JPH01216927A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は下記＝誓矢〔■〕 で表わされる構造を有する物質を有効成分として含有す
る抗腫瘍剤に関し新規かつ有効な抗腫瘍剤を提供するも
のである。

〔従来の技術〕

従来知られている抗腫瘍剤にはアクテノマイシンＤ、ク
ロモマイシンＡ、（新田和男：発酵と工業。

３８（６）、５０９．（１９８０））、ネオカルチノス
タチン（Ｎ、ｌ５ｈｉｄａ　ｅｔ、ａｌ　：　Ｊ、Ａｎ
ｔｉｂｌｏｔｉｃｓ　、　Ａ　）８　ｓ　６８（１９６
５））、−ｒイトマイシンＣ（Ｓ、Ｗａｋａｋｌ　ｓｔ
、ａｌ　：ムｎｔ１ｂｉｏｔ、ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、
　８　ｅ　２２２　（１９５８）　）　ｔｆレオマイシ
ン（ＨｌｌＵｍｅｚａｗａ　：　Ａｎｔｉｍｉｃｒｂ　
、　ＡｇｅｎｔｓＣｈａｍｏｔｈ＠ｒ、、１９６５ｔ　
１０７９（１９６５））、アドリアマイシン（Ｆ−Ａｒ
ｅａｍｏｎ＠ａｔ　ａｌ　＊　：　Ｂｉｏｔｅｃｋ、Ｂ
ｉｏｅｎｇ、。

１１．１１０１（１９６９））等がある。これらの物質
は臨床的に使用されているが、その効果が抗腫瘍薬とし
て十分なものとはいえず、腫瘍を完全に治癒できる新し
い抗腫瘍剤の出現が望まれている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、その抗腫瘍作用、毒性を改良した新規
な抗腫瘍剤を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者等は抗腫瘍活性物質の検索を目的として広く微
生物の培養物について種々検索した結果、Ｓｔｒｓｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ属に属する放線菌が抗生物質活性及び抗腫
瘍活性を有する構造式（１）で示される物質を生産する
ことを発見した。

本発明者らは構造式（１）で示される物質がふりンザル
コーマウイルス（Ｍｕｒｉｎｅ　Ｓａｒ６ｏｍａ　Ｖｉ
ｒｕｓ）ノモロニーｆｊｌ　（Ｍｏｌｏｎ＠ｙ）でトラ
ンスフオームしたマクスの線維芽細胞Ｍ−ＭＳＶ　Ｂａ
　１　ｂ　３　Ｔ　３に対して強い生育阻害作用を有し
ていることを初めて見い出し友。

本物質はＭ−ＭＳＶ　Ｂａ１ｂ　３Ｔ３に対して強い生
育阻害作用を有しており抗腫瘍剤として利用できるもの
である。

父本物質は抗菌活性、抗カビ活性、殺虫活性を有し抗菌
物質、抗カビ物質、殺虫物質としても利用出来ることは
すでに知られている。

（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｍ、Ｖｏｌ　、３７．Ａ２
　、　ｐｐ　１１（）”１１７．１９８４　。

とＧ＠ｒ、０ｆｆｅｎ、ＤＩ　３３１０５３３Ａ１　、
２７　Ｓ＠ｐ　、　１９８４　）本発明において使用す
る微生物は、本物質を生産する能力を有する微生物で１
）、−例としてストレプトミセス・ニス・ビーＡ　Ｊ　
９４６２　（ＦＥＲＭ　Ｐ−９８７９）がある。

本微生物を用いて本物質を生産するにあたりて用いられ
る培地は炭素源、窒素源及び無機塩類、更に必要に応じ
て有機微量栄養素を適宜含有する通常の液体培地が用い
られる。

炭素源としては、例えばグルコース、フラクトース、マ
ルトース、シェークロース、スＩ’−ｆ、デキストリン
、澱粉加水分解物、廃糖蜜等の炭水化物、クエン酸、コ
ハク酸、フマール酸、酢酸等の有機酸類及びグリセリン
等のアルコール類が用いられる。窒素源としては例えば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等のアンモ
ニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の硝酸塩、
尿素、アンモニア水、アンモニアガス、アミノ酸類、さ
らにペプトン、大豆ホエー、大豆フレーク及びそれらの
加水分解物等の蛋白質、米糖等が用いられる。その他無
機塩としては例えばマンガン塩、リン酸塩が適宜用いら
れ、又有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン及び
これらを含有するペプトン、酵母エキス等が適宜用いら
れる。

培養条件は、培地組成その他により異なるが、例えば通
常ｐＨ４，０〜９．０、温度１５〜４０℃で振盪培養、
通気攪拌培養等好気的条件下に培養が行われる。

本発明の本物質はこのようにして培養して得られる培養
液中に存在し、培養液より本物質を分離・採取する方法
はブタノール、メタノール、アセトニトリル等の有機溶
媒抽出法、順相及び逆相シリカダル、セルロース等の吸
着剤を用いる吸着クロマトグラフィー、ｒル濾過法、各
種溶媒に対する溶解度の差を利用する方法等の公知の分
離・精製法を適宜組み合せて行われる。

■く製造例〉 次に製造例を示す。

第１表に示した培地（ＰＨ７，２）１００−を分注した
５００＋ｔ／容フラスコを１２０℃２０分間殺菌して、
これにストレプトミセス・ニス・ピーＡ　Ｊ　９４６２
（ＦＥＲＭ　Ｐ−９８７９）の培養液１ｔｎｌを接種し
、２７℃で４日間培養した。一方３（ｌ容のステンレス
・ジャーファーメンタ−の中に前記の培地を１８Ｊ入れ
殺菌したものに上記の種母２）を接種しかく拌（３５０
ｒｐｍ　）　、通気（Ｌ′／２ｖｖｍ　）　ｌ、　２７
℃で３日間培養した。２０１の培養液を遠心分離して菌
糸１．０に９（湿重量）を得九。

第１表 グルコース　　　　　　　　１．０％ 酵母エキス　　　　　　　０．２％ ＫＨ２ＰＯ４０，１％ ＭｇＳＯ４・７ａｑ　　　　　　　　Ｏ，１％バクトソ
イトン　　　　　　０．７％ デンプン　　　　　　　　　２．０％ （ｐ）１７．２） 得られた菌体１．Ｏｋｇに３１のメタノールを加え活性
物質を抽出し之。抽出液を濾過して菌体を除去した。得
られ九炉液に３ノの水を加えた後、５０弊メタノールで
平衡化したダイヤイオン）ＬＰ−２０カラム（三菱化成
工業製、カラム体積６００ｍｊ）を通過させ、活性物質
を吸着させた。カラムを５０多メタノール１．８ｊ、７
５％メタノール１．８ｊで順次洗浄した後、１００％メ
タノールで活性物質を溶出し念。溶出液をエバ４レータ
−を用いて４０℃で濃縮乾固して３６０ダの粗活性物質
を得た。

この粗活性物質を９５％メタノールに溶解し、ＭＭＣ−
Ｄ−ＯＤ８カラム（山村化学研究所共、２０×２５０　
ｍ　）による逆相分配高速液体クロマトグラフィーを行
った。移動相９５％メタノール、流速８、　Ｑ　ｍＶｍ
ｌｎの条件下で活性物質は保持時間７．５ｍ１ｎの紫外
部吸収ピーク（検出波長２５０　ｎｍ　）として溶出さ
れた。溶出液をエバポレーターを用いて４０℃で濃縮乾
固して２８■の活性物質ＣＩ）を得た。

■〈物質の同定〉 次に本物質の同定結果について述べる。本物質につき、
ＦＡＢ−ＭＡＳ　スペクトＡ／、ＵＶＸペクトＡ／　、
　■Ｒスペクトルなどの測定を行ない本物質の特徴を表
わす性質を表２に示した。これらの諸性質は、Ｔｅｔｒ
ａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　、　Ｖｏｌ　、　２
４　＋７ｉ４７　＃ｐＩ）　５１９３〜５１９６　、１
９８３およびＪ、Ａｔ＋ｔｉｂｌｏｔｌｅｇ　、　Ｖｏ
ｌ　、　３７　ｅ＆　２　＃ｐ９１１０〜１１７　、１
９８４に記載されているマクロライド抗生物質ｂａｆ１
１ｏｍｙｅｉｎ　Ｂ、と一致した。

また本物質の　Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび　Ｃ−ＮＭ
Ｒス硬クトりを測定した結果、１位から３３位の母核部
分のシグナルは、表３に示した通り２０位から２２位の
部分を除き、ｂａｆｉｌｏｍｙｃｉｎ　Ａ、について記
載されている値（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔ　ｉｃｓ　、　
Ｖｏｌ　、　３７１＆２　＃ｐｐ　１１０〜１１７．１
９８４）と一致した。また本物質の１位から３３位の結
合は二次元ＮＭＢ（ＣＯ８Ｙ）スペクトル、ＮＯＥ差ス
イクトルにょシ確認された。

ま之１本物質の１３ｃｍｍ伍スペクトルをｂａｆｉｌｃ
ｌｗｃｌｎＡ、のスペクトルと比較すると、２１位の炭
素シグナルの低磁場側シフト（４，８ｐｐｍ）、２ｏお
よび２２位の炭素シグナルの高磁場側シフ）（３，４お
よび２．８　ｐｐｍ　）が観測された。この結果は、本
物質の２１位の水酸基がアシル化されていることを示唆
した。なお、２１位のアシル基の構′造は、本物質の１
ト高伍スペクトルおよび”Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおい
て観察される以下のシグナルよシ次の（ＩＩ）の様に決
定された。０１′（δ１６４．３．シングレット）。

０２′（δ１３３．４．ダブレット）、Ｈ２’（δ６．
８９．ダプレッ））、Ｃ３’（δ１３３．６　、ダブレ
ット）、Ｈ３’（δ７．１６゜ダブレット）　、　Ｃ４
’（δ１６３．７　、シングレット）。

Ｃ６′（δ１１４．７　、シングレット）　、Ｉ（７’
、８’（δ２．６１　）。

以上の結果から、本物質がｂａｆｌｌｏｍｙｃｔｎ　Ｂ
、と−致し構造式（１）を有すると確認された。

第２表 ＦＡＢ−ＭＡＳＳスペクトル　　　　ｍ／ｚ８３８　（
Ｍ＋Ｎａ　）”分子量　　　　　　　　　　８１５ ＵＶスペクトル　　　　　　　　　　２４８λ”ＯＨ（
ｎｍ）　　　　　　　２８５　（ｓｈ）ａｘ ＩＲスイクトル　　　　　　　　　　３４５０νＫＢｒ
　（１１）　　　　　３２００ａｘ 〔作用〕 本発明の構造式〔ｌ〕で示される物質を有効成分として
含有する抗腫瘍剤はヒトに包含される腫瘍哺乳動物を治
療する抗腫瘍剤として有用で６９、そして経口投与とし
て錠剤、カプセル剤またはエリキシル剤のような調剤で
または非経口投与として無菌溶液剤ｔたは懸濁液剤で処
方することによって生体中の腫瘍を抑制せしめるために
利用するととができる。本発明に使用する前記有効成分
はかかる治療を必要とする患者（動物およびヒト）に対
して患者当り０．２〜ｓｏｏｗの用量範囲で一般に数回
に分けて従って１日当、９１〜２０００１ｒ１ｇの全日
用量で投与することができる。用量は病気の重さ、患者
の体重および当業者が認める他の因子によりて変化させ
る。

本前記物質は生理学的に認められる塩の化合物または混
和物的０．２〜５００■は生理学的に認められるベヒク
ル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤な
どとともに一般に認めら゛れた製薬実施に要求される単
位用量形態で混和される。

これらの組成物または製剤における活性物質の量は指示
された範囲の適当な用量が得られるようにするものであ
る。

錠剤、カプセル剤などに混和することができる具体的外
薬剤は次に示すものである：トラガント、アラビアゴム
、コーンスターチま九はゼラチンのような結合剤；微品
性セルロースのような賦形剤：コーンスターチ、前ゼラ
チン化デングン、アルギン酸などのような膨化剤ニステ
アリン酸マグネシクムのような潤滑剤；シ冒糖１、乳糖
またはサッカリンのような甘味剤；イ・々−ミント、ア
カモノ油またはチェリーのような香味剤、調剤単位形態
がカプセルである場合には上記のタイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。種々の
他の材料は被覆剤としてまたは調剤単位の物理的形態を
別な方法で変化させるために存在させることができる。

例えば錠剤はシェラツク、砂糖またはその両方で被覆す
ることができる。。シロップまたはエリキシルは活性化
合物、甘味剤としてシｌ糖、防腐剤としてメチルおよび
グロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ
香味のような香味剤を含有することができる。

注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中
の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの
ような天然産出植物油またはエチルオレエートなどのよ
うな合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の製
薬実施に従って処方することができる。緩衝剤、防腐剤
、酸化防止剤などが必要に応じて結合することができる
。

〔実施例〕

Ｈａｍ　ＳＦ　−１２粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製の細胞
培養用培地成分）１０．４＃及びＮａＨＣＯｓ　１．４
　ｊ’を１．０１の蒸留水に溶解し、ポアーサイズ０，
２２μのミリポアフィルタ−で無菌−過し、これに無菌
的に調製した牛胎児血清（Ｆｌｏｗ　１ａｂｏ社製）を
１００１ｄ添加して細胞培地を調製した。この培地に、
予め培養し九フレンド白血病細胞（井用洋二、代謝、１
５．１４５（１９７８）参照）を加え（細胞濃度：ｌＸ
１０’／ｄ）、この細胞懸濁液をマイクロテストグレー
）（Ｎｕｎｃ社製、９６穴）に０．１−宛無菌的に分注
し、炭酸ガスインキュベーター中（炭酸ガス濃度５％、
温度３７℃）で２４時間培養した。この培養液に、スト
レプトミセス・ニス・ピーＡＪ９４６２（ＦＥＲＭＰ−
９８７９）の発酵液よシ単離・精製された本物質を一定
量含有する上記培地を０．１−宛添加し、更に３日間培
養を継続し、トリ／臂ンブルーを用いる細胞染色法によ
り生細胞数を計測し本物質のフレンド白血病細胞に対す
る生育阻害作用を調べた。

その結果を第３表に示す。尚１表中（→は生育阻害のな
いことを示しく＋１＋）は全ての細胞が死滅することを
示す。

次に、Ｍ−ＭＳＶウィルスでトランスフオームしたＢａ
１ｂ　３Ｔ３細胞（Ａａｒｏｎｌｏｒ　ａｎｄ　Ｒｏｖ
ｅ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ。

４２．９　（１９７０）参照）に対する生育阻害度を第
４表に示す。この実験では培地として■ｙダルベツコ培
地（Ｇｔｂｃｏ社製）を用いた。

第３表及び第４表に示すように本物質は、フレンド白血
病細胞、Ｍ−ＭＳＶ−Ｂａｌｂ　３Ｔ３細胞に対して著
るしく強い生育阻害作用を有することが確認され九。

第３表　本物質の癌細胞生育阻害効果 濃度　　　フレンド白血病細胞 （μｆｖｆｎｌ）　　　の生育阻害効果０．００４　　
　　　　　＋）） ０．０１　　　　　　　　＋Ｉ＋ ｏ、ｏ　ｓ　　　　　　　　ｍ 第４表　本物質の癌細胞生育阻害効果 濃度　Ｍ−ＭＳＶ−Ｂａｌｂ　３Ｔ３ ０．００２　　　　　　　＋ｌ＋ ０．００４　　　　　　１ ｏ、ｏ　ｏ　ｓ　　　　　　　ｍ 〔発明の効果〕 本発明によれば、ｂａｆｉｌｏｍｙｃｉｎ　Ｂ、は、抗
腫瘍効果を有するものであることが判明し、新薬開発に
当たり大きな成果となることが期待される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔 I 〕 であらわされる構造を有する物質を有効成分として含有
   する抗腫瘍剤