JPS60149520A - 抗腫瘍剤 - Google Patents
抗腫瘍剤Info
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- JPS60149520A JPS60149520A JP440084A JP440084A JPS60149520A JP S60149520 A JPS60149520 A JP S60149520A JP 440084 A JP440084 A JP 440084A JP 440084 A JP440084 A JP 440084A JP S60149520 A JPS60149520 A JP S60149520A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
式〔１）で示されるトリコスタチンＡを有効成分として
含有する抗腫瘍剤に関する。
含有する抗腫瘍剤に関する。
トリコスタチンＡ
これまでトリコスタチンＡが抗腫瘍活性を示すことは知
られていなかったが、本発明者は、トリコスタチンＡが
、フレンドウィルス（Ｆｒｉｅｎｄｖｌｒｕｍ）でトラ
ンスフオームしたマウス赤芽球細胞Ｆｒ１ｅｎｄ細胞，
ムリンザルコーマウィルス（Ｍａｒｉｎｅ８ａｒａｏｍ
ａ ｖｉｒｕｓ）のモａ＝ー株（Ｍｏｌｏｍａｙ）でト
ランス７オームしたマウスの線維芽細胞Ｍ−ＭＳＶ−Ｂ
ａ ｌ ｂ３Ｔ３，ヒト子宮頚癌細胞ヘラ（ＨｅＬａ
）細胞，ヒト白血病細胞， ＨＬ−６０細胞およびＭＬ
−１細胞に対し強い生育阻害作用を有していることを初
めて見い出し、この発見に基づき本発明を完成するに至
った。
られていなかったが、本発明者は、トリコスタチンＡが
、フレンドウィルス（Ｆｒｉｅｎｄｖｌｒｕｍ）でトラ
ンスフオームしたマウス赤芽球細胞Ｆｒ１ｅｎｄ細胞，
ムリンザルコーマウィルス（Ｍａｒｉｎｅ８ａｒａｏｍ
ａ ｖｉｒｕｓ）のモａ＝ー株（Ｍｏｌｏｍａｙ）でト
ランス７オームしたマウスの線維芽細胞Ｍ−ＭＳＶ−Ｂ
ａ ｌ ｂ３Ｔ３，ヒト子宮頚癌細胞ヘラ（ＨｅＬａ
）細胞，ヒト白血病細胞， ＨＬ−６０細胞およびＭＬ
−１細胞に対し強い生育阻害作用を有していることを初
めて見い出し、この発見に基づき本発明を完成するに至
った。
前記構造式（１）で示されるトリコスタチンＡは特にＦ
ｒ１ｅｎｄ細胞， Ｍ−Ｍ８Ｖ・Ｂａｌｂ ３Ｔ３細胞
， ＨｅＬａ細胞， ＨＬ−６０細胞及びＭＬ−１細胞
に対して強い生育阻害作用を有しておシ、抗腫瘍剤とし
て利用できるものである。
ｒ１ｅｎｄ細胞， Ｍ−Ｍ８Ｖ・Ｂａｌｂ ３Ｔ３細胞
， ＨｅＬａ細胞， ＨＬ−６０細胞及びＭＬ−１細胞
に対して強い生育阻害作用を有しておシ、抗腫瘍剤とし
て利用できるものである。
前記構造式で示されるトリコスタチンＡは本発明者が見
い出した方法で製造することができる。
い出した方法で製造することができる。
すなわち本発明において使用する微生物は、トリコスタ
チンＡを生産する能力を有する微生物でおシ、具体的に
は土壌中よシ分離された微生物が使用される。本微生物
をパージイーズ・マニアル・オブ・ディタミネイティブ
・ノぐクテリオロジー８版（１９７４）に従って同定し
たところストレプトミセス・シオイアエンシスＦＥＲＭ
−Ｐ−７２９６と同定した。
チンＡを生産する能力を有する微生物でおシ、具体的に
は土壌中よシ分離された微生物が使用される。本微生物
をパージイーズ・マニアル・オブ・ディタミネイティブ
・ノぐクテリオロジー８版（１９７４）に従って同定し
たところストレプトミセス・シオイアエンシスＦＥＲＭ
−Ｐ−７２９６と同定した。
本発明においては上記菌株およびその人工ならびに自然
変異株は勿論のこと、ストレプトミセス属に属するトリ
コスタチンＡ生産菌のすべてが使用され得る。
変異株は勿論のこと、ストレプトミセス属に属するトリ
コスタチンＡ生産菌のすべてが使用され得る。
本微生物を用いてトリコスタチンＡを生産するにあたっ
て用いられる培地は炭素源、窒素源及び無機塩類、更に
必要に応じて有機微量栄養素を適宜含有する通常の液体
培地が用いられる。
て用いられる培地は炭素源、窒素源及び無機塩類、更に
必要に応じて有機微量栄養素を適宜含有する通常の液体
培地が用いられる。
炭素源としては、例えばグルコース、フラクトース、マ
ルトース、シェークロース、スターチ、デキストリン、
澱粉加水分解物、廃糖蜜等の炭水化物、クエン酸、コハ
ク酸、フマール酸、酢酸等の有機酸類及びグリセリン等
のアルコール類が用いられる。窒素源としては例えば硫
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等のアンモニ
ウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の硝酸塩、尿
素、アンモニア水、アンモニアガス、アミノ酸類、さら
にペプトン、大豆ホエー、大豆フレーク及びそれらの加
水分解物等の蛋白質、米糠等が用いられる。その他無機
塩としては例えばマンガン塩、リン酸塩が適宜用いられ
、又有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン及びこ
れらを含有するペプトン、酵母エキス等が適宜用いられ
る。
ルトース、シェークロース、スターチ、デキストリン、
澱粉加水分解物、廃糖蜜等の炭水化物、クエン酸、コハ
ク酸、フマール酸、酢酸等の有機酸類及びグリセリン等
のアルコール類が用いられる。窒素源としては例えば硫
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等のアンモニ
ウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の硝酸塩、尿
素、アンモニア水、アンモニアガス、アミノ酸類、さら
にペプトン、大豆ホエー、大豆フレーク及びそれらの加
水分解物等の蛋白質、米糠等が用いられる。その他無機
塩としては例えばマンガン塩、リン酸塩が適宜用いられ
、又有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン及びこ
れらを含有するペプトン、酵母エキス等が適宜用いられ
る。
培養条件は、培地組成その他によシ異なるが、例えば通
常ｐＨ４，０〜９．０、温度１５〜４０℃で振盪培養、
通気攪拌培養等好気的条件下に培養が行われる。
常ｐＨ４，０〜９．０、温度１５〜４０℃で振盪培養、
通気攪拌培養等好気的条件下に培養が行われる。
本発明のトリコスタチンＡはこのようにして培養して得
られる培養液中及び菌体内に存在し、培養液よシトリコ
スタチンＡを分離・採取する方法は酢酸エチル等の有機
溶媒抽出法、順相及び逆相シリカゲル、セルロース等の
吸着剤を用いる吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過法、
各種溶媒に対する溶解度の差を利用する方法等の公知の
分離・媒で抽出した後上記の方法に従って精製分離され
る。
られる培養液中及び菌体内に存在し、培養液よシトリコ
スタチンＡを分離・採取する方法は酢酸エチル等の有機
溶媒抽出法、順相及び逆相シリカゲル、セルロース等の
吸着剤を用いる吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過法、
各種溶媒に対する溶解度の差を利用する方法等の公知の
分離・媒で抽出した後上記の方法に従って精製分離され
る。
次に製造例を示す。
て、これにストレプトミセス・シオイアエンシスＦＩＲ
Ｍ−Ｐ−７２９６の培養液ｌ ｍｌを接種し、２７℃で
４日間培養した。一方３０／容のステンレス・ジャーフ
ァーメンタ−の中に前記の培地を１８Ｉｌ入れ殺菌した
ものに上記の種母２１を接種しかく拌（３５０ｒｐｍ）
、通気（１７２ｖｖｍ ） Ｌ ２７℃で３日間培養を
続けた。更にその２０１を２次種母として３００１容の
ステンレスタンク中に上記組成の培地２８０１を入れ殺
菌したものに接種しかく拌（’３１０ ｒｐｍ ）、通
気（歿ｖｖｍ ） ｌ、、２７℃で３日間培養した。
Ｍ−Ｐ−７２９６の培養液ｌ ｍｌを接種し、２７℃で
４日間培養した。一方３０／容のステンレス・ジャーフ
ァーメンタ−の中に前記の培地を１８Ｉｌ入れ殺菌した
ものに上記の種母２１を接種しかく拌（３５０ｒｐｍ）
、通気（１７２ｖｖｍ ） Ｌ ２７℃で３日間培養を
続けた。更にその２０１を２次種母として３００１容の
ステンレスタンク中に上記組成の培地２８０１を入れ殺
菌したものに接種しかく拌（’３１０ ｒｐｍ ）、通
気（歿ｖｖｍ ） ｌ、、２７℃で３日間培養した。
第 １ 表
グルコース １．０ ％
酵母エキス ０．２ ％
ＫＨ２ＰＯ４０，１チ
ＭｇＳＯ４，７ａｑ ０．１ ％
バクトソイトン ０．７ ％
バクトベゾトン ０．５ ％
デンプン ２．０ チ
アデカノール ０．０５ ％
（ＰＨ７，２）
２８０１の培養液を遠心分離し、菌糸１３ｋｇと除菌液
２６０１を得た。菌糸よ、９）リコスタチンＡを含む区
分を取得するには、以下の方法に従えばよい。
２６０１を得た。菌糸よ、９）リコスタチンＡを含む区
分を取得するには、以下の方法に従えばよい。
この菌糸１３ｋｇに、クロロホルム：メタノール店
を含むクロロホルム−メタノール混合液を濃縮し、油状
物質を得た。
物質を得た。
除菌液２６０！中よりトリコスタチンＡを含む区分を取
得するには以下の方法に従えばよい。
得するには以下の方法に従えばよい。
吸着クロマトグラフィーカラム（オルガノ社製ｒ７７Ａ
−ラ’ｆ ）ＸＡＤ−７Ｊ ） （１５’″φＸ６７”
）Ｋ該除菌液２６０１を注ぎ込み、吸着り四マドグラフ
ィーカラムに吸着しない物質を除去した。その後、吸着
クロマトグラ２イーカラムに１００チメ１／−ルア５ノ
を注ぎ込み１００％メタノールで溶離されるトリコスタ
チアＡを含む溶液を採取した。該区分を二ノ々ボレータ
ーを用い常温で濃縮し、３．１１の濃縮液を得た。菌糸
をクロロホルム−メタノール抽出して得られた油状物質
と除菌液中の吸着クロマトグラフィーカラムに吸着され
る物質で１００Ｉｌｂメタノールに溶離される区分につ
いては、以下に述べる共通のトリコスタチンＡの単離精
製工程を用いることができる。
−ラ’ｆ ）ＸＡＤ−７Ｊ ） （１５’″φＸ６７”
）Ｋ該除菌液２６０１を注ぎ込み、吸着り四マドグラフ
ィーカラムに吸着しない物質を除去した。その後、吸着
クロマトグラ２イーカラムに１００チメ１／−ルア５ノ
を注ぎ込み１００％メタノールで溶離されるトリコスタ
チアＡを含む溶液を採取した。該区分を二ノ々ボレータ
ーを用い常温で濃縮し、３．１１の濃縮液を得た。菌糸
をクロロホルム−メタノール抽出して得られた油状物質
と除菌液中の吸着クロマトグラフィーカラムに吸着され
る物質で１００Ｉｌｂメタノールに溶離される区分につ
いては、以下に述べる共通のトリコスタチンＡの単離精
製工程を用いることができる。
以下、除菌液よシ得たトリコスタチンＡを含む濃縮液中
からのトリコスタチンＡの単離精製工程について説明す
る。
からのトリコスタチンＡの単離精製工程について説明す
る。
上記濃縮液３．ＩＪに酢酸□エチル６７を加え常温で２
０分間激しく振盪後静置し、酢酸エチル区分５１を分取
した。次いで残液中に酢酸エチルを６１加え、再び常温
で２０分間激しく振盪後静置し、酢酸エチル区分５１を
分取した。これら酢酸エチル区分を合せ７た後に、エバ
ポレーターを用い常ノール２００ｍＡ！に溶解させた。
０分間激しく振盪後静置し、酢酸エチル区分５１を分取
した。次いで残液中に酢酸エチルを６１加え、再び常温
で２０分間激しく振盪後静置し、酢酸エチル区分５１を
分取した。これら酢酸エチル区分を合せ７た後に、エバ
ポレーターを用い常ノール２００ｍＡ！に溶解させた。
次にゲル濾過クロ１００チメタノール液を注いだ後、新
たに１００％メタノールを３０！注ぎ、ゲル濾過を行な
い、ｐ液を各々ｌＱＱｍＡ！毎に分取した。これらのが
液中からフレンド白血病細胞に対して生育阻害作用を有
する画分１ｊＡＪを採取した。この画分を濃縮後、酢酸
エチルとメタノールの混合溶媒（７，５：１）１ｇ＋ｎ
ｔに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行
なう。酢酸エチル・メタノール（７，５：１）で展開後
フレンド白血病細胞に対して生育阻害作用を有する両分
１００ｍ１を採取した。この両分を濃縮し約５ｏｏｒｎ
ｙのトリコスタチアＡの粗物質を得た。さらにこの粗物
質をシリカゲルの薄層クロマトグラフィーで分離ｔ＊
＋ｑしトリコスタチンＡ約２００ｍ９を得た。
たに１００％メタノールを３０！注ぎ、ゲル濾過を行な
い、ｐ液を各々ｌＱＱｍＡ！毎に分取した。これらのが
液中からフレンド白血病細胞に対して生育阻害作用を有
する画分１ｊＡＪを採取した。この画分を濃縮後、酢酸
エチルとメタノールの混合溶媒（７，５：１）１ｇ＋ｎ
ｔに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行
なう。酢酸エチル・メタノール（７，５：１）で展開後
フレンド白血病細胞に対して生育阻害作用を有する両分
１００ｍ１を採取した。この両分を濃縮し約５ｏｏｒｎ
ｙのトリコスタチアＡの粗物質を得た。さらにこの粗物
質をシリカゲルの薄層クロマトグラフィーで分離ｔ＊
＋ｑしトリコスタチンＡ約２００ｍ９を得た。
トリコスタチンＡの物理化学的性状は以下の通夛である
。この性状から本物質は辻ら、ジャーナル・オツ・アン
ティバイオティックス１９ 、１ （１９７９）（Ｊ、
Ａｎｔｉｂｊｏｔｌｃｓ、 Ｎ、ＴｓｕＪｌ ａｔ ａ
ｌ １９１ （１９７６））の報告するトリコスタチン
Ａと同一であると確認できる。
。この性状から本物質は辻ら、ジャーナル・オツ・アン
ティバイオティックス１９ 、１ （１９７９）（Ｊ、
Ａｎｔｉｂｊｏｔｌｃｓ、 Ｎ、ＴｓｕＪｌ ａｔ ａ
ｌ １９１ （１９７６））の報告するトリコスタチン
Ａと同一であると確認できる。
■融点 ｍ、９１５０〜１５１℃
■分子量 ３０２ （ＦＤ−ＭＡＳＳ法による）■元素
分析Ｃ，６７，２８饅、Ｈ，７，４０％、Ｎ、９．４３
チ、■紫外線吸収スペクトル ■溶剤に対する溶解性 ｐ ａ 四ホルム、酢酸エチル、アセトン、ベンゼンに
可溶、水に不溶 ■呈色反応 ドラゲンドルフ反応 陽性 ■’Ｈ−ＮＭＲスペクトラム 第１図参照 ■１５Ｃ−ＮＭＲスペクトラム （１） Ｆｒ１ｅｎｄ細胞忙対する生育阻害効果Ｈａｍ
’Ｓ Ｆ−１２粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製の細胞培養用
培地成分）１０．４Ｎ及びＮａＨＣＯ３１，４９を１．
Ｏｌの蒸留水に溶解し、４アーサイズ０．２２μのミリ
４アフイルターで無菌濾過し、これに無菌的に調製した
牛胎児血清（Ｆｌｏｗ １ａｂｏ社製）を１００ｄ添加
して細胞培養用培地を調製した。この培地に、予め培養
したフレンド白血病細胞（井用洋二、代謝、１５゜１４
５（１９７８）参照）を加え（細胞濃度：ｌＸ１０ν罰
）、この細胞懸濁液をマイクロテストプレート（Ｎｕｎ
ｃ社製、９６穴）にＱ、１ＷＬｌ宛無菌的に分注し、炭
酸ガスインキエペーター中（炭酸ガス濃度５チ、温度３
７℃）で２４時間培養した。この培養液に、ストレプト
ミセス・シオイアエンシスＦＩＲＭ−Ｐ−７２９６の発
酵液よシ単離・精製されたトリコスタチアンＡを一定量
含有する上記培地を０．１ｍｌ宛添加し、更に３日間培
養を継続し、（トリフ９ンブル−を用いる細胞染色法に
よシ生細胞数を計測し）トリコスタチンへのフレンド白
血病細胞に対する生育阻害作用を調べた。その結果を第
２表に示す。尚、表中（−）は生育阻害のないことを示
しく＋＋＋）は全ての細胞が死滅することを示す。
分析Ｃ，６７，２８饅、Ｈ，７，４０％、Ｎ、９．４３
チ、■紫外線吸収スペクトル ■溶剤に対する溶解性 ｐ ａ 四ホルム、酢酸エチル、アセトン、ベンゼンに
可溶、水に不溶 ■呈色反応 ドラゲンドルフ反応 陽性 ■’Ｈ−ＮＭＲスペクトラム 第１図参照 ■１５Ｃ−ＮＭＲスペクトラム （１） Ｆｒ１ｅｎｄ細胞忙対する生育阻害効果Ｈａｍ
’Ｓ Ｆ−１２粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製の細胞培養用
培地成分）１０．４Ｎ及びＮａＨＣＯ３１，４９を１．
Ｏｌの蒸留水に溶解し、４アーサイズ０．２２μのミリ
４アフイルターで無菌濾過し、これに無菌的に調製した
牛胎児血清（Ｆｌｏｗ １ａｂｏ社製）を１００ｄ添加
して細胞培養用培地を調製した。この培地に、予め培養
したフレンド白血病細胞（井用洋二、代謝、１５゜１４
５（１９７８）参照）を加え（細胞濃度：ｌＸ１０ν罰
）、この細胞懸濁液をマイクロテストプレート（Ｎｕｎ
ｃ社製、９６穴）にＱ、１ＷＬｌ宛無菌的に分注し、炭
酸ガスインキエペーター中（炭酸ガス濃度５チ、温度３
７℃）で２４時間培養した。この培養液に、ストレプト
ミセス・シオイアエンシスＦＩＲＭ−Ｐ−７２９６の発
酵液よシ単離・精製されたトリコスタチアンＡを一定量
含有する上記培地を０．１ｍｌ宛添加し、更に３日間培
養を継続し、（トリフ９ンブル−を用いる細胞染色法に
よシ生細胞数を計測し）トリコスタチンへのフレンド白
血病細胞に対する生育阻害作用を調べた。その結果を第
２表に示す。尚、表中（−）は生育阻害のないことを示
しく＋＋＋）は全ての細胞が死滅することを示す。
第２表 トリコスタチンＡの癌細胞生育阻害効果〇 −
０、５＋ 十＋
２．５ ＋＋＋
１０．０ ＋＋＋
第２表よシあきらかな如＜、トリコスタチンＡはフレン
ド白血病細胞に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し、
フレンド白血病細胞に細胞毒性を示すことが明らかにな
った。
ド白血病細胞に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し、
フレンド白血病細胞に細胞毒性を示すことが明らかにな
った。
（２） Ｍ−ＭＳＶ Ｂａ１ｂ ３Ｔ３細胞に対する効
果次に、Ｍ−ＭＳＶウィルスでトランスフオームしたＢ
ａ１ｂ ３Ｔ３細胞（Ａａｒｏｎａｏｎ ａｎｄ Ｒｏ
ｖｅ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ。
果次に、Ｍ−ＭＳＶウィルスでトランスフオームしたＢ
ａ１ｂ ３Ｔ３細胞（Ａａｒｏｎａｏｎ ａｎｄ Ｒｏ
ｖｅ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ。
４２．９（１９７０）参照）に対する生育阻害度を第３
表に示す。この実験では培地としてＭＥＭ Ｉ″″″ル
ペツコ培地ｉｂｃｏ社製）を用いた。
表に示す。この実験では培地としてＭＥＭ Ｉ″″″ル
ペツコ培地ｉｂｃｏ社製）を用いた。
結果は第３表に示した。なお、表中の（−）は生育阻害
がないことを示し、（＋＋＋ ）はすべての細胞が死滅
することを示す。
がないことを示し、（＋＋＋ ）はすべての細胞が死滅
することを示す。
第 ３ 表
（μｇ／ｆｎｌ ） ）リコスタチンＡ〇 −
０，５＋＋＋
２．５ 、＋＋＋
１０．０ ＋＋＋
第３表より明らかなごとく、トリコスタチンＡはＭ−Ｍ
ＳＶ−Ｂａ ｌｂ ３Ｔ３細胞に対し顕著な細胞生育阻
害効果を示し、Ｍ−ＭＳＶ−Ｂａｌｂ ３Ｔ３細胞に細
胞毒性を示すことが明らかになった。
ＳＶ−Ｂａ ｌｂ ３Ｔ３細胞に対し顕著な細胞生育阻
害効果を示し、Ｍ−ＭＳＶ−Ｂａｌｂ ３Ｔ３細胞に細
胞毒性を示すことが明らかになった。
（３） ヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａに対する作用ＭｇＭ
ダルベツコ粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製）ＩＩｌを１００
ｍＡ！の二段蒸留水に溶解した後、０．１４ｇのＮ ａ
ＨＣＯ３を加え溶解し、ミリポアフィルタ−（０，２２
μ）で濾過し、これに牛胎児血清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ、
社製）１１ｍＡ！を加えた培地に、予め、３７℃５％Ｃ
Ｏ□存在下３日間培養したＨｅＬａ細胞（Ｇｅｙ、Ｋｕ
ｂｉａｅｌｃ ａｎｄＣｏｆｆｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ 、 １２ 、２６４（１９５２） ）を５ Ｘ
１０ ｃａｌｌａ／ｍＡになる様に分散させ、その培
地ンブルー染色法によシ生存細胞を計測してめた。
ダルベツコ粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製）ＩＩｌを１００
ｍＡ！の二段蒸留水に溶解した後、０．１４ｇのＮ ａ
ＨＣＯ３を加え溶解し、ミリポアフィルタ−（０，２２
μ）で濾過し、これに牛胎児血清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ、
社製）１１ｍＡ！を加えた培地に、予め、３７℃５％Ｃ
Ｏ□存在下３日間培養したＨｅＬａ細胞（Ｇｅｙ、Ｋｕ
ｂｉａｅｌｃ ａｎｄＣｏｆｆｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ 、 １２ 、２６４（１９５２） ）を５ Ｘ
１０ ｃａｌｌａ／ｍＡになる様に分散させ、その培
地ンブルー染色法によシ生存細胞を計測してめた。
輩表４より明らかな如く、トリコスタチンＡはＨｅＬａ
細胞に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し、）ｔａＬ
ａ細胞に細胞毒性を示すことが明らかになった。
細胞に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し、）ｔａＬ
ａ細胞に細胞毒性を示すことが明らかになった。
したがってトリコスタチンＡ ｉｌ：Ｉ（ｅＬａ細胞に
対し、細胞毒性を与えることがわかる◎ 第 ４ 表 濃 度 ＨｅＬａ細胞 （μｇ／ｍｅ） ）リコスタチンＡ 〇 − ０，１４＋ ０．４４ ＋＋ １．３８ ＋＋＋ ８．７５ ’ ＋十＋ 細胞生育阻止効果 十＋＋十 完全に細胞死滅判定基準
＋＋＋ 生育量は無添加の２０−以下＋十 生育量は
無添加の２０〜５０チ ＋ 生育量は無添加の５０〜９０％ −生育量は無添加と同じ （４） ヒト白血病細胞）ＩＬ−６０、ＭＬ−１に対す
る作用ＲＰＭｆｆ−ｔ１４ｏ粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製
）１９を１００ゴの２段蒸留水に溶解した後、０．１４
．９’のＮａ ＨＣＯｓを加え溶解し、ミリポアフィル
タ−（０，２２μ）で濾過し、これに牛胎児血清（Ｆｌ
ｏｗ Ｌａｂ、社製）ｌｉｄを加えた培地に、予め３７
℃、５％ＣＯ２存在下で３日間培養したＨＬ−６０細胞
（Ｃｏｌｌｉｎｓ、ａｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ。
対し、細胞毒性を与えることがわかる◎ 第 ４ 表 濃 度 ＨｅＬａ細胞 （μｇ／ｍｅ） ）リコスタチンＡ 〇 − ０，１４＋ ０．４４ ＋＋ １．３８ ＋＋＋ ８．７５ ’ ＋十＋ 細胞生育阻止効果 十＋＋十 完全に細胞死滅判定基準
＋＋＋ 生育量は無添加の２０−以下＋十 生育量は
無添加の２０〜５０チ ＋ 生育量は無添加の５０〜９０％ −生育量は無添加と同じ （４） ヒト白血病細胞）ＩＬ−６０、ＭＬ−１に対す
る作用ＲＰＭｆｆ−ｔ１４ｏ粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製
）１９を１００ゴの２段蒸留水に溶解した後、０．１４
．９’のＮａ ＨＣＯｓを加え溶解し、ミリポアフィル
タ−（０，２２μ）で濾過し、これに牛胎児血清（Ｆｌ
ｏｗ Ｌａｂ、社製）ｌｉｄを加えた培地に、予め３７
℃、５％ＣＯ２存在下で３日間培養したＨＬ−６０細胞
（Ｃｏｌｌｉｎｓ、ａｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ。
Ｌ烈、３４７−３４９（１９７７））およびＭＬ−１細
胞（Ｊ。
胞（Ｊ。
Ｍｉｎｏｖａｄａ ａｔ ａｌ 、Ｉｎｔｅｒｎａｔｌ
ｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｌｕｍ ｏｎＮｅｗ Ｔｒｅｎ
ｄａ ｌｎ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎ
ｄ ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｔｈｓｒａｐｙ ｐｐ１
８８−１９９（１９８０） ）をそれぞれ５８１０ ｃ
ａｌｌｓ／ｍｌになるように分散させその培地０．２１
Ｒ１ずつマイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製９６穴）に分
注し、３時間５％ＣＯ□存在下３７℃で培養した。これ
に０〜５００μ９７ｍ１の濃度になるようにトリコスタ
チンＡを添加し５日間培養した。その後生育量をトリパ
ンブルー染色法によシ生存細胞を計測してめた。第４表
に示す基準によシ細胞生育阻害度を示したのが第５表で
ある。
ｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｌｕｍ ｏｎＮｅｗ Ｔｒｅｎ
ｄａ ｌｎ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎ
ｄ ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｔｈｓｒａｐｙ ｐｐ１
８８−１９９（１９８０） ）をそれぞれ５８１０ ｃ
ａｌｌｓ／ｍｌになるように分散させその培地０．２１
Ｒ１ずつマイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製９６穴）に分
注し、３時間５％ＣＯ□存在下３７℃で培養した。これ
に０〜５００μ９７ｍ１の濃度になるようにトリコスタ
チンＡを添加し５日間培養した。その後生育量をトリパ
ンブルー染色法によシ生存細胞を計測してめた。第４表
に示す基準によシ細胞生育阻害度を示したのが第５表で
ある。
０．６３ ＋
１．８９ ＋＋
５．８０ ＋＋＋
１６．５０ ＋＋＋
ＭＬ−１０−
１０，０＋
２０．０ ＋＋
３９．５ ＋＋＋
７７．５ ＋＋＋
＋＋表から明らかなごとく、トリコスタチンＡはＨＬ−
６０細胞およびＭＬ−１細胞に対して顕著な細胞生育阻
害効果を示し、）Ｉｆ、−６０細胞およびＭＬ−１細胞
に対して細胞９性を示すことが明らかになった。
６０細胞およびＭＬ−１細胞に対して顕著な細胞生育阻
害効果を示し、）Ｉｆ、−６０細胞およびＭＬ−１細胞
に対して細胞９性を示すことが明らかになった。
以上の結果よシトリコスタチンＡは筋細胞の生育を阻害
することが明らかになシ有効な抗腫瘍剤となシ得る。
することが明らかになシ有効な抗腫瘍剤となシ得る。
本発明の構造式Ｅｌ）で示される物質を有効成分として
含有する抗腫瘍剤はヒ）Ｋ包含される腺癌哺乳動物を治
療する抗腫瘍剤として鳴用でおル、そして経口投与とし
て錠剤、カプセル剤また社エリキシル剤のような調剤で
または非経口投与として無菌溶液剤または懸濁液剤で処
方することによって生体中の腫瘍を抑制せしめるために
利用することができる。本発明に使用する前記有効成分
はかかる治療を必要とする患者（動物およびヒト）に対
して患者ＩＪ）０．２〜５００ダの用量範囲で一般に数
回に分けて従って１日当９１〜２０００■の全日用量で
投与することができる。用量は病気の重さ、患者の体重
および当業者が認める他の因子によって変化させる。
含有する抗腫瘍剤はヒ）Ｋ包含される腺癌哺乳動物を治
療する抗腫瘍剤として鳴用でおル、そして経口投与とし
て錠剤、カプセル剤また社エリキシル剤のような調剤で
または非経口投与として無菌溶液剤または懸濁液剤で処
方することによって生体中の腫瘍を抑制せしめるために
利用することができる。本発明に使用する前記有効成分
はかかる治療を必要とする患者（動物およびヒト）に対
して患者ＩＪ）０．２〜５００ダの用量範囲で一般に数
回に分けて従って１日当９１〜２０００■の全日用量で
投与することができる。用量は病気の重さ、患者の体重
および当業者が認める他の因子によって変化させる。
・本発明に使用する前記物質は生理学的に認められるベ
ヒクル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味
剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される
単位用量形態で混和される。
ヒクル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味
剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される
単位用量形態で混和される。
これらの組成物または製剤における活性物質の量をよ指
示された範囲の適当な用量が得られるようにするもので
ある。
示された範囲の適当な用量が得られるようにするもので
ある。
錠剤、カプセル剤などに混和することができる具体的な
薬剤は次に示すものである二トラガント、アラビアゴム
、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤；微品
性セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラ
チン化デンノン、アルギン酸などのような膨化剤；ステ
アリン酸マグネシウムのような潤滑剤；ショ糖、乳糖ま
たはサッカリンのような甘味剤１ニー２ノや−ミント、
アカモノ油またはチェリーのような香味剤、調剤単位形
態がカプセルである場合には上記のタイプの材料にさら
に油脂のような液状担体を含有することができる。種々
の他の材料は被覆剤としてまたは調剤単位の物理的形態
を別な方法で変化させるために存在させることができる
。例えば錠剤はシェラツク、砂糖またはその両方で被覆
することができる。シロップまたはエリキシルは活性化
合物、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルおよび
プロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ
香味のような香味剤を含有することができる。
薬剤は次に示すものである二トラガント、アラビアゴム
、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤；微品
性セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラ
チン化デンノン、アルギン酸などのような膨化剤；ステ
アリン酸マグネシウムのような潤滑剤；ショ糖、乳糖ま
たはサッカリンのような甘味剤１ニー２ノや−ミント、
アカモノ油またはチェリーのような香味剤、調剤単位形
態がカプセルである場合には上記のタイプの材料にさら
に油脂のような液状担体を含有することができる。種々
の他の材料は被覆剤としてまたは調剤単位の物理的形態
を別な方法で変化させるために存在させることができる
。例えば錠剤はシェラツク、砂糖またはその両方で被覆
することができる。シロップまたはエリキシルは活性化
合物、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルおよび
プロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ
香味のような香味剤を含有することができる。
注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中
の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの
ような天然産出植物油またはエチルオレエートなどのよ
うな合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の製
剤実施に従って処方することができる。緩衝剤、防腐剤
、酸化防止剤などが必要に応じて結合することができる
。
の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの
ような天然産出植物油またはエチルオレエートなどのよ
うな合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の製
剤実施に従って処方することができる。緩衝剤、防腐剤
、酸化防止剤などが必要に応じて結合することができる
。
第１図はトリコスタチンＡの Ｈ−ＮＭＲスペクトラム
である。 第２図はトリコスタチンＡの Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
である。 出 願 人 味の素株式会社
である。 第２図はトリコスタチンＡの Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
である。 出 願 人 味の素株式会社
Claims (1)
- 下記構造式で示される物質を含有する抗腫瘍剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP440084A JPS60149520A (ja) | 1984-01-13 | 1984-01-13 | 抗腫瘍剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP440084A JPS60149520A (ja) | 1984-01-13 | 1984-01-13 | 抗腫瘍剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60149520A true JPS60149520A (ja) | 1985-08-07 |
| JPH0447648B2 JPH0447648B2 (ja) | 1992-08-04 |
Family
ID=11583290
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP440084A Granted JPS60149520A (ja) | 1984-01-13 | 1984-01-13 | 抗腫瘍剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60149520A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61176523A (ja) * | 1985-01-30 | 1986-08-08 | Teruhiko Beppu | 制癌剤 |
| WO2000056917A1 (fr) * | 1999-03-23 | 2000-09-28 | Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc. | Methode de criblage d'agents anticancereux |
| US6706762B1 (en) * | 1997-05-01 | 2004-03-16 | The Salk Institute For Biological Studies | Methods for the use of inhibitors of co-repressors for the treatment of neoplastic diseases |
| WO2005000332A3 (en) * | 2003-06-27 | 2005-03-24 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Therapeutic agent for soft tissue sarcoma |
| US7235688B1 (en) | 2004-11-04 | 2007-06-26 | University Of Notre Dame Du Lac | Process for preparing histone deacetylase inhibitors and intermediates thereof |
| WO2016210292A1 (en) | 2015-06-25 | 2016-12-29 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion, enrichment, and maintenance |
| WO2017161001A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-21 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion |
| CN109112171A (zh) * | 2018-09-28 | 2019-01-01 | 广州市雅薏诗化妆品有限公司 | 一种基于海洋微生物的抗菌活性物质的制备方法 |
-
1984
- 1984-01-13 JP JP440084A patent/JPS60149520A/ja active Granted
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61176523A (ja) * | 1985-01-30 | 1986-08-08 | Teruhiko Beppu | 制癌剤 |
| EP0196415A2 (en) * | 1985-01-30 | 1986-10-08 | Teruhiko Beppu | Trichostatins A and C as antitumour drugs |
| JPH0466453B2 (ja) * | 1985-01-30 | 1992-10-23 | Teruhiko Betsupu | |
| US6706762B1 (en) * | 1997-05-01 | 2004-03-16 | The Salk Institute For Biological Studies | Methods for the use of inhibitors of co-repressors for the treatment of neoplastic diseases |
| WO2000056917A1 (fr) * | 1999-03-23 | 2000-09-28 | Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc. | Methode de criblage d'agents anticancereux |
| US7407745B1 (en) | 1999-03-23 | 2008-08-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for screening anticancer agent |
| US7056883B2 (en) * | 2003-06-27 | 2006-06-06 | Astellas Pharma Inc. | Therapeutic agent for soft tissue sarcoma |
| WO2005000332A3 (en) * | 2003-06-27 | 2005-03-24 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Therapeutic agent for soft tissue sarcoma |
| US7235688B1 (en) | 2004-11-04 | 2007-06-26 | University Of Notre Dame Du Lac | Process for preparing histone deacetylase inhibitors and intermediates thereof |
| WO2016210292A1 (en) | 2015-06-25 | 2016-12-29 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion, enrichment, and maintenance |
| WO2017161001A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-21 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion |
| EP4049665A1 (en) | 2016-03-15 | 2022-08-31 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion |
| CN109112171A (zh) * | 2018-09-28 | 2019-01-01 | 广州市雅薏诗化妆品有限公司 | 一种基于海洋微生物的抗菌活性物质的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0447648B2 (ja) | 1992-08-04 |
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