CN113214214B - 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用 - Google Patents
关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113214214B CN113214214B CN202110548596.9A CN202110548596A CN113214214B CN 113214214 B CN113214214 B CN 113214214B CN 202110548596 A CN202110548596 A CN 202110548596A CN 113214214 B CN113214214 B CN 113214214B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethanol
- terpenoid
- preparation
- compound
- dichloromethane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241000132011 Atractylodes lancea Species 0.000 title claims abstract description 24
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 13
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 12
- 241000132012 Atractylodes Species 0.000 claims description 9
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000002027 dichloromethane extract Substances 0.000 claims description 8
- FBMORZZOJSDNRQ-GLQYFDAESA-N Atractylenolide III Chemical compound C=C([C@@H]1C2)CCC[C@]1(C)C[C@@]1(O)C2=C(C)C(=O)O1 FBMORZZOJSDNRQ-GLQYFDAESA-N 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- -1 terpenoid compound Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 5
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 3
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 abstract 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 abstract 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 5
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethyl n'-phenylcarbamimidothioate;dihydrobromide Chemical compound Br.Br.CCN(CC)CCSC(N)=NC1=CC=CC=C1 XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002072 distortionless enhancement with polarization transfer spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 2
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N methylidenecarbene Chemical group C=[C] SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000013332 literature search Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920001197 polyacetylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D313/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D313/02—Seven-membered rings
- C07D313/06—Seven-membered rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从关苍术中获得的新的萜类化合物及其制备方法和抗胃癌方面的应用，其分子式为C30H44O4，分子量为468。该化合物由乙醇冷浸提取，采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和半制备型高效液相色谱等方法分离纯化而得到，化学结构通过一维、二维核磁共振技术以及质谱手段确认和阐明。通过CKK‑8实验结果表明，该化合物对人源性胃癌MGC‑803细胞有抑制作用。本发明从关苍术中分离制备得到的萜类化合物结构新颖，可作为研制新型抗肿瘤药物的先导化合物，也有望进一步作为治疗癌症的临床药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种从关苍术中分离、纯化得到的萜类化合物及其制备方法和在制备抗胃癌药物方面的应用。
背景技术
关苍术，又名关东苍术、枪头菜、东苍术，为菊科苍术属多年生草本植物，生于山坡、柞林、灌丛间。在我国主产于东北地区，日本、朝鲜、俄罗斯也有分布。关苍术味辛、苦，性温，归脾、胃、肝经。《中华食疗本草》记载其根茎可入药，具有健脾、燥湿、排汗、明目等功效。现代研究表明，关苍术有抗胃溃疡、降血糖、抗炎、抗心律失常等作用。在民间，关苍术也经常被作为治疗胃溃疡以及消化系统疾病的药物使用，由于治疗效果很好，所以得到广泛地应用。根据文献报道，关苍术中主要活性成分类型有萜类、聚乙炔类、糖类等。
胃癌是常见的恶性肿瘤之一，居消化道癌瘤的首位。现代医学治疗胃癌的手段，主要是手术治疗结合放化疗，其中放化疗所带来的副作用和后遗症让许多患者难以接受。因此癌症的治疗开始偏向于现代医学手段与天然药物治疗相结合的方式。目前，国内外对关苍术中抗胃癌活性的次生代谢产物的提取分离未见报道，因此从关苍术中提取分离此类活性成分，可提升关苍术的应用价值和经济价值，对关苍术的综合开发利用具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的萜类化合物及其制备方法和医药用途，以进一步提高关苍术资源的开发及利用，扩大治疗肿瘤药物的来源。
为了达成上述目的，本发明提供了一种从关苍术中分离得到的具有抗胃癌活性的萜类化合物关苍术萜烯酸Ⅰ，其化学结构式如下：
本发明还提供了该萜类化合物的制备方法：依次通过乙醇冷浸提取、有机溶剂萃取、正相硅胶柱色谱分离和HPLC制备纯化得到。具体制备步骤如下：
（1）乙醇冷浸提取：取关苍术低温烘干，适当粉碎，然后加入95%乙醇（药材重量与乙醇体积配比为1:6～1:10）冷浸提取3次，每次7 d，将所得提取液合并、浓缩；向上述乙醇浓缩液加入等体积纯净水，搅拌均匀，并于10℃下静置12 h，抽滤除去沉淀，滤液浓缩至不含醇，得到乙醇粗提物浸膏；
（2）有机溶剂萃取：将步骤（1）所得乙醇粗提物浸膏用水分散形成混悬液，再用与混悬液等体积的二氯甲烷反复萃取，合并萃取液，回收溶剂得到二氯甲烷萃取物；
（3）正相硅胶柱色谱分离：取步骤（2）所得二氯甲烷萃取物进行正相硅胶柱色谱分离。依次采用体积配比依次为25:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，每一个比例洗脱8个柱体积，将体积配比为8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱部分减压回收得到分离产物；
（4）HPLC制备纯化：将步骤（3）所得粗品通过制备型HPLC进行制备纯化，用体积配比为35:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂为流动相，洗脱速率为3 mL/min，保留时间tR=17.5min～18 min阶段内收集馏分，回收干燥得到该化合物纯品。
本发明还提供了关苍术萜烯酸Ⅰ在制备预防和治疗肿瘤药物方面的应用。在体外细胞毒实验中能够抑制人源性胃癌MGC-803细胞的增殖，具有细胞毒作用，可以作为制备预防和治疗人胃癌药物的来源。
本发明的有益效果在于：本发明以关苍术为原料，在东北拥有丰富的野生资源，因其与二级濒危中药材苍术的功效相似，对于苍术资源的替代和补充有重要意义；此外本发明对关苍术进行化学成分研究，寻找到化学结构新颖并且具有抗肿瘤活性的化合物，为进一步开发抗肿瘤药物提供了有价值的药效物质来源。
附图说明
图1为本发明化合物的化学结构式；
图2为本发明化合物的正性HR-ESI-MS谱图；
图3为本发明化合物的1H-NMR谱图；
图4为本发明化合物的13C-NMR谱图；
图5为本发明化合物的DEPT谱图；
图6为本发明化合物的HSQC谱图；
图7为本发明化合物的HMBC谱图；
图8为本发明化合物的1H-1H COSY谱图；
图9为本发明化合物的NOESY谱图；
具体实施方式
根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员很清楚本发明的其他实施方案，下述实施方案仅作为范例，本发明不限于上述具体实施例。对于该领域研究人员，任何对本发明进行的同等修改以及替代均属于本发明的范畴。下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：关苍术萜烯酸Ⅰ的制备方法
本发明所述关苍术中一种萜类化合物关苍术萜烯酸Ⅰ的制备方法，包括以下具体步骤：
（1）乙醇冷浸提取：取10 kg关苍术45℃低温烘干，粉碎至80目粗粉，然后加入95%乙醇（药材重量与乙醇体积配比为1:8）冷浸提取3次，每次7 d，将所得提取液合并、浓缩至1.25±0.05 g/mL；向上述乙醇浓缩液加入等体积纯净水，搅拌均匀，并于10℃下静置12 h，抽滤除去沉淀，滤液浓缩至不含醇，得到乙醇粗提物浸膏485.2 g。
（2）有机溶剂萃取：将步骤（1）所得乙醇粗提物浸膏用水分散形成混悬液，混悬液体积是原有乙醇浸膏的6.5倍，再用与混悬液等体积的二氯甲烷反复萃取8次，合并萃取液，回收溶剂得到二氯甲烷萃取物51.2 g；
（3）正相硅胶柱色谱分离：取步骤（2）所得二氯甲烷萃取物进行正相硅胶柱色谱分离，所述硅胶柱内的拌样硅胶为80～100目，拌样硅胶与二氯甲烷萃取物质量比为2.5:1，搅拌均匀后挥干溶剂；所述硅胶柱内的装柱硅胶为200～300目的柱层析硅胶，装柱硅胶与二氯甲烷萃取物质量比为50:1～30:1，柱径高比为5:1。用体积配比依次为25:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，每一个比例洗脱8个柱体积，将体积配比为8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱部分减压回收得到分离产物15.9 g；
（4）HPLC制备纯化：将步骤（3）所得粗品通过制备型HPLC（岛津LC-20AR型，HPLCONE-5SIL，10 mm i.d. × 250 mm，5 μm））进行分离纯化，用体积配比为35:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂为流动相，洗脱速率为3 mL/min，保留时间tR=17.5 min～18 min阶段内收集馏分，回收干燥得到该化合物纯品15.7 mg。
实施例2：关苍术萜烯酸Ⅰ的结构鉴定
本发明化合物关苍术萜烯酸Ⅰ的结构通过以下方法进行鉴定；黄色油状物，溶于二氯甲烷。在HR-ESI-MS中，m/z 486.3581处可见[M+NH4]+离子峰，表明该萜类化合物的分子量为468。结合1H-NMR、13C-NMR及DEPT谱等推测该萜类化合物的分子式为C30H44O4，计算其不饱和度为9。
本发明化合物的13C-NMR (CDCl3, 150MHz)谱和DEPT谱中，共显示出30个碳信号，δ172.1 (C-30)、160.2 (C-22)、151.2 (C-10)、148.9 (C-21)、138.8 (C-5)、124.0 (C-23)、121.4 (C-6)、106.5 (C-8)、36.9 (C-12)、36.3 (C-1)为10个季碳信号，其中δ172.1 (C-30)和106.5 (C-8)为连氧的季碳；δ106.9 (C-25)、105.5 (C-24)、64.0 (C-7)、50.5 (C-11)、42.1 (C-2)、41.6 (C-16)、41.5 (C-15)、36.8 (C-18)、36.2 (C-20)、28.8 (C-4)、25.6 (C-3)、25.2 (C-14)、23.5 (C-17)、22.5 (C-19)为14个亚甲基碳信号，其中δ64.0(C-7)为连氧的亚甲基碳信号，106.9 (C-25)、105.5 (C-24)为末端双键的碳信号；δ52.1(C-13)、50.3 (C-9)为2个次甲基碳信号；δ17.0 (C-27)、16.6 (C-28)、16.0 (C-26)、8.5(C-29)为4个甲基碳信号。
该化合物的1H-NMR (CDCl3, 600MHz)谱中，在高场区存在δ1.86 (3H, s)、1.72(3H, s)、0.99 (3H, s)、0.79 (3H, s)四个甲基质子信号；在低场区存在δ4.74 (1H, br s)、4.46 (1H, br s)和δ4.86 (1H, br s)、4.59 (1H, br s)两组末端双键的质子信号；此外，δ3.93 (1H, d, J = 9.8 Hz)和3.75 (1H, d, J = 9.9 Hz)为一组连氧的质子信号。
该萜类化合物的HMBC中，H2-4 (δ2.46, 1.76)与C-5 (δ138.8)、C-6 (δ121.4)、C-1 (δ36.3)、C-3 (δ25.6)相关，在1H-1H COSY中，H2-2 (δ1.50, 1.18)与H2-3 (δ2.48,1.91)、H2-3 (δ2.48, 1.91)与H2-4 (δ2.46, 1.76)相关；在HMBC中，H2-7 (δ3.93, 3.75)与C-5 (δ138.8)、C-6 (δ121.4)、C-8 (δ106.5)、C-27 (δ17.0)相关，H3-27 (δ1.72)与C-5 (δ138.8)、C-6 (δ121.4)、C-7 (δ64.0)相关，H3-26 (δ0.79)与C-9 (δ50.3)、C-2 (δ42.1)、C-1 (δ36.3)相关，推测存在A、B环结构，与carabrolactone B的A、B环部分化学结构相，但C，D环存在较明显的差异性。在HMBC中，H-9 (δ1.76)与C-10 (δ151.2)相关，H2-24 (δ4.74,4.46)与C-11 (δ50.5)、C-12 (δ36.9)相关，H2-11 (δ2.40, 1.42)与C-8 (δ106.5)、C-13(δ52.1)、C-12 (δ36.9)、C-28 (δ16.6)相关，H3-28 (δ0.99)与C-13 (δ52.1)、C-12 (δ36.9)相关，H2-14 (δ2.63, 2.27)与C-8 (δ106.5)、C-13 (δ52.1)、C-12 (δ36.9)相关，在1H-1H COSY中，H2-14 (δ2.63, 2.27)与H-13 (δ1.81)相关，推测存在C环结构,其中根据δ106.5数值判断，该位分别连有一个氧以及一个羟基；根据δ64.0数值及氢谱数据判断，该位连有一个氧；在1H-1H COSY中，H2-15 (δ1.56, 1.22)与H2-16 (δ1.44, 1.22)相关，H2-16 (δ1.44, 1.22)与H2-17 (δ1.60)相关，H2-17 (δ1.60)与H2-18 (δ2.29, 1.96)相关，H2-18 (δ2.29, 1.96)与H2-19 (δ1.62)相关，H2-19 (δ1.62)与H2-20 (δ2.36, 1.96)相关，故存在片段-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，在HMBC中，H2-25 (δ4.86, 4.59)与C-21 (δ148.9)、C-13 (δ52.1)、C-20 (δ36.2)相关，H3-29 (δ1.86)与C-22 (δ160.2)、C-23 (δ124.0)、C-30 (δ172.1)相关，H3-28 (δ0.99)与C-15 (δ41.5)相关，H2-11 (δ2.40, 1.42)与C-15 (δ41.5)、C-22 (δ160.2)相关，H2-14 (δ2.63, 2.27)与C-22 (δ160.2)、C-23 (δ124.0)相关，推测存在D环结构。同时根据NOESY谱确定该化合物26位和28位甲基及8位羟基相对构型。通过该化合物1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HMBC 和1H-1H COSY信号进行了相应归属（见表 1）。综上解析，经SciFinder网络文献检索，确定本发明化合物关苍术萜烯酸Ⅰ为新化合物。
表1 本发明化合物NMR信号归属
实施例3：关苍术萜烯酸Ⅰ的体外抑制肿瘤细胞增殖作用
（1）材料和方法
对实施例1中制备得到的化合物进行了体外抗肿瘤试验，试验所采用的细胞为人源性胃癌MGC-803细胞株，该瘤株源自武汉大学细胞保藏中心，采用CKK8法进行细胞毒活性实验。
具体方法如下：
将处于对数生长期状态良好的人源性胃癌MGC-803细胞接种于96孔板中，接种细胞浓度为1×104个细胞/孔，每个孔100 μL。将上述肿瘤细胞用含10%胎牛血清和1%的青霉素-链霉素的DMEM培养基在37℃、5% CO2恒温培养箱中进行细胞贴壁培养，24 h后，观察到细胞完全贴壁，吸去培养基。除空白组和对照组给予不完全培养基外，受试药物组给予药物100 μL，浓度分别为5 μM、10 μM、20 μM、40 μM、80 μM、160 μM，其中受试药物组中药物为本申请的实施例1所制备的萜类化合物关苍术萜烯酸Ⅰ，阿霉素为阳性对照药，继续培养48 h后，向每个孔中加入10 μL的CCK8试剂，并放置在37℃、5% CO2恒温培养箱中孵育1 h，之后用酶标仪在450 nm下测量各孔吸光度(OD)值，重复3次实验，取平均值。使用Logit法计算药物的IC50值。
（2）结果
经线性回归计算IC50值，结果显示本发明化合物对人源性胃癌MGC-803细胞作用IC50值是65.14± 3.08 μM（阳性对照药阿霉素IC50值是4.05 ± 0.56 μM）。
结果表明本发明化合物对人源性胃癌MGC-803细胞具有一定的抑制作用，具有制备临床肿瘤治疗药物的前景。
Claims (4)
1.一种从关苍术中分离得到的萜类化合物，命名为关苍术萜烯酸 Ⅰ，其特征在于，其结构式如式（I）所示：
（I）。
2.权利要求1所述的萜类化合物，其特征在于，所述萜类化合物关苍术萜烯酸 Ⅰ是从关苍术中提取获得。
3.权利要求1所述萜类化合物关苍术萜烯酸 Ⅰ的制备方法，其特征在于，以关苍术为原料，依次通过乙醇冷浸提取、有机溶剂萃取、正相硅胶柱色谱分离和HPLC制备纯化得到，其特征在于，通过以下具体步骤制备：
（1）乙醇冷浸提取：取关苍术低温烘干，适当粉碎，然后加入95%乙醇，药材重量与乙醇体积配比为1:6～1:10，冷浸提取3次，每次7 d，将所得提取液合并、浓缩；向上述乙醇浓缩液加入等体积纯净水，搅拌均匀，并于10℃下静置12 h，抽滤除去沉淀，滤液浓缩至不含醇，得到乙醇粗提物浸膏；
（2）有机溶剂萃取：将步骤（1）所得乙醇粗提物浸膏用水分散形成混悬液，再用与混悬液等体积的二氯甲烷反复萃取，合并萃取液，回收溶剂得到二氯甲烷萃取物；
（3）正相硅胶柱色谱分离：取步骤（2）所得二氯甲烷萃取物进行正相硅胶柱色谱分离，依次采用体积配比为25:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，每一个比例洗脱8个柱体积，将体积配比为8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱部分减压回收得到分离产物；
（4）HPLC制备纯化：将步骤（3）所得粗品通过制备型HPLC进行制备纯化，用体积配比为35:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂为流动相，洗脱速率为3 mL/min，保留时间tR=17.5 min～18 min阶段内收集馏分，回收干燥得到该化合物纯品。
4.权利要求1所述的萜类化合物关苍术萜烯酸 Ⅰ在制备抗胃癌药物方面的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110548596.9A CN113214214B (zh) | 2021-05-20 | 2021-05-20 | 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110548596.9A CN113214214B (zh) | 2021-05-20 | 2021-05-20 | 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113214214A CN113214214A (zh) | 2021-08-06 |
| CN113214214B true CN113214214B (zh) | 2022-10-18 |
Family
ID=77093332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110548596.9A Expired - Fee Related CN113214214B (zh) | 2021-05-20 | 2021-05-20 | 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113214214B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115611844B (zh) * | 2022-11-13 | 2024-05-10 | 黑龙江中医药大学 | 一种从关苍术中分离得到的化合物的制备方法和应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57102812A (en) * | 1980-12-11 | 1982-06-26 | Tadashi Kamibayashi | Preparation of aroma composition |
| CN101474233B (zh) * | 2008-12-12 | 2011-06-08 | 深圳海王药业有限公司 | 苍术提取物软胶囊及其制备方法 |
| MX2011012398A (es) * | 2009-05-22 | 2012-02-28 | Sk Chemicals Co Ltd | Composicion para prevenir o tratar el sindrome de intestino irritable. |
-
2021
- 2021-05-20 CN CN202110548596.9A patent/CN113214214B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113214214A (zh) | 2021-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110627861B (zh) | 一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和应用 | |
| CN113105388B (zh) | 一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用 | |
| CN109705188A (zh) | 青龙衣中一种新的三萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN113214214B (zh) | 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用 | |
| CN113087756B (zh) | 具有肿瘤细胞毒活性的三萜类化合物及其制备方法以及应用 | |
| CN104892714B (zh) | 一种新的灵芝三萜及其制备方法和医药用途 | |
| CN111205347A (zh) | 齐墩果烷型三萜皂苷类化合物及其提取方法和用途 | |
| CN113278026B (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111253352B (zh) | 一种从中药斑叶兰中提取分离的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111377933B (zh) | 诸葛菜种子提取的生物碱类化合物及其提取方法与应用 | |
| CN110204589B (zh) | 青葙子有效成分、提取方法及其在制备神经保护药物方面的应用 | |
| CN111303238B (zh) | 甾体皂苷类化合物及其制备方法和医药用途 | |
| CN115611844B (zh) | 一种从关苍术中分离得到的化合物的制备方法和应用 | |
| CN113336822B (zh) | 麦冬-甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109180632A (zh) | 一种从雷公藤中分离出的新化合物及其制备方法和医药用途 | |
| CN116693485B (zh) | 白鲜酯c及其制备方法和应用 | |
| CN113234084B (zh) | 一种鹤庆唐松草中具有抗轮状病毒活性的化合物及其制备方法 | |
| CN116693480B (zh) | 二氢白蜡酮a及其制备方法和应用 | |
| CN114835568B (zh) | 核桃青皮中一种联苯型二芳基庚烷的制备方法和应用 | |
| CN108478619A (zh) | 田旋花总树脂糖苷提取物及其制备方法和医药用途 | |
| CN116715707B (zh) | 白鲜酚苷d及其制备方法和应用 | |
| CN116143796B (zh) | 一种从马钱子中提取分离的单萜吲哚类生物碱及制备方法和应用 | |
| CN115724900B (zh) | 达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和在制备降血糖药物中的应用 | |
| CN112979740B (zh) | 一种睡茄交酯ⅰ类化合物及其提取方法和应用 | |
| CN113372407B (zh) | 甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20221018 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |