JPS63157992A - 抗生物質ｎ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は新抗生物質Ｎ−ヒドロキシジヒドロアピコビロ
マイシン（Ｎ　−Ｈｙｄｒｏｘｙ　ｄｉｈｙｄｒｏ−ａ
ｂｉｋｏｖｉｒｏｍｙｃｉｎ　）およびその製法に関す
る。

本発明者らは、千葉県鋸南町の土壌より分離したストレ
プトミセス属に属する５ＡＮＫ６５９Ｂ６株がダラム陽
性、陰性細菌に有効な新抗生物質Ｎ−ヒドロキシジヒド
ロアビコビロマイシンを生産することを見出した。

〔発明の構成〕

本発明のＮ−ヒドロキシジヒドロアビコピロマイシンは
下記の構造式を有する。

０Ｈ そして、Ｎ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンは
下記のような理化学的性状を有する。

１）物質の性状：脂溶性で無色の油状物質２）比旋光度
：〔α）Ｄ−３２７，１°（Ｃ，１，０，クロロホルム
） ３）元素分析値（％）　：　Ｃ，６７，２６；　Ｈ，７
，２５；　Ｎ。

７．６６ ４）分子量＝１７９ ５）分子式　Ｃｌ０Ｈ１３ＮＯ２ ６）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ　ｎｍ　（”　Ｌ
）メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは２４
２ｎｍＣＢ”　８７０）に極大吸収を示す。

７）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒｃＩＩ！−１ａｘ ３１００．２９５０．２Ｂ５０，１６７０，１４５０，
１４３Ｇ。

１３４０．１２５０，１０９０，９７０，９２０，８７
０，８４０゜７９０．７４０，６１０ ８）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ（ｐｐｍ）重クロロ
ホルム中、内部規準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）
を使用して測定したＩＨ−核磁気共鳴吸収スペクトル（
９０ＭＨｚ　）　　は次の通りである。

１．７５　（３Ｈ，ｄ　）、　２．１５　　（７Ｈ，ｍ
　）　　、　２．８　（２Ｈ。

ｍ　）１３．１　（１Ｈ，Ｓ　）！　３．７　（ＩＩ（
、Ｓ　）　、　５．１５（ＩＨＩ　ｑ　）、　６．３　
（１Ｈ，ｍ　）、　６．７５　（ＩＨ，ｄ）９）溶解性
：水に難溶、クロロホルム、酢酸エチル、エーテル、ア
セトン、アルコールに易溶である。

１０）呈色反応：ヨード、過マンガン酸カリで陽性、ニ
ンヒドリンで陰性である。

１１）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値０，２３吸着剤
；シリカゲル（メルクキーゼルゲルＦ　２５４　　Ｎｏ
　５Ｔ１５　） 展開溶媒；クロロホルム：メタノール （ａｓ　：　１ｓ　） Ｎ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンを生産する
放線菌５ＡＮＫ６５９８６株の菌学的性状は次の通りで
ある。

１、　形態学的特徴 一般的に塞化菌糸は寒天培地上で分枝して、よく伸長し
気菌糸は単純分枝である。胞子鎖の形態は多くのものは
螺旋状を示す。１胞子柄上に形成される胞子数は多くの
場合、約１０〜５０個またはそれ以上が観察される。胞
子の形は円柱状であり、その大きさは０．５〜０．７μ
ｍＸ０．８〜１．３μｍであり、その表面は平滑状を示
す。また気菌糸の車軸分枝、菌核、胞子の５などの特殊
器官は観察されなかった。

２　各種培養基上の諸性質 各種培養基上で２８″ｃ、１４日間培養後の性状は第１
表に示す通りである。色調の表示は日本色彩研究新版１
１標準色票１のカラーチップ・ナンバーを表わす。

第　　１　　表 培地の種類　　項目　　　５ＡＮＫ６５９８６株の性状
シュクロース・　Ｇ　　余り良くない、平坦、黄味法（
１−９−硝酸塩寒天　　　　　　１０） ＡＭ　良好に形成、黄味法（２−１１−１０）Ｒ薄茶（
２−８−９） ｓｐ　　産生ぜず グルコース・　　　Ｇ　　余り良くない、平坦、薄黄味
橙（２−９アスパラギン　　　　　−９） 寒天　　　　　　ＡＭ　　余り良くない、ビロード状、
白Ｒ薄層（４−９−９） ｓｐ　　産生ぜず グリセリン・　　Ｇ　　良好、平坦、薄黄味茶（４−８
−９）アスパラギン　　ＡＭ　　良好に形成、綿毛状、
黄味法（２−８−寒天（ＩＳＰ５）　　　　　１０） Ｒ薄黄味茶（４−８−９） ｓｐ　　産生ぜず 澱粉・無機塩　　Ｇ　　良好、平坦、薄黄味茶（４−８
−９）寒天（ＩＳＰ　４　）　　　ＡＭ　豊富に形成、
綿毛状、明るい茶味灰（１−ｙ−１ｏ） Ｒ薄黄味茶（６−８−９） ｓｐ　　産生ぜず チロシン寒天　　Ｇ　良好、平坦、薄黄味茶（４−８−
９）（ＩＳＰ　７　）　　　　　ＡＭ　　豊富に形成、
明るいオリーブ灰（２−８Ｒ黄味系（６−５−８） ｓｐ　　産生ぜず ペプトン・イー　Ｇ　余り良くない、隆起状、薄黄味茶
（４−ストエキス・　　　　　８−９） 鉄寒天　　　　　ＡＭ　　僅かに形成、白（ＩＳＰ６）
　　　　　Ｒ薄黄味茶（６−８−９）ｓｐ　　産生せず 栄養寒天　　　　Ｇ　余り良くない、平坦、薄黄味橙（
２−９（Ｄｉｒｃｏ）　　　　　　　　９） ＡＭ　　僅かに形成、白 Ｒ薄黄味茶（４−８−９） ｓｐ　　産生ぜず イーストエキス　Ｇ　非常に良好、隆起状、薄黄味茶（
４−８・麦芽エキス寒　　　　−９） 天（ＩＳＰ２）　　　　ＡＭ　　良好に形成、ビロード
状、薄黄味橙Ｒ黄味系（６−７−８） ｓｐ　　産生ぜず オートミール寒　Ｇ　非常に良好、隆起状、薄黄味橙（
３−８天（ｘｓｐ　ａ　）　　　−８） ＡＭ　豊富に形成、綿毛状、黄味系（４−７−９）Ｒ明
るい茶（８−５−６） ｓｐ　　黄味系（６−６−８） 水寒天　　　　　Ｇ　良くない、平坦、黄味法（１−９
−１０）ＡＭ　　余り良くない、粉状、明るい茶味灰Ｒ
黄味法（２−９−１０） ｓｐ　　産生ぜず ポテトエキス・　　Ｇ　余り良（ない、平坦、薄黄味橙
（２−９人参エキス寒天　　　　−９） ＡＭ　　良好に形成、ビロード状、黄味法（２−８Ｒ薄
黄味茶（４−８−９） ｓｐ　　産生ぜず ３、生理学的性質 ８ＡＮＨ６５９８６株の生理学的性質は第２表に示す通
りである。

第　　２　　表 澱粉の加水分解　　　　　　　陽　性 ゼラチンの液化　　　　　　　陽　性 硝酸塩の還元　　　　　　　　陽　性 ミルクの凝固　　　　　　　　陰　性 ミルクのペプトン化　　　　　擬陽性 生育温度範囲（培地１）餐　　１０〜３Ｔ”ｃ生育適正
温度（培地１）　　　２５〜３０℃食塩耐性（培地１）
　　　　　２％以上３％以下カゼインの分解　　　　　
　　陽　性 チロシンの分解　　　　　　　陽　性 キサンチンの分解　　　　　　陰　性 メラニン様色素生産性 （培地２）　　陰　性 （培地３）　　陰　性 （培地４）　　陰　性 ＋培地１：イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ２
） 培地２ニドリプトン・イーストエキス・プロス（ＩＳＰ
１） 培地３：ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（ｒｓｐｓ
） 培地４：チロシン寒天（ＩＳＰ７） また、プリドハム・ゴドリープ寒天培地（ＩＳＰ９）を
使用して、２８℃、１４日間培養後に観察した５ＡＮＫ
　６５９８６株の炭素源の資化性は第３表に示す通りで
ある。

第　　３　　表 ＋：利用する、　　　±：弱く利用するｍ：利用しない ４、　菌体成分について ５ＡＮＫ　６５９８６株の細胞壁は　ビー・ペラカーら
の方法［Ｂ、　Ｂｅｃｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、アプライ
ド・マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｙ　）　＋１２巻、４２１〜４２３頁、
１９６４年〕　に従い検討した結果、Ｌ、Ｌ−ジアミノ
ピメリン酸およびグリシンが検出されたことから、細胞
壁りイブＩであることが確認された。また、Ｓ　ＡＮＫ
６５９Ｂ６株の全細胞中の糖成分をエム・ビー・レシエ
バリエの方法ＣＭ、　Ｐ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　
、ジャーナル・オン・ラボラトリイ・アンド・クリニカ
ル・メデイシン（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ＆　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　）
　＋　　７１巻、９３４頁、　　１９６８年〕に従い検
討した結果、特徴的なパターンは認められなかった。

以上のことから、本菌株は放線菌の中でもストレプトミ
セス属に属することが判明したのでストレプトミセス・
エスピー・Ｓ　ＡＮＫｅｓｓｓｓ　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ｓｐ、　５ＡＮＫ　６５９８６　）　（微工
研菌寄第９０８１号）とした。

なお、５ＡＮＫ　６５９８６株の同定はＩＳＰ、　　（
ニジ・インターナショナル・ストレプトミセス・プロジ
ェクト（Ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ　）　］基準、バー
ジエース・マニアル（Ｂｅｒｇｅｙ’　ｓ　Ｍａｎｕａ
ｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ
−ｉｏｌｏｇｙ　）　第８　版、ニス・エイ・ワックス
マン（Ｓ、　Ａ、　Ｗａｋｓｍａｎ　）者［ジ・アクチ
ノミセイテス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　
）　）　　および放線菌に関する最近の文献によって行
った。

以上Ｎ−ヒドロキシジヒドロアピコビロマイシンの生産
菌について説明したが、放線菌の諸性質は一定したもの
でなく自然的、人工的に容易に変化することは周知の通
りであり、本発明で使用しうる菌株はストレプトミセス
属に属する、Ｎ−ヒドロキシジヒドロアピコビロマイシ
ンを生産するすべての菌株を包含するものである。本発
明における培養は一般放線菌における培養方法に準じて
行われ、液体培養地中での振盪培養あるいは通気攪拌培
養によるのが好ましい。培地成分としては、放線菌の栄
養源として公知のものが使用され、たとえば炭素源とし
てブドウ糖、・イユクロース、グリセリン、マルトース
、デキス）　ＩＪン、澱粉、大豆油、綿実油などが、窒
素源として大豆粉、落花生粉、綿実粉、７フーマミン、
魚粉、コーン・スチーフ・リカー、ペプトン、肉エキス
、イースト、イーストエキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモ
ニウム、硫酸アンモニウムなどが、また無機塩として食
塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要に
応じて適宜添加される。液体培養に際してはシリコン油
、植物油、界面活性剤などが消泡剤として適宜使用され
る。培地のｐＨは中性附近、培養温度は２５〜３０で、
特に２８υ前後が好ましい。通常通気攪拌培養では７２
〜９６時間の培養でＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロ
マイシンの生産量は最高値に達する。このようにして培
養された培養物中の主として液体部分に存在スるＮ−ヒ
ドロキシジヒドロアビコビロマイシンは培養終了後、菌
体その他の固型部分を叶いそう土等を濾過助剤とする濾
過操作、あるいは遠心分離によって除去し、そのｐ液あ
るいは上清中から抽出・精製することによって得られる
。Ｎ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンはその物
理化学的性状を利用することにより、たとえば吸着剤を
用いて採取することができる。吸着剤としてはたとえば
活性炭、あるいは吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡ
Ｄ−２、およびＸＡＤ　−４（ローム嗜アンド・ハース
社製）、ダイヤイオンＨＰＩＱ、　ＨＰ２０．　ＨＰ３
０　（三菱化成工業（力社製）などが使用される。Ｎ−
ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンを含む液をこれ
らの吸着剤を通過させて不純物を吸着させて取除くか、
またはＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンをこ
れらの吸着剤に吸着させた後、メタノール水、ｎ−ブタ
ノール水、アセトン水などで溶出し精製採取することが
できる。

更に純度の高い抗生物質標品を得るためには微結晶セル
ロース、たとえばアビセル（旭化成工業（株）社製）を
担体とする分配クロマトグラフィー、バイオゲル（ビオ
ラッド社製）あるいはセファデックス（ファルマシア社
製）などを用いるゲル濾過なども有効である。

またＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンが水と
混合しない有機溶媒たとえば酢酸エチルなどのエステル
類、クロロホルムなどにより抽出されることから水と有
機溶媒に対する分配率を利用して精製することもできる
。以上の精製手段を適宜組合せ、反復用いることによっ
てＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンを精製す
ることができる。

〔発明の効果〕

本発明のＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンは
下記の生物学的性状を有する。

１）抗菌スペクトル： ペーパーディスク（東洋科学、直径８胃厘）にＮ−ヒド
ロキシジヒドロアビコビロマイシン１０００μｔ　／ｍ
ｌ　　の水溶液を十分に浸みこませた後各種被検菌を接
種した寒天平板にのせ３７℃にて２４時間培養後生じた
生育阻止帯（−）の直径を測定した（第４表）。

第　　４　　表 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　　　
２０９Ｐ　ＪＣ−１）バチルス・ズブチリス　ＰＣＩ２
１９　　　　　　　　　１　　９（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
５ｕｂｔｉｌｉｓ　ｐｃＩ　２１９）マイコバクテリウ
ム・スメグマチス　ＡＴＣＣ６０７１９（Ｍｙｃｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ　　　ＡＴＣＣ６０
７）エツジエリシア・コリー　ＮＩＨＪＪＣ−２２０（
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　　ＮＩＨＪ　ＪＣ
−２）プロテウス・ブルガリス　０Ｘ−１８１０（Ｐｒ
ｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　　０Ｘ−１８）プロテ
ウス・レットゲリ　　　　　　　　　　　　　　　　１
０（Ｐｒｏｔｅｕｓ　　ｒｅｔｔｇｅｒｉ　）クレブシ
ェラ・ニュウモニエ　ＰＣＩ６Ｑ２　　　　　　１　３
２（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｒｌｉａｅ　
、ｐＣｌ　６０２　）＋１：１％グリセロール添加普通
寒天培地（栄研）２：０．５％ポリペプトン殊天培地（
寒天１．２％）以上から、Ｎ−ヒドロキシジヒドロアビ
コビロマイシンはダラム陽性および陰性細菌に有効であ
る。

従って、Ｎ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンは
これらに起因するヒト、動物または植物の疾病の予防ま
たは治療に用いられる。

以上からＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシンは
各種細菌感染疾患を対照とする抗菌剤として使用される
。その投与形態としては皮下注射、静脈内注射、筋肉注
射、坐剤などによる非経口投与法あるいは錠剤、カプセ
ル剤、散剤、顆粒剤などによる経口投与法があげられる
。

投与量は対象疾患、投与経路および投与回数などによっ
て異なるが、例えば成人に対して通常はそれぞれ１日０
．１ｇ乃至２ｇを１回または数回に分けて投与するのが
好ましい。

次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。

実施例１ ストレプトミセス・エスピー５ＡＮＫ６５９Ｂ６株を下
記の如き培地組成で示される人培地８０コを含む５００
ｇ／容三角フラスコに一白金耳接種し、２１０　ｒｐｍ
の回転振盪培養機により２８″Ｃで４８Ｒ間培養した。

培地組成 人培地　グルコース　　　　　　　　　　　　　　５．
０　　％イースト・エキス　　　　　　　　　　　０．
１肉エキス　　　　　　　　　　　　　　　０・４大豆
粉　　　　　　　１．０ ポリペプトン　　　　　　　　　　　　０．４炭酸カル
シウム　　　　　　　　　　　　０，５ＮａＣｊ　　　
　　　　　　　　　　　　　　Ｏ，２５ニツサンデイス
フオーム　ＣＢ４４２　　　０．０１滅菌前ｐＨ７，０ その培養液１　ｍｌをＡ培地８０露ｌを含む５００　　
ｍｌ容三角フラスコに接種しＨｏｒｐｍの回転振盪培養
機により２８℃にて７２時間培養した。

この培養液１３１Ｖｃ濾過助剤としてセライト５４５（
米国ジョンズ・マンビル・プロダクト・コーポレーショ
ン族）を加えてｆ過するとＰ′ｔＬ１０１　（ｐＨ７，
１）が得られた。このＰ液のｐＨを稀アルカリにて９．
０に上げ、酢酸エチル５１で２回抽出した。

このようにして得られた酢酸エチル要約１０！を芒硝に
て脱水後、減圧下シロップ状に濃縮し、次いでベンゼン
−酢酸エチル（１：１）の溶媒系で十分膨潤平衡化させ
た２００１のシリカゲルカラムに注加した。同混合溶媒
系で展開し溶出液を１５−ずつ分画した。活性分画を減
圧下濃縮することにより１１５■のＮ−ヒドロキシジヒ
ドロアビコビロマイシンが針状晶として得られた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシン
   。 ２、ストレプトミセス属に属するＮ−ヒドロキシジヒド
   ロアビコビロマイシン生産菌を培養して、その培養物よ
   り式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるＮ−ヒドロキシジヒドロアビコビロマイシン
   を採取することを特徴とするＮ−ヒドロキシジヒドロア
   ビコビロマイシンの製法。 ３、ストレプトミセス属に属するＮ−ヒドロキシジヒド
   ロアビコビロマイシン生産菌がストレプトミセス・エス
   ピーＳＡＮＫ６５９８６（微工研菌寄第９０８１号）で
   ある特許請求の範囲第２項記載の製法。