JPS62132848A - ２，３−ジヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸もしくはそのエステルならびにそれらの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、抗かび剤、抗豚赤痢剤および抗細菌剤として
有用な２，３−ジヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息
香酸もしくはそのエステルならびにそれらの製造法に関
する。

従来の技術 発酵生産物として得られるノアゾキノン系化合物として
はペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎ　ｉｃ　ｉ　ｌ　ｌ
　ｉｕｍｓｐ、）　Ｎ　Ｒ６２２０株が生産するｒｈｏ
　０９−０９２６（下式）が知られており（第１０５回 細菌性を示す。

発明が解決しようとしている問題点 近年、抗菌剤特にβ−ラクタム剤の大量使用により、い
わゆる菌交代現象が起き医真菌症で苦しむ人々が増加し
ている。まｆコ豚赤痢症は養豚家にとって重大視されて
いる病害の一つである。

本発明によって得られる化合物は上述した病害に対する
薬剤として有用な新規骨格化合物である。

問題点を解決するための手段 本発明者らは新規な抗生物質の探索を目的として多数の
微生物を培養し、培養液中の生産物を分離検索したとこ
ろ、ある種の微生物Ｃ−６６４６４株が新規な抗生物質
を産生じ、分離された化合物が抗原赤痢作用（起因菌は
トレボネーマ・バイオディセンテリーＴ−−Ｔｒｅｐｏ
ｎｅｍａ　ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）を有するこ
とを見出し、それらの物理化学的性質から当該化合物が
新規なジアゾキノン系物質であることを確かめた。また
本発明者らは該化合物のエステル誘導体を合成し、それ
らが強力な抗かびおよび抗細菌性を有することを見出し
た。

本発明者らはこれらの知見に基づいてさらに研究した結
果、本発明を完成した。

すなわち本発明は、 （１）　　２．３〜ノヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ
安り青酸もしくはそのエステルまたはそれらの塩、（２
）　　ストレプトミセス属に属し、２．３−ジヒドロ−
２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸を生産する能力を有す
る微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄
積せしめ、これを採取することを特徴とする２、３−ジ
ヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸の製造法、 （３）　　２．３−ジヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ
安息香酸をエステル化反応に付すことを特徴とする２、
３−ジヒドロ−２−ジ安息−３−オキソ安息呑酸エステ
ルの製造法および （４）　　ンユークロースおよびラフィノースのいずれ
をも単一炭素源として利用し、抗生物質２．３−ジヒド
ロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸を生産する能力を
有するストレプトミセス・タケトミエンシスである。

以下、２．３−ノヒドロ〜２−ジアゾー３−オキソ安息
香酸をＴ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａと称することもある。

本発明において、抗生物質ＴＡＮ−６６５Ａを産生ずる
微生物Ｃ−６６４６４株は、次のような菌学的性質を何
する。

１、形態　各種寒天培地上で直状ないじゃ一曲状の胞子
形成菌糸は、ふさくｔｕｆｔ）状に形成される。

愉生糸は認められない。成熟した分生胞子は、通常１０
個以上が連鎖し、胞子の形は、円筒形ないし楕円形で、
その大きさは０．８〜１．４Ｘ１．Ｏ〜２．１ｍμであ
る。胞子の表面構造は平置である。胞子のう、１毛胞子
、菌核などの特殊な構造は認められない。また、基土菌
糸の分断ら認められない。

２、各種分類培地」二の性質（２８℃、１４日間培養）
１）蔗糖・硝酸塩寒天培地 生育：　中程度 気菌糸：中程度、パール（３ｂａ）〜ザンド（３ｃｂ）
裏面の色メイプル（４Ｒｅ） 可溶性色素：黄喝色〜Ｋｌ褐色 ２）イースト・麦芽寒天培地 生育：　良好 ’Ｍｉ：Ａ糸・つ好　コバート・り゛レイ（’Ｈｅ）〜
シルバー・グレイ（：Ｈｅ） 裏面の色：イエロー・メイプル（３ｎｇ）〜アドーブ・
ブラウン（３２ｇ） 可溶性色素：淡黄褐色 ３）オート・ミール寒天培地 生育　中程度 気菌糸：中程度、ナチュラル（３ｄｃ）〜シルバー・グ
レイ（３ｆｅ） 裏面の色ニライト・アンバー（３ｉｃ）〜黄褐色可溶性
色素・淡黄褐色 ４）澱粉無機塩寒天培地 生育：　中程度 気菌糸：中程度、ナチュラル（３ｄｃ）〜コバート・グ
レイ（２４ｅ）、コロニーの端の気菌糸は白色 裏面の色、ビスタ（３ｅｃ）〜ベルジエ・ブラウン（３
ｉｇ） 可溶性色素、　なし ５）グリセロール・アスパラギン寒天培地生育：　中程
度 気菌糸：中程度、ナチュラル（３ｄｃ）〜ンルバー・グ
レイ（３ｆｅ） 裏面の色：イエロー・メイブル（３ｎｇ）可溶性色素：
淡黄褐色 ６）グルコース・アスパラギン寒天培地生育：　中程度 気菌糸：中程度、ナチュラル（３ｄｃ）〜コバート・グ
レイ（２ｒｅ） 裏面の色ニアドープ・ブラウン（３Ｒｇ）〜ダーク・ブ
ラウン（３ｎＲ） 可溶性色素；淡黄褐色 ７）ペプトン・イースト・鉄寒天培地 生育；　貧弱 気菌糸：　なし 裏面の色：無色〜淡黄褐色 可溶性色素：淡黄褐色 ８）チロシン寒天培地 生育：　貧弱 気菌糸：貧弱、白色 裏面の色：無色 可溶性色素：　なし ９）カルシウム・マレイド寒天培地 生育：　貧弱 気菌糸：貧弱、コロニーの端にのみ形成、白色 裏面の色：淡褐色〜ライト・スパイス・ブラウン（４Ｒ
ｇ） 可溶性色素：淡黄褐色 １０）栄養寒天培地 生育：　貧弱 気菌糸二貧弱、白色 裏面の色：無色〜淡黄色 以上の色名およびその記号はカラー・ハーモニー・マニ
ュアル第４版（Ｃｏｌｏｒ　Ｉｌａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎ
ｕａｌ。

Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆＡ
ｍｅｒｉｃａ、１９５８年発行）によった。

３、生理的性質 ■）生育温度範囲：　１１〜４０℃ ２）ゼラチンの液化：　　陽性 ３）澱粉の加水分解：　　陽性 ４）ミルクのペプトン化：　陽性 ５）ミルクの凝固：　　　陽性 ６）硝酸塩の還元：　　　陽性 ７）メラニン様色素の生成： ペプトン・イースト・鉄寒天培地：陰性チロシン寒天培
地：　陰性 トリプトン・イーストブロス：　陰性 ８）炭素源の利用性： Ｄ−ソルビトール　士　　シュークロース　＋ｉミーイ
ノシトール士　　ラクトース　　±Ｄ−マンニトール　
士　　ラフィノース　＋十〇−キシロース　＋　　トレ
ハロース　＋＋Ｌ−アラビノース　＋＋　マンノース　
　＋＋Ｄ−ガラクトース　＋＋　可溶性殿粉　　＋十〇
−グルコース　＋　　グリセロール　十〇−フラクトー
ス　＋　　無添加　　　　士ラムノース　　士 メリビオース　　± マルトース　＋＋ 基礎培地ニブリドハムとゴツトリープ寒天培地以北の性
質および細胞壁組成として、ＬＬ−ジアミノピメリン酸
およびグリシンを含むこと、さらに全菌体の糖組成に特
徴が見られないことがらＣ−６６４６４株がストレプト
ミセス属に属することは明らかである。本菌と比較的近
縁な既知菌種として、ストレプトミセス・フラボグリセ
ウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｎａｖｏｇｒｉｓｔ
ｕｓ）、ストレプトミセス・グリセオルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｏｌｕｓ）およびストレプ
トミセス・ニグリファシェンス（Ｓｔ　ｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　ｎｉｇｒｉｒａｃｉｅｎｓ）があげられるが、
Ｃ−６６４６４株とそれら標準株（ストレプトミセス・
フラボグリセウス（Ｉ　ＦＯ１３０４０）、ストレプト
ミセス・グリセオルス（ＩＦＯ１２７７７）、ストレプ
トミセス・ニグリファシエンス（Ｉ　Ｆ　０１２８０２
））と直接同一条件下で比較を行ったところ、Ｃ−６６
４６４株は、分類培地とりわけ、オートミール寒天培地
上で生育状態、生育裏面の色調並びに気菌糸の色調が、
上記既知の３菌種と明らかに異なり、又ｊｌｉ−炭素源
の利用性においてら、Ｃ−６６４６４株はシュークロー
ス及びラフィノースのいずれをも明瞭に利用するが、既
知菌種はそれらを全く利用しないかもしくは利用は疑わ
しい。

従って、本菌を新菌種と認め分離源の採取地にちなみス
トレプトミセス・タケトミエンンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ｔａｋｅｔｏｍｉｅｎｓｉｓ）と命名した。

Ｃ−６６４６４株は昭和６０年１０月２８日に財団法人
発酵研究所（ｒＦｏ）１．：受託番号ＩＩ’；’０１４
４７２として、また本微生物は昭和６０年１１月２０日
に通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲｌ
）に受託番号ＦＥＲＭ　　Ｐ−８５２１としてそれぞれ
寄託されている。

ストレプトミセス属に属する抗生物質ＴＡＮ−６６５Ａ
の生産菌は、他のストレプトミセス属の場合と同様に、
その性状が変化しやすく、たとえば紫外線、エックス線
、放射線４人工変異剤などを用いる人工的変異手段で容
易に変異しうるちのであり、この様な変異株であっても
抗生物質ＴＡＮ−６６５Ａの生産能を有するものは、す
べて本発明の方法に使用することが出来る。

本発明の方法において、抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５
Ａ生産菌か培養される培地は、液状でも固体状でもよい
が、液状の培地がより便宜的に用いられ、また表面培養
、振盪培養法によってもよいが、深部培養方法がよりａ
刊に用いられる。培地中には抗生物質ＴＡＮ　　６６５
Ａ生産菌か同化し得る炭素源たとえばでんぷん、グルコ
ース、デキストリン。

グリセリン、シュークロース、ｎ−パラフィンおよびア
ルコール類（例、メタノール）など、窒素源としては、
たとえば有機窒素源としてコ、−ン・スチーブ・リカー
、犬豆扮、綿実粉、ペプトン、肉エキスなど、無機窒素
源としては塩化アンモニウム。

硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムおよび尿素などを
使用し得る。その他、必要に応じて無機塩類たとえばナ
トリウム、カリウム、マグネシウムまたは燐を含む塩類
３重金属塩類たとえば鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、
銅、ニッケルなどの塩類、消泡剤たとえば大豆油、ラー
ド油、チキン油、シリコン油、アクトコール（武田薬品
工業株式会社製）などを適宜添加しても良い。液体培養
に際しては、培地のｐＨは中性付近、特にｐｌ＋約６〜
８が好ましい。

培養温度は約２４°Ｃ〜３０°Ｃ１培養時間は約４８〜
１１４時間が好ましい。

培養の経過にとらなって培養液中に生産される抗生物質
Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａの力価はトレボネーマ・ハイオ
ディセンテリエを被検菌とする寒天希釈法あるいはペー
パーディスク法の常法に従って定量される。通常、約１
〜３日間の培養で抗生物質ＴＡ　Ｎ　−６６５Ａの生産
量は最高に達する。

培養物から目的とする抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ−６６５Ａを
採取するには微生物の生産Ｖる代謝物をその微生物の培
養物から採取するのに通常使用されろ分離手段が適宜利
用される。たとえばＴ　Ａ　Ｎ−６６５Ａは水溶性の性
質を示し、主として培養ろ液中に含まれるので、まず培
養液にろ過補助剤を加えてろ過あるいはそのまま遠心分
離ずろことによって菌体を除去する。

得られた培養ろ液を適宜の担体に接触さ什てろ液中の有
効成分を吸着させ、次いで適宜の溶媒で有効物質を脱着
させ、分別採取する手段が有利に利用される。クロマト
グラフィーの担体としては活性炭、シリカゲル、粉末セ
ルロース、吸着性樹脂など化合物の吸着性の差を利用、
または陰イオン交換樹脂、陰イオン交換セルロースなど
化合物の官能基の差を利用するものが有利に用いられる
。

これら担体から目的とする化合物を溶出するためには担
体の種類、性質によって組み合せが異なるか、たとえば
水溶性有機溶媒の含水溶性すなわち、含水アセトン、含
水アルコール類など、あるいは酸、アルカリ、緩衝液も
しくは無機あるいは有機塩を含む水溶液などが適宜組み
合わせて用いられる。

また、ろ液中から祖物質を得るにはろ液を酸性好ましく
はｐｌ！２〜４に調整し、有機溶媒たとえばブタノール
、イソブタノールあるいはｎ−アシルアルコールなどで
抽出し、抽出液を濃縮、乾固する方法によっても得られ
る。さらにクロマトグラフィー法あるいは溶媒抽出法に
よって得られた祖物質を精製するには分子ふるい性陰イ
オン交換樹脂あるいは分取用高速液体クロマトグラフィ
ーなどが有利に用いられる。さらに詳しく述べるならば
、担体として陰イオン交換樹脂たとえばダウエックスー
！（ダウ・アンド・ケミカル社製、米国）、アンバーラ
イトＩ　ＲＡ−６８，４００，４０２，４１０（ローム
・アンド・ハース社製、米国）、ダイヤイオン５Ａ−２
１Ａお上びＣ（三菱化成社製、日本）などを用いるとる
液中の本抗生物質は吸着され、塩類あるいは酸含有の水
溶液あるいは緩衝液などで溶出される。また陰イオン交
換セルロースたとえばＤＥ−３２（ワットマン社製、英
国）、ＤＥＡＥ−セルロース（ブラウン社製、西独）な
ど、あるいは陰イオン交換分子ふるい性樹脂たとえばＤ
ＥＡＥ−あるいはＱＡＥ−セファデックス（ファルマシ
ャ社製、スウェーデン）などの担体に本抗生物質を吸着
せしめ、塩類あるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液な
どによって溶出させることが出来る。これら溶出液中の
塩類、着色物質などを取り除くためにはクロマト用活性
炭（武田薬品工業社製、日本）あるいは吸着性樹脂たと
えばダイヤイオン５Ｐ−２０７，ＨＰ−２０（三菱化成
社製、日本）、アンバーライトＸＡＤ−ｎ（ローム・ア
ンド・ハース社製、米国）などが有利に用いられる。分
画された溶出区分は、濃縮、凍結乾燥などの工程を経て
、粉末化されろ。かくして得られた粉末の純度が悪い場
合さらに精製するためには高速液体クロマトグラフィー
法が有利に利用される。用いられる担体としては、たと
えばＴＳＫゲル（東洋曹達社製、日本）、ＹＭＣゲル（
山村化学研究新製、日本）などが挙げられ、移動円とし
てはメタノールあるいはアセトニトリルなどと酸性水溶
液あるいは緩衝液などとの混合液が用いられる。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａは精製過程において、用いられ
た塩類、＠新液中の陽イオンたとえばナトリウム。

カリウム、リチウム、カルシュウム、アンモニウムイオ
ンなどと結合した状態で存在するが、この場合そのまま
のｐＨで活性炭クロマトグラフィーに付すると対応する
塩の精製粉末として単離することができ、希塩酸でＩ）
１１５ないし２好ましくはｐＨ４、５ないし３に溶出液
を調整し、放置すると、なお、本遊離体は、常法にした
がって上記塩類に変えることができる。

後述する実施例！で得られたＴＡＮ−６６５Ａ（遊離体
）の物理化学的性状を以下に示す。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａ １）外観：黄色結晶 ２）融点：１５５℃付近から徐々に着色分解３）分子量
測定値：ｍ／ｚ１６４（Ｍ”、Ｅｌ−ＭＳ法による）４
）元素分析値： 実測値、Ｃ，５０，７，Ｈ，２，５，Ｎ、１６．８（％
）５）分子式：Ｃ？Ｈ，Ｎ、０３ ６）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：　０．０５Ｍリン
酸緩衝液（ｐｌ＋７．０）中（第１図） λｍａｘ＝　２４３　ｎｍ（Ｅ　’％＝３６５）１ｃｍ ２７８　（肩） ４００　　（Ｅ１５′＝３６３） １ｃｍ ７）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢｒ中（第２図
）主な波数（ｃｍ一つ： ３４５０、２７６０．２４６０．２２３０．２１８０．
２１４０．１８８０゜１Ｂ９０．１５９５．１４９０．
１４１５．１３７５．１２６５．１２１５゜１１１５、
１０３０．９７０．８２０．８００．７６０．７３０．
７２０゜５００、４７０ ８）　”Ｃ−核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：１００
ＭＨｚ、　ＤＭＳＯｄｏ中、δｐｐｍ １７７．３（ｓ）、　１６３．８（ｓ）、　１３６．７
（ｄ）、　’１２７．８（ｄ）。

１２７．２（ｓ）、　１１８．８（ｄ）、　８３．４（
ｓ）（但し、ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ、　　ｄ：ｄｏｕｂｌ
ｅｔを示す）９）呈色反応： 陽性：バートン反応、過マンガン酸カリウム陰性：ニン
ヒドリン、ブレイブ・リーバツク反応 １０）酸性、塩基性物質の区別： 酸性物質 １１）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：ａ）担体ニ
ジリカゲルＦ　ｚｓ４（メルク社製、西独）溶媒系；ク
ロロフォルム：メタノール（１：１）Ｒｒ値、　　０．
６０ ｂ）担体；セルロースｒ（東京化成社製１日本）溶媒系
；アセトニトリル：水（４：Ｉ）ｒｌｆ値、　　０．５
３ 以上述べた性質および関連化合物の物理化学的データか
ら’ｒＡＮ−６６５への構造式は、式Ｃ００Ｉ＋ で表わされる。

また化合物（Ｉ）は、次の様に平衡状態にあり、式（Ｉ
Ｉ）としても表わされろ。

（１）　　　　　　　　　　　（ＩＩ）次に、Ｔ　Ａ　
Ｎ　−６６５Ａのエステル誘導体について述べろ。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａのエステル誘導体は、一般式［
式中、Ｒは置換基を有していてもよいアルキル。

置換基を有していてもよいアリール、置換基を有してい
てもよいアラルキルまたは置換基を有していてもよい複
素環を表わす。］で表イつされる。

１記式中、Ｒで示される置換基を有していてもよいアル
キルにおけろアルキルとしては、たとえば炭素数１〜６
のらのが好ましく、その例としてはたとえばメチル、エ
チル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ
ブチル、５ｅｃ−ブヂル、ｔ−ブチル、１．１−ジメヂ
ルブロピル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシ
ル、イソヘキシルなどが挙げられる。

該アルキル基が有していてもよい置換基としては、例え
ばハロゲン、シアノおよびヒドロキシ等が挙げられる。

置換基を有していてもよいアリールにおけるアリールと
しては、例えばフェニル。

ナフチル、ビフェニル、アンスリルおよびインデニル等
が挙げられる。

該アリール基が有していてもよい置換基としては、例え
ばアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキ
シ、アシルオキシ、スルホ、シアノおよびスルファモイ
ル等が挙げられる。

置換基を有していてもよいアラルキルにおけるアラルキ
ルとしては、例えば炭素数ｌ〜６のアルキルにアリール
が結合したものが好ましく、該アルキルの例としてはた
とえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、
ｎ−ブチル、イソブチル、５ｅｃ−ブチル、ｔ−ブヂル
、１．Ｉ−ジメチルプロピル。

ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキ
シルなとが挙げられ、該アリールの例としては、例えば
フェニル、ナフチル、ビフェニル、アンスリルおよびイ
ンデニル等が挙げられる。

該アラルキル基か有していてもよい置換基としては、例
えばアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ヒドロ
キン、アンルオキン、スルホ、シアノおよびスルファモ
イル等が挙げられる。

置換基を有していてもよい複素環における複素環として
は、たとえば１ｇの硫黄原子、窒素原子または酸素原子
を含む５〜７員曳素環基、２〜４個の窒素原子を含む５
〜６員複索環基、！〜２凹の窒素原子および１個の硫７
１１原子または酸素原子を含む５〜６員段素環基が挙げ
られ、これらの複素環括は２個以下の窒素原子を含む６
員環基、ベンゼン環または１個の硫黄原子を含む５員環
基と縮合していてもよい。

上記の複素環基の具体例としては、たとえば、２−ピリ
ジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミジニル、ピ
ラジニル、ピリダジニル、ピペラジニル、ピラゾリル、
イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサシ
リル、イソキサゾリル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジ
ル、ベンゾピラニル、ｌ、８−ナフチリジル、１．５−
ナフチリジル。１．６−ナフチリジル、Ｉ、７−ナフチ
リジル、２．７−ナフチリジル。

２．６−ナフチリジル、キノリル、ヂエノ［２，３−ｂ
］ピリジル、テトラゾリル、チアジアゾリル、オキサジ
アゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、チェニル、ピ
ロリル、フリル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ジ
チェタン、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニ
ル、ペンゾヂエニル、ピラニル、ヘキザヒドロ−Ｉ　Ｈ
−アゼピニル、インドリル、イソイントリジニル、クロ
マニルなどが挙げられる。

該ｍ素環基が有していてもよい置換基としては、例えば
、アミノ、アルキルアミノ、スルファモイル。

カルバモイル、ハロゲン、シアノおよびニトロ等が挙げ
られる。

上記の置換基について、以下にさらに詳しく説明する。

ハロゲンとしては、例えば塩素、臭素、フッ素およびヨ
ウ素等が挙げられる。

アルキルとしては、炭素数１−１０、さらにｌ〜６．あ
るいは１〜４のものが好ましく、その例としてはたとえ
ば、メチル、エチル、ｎ−プロピル。

ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、
５ｅＣ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘ
キシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、
デシルなどが挙げられる。

アシルとしては、炭素数１〜６さらに１〜４のものが好
ましく、たとえばホルミル、アセチル、プロピオニル、
ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピ
バロイル、ヘキサノイルなどが挙げられる。

アルコキシとしては、炭素１１〜４のものが好ましく、
その例としてはたとえばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロ
ポキシ１１−プロポキシ、ｎ−ブトキシ。

ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシなどが挙げられる。

上記１’　Ａ　Ｎ　−６６５Ａのエステル化は、常法た
とえば次の方法により行なわれる。

１）　　Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａをジアゾアルカン、例
えば、ノアジメタン。フェニルジアゾメタン、ジフェニ
ルジアゾメタンなど、と溶媒、例えばテトラヒドロフラ
ン、ジオキサン、酢酸エチル、アセトニトリルなど、の
中で、約０℃ないし還流温度で約２分から２時間反応さ
せる。

２）　　Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａまたはそのアルカリ金
属塩を活性化アルキルハライド、例えば、メチルヨーダ
イト、ベンジルプロミド、ｐ−ニトロ−ベンジルプロミ
ド、ｍ−フェノキシベンジルプロミド、ｐ−ｔ−ブチル
ベンジルプロミド、ピバロイルオキシメチルクロリド、
などと反応させる。適当な反応条件は、溶媒、例えば、
ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドまたはへ
キサメチルホスホルアミドなどを使用し、約０°Ｃない
し６０℃で、約２分から４時間反応させる。この反応液
中にトリエチルアミンなどを共存させても反応の進行に
は差しつかえない。

３）　　Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａをアルコール、例えば
、メタノール、エタノール、ベンジルアルコールなどと
反応させる。この反応は、カルボジイミド縮合剤、例え
ば、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの存在下で行
なわれる。約０℃ないし還流温度で、約１５分ないし１
８時間行ない、溶媒としてはクロロホルム、ジクロロメ
タン、ジクロロエタンなどが用いられる。

４）　　Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａを酸クロリド、たとえ
ば、エチルクロロホーメート、ベンジルクロロホーメー
トなどと反応させて得られたＴ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａの
酸無水物をアルコール、例えば、３）に挙げたものと、
３）に記載の反応条件下で反応させる。この無水物はＴ
ＡＮ−６６５Ａを酸クロリドと、溶媒、例えば、テトラ
ヒドロフラン、ジクロロメタン、などの中で２５℃ない
し還流温度で、約１５分ないし１０時間反応させること
により得られる。

ＴＡＮ−６６５Ａの生物学的性質は以下に述べるとおり
である。Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａ　（遊離体）、ＴＡＮ
−６６５Ａ（Ｎａ塩）、Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａメチル
エステル（Ｍ　ｅ体）およびＴＡＮ−６６５Ａｐ−ニト
ロ−ベンジルエステル０）Ｎ８体）の抗菌スペクトルお
よび抗かびスペクトルをそれぞれ第１表および第２表に
示す。

これらのデータから明らかなようにＴ　Ａ　Ｎ　−６６
５Ａは遊離体とＮａ塩で生物活性に差がなく、エステル
体にすると抗細菌性、抗かび性などが著しく増強される
ことが解る。またＴ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａは第３表に示
すようにマウスを用いた抗豚赤痢試験（起因間はトレボ
ネーマ・ハイオディセンテリエ）において有効である。

さらにＴ　Ａ　Ｎ−６６５Ａは第４表に示すようにマウ
スを用いた急性毒性試験で、何らの毒性も示さなかった
。

第１表 接種菌ｆｆｉ：　　ｌｏ＠ｃＦＵ／ｍｌ培地：　変法ミ
ューラーーヒントン（Ｍｕｅｌｌｅｒ−１１ｉｎｔｏｎ
）寒天培地 ％１５％馬血清添加トリブティケース・ソイ・アガー １　ヘイフリック（Ｉｌａｙｒ　ｉ　ｌ　１ｃｋ）液体
培地第２表 Ｗ４Ａ：　　変法ペブフｙ　−（ｐｆｅｆｆｅｒ）培地
Ｂ　　グルコース栄養寒天培地 第３表 陽性例数／供試マウス 第４表 以上詳述したようにＴ　Ａ　Ｎ−６６５Ａは抗豚赤痢作
用を示し、低毒性である。またそのエステル体はグラム
陽性。陰性菌ならびに植物病原性菌、医真閑などに幅広
い抗菌力を示している。したがってこれらの化合物は温
血咄乳動物（例、マウス、ラット、犬、ネコ、牛、豚、
羊、ヒト）の細菌感染症、かび感染症および豚赤痢症な
どの予防および治療を目的として用いることが可能であ
る。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａらしくはそのエステルまたはそ
れらの塩を豚赤痢症の治療薬として用いる場合の１日投
与量は飼料添加剤として約２０〜５００ＩＩ１ｇ／ｋｇ
。

さらに好ましくは約５０〜２ＱＱｆｆ１ｇ／ｋｇとなる
塗である。

ＴＡＮ−６６５Ａのエステル体またはその塩を細菌感染
症またはかび感染症の治療薬として用いる場合の１日投
与量は注射剤として約１０〜２０Ｇ＋ｎｇ／ｋｇ、さら
に好ましくは約２０〜１００ｍｇ／ｋｇとなる虫である
。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａもしくはそのエステルを投与す
るには、Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａらしくはそのエステル
またはその薬理学的に許容され得る塩を常套手段によっ
て、適宜の薬理的に許容され得る担体、賦形剤、希釈剤
と混合し、たとえば錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ドロッ
プ剤などの剤型にして経口的に投与することができ、ま
たは常套手段によってたとえば注射剤に成型し、常套手
段によって製造された滅菌性担体中に配合し非経口的に
投与することができる。

また、Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａのエステル体は植物のか
び防除剤として有用であり、さらに本発明の化合物は、
新しい医薬品、農薬、動物薬の合成中間体としても重要
である。

以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明す
るが、これによって本発明が限定されろものではない。

なお、培地におけるパーセント（％）は、とくにことわ
りのない限り重重／容量パーセントを表わす。

実施例１ 酵母エキス・麦芽エキス斜面寒天培地に培養したストレ
プトミセス・タケトミエンシスＮｏ、Ｃ−６６４８４（
ＩＦＯ−１４４７２，ＦＥＲＭ　　Ｐ−８５２１）を２
００ｍ１容三角フラスコ内のグルコース２％、可溶性で
ん粉３％、生大豆粉１％、コーンスチイーブリカ−１％
、ペプトン０．５％、ＮａＣ１０，３％、ＣａＣ０ａ　
Ｏ，５％を含む４０ｍ１の種培地（ｐＨ７，０）に接種
し、２８℃。

４８時間回転振盪機上で培養し、前培養液を得た。

得られた前培養液の５ｍｌを２０００ｍ１容坂ロフラス
コ内の５００ｍ１の種培地に移植し、２８℃、４８時間
往復振盪機上で培養し種培養液を得た。この種培養液５
００ｍ１を５０Ｑ容ステンレススチールタンク内の３０
９種培地（上記種培地と同一組成）に移植し、通気３０
Ｑ／分、攪拌２８０回転／分、内圧１　ｋｇ／ｃｍ”の
条件で培養した。得られた培養液の５９．を２００Ｑ容
ステンレススチールタンク内のグルコース０．５％、デ
キストリン５％、脱脂大豆粉３．５％、ＣＯＣｌ２０゜
０００２％、　ＣａＣ０＋　０．７％を含む１００１！
の主培地（ｐＨ７゜０）に移植し、２Ｂ２Ｏ３通気１Ｇ
ＯＲ／分、攪拌２００回転／分、内圧１　ｋｇ／ｃｍ２
の条件で９６時間培養した。

かくして得られた培養液（１７０９）を希硫酸でＩ）Ｈ
３〜３．５に調整し、ハイフロ・スーパー・セル（ジョ
ンズ・マンビル社製、米国）を加えて、ろ過し、ろ・液
（１６ｕりを得た。ろ液のｐｉを６〜７に希水酸化ナト
リウム溶液で調整後、ろ液をアンバーライトＩＩ’（Ａ
−４０２（ＣＩ型、１６Ｑ）のカラムクロマトグラフィ
ーに付した。活性区分を１Ｍ食塩水（１３０Ｒ）で溶出
した。溶出液を活性炭（６Ｑ）のカラムクロマトグラフ
ィーに付し、活性物質を含む部分を８％イソ・ブタノー
ル水（４２Ｒ）で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、濃
縮液（２２）をダイヤイオンＳＰ−２０７（２ｆりのカ
ラムクロマトグラフィーに付し、水で溶出した。溶出液
（５２）をＱＡＥ−セファデックスＡ　−２５（ＣＩ型
、２ｇ）のカラムクロマトグラフィーに付し、活性区分
を０．０５Ｍ食塩水で溶出。

分画した。ＨＰＬＣで単一ピークを示す両分を集め（８
Ｒ）、活性炭（０，４１！　）のクロマトグラフィーで
脱塩操作を行った。

脱塩液を減圧下濃縮、ａ縮液を凍結乾燥してＴＡ　Ｎ−
６６５Ａモノナトリウム塩の白色粉末（１５ｇ）が得ら
れた。

ナトリウム塩（６，７ｇ）を水（２００ｍｌ）に溶解し
、希塩酸でｐＨ２，４に調整するとＴ　Ａ　Ｎ−６６５
Ａ　（遊離体）の黄色結晶（４、９８ｇ）が得られた。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａナトリウム塩の物性値は次のと
おりである。

Ｓ　Ｉ　−Ｍ　Ｓ　：ｍ／ｚ　１８５（Ｍ＋　Ｈ）”、
２０７（Ｍ＋　Ｎａ）”。

２２９（Ｍ＋２Ｎａ）” Ｕ■：　λ”１７’　２１０ｎｍ（Ｅ’％＝　１，０１
０）ｍａｙ　　　　　　　　　　１ｃｍ ２４０　　（〃＝　−３２５） ２７５　　（〃＝　　＋９５） ３１５　　（〃＝　　１２８） ４００　　（”　　＝　　３０５） 元素分析値：Ｃ？Ｈ＊Ｎ　ｔｏ　ｓＮａ　＠　１１５１
−Ｉ　ｔｏとして実測値：Ｃ，４４，７３；　　Ｈ，１
，６７、Ｎ、１３．８５゜Ｎａ、１２．０　（％） 計算値：Ｃ，４４Ｊ２；　　Ｉ−１，１，８１；　　Ｎ
、１４．７７゜０．２６．９９；　　Ｎａ、１２．１２
　（％）１１：ＫＢｒ中（第３図） 主な波数（ｃｍ−’　） ３４３ｏ、　２１？０．２１４０．１６４０．　ｔａｏ
ｏ、　１５３５．１４１５゜１４Ｇ０．１３７５．１２
２０．１１２５．１０３０．９８０．８２０゜実施例２ １）　Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａ　（２，０ｇ）をジメチ
ルホルムアミド（４ｍｌ）に懸濁さけ、トリエチルアミ
ン（１，７ｍ１）とヨウ化メチル（２，３ｍ１）を加え
、室温で１．５時間攪拌した。反応液に水（２００ｍｌ
）を加え、酢酸エチル（２００ｍｌ）で２回抽出した。

有機層を水洗後、硫酸ナトリウムで脱水した。濃縮液、
石油ベンジンを加えてＴ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａメヂルエ
ステルの赤かっ色粉末（１５７ｇ）を得た。

元素分析値：　Ｃｓ　Ｈｅ　Ｎ　ｔ　Ｏ３として計算値
：Ｃ，５３，９４；　　Ｈ，３，３９；　　Ｎ、１５．
７３；０．２６．９４　（％） 実測値Ｃ，５３，８６；　　Ｈ，３，３０；　　Ｎ、１
５．０５（％）Ｅ　Ｔ　　Ｍ　Ｓ　：　　ｍ／ｚ　１７
ｇ（Ｍ”）ＵＶ：　λＭ００Ｈ（ε）　　２６０ｎｍ（
５，３００）、　３９８ｎｍａＸ （６，８００）、　４１４ｎｍ（６，８００）Ｐ　Ｍ　
Ｒ：（９０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ５）６３．９３（３Ｈ，ｓ
）、　６，８ｇ（ｉｌｌ、ｄ、Ｊ＝９ｔｌｚ）、　７．
０３（１１１、ｄ、Ｊ＝６１１ｚ）、　７．３２（ＩＩ
Ｉ、ｄｄ、Ｊ＝６．９１１ｚ）ＩＲ：ＫＢｒ中（第４図
） 主な波数（ｃｍ−’） ２１４０、１７１０．１６２５．１５６０．１５３０．
１４４０．１３９５゜１２８５、　１２７５．　１２３
５．　１１９０．　１１５５．　１１３５．　１０３５
゜１０１５、　９１５．　８２０．　７６０２）　′ｒ
　Ａ　Ｎ　−６６５Ａ　（３２８ｍｇ）をジメチルホル
ムアミド（５ｍｌ）に懸濁さけ、トリエチルアミン（３
３４μ９）。

ｐ−ニトロベンジルブロマイド（５１８ｍｇ）を加え、
室温で１．５時間攪拌した。反応液に水（ｌｏＯｍｌ）
を加え、酢酸エチル（１００ｍｌ）で３回抽出した。有
機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮後エーテルを加え
てＴＡＮ−６６５Ａｐ−二トロベンジルエステルの橙黄
色結晶（４９６ｎ＋ｇ）を得た。

元素分析値：　Ｃ＋　４Ｈｅ　Ｎ　３０　ｓとして計算
値：Ｃ，５６，１９；　　）１，３．０３．　　Ｎ、１
４．０４゜０．２６．７３　（％） 実測値：Ｃ，５６，２２；　　Ｈ，３，０１，Ｎ、１３
．７５（％）Ｅ　Ｉ　−ＭＳ　：　　ｍ／ｚ　　２９９
（Ｍ”）ＵＶ；　λＭｅ”（ε）　　２６４ｎｍ（１６
，４００）、　３９８ｎｍａｘ （６，９００）、　４１４ｎｍ（６，７００）Ｐ　Ｍ　
Ｒ：　（９０ＭＩＩＺ、　ＣＤＣ１３）δ　５．４５（
２Ｈ，ｓ）、　６．９０（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ
）、　７゜０８（Ｉｌｌ、ｄｄ、Ｊ＝２．６１１ｚ）、
　　７．３２（ｉｌｌ、ｄｄ、Ｊ＝６，９１１ｚ）。

７．５７（２１１，ｄ、Ｊ＝９１１ｚ）、　　８．２５
（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝９ｔｌｚ）ＩＲ：ＫＢｒ中（第５図） 主な波数（ｃｒＱ一つ ３０６０、２１２０．１７１０．　＋６１５．１５６５
．１５１０．１４４０゜１４３０、１３８５．１３４０
．１２８０．１２１５．１１２５．１０２５゜９５５、
８３５．８１０．７４５．７３５発明の効果 本発明によって得られるＴ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａもしく
はそのエステルは、新規抗生物質であり、かび。

細菌あるいは豚赤痢菌感染症の治療剤として有用である
。

【図面の簡単な説明】 第１図および第２図は、ＴＡＮ−６６５Ａの紫外部吸収
スペクトルおよび光外部吸収スペクトルを、第３図は、
ＴＡｌｌ−６６５Ａナトリウム塩の光外部吸収スペクト
ルを、第４図は、Ｔ　Ａ　Ｎ　−６６５Ａメチルエステ
ルの光外部吸収スペクトルを、第５図は、ＴＡＮ−６６
５Ａｐ−ニトロベンノルエステルの光外部吸収スペクト
ルをそれぞれ表わす。 プ褌〈 癩顧蕾　？ 葦咽外計　ｔ

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）２，３−ジヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息
   香酸もしくはそのエステルまたはそれらの塩。
2. （２）ストレプトミセス属に属し、２，３−ジヒドロ−
   ２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸を生産する能力を有す
   る微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄
   積せしめ、これを採取することを特徴とする２，３−ジ
   ヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸の製造法。
3. （３）２，３−ジヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息
   香酸をエステル化反応に付すことを特徴とする２，３−
   ジヒドロ−２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸エステルの
   製造法。
4. （４）シュークロースおよびラフィノースのいずれをも
   単一炭素源として利用し、抗生物質２，３−ジヒドロ−
   ２−ジアゾ−３−オキソ安息香酸を生産する能力を有す
   るストレプトミセス・タケトミエンシス。