JPH03157366A - 化合物ｔａｎ―１３０７およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は真菌感染症の治療剤として有用な新規抗生物質
ＴＡＮ−１３０７およびその塩ならびにそれらの製造法
に関する。

従来の技術 本発明の新規抗生物質ＴＡＮ−１３０７はその物理化学
的および生物学的データなどから新規アミノ酸系抗生物
質であり、以下に記載する式［Ｉ］で示される構造を有
しており、このような抗真菌性抗生物質は未だ報告され
ていない。

発明が解決しようとする課題 真菌によって惹起される疾病は抗生物質あるいは合成抗
菌剤投与による治療法の発達によってかなり克服されて
いる。しかし、従来の真菌性抗生物質は毒性（副作用）
が強いものが多く、またそれらを長期あるいは大量に投
与することによる起因菌の変化（菌交代現象）あるいは
耐性菌の出現（耐性化現象）などは現在の真菌感染症治
療医学分野で大きな問題となっている。これらの問題を
克服するために、当分野では、常に毒性（副作用）が弱
く、新規骨格を有し、新しい生物活性を示す抗生物質、
あるいはそれらを合成するための中間原料などが求めら
れている。

課題を解決するための手段 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の微生物を土壌より分離し、その生産する抗生物質を分
離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物質を
生産すること、該微生物がストレプトミセス属に属する
菌種であること、該抗生物質が新規な抗生物質であるこ
とを確かめ、これを化合物ＴＡＮ−１３０７と弥するこ
とにした。

本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重
ねた結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）化合物ＴＡＮ−１３０７またはその塩
および（２）ストレプトミセス（５ｔｒｅｐｔ。

ｍｙｃｅｓ）属に属し、化合物ＴＡＮ−１３０７を生産
する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に該
化合物を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴と
する化合物ＴＡＮ−１３０７の製造法に関する。

なお、本明細書において「化合物（抗生物質）′ｒＡＮ
−１３０７Ｊを単に［ＴＡＮ−１３０７Ｊと称すること
もある。

ＴＡＮ−１３０７の生産菌としては、ＴＡＮ−１３０７
を産生ずる能力を有するものであれば如何なる微生物で
も良いが、たとえば本発明者らが分離し、ストレプトミ
セス・エスピー　Ｂ−１４（Ｓｔｒｅｐｔｏｎ＋ｙｃｅ
ｓ　　ＳＰ、　　Ｂ　−１４）と名付けた菌株またはそ
れに類縁の菌株などはもっとも有効に用いられる一例で
ある。以後本菌をＢ−１４菌と略称することもある。

該菌の形態的特徴および分類培地上の培養所見はたとえ
ば次のとおりである。

本菌においては通常の分類培地」；で気菌糸が形成され
、それらは単純分枝を示し、また胞子形成菌糸は螺旋状
を呈する。胞子は１０個以上連鎖しており、その表面は
とげ状で、大きさは０．９〜１．０μｍｘｔ、ｔ〜１．
２μｍである。通常の分類培地上で胞子のう、鞭毛胞子
、菌核などの形成は認められない。

本閑の分類培地上の生育状態はつぎのとおりである。と
くに記載しない限り２８°Ｃで２１日間観察した培養所
見である。なお、記載中（カラー・ハーモニー・マニュ
アル第４版（コンテイナー・コーポレーシゴン・オブ・
アメリカ　１９５８年）による色名の記載である。

）内は （以　下　余　白） Ｂ−１４菌の生理的性質は次のとおりである。

（１）生育温度範囲：１３．５〜４８°Ｃで生育するが
３７〜４０’Ｃでより良好な生育を示す。

（２）ゼラチンの液化：陽性 （３）スターチ加水分解：陽性 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化：陽性（５）メラニ
ン様色素の生成：陰性（ペプトン・イースト・鉄寒天培
地およびチロシン寒天培地）（６）　ｌｉｌ’ｌ酸塩還
元：陰性（インターナショナル・ストレプトミセス・プ
ロジェクトＮ０１８培地）（７）炭素源の利用性（ブリ
トノ＼ム・ゴツトリーブ寒天培地） よく利用される炭素源 イノシトール、Ｄ−マンニトール、Ｄ−キシロース、Ｄ
−グルコース、Ｄ−フラクトース、ラフィノース、Ｌ−
アラビノース、ラムノース。

シュークロース Ｂ−１４菌菌体の塩酸加水分解中にはＬＬ−ジアミノピ
メリン酸が検出された。このことから本菌はストレプト
ミセス属に属すると考えられる。

Ｂ−１４菌の形態的特徴、培養所見、生理的性質に基き
、本菌をストレプトミセス・エスピーと同定し、ストレ
プトミセス・エスピー　Ｂ−１４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　　ＳＰ、　　Ｂ　−１４）と名付けた。本発明
に使用されるストレプトミセス・エスピー　Ｂ１４は平
成１年ＩＯ月３１日から財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）
に受託番号ＩＦＯ−１４９６９として、また平成１年１
１月７日から通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所（ＦＲＩ）に受託番号ＦＥＲＭ　　Ｂｐ−２６’４−
（１＞　　としてそれぞれ寄託されている。

ストレプトミセス属菌の一般的性状として菌学上の性質
はきわめて変異しやすく、ストレプトミセス・エスピー
　Ｂ−１４もその例外ではナイ。

したがって、本菌の性質も上述のとおりに一定のもので
はなく種々の変異株が容易に得られる。しかしこれらの
変異株にあってもＴＡＮ−１３０７を生産する性質を失
わないかぎり本発明の方法に使用することができる。も
ちろんそれらの変異が自然の原因に由来するものであっ
ても各種変異誘起剤（例えば紫外線、エックス線、放射
線、ニトロソグアニジン等）を用いて人工的に行なわれ
たものであってもさしつかえない。

本発明の方法において培養に際しては、一般に微生物が
同化しうる炭素源、消化しうる窒素源および無機塩など
を含有させた培地が使用される。

また培地には必要に応じて微量栄養素１発育促進物質、
前駆物質などの微量有効物質を添加してもよい。一般に
微生物が同化しうる炭素源としてはぶどう糖、しょ糖、
糖みっ１でんぷん、デキストリン、グリセリンなどがあ
り、消化しつる窒素源としては肉エキス、大豆粉　コー
ンステイープリカー、ペプトン、カゼイン、綿実粕など
、および硝酸塩類、アンモニウム化合物などの無機窒素
化合物などがあり、それらはいずれも有効に利用される
。培養は表面培養法によってもよいが、深部通気培養法
によるのが通常である。深部通気培養法による場合、培
地の性質は中性付近にするのがよく、培養時の温度は２
０〜３６°Ｃ付近、好ましくは２４〜３０°Ｃに］呆つ
のがよい。しかしこれらの培養組成物、培地の液性、培
養温度、撹拌数などの培養条件は使用する菌株の種類や
外部の条件などに応じて好ましい結果が得られるように
適宜調節１選択されることはいうまでもない。

培養物から目的とするＴＡＮ　　１３０７を採取するに
は微生物の生産する代謝物をその微生物培養物から採取
するのに通常使用される分離手段が適宜利用される。た
とえばＴＡＮ−１３０７は水溶性両性物質の性質を示し
、主として培養ろ液中に含まれるので、まず培養液にろ
過補助剤を加えてろ過、あるいは遠心分離によって菌体
を除去し、得られた培養ろ液を適宜担体に接触させてろ
液中の有効成分を吸着させ、ついで適宜の溶媒で有効物
質を脱着させ、分別採取する手段が有利に利用される。

クロマトグラフィーの担体としては活性炭、シリカゲル
、粉末セルロース、吸着性樹脂など化合物の吸着性の差
を利用、またはイオン交換樹脂、イオン交換セルロース
、イオン交換セフ７デソクス、セファデックスなど化合
物の官能基の差を利用、あるいは分子ふるい性担体類な
ど化合物の分子電を差を利用するもの等が有利に用いら
れる。これら担体から目的とする化合物を溶出するため
には担体の種類、性質によって組み合せが異なるが、た
とえば水溶性有機溶媒の含水溶液すなわち、含水アセト
ン、含水アルコール類など、あるいは酸、アルカリ、緩
衝液もしくは無機あるいは有機塩を含む水溶液などが適
宜組み合わせて用いられる。

さらに詳しくは、担体として陽イオン交換樹脂たとえば
アンバーライトＩＲ−１２０（ローム・アンド・ハース
社製、米国）、ダウエックス５０Ｗ（ダウ・ケミカル社
製、米国）、タイヤイオンＳＫ　Ｉ　Ａ（三菱化成社製
）または陰イオン交換樹脂たとえばアンバーライトＩＲ
Ａ−＝１０２．ＩＲＡ６８、ＴＲ−４５（ローム・アン
ド・ハース社製、米国）、タイヤイオン５ＡＩＯＢ、Ｐ
Ａ−４０４ＷＡ−３０（三菱化成社製）などを用いると
る液中の本抗生物質が吸着され、塩、アルカリあるいは
酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶出される。

また、イオン交換分子ふるい性樹脂だと左ばＱＡＥまた
はＣＭ−セファデックス（ファルマシア社製、スウェー
デン）などの担体に本抗生物質を吸着せしめ、塩類、ア
ルカリあるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などによ
って溶出させることか出来る。これらの溶出液中の塩類
、着色物質などを取り除（ためにはクロマト用活性炭（
底口薬品工業社製）、吸着性樹脂たとえばダイヤイオン
ＨＰ−２０，５Ｐ−２０７（三菱化成社製）、アンバー
ライトＸＡＤ−ＩＩ（ローム・アンド・）１−ス社製、
米国）１分子ふるい性樹脂セファデックスＬＨ−２０（
ファルマ７ア社製、スウェーデン）あるいは結晶セルロ
ース（旭化成社製）などが有利に用いられる。またろ液
中あるいは溶出液中の脂溶性物質などを取り除くために
活性炭あるいは吸着性樹脂などのカラム中を通過させる
、あるいは水と混和しない有機溶媒、たとえばツクロロ
メタン酢酸エチル、メチルイソブチルケトンなどでこれ
らを除去することなども適宜組合わせて行われる。

さらに化合物を最終的に精製する場合に分取用高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法も有利に用いられる
、この方法を適用する場合、担体としては逆Ｆ目系樹脂
たとえばＹＭＣゲル（山村化学研究所）あるいはＴＳＫ
ゲル（東洋曹達工業社）などが用いられ、移動相として
は緩衝液にメタノール、アセトニトリルなどを添加した
溶媒系なとを用いる。

以上のようにして精製、分画された溶出区分は濃縮、凍
結乾燥あるいは晶出などの工程を経て′ＦＡＮ−１３０
７を粉末１ヒあるいは結晶化することが出来る。

ＴＡＮ−１３０７は遊離体として１１１離された。

遊離体から薬理学的に許容される塩（例えば、ナＩ・リ
ウム塩、カリウム塩、カルンユウム塩、塩酸塩等）を：
Ａう２するには自体公知の方法によって行なわれる。

後述する実施例２で得られたＴＡＮｉ３０７の物理化学
的性質はつぎのとおりである。

１）外観：無色結晶 ２）融点：１７４°Ｃ（分解点） ３）比旋光度　［αコ２４　　＋１．３”２゜（ｃｏ、
４５．水中） ４）元素分析値（％） 実測値　　　　　　　計算値 Ｃ，５０，３８Ｃ，５０，３６ Ｈ，５，０７Ｈ，５，１７ Ｎ、１２．７９　　　　Ｎ、１３．０５Ｃ１２，１６，
３２Ｃｉ２，１６．５２５）測定分子量値：　Ｓ　Ｉ　
−ＭＳ法によるｍ／ｚ２１５および２１７　（Ｍ十Ｈ）
”６）分子式：　Ｃ，Ｈ，、Ｎ、０．Ｃ１２７）ＵＶス
ペクトル：水中 λｍａｘ　２１０±３ｒ＋ｎ＋　（Ｅ　’、工＝６７０
±７０）および２５０±３ｎｍ　（Ｅ　１％＝４６１±
５０）ｌｃｎ＋ ８）ＩＲスペクトル：ＫＢｒ錠剤中。

主な波数（ｃ＋ａ−Ｌ） ３４２０、３１５０．２９５０゜ １５？０．１４４０．１４１０゜ １０８０、　９１０．　８６０゜ ７４０、　７００．　６６０゜ ２６２０、　２０ｇ０．　１６２０゜ １３６０、　１３２０．　１１５０゜ ８４０、　８３０．　８００゜ ５８０、　　５５０ ９）　１３Ｃ−核磁気共鳴スベクトルニア５ＭＨｚ重水
中、下記のシグナルが認められる（δｐｐｍ）１７７．
１（Ｑ）、　　１２３．６（ＣＨ）、　　１２３．１（
ＣＩ）１２１．０（Ｃ１１）、　　１１８．６（Ｑ）、
　　１１７．９（Ｑ）。

１１６、８（ＣＨ）、　　５８．３（ＣＨ）、　　２８
．９（ＣＩり（ただし、Ｑ：四級炭素、ＣＨ：メチン。

ＣＨ，：メチレンを表わす） １０）溶解性： 可溶−水、ジメチルスルフォキサイド ｍ溶：　酢ａエチル、クロロフォルム １１）呈色反応： 陽性：ニンヒドリン、エールリッヒ、リンモリブデン酸
、バートン反応 陰性：グレーグ・リーバツク、ドラーゲンドルフ反応 １２）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：セル
ロース「（東京化成社製１日本）溶媒系：１）アセトニ
トリル：水（４：１）２）ｎ−ブタノール：酢酸：水（
２：ｌ：１）Ｒｆ値・　１）０．３２ Ｈ） １４） １５） ２）０．８３ 高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）担体：　ＹＭ
Ｃ−Ｐａｃｋ　Ａ−３１２（山村化学研究所製２日本） 移動相ニア％アセトニトツル１０．０ＩＭＩＪン酸緩衝
液（ｐＨ６，３） 流速＝２滅／ｌ１ｉｎ 検出法：Ｕｖ吸収（２！４および２５４　ｎｍ）溶出時
間　５．５分 物質区分：両性物質 構造式：上記物理化学的性状および核磁気共鳴スペクト
ルの解析によりＴＡＮ−１３０７の化学構造は下記式で
ある。

■ 作用 次にＴＡＮ−１３０７の生物学的性状について述べる。

ＴＡＮ−１３０７の１０００μｇ／ｄ水溶液に浸漬した
ろ紙回収（東洋製作新製、直径８　ｍｍ）を各種真菌の
金回寒天平板にはりつけ、２８°Ｃで所定時間培養後、
ろ紙回収のまわりに生じた生育抑制内の直径を第１表に
示す。表中“０”は阻止円の認められなかったことを示
す。用いた培地は次のとおりである；イースト・ナイト
ロゲン・ベース寒天培地（デイフコ社、米国）にグルコ
ース２％。

寒天１．５％添加。

第１表に示すように化合物ＴＡＮ−１３０７はある種の
真菌類に対して抗菌力を示す。

また、ＴＡＮ−１３０７を投与ｆｆ１４００ｍｇ／ｋｇ
でマウスに腹腔内あるいは経口投与しても急性毒性は全
く認められなかった。

これらのデータから明らかなようにＴＡＮ−１３０７は
真菌に対して抗菌性を示し、哺乳動物などに毒性を示さ
ない抗生物質であると言える。したがってＴＡＮ−１３
０７はヒトおよび家畜、家きんなどの真菌感染症の治療
に用いることが出来る。

この治療用に、ＴＡＮ−１３０７は公知の製剤化技術に
従って種々の剤形の医薬組成物に処方して用いることが
できる。

ＴＡＮ−１３０７はまた新しい医薬品の合成中間体とし
ても有望な化合物である。

実施例 次に実施例をもってさらに詳細に本発明を説明するが、
これによって本発明が限定されるものではない。パーセ
ントは、特にことわりのないかぎり重量／容量％を示す
。

実施例１ ３（容ｆｆｉの坂ロコルベンにグルコース２．０％可溶
性デンプン３．０％、コーン・スチーブ・リカー１，０
％、脱脂大豆粉１．０％、ペプトン０．５％、塩化ナト
リウム０．３％、炭酸カルシウム０．５％（ｐＨ７調整
）からなる培地５００　ｄを才人後滅菌し、これにスト
レプトミセス・エスピーＢ　−１４の斜面培養から１白
金耳を接種したのち１２０往復／分の往復振盪機上２８
°Ｃで４８時間培養した。５０＆容量のステンレスタン
クに上記培地組成にアクトコール（消泡剤、代用薬品工
業社製）０．０５％加えた培地３０ｇを調製、滅菌し、
先に培養した坂ロコルベンの全培養ｉｆｆ１５００ｇを
これに接種して通気ｆｆ１３０（／分、撹拌数２８　Ｏ
ｒｐｍで２８°Ｃ２４８時間深部培養を行い種培養液を
得た。

２００＆容ｆｆｉのステンレスタンクにグルコース０．
５％、デキストリン５％、脱脂大豆粉３．５％。

炭酸カルシウム０．７％（ｐＨ７，０）からなる培地＋
２０ｔ２を調製滅菌したものに前記種培養液６（！を接
種し、通気１１２Ｏｆ２／分、撹拌数２００ｒｐｍテ２
８°Ｃ１９０時間培養を行った。

実施例２ 実施例１によって得られた培養液（９０Ｑ、）をｐｌ（
３，３に調整後、ハイフロス−パーセル（ジョンズ・マ
ンビル社製、米国）を加えてろ過し、ろ液（７８Ｑ）を
得た。ろ液をｐＨ４，５に調整後、ダイヤイオン５Ｐ−
２０７（８ρ）のカラムクロマトグラフィーに付した。

抗生物質を５０％メタノール水（４０ｇ）で溶出し、溶
出液をダウエックス５ＱＷｘ２（Ｈ゛型、３Ｑ）のカラ
ムクロマトグラフィーに付した。抗生物質を２％アンモ
ニア水（１２ので溶出し、溶出液を１農縮した。濃縮液
（３，５Ｑ）をダイヤイオン５Ｐ−２０７（０，５ｉり
のカラムクロマトグラフィーに付し、１０％〜５０％メ
タノール水で溶出２分画した。活性画分を集め、濃縮後
、濃縮液をダイヤイオントｒｐ＝２０（５０−１００メ
ツシユ、０．４ｆ２）のカラムクロマトグラフィーに付
し、５％〜１５％メタノール水で溶出１分画した。

活性画分を集め、濃縮後、凍結乾燥してＴＡＮ１３０７
の粗粉末（４，７ｇ）を得た。この粗粉末を５０％メタ
ノール水（２０りに溶解し、セファデックスＬＨ−２０
（１，５＆）のカラムクロマトグラフィーに付し、５０
％メタノール水で溶出９分画した。ＨＰ　Ｌ　Ｃで単一
ピークを示す両分を集め、濃縮後、冷所に放置してＴＡ
Ｎ−１３０７の無色結晶（９３５ｍｇ）を得た。母液を
１５Ｉ縮後、冷所に放置すると、さらにＴＡＮ　　１３
０７の無色結晶（４７７ｍｇ）が得られた。

発明の効果 本発明の新規化合物ＴＡＮ−１３０７およびその塩は、 抗真菌作用を示し、 真菌感染症の治療に 有利に用いることができる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる化合物ＴＡＮ−１３０７またはその塩。
2. （２）ストレプトミセス属に属し、化合物ＴＡＮ−１３
   ０７を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培
   養物中に該化合物を生成蓄積せしめ、これを採取するこ
   とを特徴とする化合物ＴＡＮ−１３０７の製造法。