CN112979741B - 一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用 - Google Patents

一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112979741B
CN112979741B CN202110249158.2A CN202110249158A CN112979741B CN 112979741 B CN112979741 B CN 112979741B CN 202110249158 A CN202110249158 A CN 202110249158A CN 112979741 B CN112979741 B CN 112979741B
Authority
CN
China
Prior art keywords
fraction
volume ratio
concentrating
compound
methanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110249158.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112979741A (zh
Inventor
陈丽霞
李华
孙德娟
项珂
李明雪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenyang Pharmaceutical University
Original Assignee
Shenyang Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenyang Pharmaceutical University filed Critical Shenyang Pharmaceutical University
Priority to CN202110249158.2A priority Critical patent/CN112979741B/zh
Publication of CN112979741A publication Critical patent/CN112979741A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112979741B publication Critical patent/CN112979741B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J19/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 by a lactone ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J21/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having an oxygen-containing hetero ring spiro-condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • C07J71/001—Oxiranes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

一种睡茄交酯II类化合物及其提取方法和应用，属于中药提取领域，具体涉及一种从龙珠中分离的睡茄交酯II类化合物、该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐或包含该化合物的药物组合物对对5种常见肿瘤细胞具有抗增殖作用，可以用于制备抗肿瘤药物。

Description

一种睡茄交酯II类化合物及其提取方法和应用
技术领域
本发明属于中药提取领域，具体涉及一种从龙珠中分离的睡茄交酯II类化合物及其提取方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
龙珠(Tubocapsicum anomalum)为茄科龙珠属植物，常生长于山坡密林或山谷中。分布于我国福建、广东、贵州和浙江等地，印度尼西亚、日本、韩国等国亦有分布。《中国中药志要》中记载，龙珠全草入药，用于治疗水肿，疔疮，疮疡肿毒，淋证。根用于痢疾；果实清热解毒，用于恶疮，疖肿(中国药材公司.中国中药资源志要[M].北京：科学出版社,1994,1129.)，国内外学者对龙珠的化学成分以及药理作用的研究较少，仅有少数几篇报道其富含睡茄交酯类化合物(acnistin–type)(L.X.Chen,H.He,F.Qiu,Natural withanolides:anoverview[J].Natural Product Reports.28(2011)705-740.)以及其苷类化合物(KiyotaN,Shingu K,Yamaguchi K,Yoshitake Y,Harano K,Yoshimitsu H,Miyashita H,Ikeda T,Tagawa C,Nohara T.New C28steroidal glycosides from Tubocapsicum anomalum[J].Chemical&Pharmaceutical Bulletin,2008,56:1038-1040.；Kiyota N,Shingu K,Yamaguchi K,Yoshitake Y,Harano K,Yoshimitsu H,Ikeda T,Nohara T.New C28Steroidal Glycosides from Tubocapsicum anomalum[J].Chemical&PharmaceuticalBulletin,2007,55:34-36.)，并且通过体外细胞实验证明从龙珠植物中分离得到的睡茄交酯类化合物对肿瘤细胞具有细胞毒活性(Hsieh P W,Huang Z Y,Chen J H,Chang F R,WuC C,Yang Y L,Chiang M Y,Yen M H,Chen S L,Yen S H,Lubken T,Hung W C,Wu YC.Cytotoxic withanolides from Tubocapsicum anomalum[J].Journal of NaturalProducts,2007,70:747-753.；Wang S B,Zhu D R,Nie B,Li J,Zhang Y J,Kong LY,Luo JG.Cytotoxic withanolides from the aerial parts of Tubocapsicum anomalum[J].Bioorganic Chemistry,2018,81:396-404.)，以及化合物Tubocapsanolide A通过抑制Skp2的表达发挥抗肺癌细胞增殖作用(Chang H C,Chang F R,Wang Y C,Pan M R,Hung WC,Wu Y C.A bioactive withanolide Tubocapsanolide A inhibits proliferation ofhuman lung cancer cells via repressing Skp2 expression[J].Molecular CancerTherapeutics,2007,6(5):1572-1578.)。为了将龙珠的药用价值发挥到最大，对龙珠地上部分进行了系统的成分研究，提取了新的睡茄交酯II类化合物，利用核磁、红外、质谱等手段对化合物的结构进行了确证，并检测提取到的化合物对5种常见肿瘤细胞的抗增殖活性。
发明内容
本发明的首要目的是提供一种睡茄交酯II类化合物。
本发明的第二个目的是提供一种睡茄交酯II类化合物的提取方法。
本发明的第三个目的是提供一种含有睡茄交酯II类化合物的药物组合物。
本发明的第四个目的是提供上述睡茄交酯II类化合物或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐或包含该化合物的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
一种睡茄交酯II类化合物，其为如通式(I)所示的化合物或该化合物的异构体、或该化合物在药学上可接受的盐。
所述的通式(I)为：
Figure BDA0002965256780000021
其中：
R1为H、OCH3或Δ2,3双键；
R2为H、α-OH或β-OH；
R3和R4各自独立为5β、6β-epoxy、Δ5,6双键、β-OH或α-Cl；
R5为H、16α、17α-epoxy或α-OH；
R6为α-H、16α、17α-epoxy或α-OH；
R7和R8各自独立为CH3或OH。
进一步的，所述的睡茄交酯II类化合物，其为如下结构式1～7所示的化合物中的任一种或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐；
Figure BDA0002965256780000031
所述的在药学上可接受的盐，包括钠盐、钾盐、氨盐、盐酸盐及硫酸盐。
所述的异构体，包括：光学异构体、顺反异构体、外消旋体以及它们的混合物。
本发明还提供了上述睡茄交酯II类化合物1～7的提取方法，包括如下步骤：
(1)以龙珠地上部分为原料，加入原料8～15质量倍的体积浓度60％～80％乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次提取2～4小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏；其中，所述的原料8～15质量倍，具体指，加入的乙醇水溶液与原料的体积质量比以mL/g计为(8～15):1；
(2)将总浸膏分散到5～10质量倍的水中，依次用5～10质量倍体积的石油醚、乙酸乙酯萃取，回收溶剂，得到石油醚萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液和水相。
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、20:1和15:1的馏分，依次记为E2、E3和E4；
(4)馏分E2、E3和E4浓缩后进一步纯化，得到化合物1～7。
上述提取方法，其中：
所述步骤(4)中，具体分离纯化过程为：
馏分E2浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为70:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E25；
馏分E25浓缩后经MCI凝胶柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、9:1、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E251；
馏分E251浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、4:6、5:5、7:3、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为5:5的馏分，记为E2513；
馏分E2513浓缩后经硅胶柱色谱分离，依次以体积比为4:1、3:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:1的馏分，记为E25131；
馏分E25131浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物1；
馏分E4浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为7:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:1的馏分，记为E43；
馏分E43浓缩后经MCI柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E431；
馏分E431浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为60:1的馏分，记为E4313；
馏分E4313浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、3:7、4:6、6:4、7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为6:4的馏分，记为E43134；
馏分E43134浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物7；
馏分E3浓缩后经MCI柱色谱分离，依次以体积比为7:3，8:2，9:1，1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E31；
馏分E31浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、3:7、4:6、6:4、7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:6的馏分，记为E313；
馏分E313浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为60:40的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物2；
收集馏分E313的其余比例的馏分，合并浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为4:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为2:1的馏分，记为E3133；
馏分E3133浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为4:1～0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为3:1和2:1的馏分，分别记为E31332和E31333；
馏分E31332浓缩后经制备型HPLC色谱，依次以体积比为55:45、60:40的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物6；
馏分E31333浓缩后经制备型HPLC色谱，依次以体积比为60:40、55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物3，4和5。
包含睡茄交酯II类化合物的龙珠地上部分提取物。
龙珠地上部分提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
一种药物组合物，其包括所述的睡茄交酯II类化合物、该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐中的一种或多种；还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂中的一种或它们的组合。所述药物组合物的给药途径为口服或注射给药，剂型包括：片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂和针剂。
所述的睡茄交酯II类化合物、该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐或所述的药物组合物对乳腺癌细胞有抑制作用，应用于制备抗肿瘤药物。
本发明的优点：
本发明的睡茄交酯II类化合物或其异构体或其在药学上可接受的盐或其药物组合物对乳腺癌细胞抑制作用，应用于制备治疗乳腺癌的药物。本发明进一步丰富龙珠活性物质的结构多样性，在此基础上，为后续得到的单体化合物进行相关生物活性测试奠定基础，为新药开发提供活性先导化合物，同时也为龙珠药材的深层次研究与开发提供理论依据。
附图说明
图1本发明实施例3中提取到的睡茄交酯II类化合物1～7对5种肿瘤细胞的抑制率。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行进一步描述。
实施例1
龙珠中睡茄交酯II类化合物1～7的提取方法，包括如下步骤：
(1)以总干重为20kg的龙珠地上部分为原料，加入原料8质量倍的体积浓度75％乙醇水溶液(160L)，回流提取2次，每次提取2小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到2836g总浸膏；
(2)将总浸膏分散到5质量倍的水中(14.2L)，依次用5质量倍体积的石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩回收溶剂，得到石油醚萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液(303g)和水相；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，依次以体积比为100:1、50:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1、0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、20:1和15:1的馏分，依次记为E2、E3和E4；
(4)馏分E2、E3和E4浓缩后进一步纯化，得到40.9mg化合物1、4.9mg化合物2、3.8mg化合物3、3.8mg化合物4、3.8mg化合物5、6.3mg化合物6和9.8mg化合物7。具体分离纯化过程为：
馏分E2浓缩后得到25.6g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为70:1、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1、0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E25；
馏分E25浓缩后得到3.7g浓缩液，经MCI凝胶柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、9:1、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E251；
馏分E251浓缩后得到2.3g浓缩液，经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、4:6、5:5、7:3、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为5:5的馏分，记为E2513；
馏分E2513浓缩后得到1.4g浓缩液，经硅胶柱色谱分离，依次以体积比为4:1、3:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:1的馏分，记为E25131；
馏分E25131浓缩后得到53.2mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，以甲醇-水为流动相，进行纯化，得到40.9mg化合物1；
馏分E4浓缩后得到37.2g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，依次以体积比为7:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:1的馏分，记为E43；
馏分E43浓缩后得到7.2g浓缩液，经MCI柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E431；
馏分E431浓缩后得到5.0g浓缩液，经硅胶柱色谱分离，依次以体积比为100:1、80:1、60:1、40:1、20:1、15:1、0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为60:1的馏分，记为E4313；
馏分E4313浓缩后得到1.9g浓缩液，经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、3:7、4:6、6:4、7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为6:4的馏分，记为E43134；
馏分E43134浓缩后得到222.2mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，以体积比为55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到9.8mg化合物7；
馏分E3浓缩后得到53g浓缩液，经MCI柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、9:1、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E31；
馏分E31浓缩后得到27.3g浓缩液，经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、3:7、4:6、6:4、7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:6的馏分，记为E313；
馏分E313浓缩后得到18.4g浓缩液，经制备型HPLC色谱，以体积比为60:40的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到4.9mg化合物2；
收集馏分E313的其余比例的馏分，合并浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为4:1、3:1、2:1、0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为2:1的馏分，记为E3133；
馏分E3133浓缩后得到601.1mg浓缩液，经硅胶柱色谱分离，以体积比为4:1、3:1、2:1、0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为3:1和2:1的馏分，分别记为E31332和E31333；
馏分E31332浓缩后得到30.1mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，依次以体积比为55:45、60:40的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到6.3mg化合物6；
馏分E31333浓缩后得到279.2mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，依次以体积比为60:40、55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到3.8mg化合物3、3.8mg化合物4和3.8mg化合物5。
对提取到的睡茄交酯II类化合物1～7进行结构鉴定，物理化学和常数如下：
化合物1：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000071
-436.0(c＝0.20,CH3OH)；HR-ESI-MS(negative)m/z:483.2390[M-H]-(calcd for C28H35O7,483.2383)，分子式C28H36O7；1H-NMR(600MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(150MHz,Pyridine-d5)数据见表1。
化合物2：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000072
-405.5(c＝0.20,CH3OH)；HR-ESI-MS(positive)m/z:509.2500[M+Na]+(calcd for C28H38NaO7,509.2510)，分子式C28H38O7；1H-NMR(600MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(150MHz,Pyridine-d5)数据见表2。
化合物3：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000073
-423.5(c＝0.20,CH3OH)；HR-ESI-MS(positive)m/z:545.2259[M+Na]+(calcd for C28H39ClNaO7,545.2276)，分子式C28H39ClO7；1H-NMR(600MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(150MHz,Pyridine-d5)数据见表3。
化合物4：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000074
-400.0(c＝0.20,CH3OH)；HR-ESI-MS(negative)m/z:469.2606[M-H]-(calcd for C28H37O6,469.2596)，分子式C28H38O6；1H-NMR(600MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(150MHz,Pyridine-d5)数据见表4。
化合物5：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000075
-262.0(c＝0.30,CH3OH)；HR-ESI-MS(negative)m/z:469.2608[M-H]-(calcd for C28H37O6,469.2596)，分子式C28H38O6；1H-NMR(600MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(150MHz,Pyridine-d5)数据见表5。
化合物6：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000076
-398.0(c＝0.20,CH3OH)；HR-ESI-MS(negative)m/z:469.2611[M-H]-(calcd for C28H37O6,469.2596)，分子式C28H38O6；1H-NMR(600MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(150MHz,Pyridine-d5)数据见表6。
化合物7：白色无定型粉末，
Figure BDA0002965256780000077
-455.5(c＝0.20,CH3OH)；HR-ESI-MS(positive)m/z:541.2760[M+Na]+(calcd for C29H42NaO8,541.2772)，分子式C29H42O8；1H-NMR(400MHz,Pyridine-d5)和13C-NMR(100MHz,Pyridine-d5)数据见表7。
表1化合物1的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000078
Figure BDA0002965256780000081
表2化合物2的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000082
表3化合物3的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000083
Figure BDA0002965256780000091
表4化合物4的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000092
表5化合物5的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000093
表6化合物6的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000094
Figure BDA0002965256780000101
表7化合物7的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0002965256780000102
通过理化数据和现代波谱学手段(HRESIMS和NMR)，结合文献相关数据，鉴定上述化合物的结构，确定化合物1～7均为未见文献报道的新化合物。
实施例2
龙珠中睡茄交酯II类化合物1～7的提取方法，包括如下步骤：
(1)以总干重为15kg的龙珠地上部分为原料，加入原料10质量倍的体积浓度60％乙醇水溶液(150L)，回流提取3次，每次提取3小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到2110g总浸膏；
(2)将总浸膏分散到6质量倍的水中(10.6L)，依次用6质量倍体积的石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩回收溶剂，得到石油醚萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液221g)和水相；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1、50:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1、0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、20:1和15:1的馏分，依次记为E2、E3和E4；
(4)馏分E2、E3和E4浓缩后进一步纯化，得到29.3mg化合物1、3.4mg化合物2、2.8mg化合物3、2.7mg化合物4、2.7mg化合物5、4.4mg化合物6和7.1mg化合物7。具体分离纯化过程同实施例1。
实施例3
龙珠中睡茄交酯II类化合物1～7的提取方法，包括如下步骤：
(1)以总干重为25kg的龙珠地上部分为原料，加入原料15质量倍的体积浓度80％乙醇水溶液(375L)，回流提取4次，每次提取3小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到3510g总浸膏；
(2)将总浸膏分散到8质量倍的水中(28L)，依次用8质量倍体积的石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩回收溶剂，得到石油醚萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液358g)和水相；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1、50:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1、0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、20:1和15:1的馏分，依次记为E2、E3和E4；
(4)馏分E2、E3和E4浓缩后进一步纯化，得到49.0mg化合物1、5.9mg化合物2、4.6mg化合物3、4.4mg化合物4、4.3mg化合物5、7.6mg化合物6和11.5mg化合物7。具体分离纯化过程同实施例1。
上述提取得到的睡茄交酯II类化合物1～7对5种常见肿瘤细胞：人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)，人结肠癌细胞(SW480，HCT116)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(Hep3B)抗增殖活性的影响研究，具体如下：
(1)细胞培养
人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)，人结肠癌细胞(SW480，HCT116)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(Hep3B)培养于10％胎牛血清(上海中乔新舟生物科技有限公司提供)的高糖培养基，37℃，5％CO2的恒温培养箱中孵育生长。
(2)CCK8法检测化合物对Hep3B细胞存活率的影响
1.原理：Cell Counting Kit-8(简称CCK8)试剂中含有WST-8，能在细胞线粒体中电子载体的作用下被细胞中的脱氢酶还原成黄色甲瓒产物，颜色越深甲瓒数量越多，生成甲瓒的数量与活细胞数成正比，可用多功能酶标仪在450nm下测定紫外吸收，根据OD值计算活细胞的数目。
2.方法：用DMSO溶解化合物使其浓度为50mM的母液待用，细胞消化成细胞悬液，计数后以每孔100μL培养基，6000个细胞体系接种于96孔板中，放置在37℃、5％CO2培养箱中过夜，待细胞贴壁后将培养基换成含有20μM化合物的DMEM培养基继续培养24小时，弃去原培养基，每孔加入100μL含10％CCK8的培养基(现用现配，4℃避光保存)，37℃孵箱中孵育1h后，用酶标仪450nm下检测OD值。计算睡茄交酯II类化合物1～7处理组的对肿瘤细胞的生长抑制率(％)以评价抗增殖活性。结果如图1所示。
从图1中可以发现，化合物1和2，5和6均对肿瘤细胞显示出较强的细胞毒性，生长抑制率超过50％，表明本发明的化合物具有较强的体外抗肿瘤细胞增殖效应。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。

Claims (4)

1.一种睡茄交酯II类化合物，其特征在于，其为如下1～7所示化合物中的任一种或该化合物在药学上可接受的盐；
Figure FDA0003594443270000011
2.权利要求1所述的睡茄交酯II类化合物的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以龙珠地上部分为原料，加入原料8～15质量倍的体积浓度为60％～80％乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次提取2～4小时，合并得到提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏；
(2)将总浸膏分散到5～10质量倍的水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收溶剂，得到石油醚萃取浓缩液、乙酸乙酯萃取浓缩液和水相；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、20:1和15:1的馏分，依次记为E2、E3和E4；
(4)馏分E2、E3和E4浓缩后进一步纯化，得到化合物1～7；
其中，馏分E2、E3和E4的具体分离纯化过程为：
馏分E2浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为70:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E25；
馏分E25浓缩后经MCI凝胶柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、9:1、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E251；
馏分E251浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、4:6、5:5、7:3、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为5:5的馏分，记为E2513；
馏分E2513浓缩后经硅胶柱色谱分离，依次以体积比为4:1、3:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:1的馏分，记为E25131；
馏分E25131浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物1；
馏分E4浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为7:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:1的馏分，记为E43；
馏分E43浓缩后经MCI柱色谱分离，依次以体积比为7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E431；
馏分E431浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为60:1的馏分，记为E4313；
馏分E4313浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、3:7、4:6、6:4、7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为6:4的馏分，记为E43134；
馏分E43134浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物7；
馏分E3浓缩后经MCI柱色谱分离，依次以体积比为7:3，8:2，9:1，1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为7:3的馏分，记为E31；
馏分E31浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为2:8、3:7、4:6、6:4、7:3、8:2、1:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为4:6的馏分，记为E313；
馏分E313浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为60:40的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物2；
收集馏分E313的其余比例的馏分，合并浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为4:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为2:1的馏分，记为E3133；
馏分E3133浓缩后经硅胶柱色谱分离，以体积比为4:1～0:1的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为3:1和2:1的馏分，分别记为E31332和E31333；
馏分E31332浓缩后经制备型HPLC色谱，依次以体积比为55:45、60:40的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物6；
馏分E31333浓缩后经制备型HPLC色谱，依次以体积比为60:40、55:45的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物3，4和5。
3.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的睡茄交酯II类化合物、该化合物在药学上可接受的盐中的一种或多种；还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂中的一种或它们的组合；所述药物组合物的给药途径为口服或注射给药，剂型包括：片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂和针剂。
4.一种睡茄交酯II类化合物或药物组合物的应用，其特征在于，所述睡茄交酯II类化合物为权利要求1所述的睡茄交酯II类化合物；所述药物组合物为权利要求3所述的药物组合物；应用于制备抗肝癌的药物。
CN202110249158.2A 2021-03-08 2021-03-08 一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用 Active CN112979741B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110249158.2A CN112979741B (zh) 2021-03-08 2021-03-08 一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110249158.2A CN112979741B (zh) 2021-03-08 2021-03-08 一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112979741A CN112979741A (zh) 2021-06-18
CN112979741B true CN112979741B (zh) 2022-06-17

Family

ID=76335532

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110249158.2A Active CN112979741B (zh) 2021-03-08 2021-03-08 一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112979741B (zh)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI422584B (zh) * 2007-10-02 2014-01-11 Univ Kaohsiung Medical 用於毒殺癌症細胞的組合物及其用途
CN105875610A (zh) * 2016-05-20 2016-08-24 芜湖欧标农业发展有限公司 阿克尼茄素a在制备杀虫剂中应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112979741A (zh) 2021-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113105388B (zh) 一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用
CN109134574B (zh) 甾体化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物
CN113004297B (zh) 二萜生物碱类化合物及其提取方法和应用
CN112979741B (zh) 一种睡茄交酯ii类化合物及其提取方法和应用
CN111548327B (zh) 降碳贝壳杉烷型二萜及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途
CN112979740B (zh) 一种睡茄交酯ⅰ类化合物及其提取方法和应用
CN113024498B (zh) 火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用和火把花总提物的应用
CN113214214B (zh) 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用
CN113004365B (zh) 一种睡茄交酯iii类化合物及其提取方法和应用
CN111253352B (zh) 一种从中药斑叶兰中提取分离的化合物及其制备方法和应用
CN115710172B (zh) 大果大戟中二萜类化合物及其提取方法和应用
CN112480203B (zh) 一种醉茄内酯类化合物及其制备方法和应用
CN115433152B (zh) 从金丝梅果实内分离出的化合物、制备方法和用途
CN111187327B (zh) 一种从小驳骨中提取三萜类化合物驳骨萜a的方法及其应用
CN116143796B (zh) 一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱及制备方法和应用
CN111410645B (zh) 一种木脂素类化合物及其制备与应用
CN113214151B (zh) 一种川滇唐松草中抗轮状病毒活性化合物及其制备方法和应用
CN116693591B (zh) 一个乌苏烷三萜咖啡酸酯化合物的制备与抗肿瘤应用
CN116217649B (zh) 槐耳中甾体类化合物及其制备方法和应用
CN115974695B (zh) 珊瑚树中降vibsane二萜类化合物的制备方法及其应用
CN112300185B (zh) 肝毒性降低的生物碱类化合物及其制备方法和用途
CN115724900B (zh) 达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和在制备降血糖药物中的应用
CN108530509B (zh) 一种升麻素苷-升麻三萜苷缩合物及其分离纯化方法及用途
CN110256511B (zh) 一类含硫螺环缩酮倍半萜化合物及其应用和另一类含硫螺环缩酮倍半萜化合物的应用
JPH0959275A (ja) 新規物質トリプロスタチン、その製造方法、細胞周期阻害剤および抗腫瘍剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant