JPH0959275A - 新規物質トリプロスタチン、その製造方法、細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤 - Google Patents
新規物質トリプロスタチン、その製造方法、細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤Info
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- JPH0959275A JPH0959275A JP21465995A JP21465995A JPH0959275A JP H0959275 A JPH0959275 A JP H0959275A JP 21465995 A JP21465995 A JP 21465995A JP 21465995 A JP21465995 A JP 21465995A JP H0959275 A JPH0959275 A JP H0959275A
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- triplostatin
- cell cycle
- tryprostatin
- cell
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【課題】 細胞周期阻害活性および抗腫瘍活性を有する
新規物質を提供する。 【解決手段】 以下の一般式（Ｉ）で表されるトリプロ
スタチン；およびアスペルギルス・フミガタスBM939 株
を培地に培養し、トリプロスタチンを生成蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とするトリプロスタチンの製
造方法；トリプロスタチンを有効成分とする細胞周期阻
害剤および抗腫瘍剤。 【化１】 式中、Ｒは、メトキシ基（トリプロスタチンＡ）または
水素原子（トリプロスタチンＢ）である。
新規物質を提供する。 【解決手段】 以下の一般式（Ｉ）で表されるトリプロ
スタチン；およびアスペルギルス・フミガタスBM939 株
を培地に培養し、トリプロスタチンを生成蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とするトリプロスタチンの製
造方法；トリプロスタチンを有効成分とする細胞周期阻
害剤および抗腫瘍剤。 【化１】 式中、Ｒは、メトキシ基（トリプロスタチンＡ）または
水素原子（トリプロスタチンＢ）である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規物質トリプロ
スタチン、その製造方法、それを有効成分とする細胞周
期阻害剤および抗腫瘍剤に関する。
スタチン、その製造方法、それを有効成分とする細胞周
期阻害剤および抗腫瘍剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】人体を構成する細胞は恒常性を維持する
ためにその増殖と分化は厳しく制御されている。細胞
は、Ｍ期・Ｇ1 期・Ｓ期・Ｇ2 期という一連の過程から
なる細胞周期を回転することにより分裂、増殖を行う。
この細胞周期の制御機構に異常が生じると癌や免疫疾患
になる。最近では、細胞周期の調節機構が分子レベルで
解明されつつあり、細胞周期を調節する物質には、抗腫
瘍剤、免疫抑制剤の可能性が知られている。
ためにその増殖と分化は厳しく制御されている。細胞
は、Ｍ期・Ｇ1 期・Ｓ期・Ｇ2 期という一連の過程から
なる細胞周期を回転することにより分裂、増殖を行う。
この細胞周期の制御機構に異常が生じると癌や免疫疾患
になる。最近では、細胞周期の調節機構が分子レベルで
解明されつつあり、細胞周期を調節する物質には、抗腫
瘍剤、免疫抑制剤の可能性が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、細胞周期阻
害活性、抗腫瘍活性を有する新規物質、その製造方法、
それを有効成分とする細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤の
提供を目的とする。
害活性、抗腫瘍活性を有する新規物質、その製造方法、
それを有効成分とする細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤の
提供を目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は上記課題の解
決のために鋭意検討した結果、静岡県大井川沖の海底か
ら採取した土壌から分離された、アスペルギルス属に属
するカビBM939 株が細胞周期阻害活性および抗腫瘍活性
を有する物質を生産することを見い出し、本発明を完成
するに至った。本発明は、以下の一般式（Ｉ）で表され
る新規物質トリプロスタチンを提供するものである。
決のために鋭意検討した結果、静岡県大井川沖の海底か
ら採取した土壌から分離された、アスペルギルス属に属
するカビBM939 株が細胞周期阻害活性および抗腫瘍活性
を有する物質を生産することを見い出し、本発明を完成
するに至った。本発明は、以下の一般式（Ｉ）で表され
る新規物質トリプロスタチンを提供するものである。
【０００５】
【化２】 式中、Ｒは、メトキシ基（トリプロスタチンＡ）または
水素原子（トリプロスタチンＢ）である。
水素原子（トリプロスタチンＢ）である。
【０００６】本発明のトリプロスタチンは、アスペルギ
ルス属に属する、トリプロスタチン生産菌を培地に培養
し、トリプロスタチンを生成蓄積せしめ、これを採取す
ることにより製造することができる。本発明で使用する
トリプロスタチン生産菌の好ましい例としては、アスペ
ルギルス・フミガタスBM939 株が挙げられる。本発明は
さらに、新規物質トリプロスタチンを有効成分とする細
胞周期阻害剤およびトリプロスタチンを有効成分とする
抗腫瘍剤を提供するものである。
ルス属に属する、トリプロスタチン生産菌を培地に培養
し、トリプロスタチンを生成蓄積せしめ、これを採取す
ることにより製造することができる。本発明で使用する
トリプロスタチン生産菌の好ましい例としては、アスペ
ルギルス・フミガタスBM939 株が挙げられる。本発明は
さらに、新規物質トリプロスタチンを有効成分とする細
胞周期阻害剤およびトリプロスタチンを有効成分とする
抗腫瘍剤を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】以下本発明を詳細に説明する。本
発明の新規物質トリプロスタチンＡおよびＢは以下の式
で表される。
発明の新規物質トリプロスタチンＡおよびＢは以下の式
で表される。
【０００８】
【化３】
【０００９】本発明の物質トリプロスタチンＡおよびＢ
を生産するアスペルギルス属に属する菌の代表例として
はアスペルギルス・フミガタスが挙げられ、その具体例
としてはカビBM939 株が挙げられる。BM939 株は以下の
菌学的性質を有する。 （１）各種培地上での生育形態 培養はすべて25℃で行い寒天平板培地上での生育形成を
記載した。 (1-1) CYA 寒天培地 生育は良好であり、25℃、７日間の培養でコロニーの直
径は65mmである。コロニーはビロード状に生育して多く
の分生子を形成し分生子は青緑色である。コロニの裏面
は淡黄色である。 (1-2) CY20S 寒天培地 生育は中程度であり、25℃、７日間の培養でコロニーの
直径は50mmである。コロニーはビロード状に生育して分
生子を形成し、分生子は青緑である。コロニーの裏面は
淡黄色である。 (1-3) MEA 寒天培地 生育は中程度であり、25℃、７日間の培養でコロニーの
直径は55mmである。コロニーはビロード状に生育して分
生子を形成し、分生子は淡黄色である。コロニーの裏面
は淡黄色である。
を生産するアスペルギルス属に属する菌の代表例として
はアスペルギルス・フミガタスが挙げられ、その具体例
としてはカビBM939 株が挙げられる。BM939 株は以下の
菌学的性質を有する。 （１）各種培地上での生育形態 培養はすべて25℃で行い寒天平板培地上での生育形成を
記載した。 (1-1) CYA 寒天培地 生育は良好であり、25℃、７日間の培養でコロニーの直
径は65mmである。コロニーはビロード状に生育して多く
の分生子を形成し分生子は青緑色である。コロニの裏面
は淡黄色である。 (1-2) CY20S 寒天培地 生育は中程度であり、25℃、７日間の培養でコロニーの
直径は50mmである。コロニーはビロード状に生育して分
生子を形成し、分生子は青緑である。コロニーの裏面は
淡黄色である。 (1-3) MEA 寒天培地 生育は中程度であり、25℃、７日間の培養でコロニーの
直径は55mmである。コロニーはビロード状に生育して分
生子を形成し、分生子は淡黄色である。コロニーの裏面
は淡黄色である。
【００１０】（２）形態的性質 25℃、７日間、CYA 寒天培地上での形態的性質は以下の
とおりであった。分生子柄の幅は 2.5〜５μm 、長さは
100〜350 μm で、その先端に直径10〜25μm 、淡緑色
の球〜半球状の頂のうを形成する。分生子柄の表面は平
滑状であり、メトレは生産していない。頂のうの約2/3
より上部に淡緑色の幅 5〜10×長さ２〜3.5mm のフィア
ライドを一段形成する。分生子はフィアライドより連鎖
して形成され、直径２〜3.5mm 、深緑色の球〜半球状で
ある。ヒューレ細胞は観察されなかった。以上の菌学的
性状から、本菌株はアスペルギルス(Aspergillus) 属の
菌であり、レイパーとフェンネル(Raper & Fennel)の
「ザ・ジーナス・アスペルギルス」(1965)("The GENUS
Aspergillus") を参考に既知菌種を検索したところ、ア
スペルギルス・フミガタス(Aspergillus Fumigatus) の
性状と一致した。なお、当該菌株Aspergillus fumigatu
s BM939 は生命工学工業技術研究所に１９９５年７月２
６日に寄託され、その受託番号はFERM P-15067である。
とおりであった。分生子柄の幅は 2.5〜５μm 、長さは
100〜350 μm で、その先端に直径10〜25μm 、淡緑色
の球〜半球状の頂のうを形成する。分生子柄の表面は平
滑状であり、メトレは生産していない。頂のうの約2/3
より上部に淡緑色の幅 5〜10×長さ２〜3.5mm のフィア
ライドを一段形成する。分生子はフィアライドより連鎖
して形成され、直径２〜3.5mm 、深緑色の球〜半球状で
ある。ヒューレ細胞は観察されなかった。以上の菌学的
性状から、本菌株はアスペルギルス(Aspergillus) 属の
菌であり、レイパーとフェンネル(Raper & Fennel)の
「ザ・ジーナス・アスペルギルス」(1965)("The GENUS
Aspergillus") を参考に既知菌種を検索したところ、ア
スペルギルス・フミガタス(Aspergillus Fumigatus) の
性状と一致した。なお、当該菌株Aspergillus fumigatu
s BM939 は生命工学工業技術研究所に１９９５年７月２
６日に寄託され、その受託番号はFERM P-15067である。
【００１１】上記菌株カビBM939 株を培養し、当該培養
物から新規物質トリプロスタチンＡおよびＢ（以下「本
発明化合物」とも記載する）を採取する方法は、具体的
には後述する製造例に記載するが、概ねアスペルギルス
属に属する菌の培養方法に従って実施することができ
る。培養終了後、培養液から本発明のトリプロスタチン
を精製、単離するには、一般に微生物代謝産物を採取す
るのに通常用いられる手段を適宜利用して行うことがで
きる。例えば、各種イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹
脂、ゲル濾過クロマトグラフィー、又は活性炭、アルミ
ナ、シリカゲル等の吸着剤によるクロマトグラフィー及
び高速液体クロマトグラフィー、或いは結晶化、減圧濃
縮、凍結乾燥等の手段をそれぞれ単独又は適宜組み合わ
せて、或いは反復して使用することが可能である。
物から新規物質トリプロスタチンＡおよびＢ（以下「本
発明化合物」とも記載する）を採取する方法は、具体的
には後述する製造例に記載するが、概ねアスペルギルス
属に属する菌の培養方法に従って実施することができ
る。培養終了後、培養液から本発明のトリプロスタチン
を精製、単離するには、一般に微生物代謝産物を採取す
るのに通常用いられる手段を適宜利用して行うことがで
きる。例えば、各種イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹
脂、ゲル濾過クロマトグラフィー、又は活性炭、アルミ
ナ、シリカゲル等の吸着剤によるクロマトグラフィー及
び高速液体クロマトグラフィー、或いは結晶化、減圧濃
縮、凍結乾燥等の手段をそれぞれ単独又は適宜組み合わ
せて、或いは反復して使用することが可能である。
【００１２】以上のようにして製造される新規なトリプ
ロスタチンは、後述の試験例に示すように細胞周期阻害
活性、抗腫瘍活性を有する。本発明のトリプロスタチン
を有効成分とする細胞周期阻害剤は、その使用目的に合
わせて、使用方法、剤型、投与量（使用量）が適宜決定
される。例えば、本発明のトリプロスタチンを有効成分
とする抗腫瘍剤の場合、その投与形態は、経口投与でも
非経口投与でもよい。剤型としては、例えば、錠剤、粉
剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経
口投与剤又は注射剤もしくは座剤等の非経口投与剤を挙
げることができる。これらの製剤は、賦形剤、結合剤等
の製薬上許容される添加剤を用いて、既知の方法で製造
される。また、上記のトリプロスタチンを有効成分とし
て含有する抗腫瘍剤の臨床的投与量は、年齢、体重、患
者の感受性、症状の程度により異なるが、通常効果的な
量は、成人一日 0.1mg〜１ｇ程度であり、一日一回又は
数回にわけて投与することも可能である。また、必要に
より上記の範囲外の量を用いることもできる。
ロスタチンは、後述の試験例に示すように細胞周期阻害
活性、抗腫瘍活性を有する。本発明のトリプロスタチン
を有効成分とする細胞周期阻害剤は、その使用目的に合
わせて、使用方法、剤型、投与量（使用量）が適宜決定
される。例えば、本発明のトリプロスタチンを有効成分
とする抗腫瘍剤の場合、その投与形態は、経口投与でも
非経口投与でもよい。剤型としては、例えば、錠剤、粉
剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経
口投与剤又は注射剤もしくは座剤等の非経口投与剤を挙
げることができる。これらの製剤は、賦形剤、結合剤等
の製薬上許容される添加剤を用いて、既知の方法で製造
される。また、上記のトリプロスタチンを有効成分とし
て含有する抗腫瘍剤の臨床的投与量は、年齢、体重、患
者の感受性、症状の程度により異なるが、通常効果的な
量は、成人一日 0.1mg〜１ｇ程度であり、一日一回又は
数回にわけて投与することも可能である。また、必要に
より上記の範囲外の量を用いることもできる。
【００１３】また生化学試験用試薬として使用する場
合、有機溶剤または含水有機溶剤に溶解して各種培養細
胞系へ直接投与すると、細胞周期の進行をＧ２／Ｍ期で
阻止する。使用可能な有機溶剤としては、例えば、メタ
ノールやジメチルスルホキシド等を挙げることができ
る。剤型としては、例えば、粉末または顆粒等の固形剤
もしくは有機溶剤または含水有機溶剤に溶解した液体剤
等を挙げることができる。通常、上記トリプロスタチン
を有効成分とする細胞周期阻害剤の効果的な使用量範囲
は５〜５０μm/mlであるが、適切な使用量は培養細胞系
の種類や使用目的により異なる。また、必要により上記
の範囲外の量を用いることもできる。
合、有機溶剤または含水有機溶剤に溶解して各種培養細
胞系へ直接投与すると、細胞周期の進行をＧ２／Ｍ期で
阻止する。使用可能な有機溶剤としては、例えば、メタ
ノールやジメチルスルホキシド等を挙げることができ
る。剤型としては、例えば、粉末または顆粒等の固形剤
もしくは有機溶剤または含水有機溶剤に溶解した液体剤
等を挙げることができる。通常、上記トリプロスタチン
を有効成分とする細胞周期阻害剤の効果的な使用量範囲
は５〜５０μm/mlであるが、適切な使用量は培養細胞系
の種類や使用目的により異なる。また、必要により上記
の範囲外の量を用いることもできる。
【００１４】
【実施例】以下、実施例等を記載して本発明を具体的に
記載する。
記載する。
【製造例】グルコース３％、可溶性澱粉２％、大豆粉２
％、リン酸第二カリウム0.５％、および硫酸マグネシウ
ム0.05％の組成の培地(pH 6.5)に、前記菌株BM939 株を
接種して28℃で４８時間振盪培養を行った。この培養液
70mlを同組成の培地18Ｌに接種し、28℃で７２時間にわ
たって毎分７Ｌの通気を行いながら、毎分３００回転の
攪拌培養を行った。上記培養液を高速遠心分離器（１５
０００回転／分）で菌体と上清に分離し、菌体を８０％
アセトン１８Ｌを用いて抽出した。上清を18Ｌの酢酸エ
チルで３回抽出し、含水アセトン抽出液は減圧濃縮し
て、得られる水溶液を５Ｌの酢酸エチルで３回抽出を繰
り返した。抽出後、全ての酢酸エチルをあわせて減圧濃
縮し、褐色のシロップ18.5ｇを得た。
％、リン酸第二カリウム0.５％、および硫酸マグネシウ
ム0.05％の組成の培地(pH 6.5)に、前記菌株BM939 株を
接種して28℃で４８時間振盪培養を行った。この培養液
70mlを同組成の培地18Ｌに接種し、28℃で７２時間にわ
たって毎分７Ｌの通気を行いながら、毎分３００回転の
攪拌培養を行った。上記培養液を高速遠心分離器（１５
０００回転／分）で菌体と上清に分離し、菌体を８０％
アセトン１８Ｌを用いて抽出した。上清を18Ｌの酢酸エ
チルで３回抽出し、含水アセトン抽出液は減圧濃縮し
て、得られる水溶液を５Ｌの酢酸エチルで３回抽出を繰
り返した。抽出後、全ての酢酸エチルをあわせて減圧濃
縮し、褐色のシロップ18.5ｇを得た。
【００１５】このシロップをメタノール200 mlにより溶
解してメタノール可溶部を得、メタノール可溶部を水に
混濁させ、クロロホルムと酢酸エチルで順次抽出し、ク
ロロホルムエキスと酢酸エチルエキスを得た。クロロホ
ルムエキスはさらにｎ−ヘキサン200 mlで油分を３回溶
出して除去し、残るｎ−ヘキサン不溶部を酢酸エチルエ
キスと合併して本発明化合物を含有するエキス4.3gを得
た。このエキスを20mlのｎ−ヘキサンークロロホルム(2
0:80) で溶解し、ｎ−ヘキサンークロロホルム(20:80)
で調製したシリカゲルカラム（ベッド容積：直径4.5 c
m、長さ15cm）に浸潤させ、最初にｎ−ヘキサンークロ
ロホルム溶液を配合割合20:80 、10:90 と5:95の順でそ
れぞれ500 mlずつ流し、引き続いてクロロホルム１Ｌを
流した後、クロロホルムーメタノール溶液を配合割合を
順次変えて（95.5：0.5 、99：１、98：2 、96：4 、9
2：8)それぞれ１Ｌずつ流し、最後にクロロホルムーメ
タノール割合80：20と70：30の溶液を各500 mlずつ流し
た。
解してメタノール可溶部を得、メタノール可溶部を水に
混濁させ、クロロホルムと酢酸エチルで順次抽出し、ク
ロロホルムエキスと酢酸エチルエキスを得た。クロロホ
ルムエキスはさらにｎ−ヘキサン200 mlで油分を３回溶
出して除去し、残るｎ−ヘキサン不溶部を酢酸エチルエ
キスと合併して本発明化合物を含有するエキス4.3gを得
た。このエキスを20mlのｎ−ヘキサンークロロホルム(2
0:80) で溶解し、ｎ−ヘキサンークロロホルム(20:80)
で調製したシリカゲルカラム（ベッド容積：直径4.5 c
m、長さ15cm）に浸潤させ、最初にｎ−ヘキサンークロ
ロホルム溶液を配合割合20:80 、10:90 と5:95の順でそ
れぞれ500 mlずつ流し、引き続いてクロロホルム１Ｌを
流した後、クロロホルムーメタノール溶液を配合割合を
順次変えて（95.5：0.5 、99：１、98：2 、96：4 、9
2：8)それぞれ１Ｌずつ流し、最後にクロロホルムーメ
タノール割合80：20と70：30の溶液を各500 mlずつ流し
た。
【００１６】本発明化合物はクロロホルム溶液画分に溶
出され、計880 mgの本発明化合物を含有する粗粉末を得
た。この粗粉末をメタノールで結晶化することにより、
本発明化合物以外の結晶性物質を除去した。メタノール
溶液部(385 mg)は、ODS カラム（直径２cm、長さ２５c
m; カプセルパック、資生堂社製）と60％メタノール溶
出溶媒を用いて流速10ml／分と検出波長210nm の条件下
で分取高速液体クロマトグラフィーにより分離し、本発
明化合物トリプロスタチンＡとＢの粗品を得た。これら
粗品は溶出溶媒のみを55％メタノールに変更した上記同
条件下の分取高速液体クロマトグラフィーまたはそれに
分取用シリカゲル薄層板（厚さ0.5mm 、大きさ20x20cm)
および展開溶媒クロロホルムーメタノール（95：5)を用
いた分取薄層クロマトグラフィーを組み合わせることに
より精製した。この結果、淡黄色結晶性固体として精製
標品トリプロスタチンＡとＢをそれぞれ7.7 mgと6.9 mg
ずつ得た。表１および表２に精製標品の物性値等を示
す。
出され、計880 mgの本発明化合物を含有する粗粉末を得
た。この粗粉末をメタノールで結晶化することにより、
本発明化合物以外の結晶性物質を除去した。メタノール
溶液部(385 mg)は、ODS カラム（直径２cm、長さ２５c
m; カプセルパック、資生堂社製）と60％メタノール溶
出溶媒を用いて流速10ml／分と検出波長210nm の条件下
で分取高速液体クロマトグラフィーにより分離し、本発
明化合物トリプロスタチンＡとＢの粗品を得た。これら
粗品は溶出溶媒のみを55％メタノールに変更した上記同
条件下の分取高速液体クロマトグラフィーまたはそれに
分取用シリカゲル薄層板（厚さ0.5mm 、大きさ20x20cm)
および展開溶媒クロロホルムーメタノール（95：5)を用
いた分取薄層クロマトグラフィーを組み合わせることに
より精製した。この結果、淡黄色結晶性固体として精製
標品トリプロスタチンＡとＢをそれぞれ7.7 mgと6.9 mg
ずつ得た。表１および表２に精製標品の物性値等を示
す。
【００１７】
【表１】 トリプロスタチンＡとＢの物理化学的諸性質 トリプロスタチンＡ トリプロスタチンＢ 性状 淡黄色結晶性粉末 淡黄色結晶性粉末 融点 120-123 ℃ 102-105 ℃ [α]D27 −69.7°(c 0.70, CHCl3) −71.1° (c 0.63, CHCl3) 分子式 C22H27N3O3 C21H25N3O2 高分解能質量分析 Ｍ+ Ｍ+ 実験値 (m/z) 381.2050 351.1943 理論値 (m/z) 381.2050 351.1933 UV λmaxMeOH nm 227 (4.39) 226 (4.38) (logε) 270 (3.74) 277 (3.94) 297 (3.82) 298sh (3.86) IR νmaxKBr 3365, 3270, 3070 3370, 3270, 3070 (cm -1) 2965, 2930, 2880, 2860 2970, 2930, 2875, 2860 1670, 1655, 1460 1670, 1655, 1460 1430, 1160 1435, 1160
【００１８】
【表２】トリプロスタチンＡおよびＢの500MHz 1H-NMR および125MHz 13C-NMRデータ トリプロスタチンＡ トリプロスタチンＢ δH (J: Hz) δc δH (J: Hz) δc 1 7.88 br s − 8.03 br s − 2 − 135.11 s − 136.43 s 3 − 104.46 s − 104.61 s 3a − 122.30 s − 127.97 s 4 7.34 d (8.8) 118.36 d 7.47 d (7.7) 117.74 d 5 6.76 dd (8.8, 2.4) 109.35 d 7.09 t (7.7) 119.91 d 6 − 156.37 s 7.16 t (7.7) 121.87 d 7 6.83 d (2.4) 94.89 d 7.31 d (7.7) 110.79 d 7a − 136.28 s − 135.44 s 8 2.91 dd (15.1, 11.2) 25.68 t 2.96 dd (15.0, 11.0) 25.61 t 3.63 dd (15.1, 3.5) 3.68 dd (15.0, 3.5) 9 4.34 brdd (11.2, 3.5) 54.57 d 4.37 brdd (11.0, 3.5) 54.57 d 11 − 169.35 s − 169.35 s 12 4.06 brdd (7.8, 7.3) 59.29 d 4.06 brdd (8.0, 7.5) 59.27 d 13 2.33 m 28.38 t 2.33 m 28.34 t 2.08-1.97 m 2.08-1.97 m 14 2.08-1.97 m 22.65 t 2.08-1.97 m 22.64 t 1.95-1.85 m 1.95-1.85 m 15 3.67 ddd (12.7, 8.3, 3.9) 45.43 t 3.68 overlapped 45.41 t 3.58 ddd (12.7, 8.8, 2.9) 3.59 ddd (12.0, 8.5, 3.0) 17 − 165.82 s − 165.80 s 18 3.455 dd (16.5, 7.0) 25.10 t 3.49 dd (17, 7.0) 25.12 t 3.400 dd (16.5, 6.5) 3.44 dd (17, 6.5) 19 5.29 brdd (7.0, 6.5) 119.97 d 5.31 brdd (7.0, 6.5) 119.70 d 20 − 135.25 s − 135.48 s 21 1.78 s 25.76 q 1.79 s 25.74 q 22 1.75 s 17.98 q 1.75 s 17.98 q
【００１９】本発明化合物の活性を以下の方法に従って
測定した。
測定した。
【試験例１】 トリプロスタチンＡ、Ｂの細胞周期阻害
活性 細胞周期の調節蛋白質である p34cdc2キナーゼが温度感
受性に変異したマウス乳癌細胞tsFT210 細胞を用いた。
tsFT210 細胞は通常32℃で5%仔牛血清を含むRPMI1640培
地にて5%炭酸ガスと水蒸気を飽和させた培養器内で培養
する。tsFT210細胞は39℃で培養すると、細胞周期がG2
期で停止し、これを32℃にシフトダウンすると再び細胞
分裂を開始してG1期へ移行する。シフトダウンと同時に
トリプロスタチンＡまたはＢを添加して、フローサイト
メーターと顕微鏡観察により細胞周期 (G2→M →G1) の
進行を解析した。結果を表３に示す。
活性 細胞周期の調節蛋白質である p34cdc2キナーゼが温度感
受性に変異したマウス乳癌細胞tsFT210 細胞を用いた。
tsFT210 細胞は通常32℃で5%仔牛血清を含むRPMI1640培
地にて5%炭酸ガスと水蒸気を飽和させた培養器内で培養
する。tsFT210細胞は39℃で培養すると、細胞周期がG2
期で停止し、これを32℃にシフトダウンすると再び細胞
分裂を開始してG1期へ移行する。シフトダウンと同時に
トリプロスタチンＡまたはＢを添加して、フローサイト
メーターと顕微鏡観察により細胞周期 (G2→M →G1) の
進行を解析した。結果を表３に示す。
【００２０】
【表３】 トリプロスタチンＡ、Ｂの細胞周期阻害活性 阻害剤 濃度 (μg/ml） 阻害効果 トリプロスタチンＡ 1.56 無 3.13 無 6.25 軽微 12.5 軽微 25 軽微 50 有 トリプロスタチンＢ 0.8 無 1.56 軽微 3.13 軽微 6.25 有 12.5 有 25 有 表３の結果は本発明のトリプロスタチンが細胞周期阻害
剤として有用であることを示している。
剤として有用であることを示している。
【００２１】
【試験例２】 トリプロスタチンＡおよびＢの細胞増殖
抑制効果 ヒト白血病細胞K-562 及びHL-60 をRPMI1640培地（10％
の牛胎仔血清を含む）で培養した。これに一連の稀釈系
列のトリプロスタチンＡおよびＢを加え、17時間培養し
たのち、MTT 試薬を加えて生育を計測した。その結果を
表４に示す。
抑制効果 ヒト白血病細胞K-562 及びHL-60 をRPMI1640培地（10％
の牛胎仔血清を含む）で培養した。これに一連の稀釈系
列のトリプロスタチンＡおよびＢを加え、17時間培養し
たのち、MTT 試薬を加えて生育を計測した。その結果を
表４に示す。
【００２２】
【表４】 細胞増殖抑制効果（最少生育阻止濃度） 被検細胞 MIC(μg/ml） トリプロスタチンＡ トリプロスタチンＢ ヒト慢性骨髄性白血病細胞 K-562 50 16 ヒト前骨髄性白血病細胞 HL-60 16 5 表４の結果は、本発明のトリプロスタチンが抗腫瘍剤と
して有用であることを示している。
して有用であることを示している。
【００２３】
【製剤例１】 （注射・点滴剤） トリプロスタチンＢ１０mgを含有するように、粉末ぶど
う糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し密封した
上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に
保存した。使用前にエタノールに溶解し、０．８５％生
理的食塩水１００mlを添加して静脈内注射剤とし、一
日、１０〜１００mlを症状に応じて静脈内注射または点
滴で投与する。
う糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し密封した
上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に
保存した。使用前にエタノールに溶解し、０．８５％生
理的食塩水１００mlを添加して静脈内注射剤とし、一
日、１０〜１００mlを症状に応じて静脈内注射または点
滴で投与する。
【製剤例２】 （注射・点滴剤） トリプロスタチンＢ２mgを用いて、製剤例１と同様の方
法により軽症用静脈内注射剤とし、一日、１０〜１００
mlを症状に応じて静脈内注射または点滴で投与する。
法により軽症用静脈内注射剤とし、一日、１０〜１００
mlを症状に応じて静脈内注射または点滴で投与する。
【製剤例３】 （顆粒剤） トリプロスタチンＡ１ｇ、乳糖９８ｇおよびヒドロキシ
プロピルセルロース１ｇを各々とり、よく混合した後、
常法に従って粒状に成形し、これをよく乾燥して篩別し
てビン、ヒートシール包装などに適した顆粒剤を製造し
た。一日、 100〜1000mgを症状に応じて経口で投与す
る。
プロピルセルロース１ｇを各々とり、よく混合した後、
常法に従って粒状に成形し、これをよく乾燥して篩別し
てビン、ヒートシール包装などに適した顆粒剤を製造し
た。一日、 100〜1000mgを症状に応じて経口で投与す
る。
【図１】トリプロスタチンＡ（１）およびＢ（２）のメ
タノール中の紫外線吸収スペクトルを示す。
タノール中の紫外線吸収スペクトルを示す。
【図２】トリプロスタチンＡ（１）およびＢ（２）の赤
外線吸収スペクトル（KBr)を示す。
外線吸収スペクトル（KBr)を示す。
【図３】トリプロスタチンＡ（１）およびＢ（２）の1H
-NMR (CDCl3)スペクトルを示す。
-NMR (CDCl3)スペクトルを示す。
【図４】トリプロスタチンＡ（１）およびＢ（２）の13
C-NMR (CDCl3) スペクトルを示す。
C-NMR (CDCl3) スペクトルを示す。
【手続補正書】
【提出日】平成８年２月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１８】
【表２】
フロントページの続き (72)発明者 磯野 清 埼玉県大宮市大和田町１−291−14 (72)発明者 高橋 勇 静岡県藤枝市南駿河台１−８−12
Claims (5)
- 【請求項１】 以下の一般式（Ｉ）で表されるトリプロ
スタチン。 【化１】 式中、Ｒは、メトキシ基または水素原子である。 - 【請求項２】 アスペルギルス属に属する、トリプロス
タチン生産菌を培地に培養し、トリプロスタチンを生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とするトリプロ
スタチンの製造方法。 - 【請求項３】 トリプロスタチン生産菌がアスペルギル
ス・フミガタスBM939 株である請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 トリプロスタチンを有効成分とする細胞
周期阻害剤。 - 【請求項５】 トリプロスタチンを有効成分とする抗腫
瘍剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21465995A JP3719689B2 (ja) | 1995-08-23 | 1995-08-23 | 新規物質トリプロスタチン、その製造方法、細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21465995A JP3719689B2 (ja) | 1995-08-23 | 1995-08-23 | 新規物質トリプロスタチン、その製造方法、細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0959275A true JPH0959275A (ja) | 1997-03-04 |
| JP3719689B2 JP3719689B2 (ja) | 2005-11-24 |
Family
ID=16659439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21465995A Expired - Lifetime JP3719689B2 (ja) | 1995-08-23 | 1995-08-23 | 新規物質トリプロスタチン、その製造方法、細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3719689B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1464336A1 (en) * | 2003-04-03 | 2004-10-06 | Humboldt-Universität zu Berlin | Use of tryprostatin A for the reversal of cancer drug resistance |
| CN101792375A (zh) * | 2010-03-11 | 2010-08-04 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟梗中倍半萜类化合物及其制备方法和应用 |
| JP2020002014A (ja) * | 2018-06-25 | 2020-01-09 | 日本システム企画株式会社 | 阻害活性物及びその精製方法 |
| CN115232096A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-10-25 | 福建卫生职业技术学院 | 源于细曲霉的内酯类化合物及其制备方法和在抗人肝癌药物中的应用 |
-
1995
- 1995-08-23 JP JP21465995A patent/JP3719689B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1464336A1 (en) * | 2003-04-03 | 2004-10-06 | Humboldt-Universität zu Berlin | Use of tryprostatin A for the reversal of cancer drug resistance |
| WO2004087162A1 (en) * | 2003-04-03 | 2004-10-14 | Humboldt-Universität Zu Berlin | Uses of tryprostatin for the reversal of cancer drug resistance |
| CN101792375A (zh) * | 2010-03-11 | 2010-08-04 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟梗中倍半萜类化合物及其制备方法和应用 |
| JP2020002014A (ja) * | 2018-06-25 | 2020-01-09 | 日本システム企画株式会社 | 阻害活性物及びその精製方法 |
| CN115232096A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-10-25 | 福建卫生职业技术学院 | 源于细曲霉的内酯类化合物及其制备方法和在抗人肝癌药物中的应用 |
| CN115232096B (zh) * | 2022-06-15 | 2023-05-05 | 福建卫生职业技术学院 | 源于细曲霉的内酯类化合物及其制备方法和在抗人肝癌药物中的应用 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3719689B2 (ja) | 2005-11-24 |
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