有する微生物を培地
に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とする化合物TAN−1307の製造法
に関する。

なお、本明細書において「化合物（抗生物質）TAN−1
307」を単に「TAN−1307」と称することもある。

TAN−1307の生産菌としては、TAN−1307を産生する能
力を有するものであれば如何なる微生物でも良いが、た
とえば本発明者らが分離し、ストレプトミセス・エスピ
ー Ｂ−14（Streptomyces SP.B−14）と名付けた菌株
またはそれに類縁の菌株などはもっとも有効に用いられ
る一例である。以後本菌をＢ−14菌と略称することもあ
る。

該菌の形態的特徴および分類培地上の培養所見はたと
えば次のとおりである。

本菌においては通常の分類培地上で気菌糸が形成さ
れ、それらは単純分枝を示し、また胞子形成菌糸は螺旋
状を呈する。胞子は10個以上連鎖しており、その表面は
とげ状で、大きさは0.9〜1.0μｍ×1.1〜1.2μｍであ
る。通常の分類培地上で胞子のう，鞭毛胞子，菌核など
の形成は認められない。

本菌の分類培地上の生育状態はつぎのとおりである。
とくに記載しない限り28℃で21日間観察した培養所見で
ある。なお、記載中（ ）内はカラー・ハーモニー・
マニュアル第４版（コンティナー・コーポレーション・
オブ・アメリカ 1958年）による色名の記載である。

Ｂ−14菌の生理的性質は次のとおりである。

（１）生育温度範囲:13.5〜48℃で生育するが37〜40℃
でより良好な生育を示す。

（２）ゼラチンの液化：陽性 （３）スターチ加水分解：陽性 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化：陽性 （５）メラニン様色素の生成：陰性（ペプトン・イース
ト・鉄寒天培地およびチロシン寒天培地） （６）硝酸塩還元：陰性（インターナショナル・ストレ
プトミセス・プロジェクトNo.8培地） （７）炭素源の利用性（プリドハム・ゴットリーブ寒天
培地） よく利用される炭素源 イノシトール,D−マンニトール,D−キシロース,D−グ
ルコース,D−フラクトース，ラフィノース,L−アラビノ
ース，ラムノース，シュークロース Ｂ−14菌菌体の塩酸加水分解中にはLL−ジアミノピメ
リン酸が検出された。このことから本菌はストレプトミ
セス属に属すると考えられる。Ｂ−14菌の形態的特徴，
培養所見，生理的性質に基き、本菌をストレプトミセス
・エスピーと同定し、ストレプトミセス・エスピー Ｂ
−14（Streptomyces SP.B−14）と名付けた。本発明に
使用されるストレプトミセス・エスピー Ｂ−14は平成
１年10月31日から財団法人発酵研究所（IFO）に受託番
号IFO−14969として、また平成１年11月７日から通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所（FRI）に受託番
号FERM BP−2640としてそれぞれ寄託されている。

ストレプトミセス属菌の一般的性状として菌学上の性
質はきわめて変異しやすく、ストレプトミセス・エスピ
ー Ｂ−14もその例外ではない。したがって、本菌の性
質も上述のとおりに一定のものではなく種々の変異体が
容易に得られる。しかしこれらの変異株にあってもTAN
−1307を生産する性質を失わないかぎり本発明の方法に
使用することができる。もちろんそれらの変異が自然の
原因に由来するものであっても各種変異誘起剤（例えば
紫外線，エックス線，放射線，ニトロソグアニジン等）
を用いて人工的に行なわれたものであってもさしつかえ
ない。

本発明の方法において培養に際しては、一般に微生物
が同化しうる炭素源、消化しうる窒素源および無機塩な
どを含有させた培地が使用される。また培地には必要に
応じて微量栄養素，発育促進物質，前駆物質などの微量
有効物質を添加してもよい。一般に微生物が同化しうる
炭素源としてはぶどう糖，しょ糖，糖みつ，でんぷん，
デキストリン，グリセリンなどがあり、消化しうる窒素
源としては肉エキス，大豆粉，コーンスティープリカ
ー，ペプトン，カゼイン，綿実粕など、および硝酸塩
類，アンモニウム化合物などの無機窒素化合物などがあ
り、それらはいずれも有効に利用される。培養は表面培
養法によってもよいが、深部通気培養法によるのが通常
である。深部通気培養法による場合、培地の性質は中性
付近にするのがよく、培養時の温度は20〜36℃付近、好
ましくは24〜30℃に保つのがよい。しかしこれらの培養
組成物，培地の液性，培養温度，撹拌数などの培養条件
は使用する菌株の種類や外部の条件などに応じて好まし
い結果が得られるように適宜調節，選択されることはい
うまでもない。

培養物から目的とするTAN−1307を採取するには微生
物の生産する代謝物をその微生物培養物から採取するの
に通常使用される分離手段が適宜利用される。たとえば
TAN−1307は水溶性両性物質の性質を示し、主として培
養ろ液中に含まれるので、まず培養液にろ過補助剤を加
えてろ過、あるいは遠心分離によって菌体を除去し、得
られた培養ろ液を適宜担体に接触させてろ液中の有効成
分を吸着させ、ついで適宜の溶媒で有効物質を脱着さ
せ、分別採取する手段が有利に利用される。クロマトグ
ラフィーの担体としては活性炭、シリカゲル、粉末セル
ロース、吸着性樹脂など化合物の吸着性の差を利用、ま
たはイオン交換樹脂、イオン交換セルロース、イオン交
換セファデックス，セファデックスなど化合物の官能基
の差を利用、あるいは分子ふるい性担体類など化合物の
分子量を差を利用するもの等が有利に用いられる。これ
ら担体から目的とする化合物を溶出するためには担体の
種類、性質によって組み合せが異なるが、たとえば水溶
性有機溶媒の含水溶液すなわち、含水アセトン、含水ア
ルコール類など、あるいは酸、アルカリ、緩衝液もしく
は無機あるいは有機塩を含む水溶液などから適宜組み合
わせて用いられる。

さらに詳しくは、担体として陽イオン交換樹脂たとえ
ばアンバーライトIR−120（ローム・アンド・ハース社
製、米国），ダウエックス50W（ダウ・ケミカル社製、
米国），ダイヤイオンSKIA（三菱化成社製）または陰イ
オン交換樹脂たとえばアンバーライトIRA−402,IRA−6
8,IR−45（ローム・アンド・ハース社製、米国），ダイ
ヤイオンSA10B,PA−404,WA−30（三菱化成社製）などを
用いるとろ液中の本抗生物質が吸着され、塩，アルカリ
あるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶出され
る。また、イオン交換分子ふるい性樹脂たとえばQAEま
たはCM−セファデックス（ファルマシア社製、スウェー
デン）などの担体に本抗生物質を吸着せしめ、塩類、ア
ルカリあるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などによ
って溶出させることが出来る。これらの溶出液中の塩
類、着色物質などを取り除くためにはクロマト用活性炭
（武田薬品工業社製），吸着性樹脂たとえばダイヤイオ
ンHP−20,SP−207（三菱化成社製），アンバーライトXA
D−II（ローム・アンド・ハース社製、米国），分子ふ
るい性樹脂セファデックスLH−20（ファルマシア社製、
スウェーデン）あるいは結晶セルロース（旭化成社製）
などが有利に用いられる。またろ液中あるいは溶出液中
の脂溶性物質などを取り除くために活性炭あるいは吸着
性樹脂などのカラム中を通過させる、あるいは水と混和
しない有機溶媒、たとえばジクロロメタン，酢酸エチ
ル，メチルイソブチルケトンなどでこれらを除去するこ
となども適宜組合せて行われる。

さらに化合物を最終的に精製する場合に分取用高速液
体クロマトグラフィー（HPLC）法も有利に用いられる、
この方法を適用する場合、担体としては逆相系樹脂たと
えばYMCゲル（山村化学研究所）あるいはTSKゲル（東洋
曹達工業社）などが用いられ、移動相としては緩衝液に
メタノール，アセトニトリルなどを添加した溶媒系など
を用いる。

以上のようにして精製、分画された溶出区分は濃縮、
凍結乾燥あるいは晶出などの工程を経てTAN−1307を粉
末化あるいは結晶化することが出来る。

TAN−1307は遊離体として単離された。遊離体から薬
理学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩，カリウ
ム塩，カルシウム塩，塩酸塩等）を調製するには自体公
知の方法によって行なわれる。

後述する実施例２で得られたTAN−1307の物理化学的
性質はつぎのとおりである。

１）外観：無色結晶 ２）融点:174℃（分解点） ３）比旋光度：▲［α］²⁴ _D▼＋1.3±２゜ （c 0.45,水中） ４）元素分析値（％） 実測値 計算値 C, 50.38 C, 50.36 H, 5.07 H, 5.17 N, 12.79 N, 13.05 Cl,16.32 Cl,16.52 ５）測定分子量値:SI−MS法による m/z215および217（Ｍ＋Ｈ）^＋ ６）分子式:C₉H₁₁N₂O₂Cl ７）UVスペクトル：水中 ８）IRスペクトル:KBr錠剤中， 主な波数（cm^-1） 3420,3150,2950,2620,2080,1620,1570,1440,1410,136
0,1320,1150,1080,910,860,840,830,800,740,700,660,5
80,550 ９）¹³C−核磁気共鳴スペクトル:75MHz, 重水中，下記のシグナルが認められる（δppm） 177.1（Ｑ）,123.6（CH）,123.1（CH）,121.0（CH）,
118.6（Ｑ）,117.9（Ｑ）,116.8（CH）,58.3（CH）,28.
9（CH₂） （ただし、Q:四級炭素,CH:メチン,CH₂:メチレンを表わ
す） 10）溶解性： 可溶：水，ジメチルスルフォキサイド 難溶：酢酸エチル，クロロフォルム 11）呈色反応： 陽性：ニンヒドリン，エールリッヒ，リンモリブデン
酸，バートン反応 陰性：グレーグ・リーバック，ドラーゲンドルフ反応 12）薄層クロマトグラフィー（TLC）： 担体：セルロースｆ（東京化成社製，日本） 溶媒系:1）アセトニトリル：水（4:1） 2）ｎ−ブタノール：酢酸：水（2:1:1） Rf値： １）0.32 ２）0.83 13）高速液体クロマトグラフィー（HPLC） 担体:YMC−Pack A−312（山村化学研究所製，日本） 移動相:7％アセトニトリル/0.01Mリン酸緩衝液（pH6.
3） 流速:2ml/min 検出法:UV吸収（214および254nm） 溶出時間:5.5分 14）物質区分：両性物質 15）構造式：上記物理化学的性状および核磁気共鳴スペ
クトルの解析によりTAN−1307の化学構造は下記式であ
る。

作 用 次にTAN−1307の生物学的性状について述べる。

TAN−1307の1000μg/ml水溶液に浸漬したろ紙円板
（東洋製作所製、直径8mm）を各種真菌の含菌寒天平板
にはりつけ、28℃で所定時間培養後、ろ紙円板のまわり
に生じた生育抑制円の直径を第１表に示す。表中“0"は
阻止円の認められなかったことを示す。用いた培地は次
のとおりである；イースト・ナイトロゲン・ベース寒天
培地（ディフコ社、米国）にグルコース２％，寒天1.5
％添加。

第１表に示すように化合物TAN−1307はある取の真菌
類に対して抗菌力を示す。

また、TAN−1307を投与量400mg/kgでマウスに腹腔内
あるいは経口投与しても急性毒性は全く認められなかっ
た。

これらのデータから明らかなようにTAN−1307は真菌
に対して抗菌性を示し、哺乳動物などに毒性に示さない
抗生物質であると言える。したがってTAN−1307はヒト
および家畜、家きんなどの真菌感染症の治療に用いるこ
とが出来る。

この治療用に、TAN−1307は公知の製剤化技術に従っ
て種々の剤形の医薬組成物に処方して用いることができ
る。

TAN−1307はまた新しい医薬品の合成中間体としても
有望な化合物である。

実施例 次に実施例をもってさらに詳細に本発明を説明する
が、これによって本発明が限定されるものではない。パ
ーセントは、特にことわりのないかぎり重量／容量％を
示す。

実施例１ ３容量の坂口コルベンにグルコース2.0％，可溶性
デンプン3.0％，コーン・スチーブ・リカー1.0％，脱脂
大豆粉1.0％，ペプトン0.5％，塩化ナトリウム0.3％，
炭酸カルシウム0.5％（pH7調整）からなる培地500mlを
注入後滅菌し、これにストレプトミセス・エスピー Ｂ
−14の斜面培養から１白金耳を接種したのち120往復／
分の往復振盪機上28℃で48時間培養した。50容量のス
テンレスタンクに上記培地組成にアクトコール（消泡
剤，武田薬品工業社製）0.05％加えた培地30を調製，
滅菌し、先に培養した坂口コルベンの全培養液500mlを
これに接種して通気量30／分，撹拌数280rpmで28℃,4
8時間深部培養を行い種培養液を得た。

200容量のステンレスタンクにグルコース0.5％，デ
キストリン５％，脱脂大豆粉3.5％，炭酸カルシウム0.7
％（pH7.0）からなる培地120を調製滅菌したものに前
記種培養液６を接種し、通気量120／分，撹拌数200
rpmで28℃,90時間培養を行った。

実施例２ 実施例１によって得られた培養液（90）をpH3.3に
調整後、ハイフロスーパーセル（ジョンズ・マンビル社
製，米国）を加えてろ過し、ろ液（78）を得た。ろ液
をpH4.5に調整後、ダイヤイオンSP−207（８）のカラ
ムクロマトグラフィーに付した。抗生物質を50％メタノ
ール水（40）で溶出し、溶出液をダウエツクス50W×
２（H⁺型,3）のカラムクロマトグラフィーに付した。
抗生物質を２％アンモニア水（12）で溶出し、溶出液
を濃縮した。濃縮液（3.5）をダイヤイオンSP−207
（0.5）のカラムクロマトグラフィーに付し、10％〜5
0％メタノール水で溶出，分画した。活性画分を集め、
濃縮後、濃縮液をダイヤイオンHP−20（50−100メッシ
ュ,0.4）のカラムクロマトグラフィーに付し、５％〜
15％メタノール水で溶出，分画した。活性画分を集め、
濃縮後、凍結乾燥してTAN−1307の粗粉末（4.7g）を得
た。この粗粉末を50％メタノール水（20ml）に溶解し、
セファデックスLH−20（1.5）のカラムクロマトグラ
フィーに付し、50％メタノール水で溶出，分画した。HP
LCで単一ピークを示す画分を集め、濃縮後、冷所に放置
してTAN−1307の無色結晶（935mg）を得た。母液を濃縮
後、冷所に放置すると、さらにTAN−1307の無色結晶（4
77mg）が得られた。

発明の効果 本発明の新規化合物TAN−1307およびその塩は、抗真
菌作用を示し、真菌感染症の治療に有利に用いることが
できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07D 207/337 C12P 17/00 - 17/18 ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式 で表される化合物TAN−1307またはその塩。
2. 【請求項２】ストレプトミセス属に属し、式 で表される化合物TAN−1307またはその塩を生産する能
   力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物
   を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする化
   合物TAN−1307またはその塩の製造法。