CN113024498B - 火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用和火把花总提物的应用 - Google Patents

火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用和火把花总提物的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用和火把花总提物的应用，属于药物化学技术领域。本发明中火把花总提物具有很好的抗炎和免疫抑制活性，基于所述火把花总提物得到的火把花烷二倍半萜化合物结构新颖，也具有很好的抗炎和免疫抑制活性，能够应用于制备抗炎药物和免疫抑制药物。本发明提供了所述火把花烷二倍半萜化合物的制备方法，本发明以唇形科火把花属植物火把花的地上部分为原料，通过有机溶剂浸提、乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱层析分离、反相C18柱层析分离、大孔树脂柱层析分离、MCI反相柱层析分离以及SephadexLH‑20柱层析纯化、半制备HPLC纯化等方式获得。

Description

火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用 和火把花总提物的应用
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用和火把花总提物的应用。
背景技术
唇形科(Lamiaceae)火把花属(Colquhounia)植物在全世界范围内约有6种。发明人前期从火把花(C.coccinea var.mollis)的腺毛中发现一系列骨架新颖的火把花烷二倍半萜化合物，对植食性昆虫棉铃虫(Helicoverpa armigera)和甜菜夜蛾(Spodopteraexigua)均有显著拒食活性，对植物病原真菌也有一定抑制作用，是该植物主要的化学防御物质[Org.Lett.,15(7),1694-1697]。目前未见天然提取的降碳、内酰胺取代等新颖结构的火把花烷二倍半萜类化合物及其活性的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供火把花烷二倍半萜化合物及其制备方法、药物组合物及应用和火把花总提物的应用，本发明中火把花总提物以及火把花烷二倍半萜化合物具有很好的抗炎和免疫抑制活性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了火把花烷二倍半萜化合物，具有式1～22所示结构中的任意一种：
Figure BDA0002976686070000011
Figure BDA0002976686070000021
本发明提供了上述技术方案所述火把花烷二倍半萜化合物的制备方法，具有式1～22所示结构化合物依次记为化合物1～22，包括以下步骤：
(1)采用有机溶剂对火把花的地上部分进行浸提，得到粗提物；所述有机溶剂为甲醇、体积分数≥80％的甲醇水溶液、乙醇、体积分数≥80％的乙醇水溶液、丙酮或体积分数≥70％的丙酮水溶液；
将所述粗提物与水混合，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行萃取，将所得萃取液经减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏；
将所述乙酸乙酯浸膏进行第一正相硅胶柱层析分离，其中，所用洗脱剂为第一试剂与第二试剂的混合物，所述第一试剂为二氯甲烷、氯仿或石油醚，所述第二试剂为丙酮、乙酸乙酯或甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，依次得到6个流份，各流份经减压浓缩依次记为A～F部分；
(2)以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将A部分进行第一大孔树脂柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.1、Fr.2和Fr.3部分；
将Fr.1部分依次进行第二正相硅胶柱层析分离和第一Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物21和化合物22；
以石油醚-氯仿为洗脱剂，将Fr.2部分进行第三正相硅胶柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分；
以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-1部分进行第二大孔树脂柱层析分离，依次得到4个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1-1、Fr.2-1-2、Fr.2-1-3和Fr.2-1-4部分；
将Fr.2-1-1部分依次进行第四正相硅胶柱层析分离和第一半制备HPLC纯化，得到化合物14和化合物20；
将Fr.2-1-2部分进行第五正相硅胶柱层析分离，得到化合物8和化合物15；
将Fr.2-1-4部分依次进行第六正相硅胶柱层析分离、第一反相C18柱层析分离和第二Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物10、化合物13、化合物18和化合物19；
将Fr.2-2部分依次进行第一MCI反相柱层析分离、第七正相硅胶柱层析分离和第三Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物1；
以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-3部分进行第二反相C18柱层析分离，依次得到5个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分；
将Fr.2-3-1部分进行第八正相硅胶柱层析分离，得到化合物12和化合物16；
将Fr.2-3-2部分依次进行第九正相硅胶柱层析分离和第四Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物4；
将Fr.2-3-4部分依次进行第三反相C18柱层析分离、第十正相硅胶柱层析分离和第五Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物11、化合物17、化合物6和化合物7；
将Fr.2-3-5部分进行第四反相C18柱层析分离，得到化合物9；
(3)将B部分依次进行第三大孔树脂柱层析分离、第十一正相硅胶柱层析分离和第二半制备HPLC纯化，得到化合物3；
(4)将C部分依次进行第二MCI反相柱层析分离、第十二正相硅胶柱层析分离、第五反相C18柱层析分离、第十三正相硅胶柱层析分离和第六Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物2和化合物5；
所述步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)无时间顺序限定。
优选地，进行所述步骤(1)中第一正相硅胶柱层析分离时，以氯仿-丙酮为洗脱剂，所述梯度洗脱包括依次进行的6个梯度，按氯仿与丙酮体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为1:0、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1，分别对应所述A～F部分。
优选地，进行所述步骤(2)中第一大孔树脂柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的3个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为8:2、9:1和1:0，分别对应所述Fr.1、Fr.2和Fr.3部分。
优选地，进行所述步骤(2)中第三正相硅胶柱层析分离时，所述洗脱剂中石油醚和氯仿的体积比为1:1。
优选地，进行所述步骤(2)中第二大孔树脂柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的5个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为6:4、7:3、8:2、9:1和1:0；其中，洗脱剂中甲醇和水体积比为6:4时的流份对应所述Fr.2-1-1部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为7:3时的流份对应所述Fr.2-1-2部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为8:2时的流份对应所述Fr.2-1-3部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为9:1和1:0时的流份对应所述Fr.2-1-4部分。
优选地，进行所述步骤(2)中第二反相C18柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的5个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为5:5、6:4、7:3、8:2和1:0，分别对应所述Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分。
本发明提供了一种含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物，包括活性成分和药剂学上可接受的辅料，所述活性成分为上述技术方案所述火把花烷二倍半萜化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的火把花烷二倍半萜化合物。
优选地，所述药物组合物中活性成分的含量为0.1～99.5wt％。
本发明提供了火把花烷二倍半萜化合物、含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物或火把花总提物在制备抗炎药物或免疫抑制药物中的应用，
其中，所述火把花烷二倍半萜化合物为上述技术方案所述火把花烷二倍半萜化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的火把花烷二倍半萜化合物；
所述含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物为上述技术方案所述的药物组合物；
所述火把花总提物的制备方法包括以下步骤：
采用有机溶剂对火把花的地上部分进行浸提，得到粗提物；所述有机溶剂为甲醇、体积分数≥80％的甲醇水溶液、乙醇、体积分数≥80％的乙醇水溶液、丙酮或体积分数≥70％的丙酮水溶液；将所述粗提物与水混合，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行萃取，将所得萃取液经减压浓缩，所得乙酸乙酯浸膏为火把花总提物。
本发明中火把花总提物具有很好的抗炎和免疫抑制活性，能够应用于制备抗炎药物和免疫抑制药物。
本发明提供了火把花烷二倍半萜化合物，具有式1～22所示结构中的任意一种。本发明提供的火把花烷二倍半萜化合物结构新颖，具有很好的抗炎和免疫抑制活性，能够应用于制备抗炎药物和免疫抑制药物。
本发明提供了所述火把花烷二倍半萜化合物的制备方法，本发明以唇形科火把花属植物火把花[Colquhounia coccinea var.mollis]的地上部分为原料，通过有机溶剂浸提、乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱层析分离、反相C18柱层析分离、大孔树脂柱层析分离、MCI反相柱层析分离以及Sephadex LH-20柱层析纯化、半制备HPLC纯化等方式获得。
具体实施方式
本发明提供了火把花烷二倍半萜化合物，具有式1～22所示结构中的任意一种：
Figure BDA0002976686070000051
Figure BDA0002976686070000061
在本发明中，具有式1～22所示结构的化合物依次记为化合物1～22，其中，以化合物1～5、化合物13以及化合物19为例，碳原子编号具体如下：
Figure BDA0002976686070000071
本发明提供了上述技术方案所述火把花烷二倍半萜化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)采用有机溶剂对火把花的地上部分进行浸提，得到粗提物；所述有机溶剂为甲醇、体积分数≥80％的甲醇水溶液、乙醇、体积分数≥80％的乙醇水溶液、丙酮或体积分数≥70％的丙酮水溶液；
将所述粗提物与水混合，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行萃取，将所得萃取液经减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏；
将所述乙酸乙酯浸膏进行第一正相硅胶柱层析分离，其中，所用洗脱剂为第一试剂与第二试剂的混合物，所述第一试剂为二氯甲烷、氯仿或石油醚，所述第二试剂为丙酮、乙酸乙酯或甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，依次得到6个流份，各流份经减压浓缩依次记为A～F部分；
(2)以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将A部分进行第一大孔树脂柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.1、Fr.2和Fr.3部分；
将Fr.1部分依次进行第二正相硅胶柱层析分离和第一Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物21和化合物22；
以石油醚-氯仿为洗脱剂，将Fr.2部分进行第三正相硅胶柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分；
以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-1部分进行第二大孔树脂柱层析分离，依次得到4个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1-1、Fr.2-1-2、Fr.2-1-3和Fr.2-1-4部分；
将Fr.2-1-1部分依次进行第四正相硅胶柱层析分离和第一半制备HPLC纯化，得到化合物14和化合物20；
将Fr.2-1-2部分进行第五正相硅胶柱层析分离，得到化合物8和化合物15；
将Fr.2-1-4部分依次进行第六正相硅胶柱层析分离、第一反相C18柱层析分离和第二Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物10、化合物13、化合物18和化合物19；
将Fr.2-2部分依次进行第一MCI反相柱层析分离、第七正相硅胶柱层析分离和第三Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物1；
以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-3部分进行第二反相C18柱层析分离，依次得到5个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分；
将Fr.2-3-1部分进行第八正相硅胶柱层析分离，得到化合物12和化合物16；
将Fr.2-3-2部分依次进行第九正相硅胶柱层析分离和第四Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物4；
将Fr.2-3-4部分依次进行第三反相C18柱层析分离、第十正相硅胶柱层析分离和第五Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物11、化合物17、化合物6和化合物7；
将Fr.2-3-5部分进行第四反相C18柱层析分离，得到化合物9；
(3)将B部分依次进行第三大孔树脂柱层析分离、第十一正相硅胶柱层析分离和第二半制备HPLC纯化，得到化合物3；
(4)将C部分依次进行第二MCI反相柱层析分离、第十二正相硅胶柱层析分离、第五反相C18柱层析分离、第十三正相硅胶柱层析分离、第六Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物2和化合物5；
所述步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)无时间顺序限定。
本发明以唇形科火把花属植物火把花[Colquhounia coccinea var.mollis]的地上部分为原料，通过有机溶剂浸提、乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱层析分离、反相C18柱层析分离、大孔树脂柱层析分离、MCI反相柱层析分离以及Sephadex LH-20柱层析纯化、半制备HPLC纯化等方式获得。本发明中涉及的正相硅胶柱层析分离，所述第一正相硅胶柱层析分离时拌样用硅胶的粒度优选为80～100目，其它正相硅胶柱层析分离时拌样用硅胶的粒度优选均为200～300目；所述第九正相硅胶柱层析分离优选为中压硅胶柱层析分离，其它正相硅胶柱层析分离优选均为常压硅胶柱层析分离；所述中压硅胶柱层析分离所用中压柱的承受压力范围优选为5～10bar(规格优选为60×4.5cm，id)，装柱用硅胶的粒度优选为300～400目，使用过程中流速优选为8mL/min；所述常压硅胶柱层析分离装柱用硅胶的粒度优选为200～300目。本发明中涉及的反相C18柱层析分离优选均为中压C18柱层析分离。
本发明采用有机溶剂对火把花的地上部分进行浸提，得到粗提物；所述有机溶剂为甲醇、体积分数≥80％的甲醇水溶液、乙醇、体积分数≥80％的乙醇水溶液、丙酮或体积分数≥70％的丙酮水溶液。本发明以火把花的地上部分为原料进行提取。在本发明中，所述火把花的产地具体为云南省临沧市凤庆县。在本发明中，所述火把花的地上部分优选包括火把花的叶、花和茎中的至少一种。本发明优选将火把花的地上部分阴干后粉粹，得到粒度为30目的粉粹物料进行浸提。在本发明中，所述浸提采用的有机溶剂为甲醇、体积分数≥80％的甲醇水溶液、乙醇、体积分数≥80％的乙醇水溶液、丙酮或体积分数≥70％的丙酮水溶液，优选为甲醇。在本发明中，所述浸提优选在室温条件下进行，即不需要额外的加热或降温；在本发明的实施例中，室温具体是指25℃。在本发明中，所述浸提的次数优选为2～5次，更优选为3次；每次浸提的时间优选为12～24h，更优选为12～18h；每次浸提采用的有机溶剂体积与粉粹物料的质量比独立地优选为(2～4)L：1kg。在本发明的实施例中，每次浸提后经过滤，将所得滤饼与有机溶剂混合后进行下一次浸提；将每次浸提并过滤的滤液合并后进行减压浓缩，得到粗提物。
得到粗提物后，本发明将所述粗提物与水混合，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行萃取，将所得萃取液经减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏。在本发明中，所述粗提物与水的用量比优选为1kg：(1.5～2.5)L。在本发明中，所述萃取优选在室温条件下进行，所述萃取的次数优选为2～4次，更优选为3次；每次萃取采用的乙酸乙酯为水体积的1～2倍。在本发明的实施例中，每次萃取后分离出有机相，将所得水相与乙酸乙酯混合后进行下一次萃取；将每次萃取的有机相合并后进行减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏。
得到乙酸乙酯浸膏后，本发明将所述乙酸乙酯浸膏进行第一正相硅胶柱层析分离，其中，所用洗脱剂为第一试剂与第二试剂的混合物，所述第一试剂为二氯甲烷、氯仿或石油醚，所述第二试剂为丙酮、乙酸乙酯或甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，依次得到6个流份，各流份经减压浓缩依次记为A～F部分。本发明优选采用溶解试剂将所述乙酸乙酯浸膏溶解，用80～100目硅胶拌样后，用200～300目硅胶装柱然后进行所述第一正相硅胶柱层析分离；所述溶解试剂优选为甲醇或丙酮，所述溶解试剂优选为乙酸乙酯浸膏质量的1.5～3倍，更优选为2～2.5倍。在本发明中，进行所述第一正相硅胶柱层析分离时，优选以氯仿-丙酮为洗脱剂，所述梯度洗脱优选包括依次进行的6个梯度，按氯仿与丙酮体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为1:0、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1，分别对应所述A～F部分。在本发明中，每个梯度优选洗脱5个柱体积。本发明优选采用TLC监测，将监测结果相同的流份合并后分别进行减压浓缩，得到所述A～F部分。在本发明中，目标化合物(即火把花烷二倍半萜化合物)存在于中等偏低极性流份，故后续对A～C部分分别进行进一步处理，具体的，A部分对应洗脱剂氯仿-丙酮体积比为1:0时的流份，B部分对应洗脱剂氯仿-丙酮体积比为9:1时的流份，C部分对应洗脱剂氯仿-丙酮体积比为8:2时的流份。
在本发明中，所述A部分中含有较多种类的目标化合物，下面首先对A部分需要进行的相关分离纯化操作进行详细说明。
得到A部分后，本发明以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将A部分进行第一大孔树脂柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.1、Fr.2和Fr.3部分。在本发明中，进行所述第一大孔树脂柱层析分离时，所述梯度洗脱优选包括依次进行的3个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为8:2、9:1和1:0，分别对应所述Fr.1、Fr.2和Fr.3部分。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明通过对所述Fr.1和Fr.2部分进行进一步分离纯化，得到相应的目标化合物。
得到Fr.1部分后，本发明将Fr.1部分依次进行第二正相硅胶柱层析分离和第一Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物21和化合物22。在本发明中，所述第二正相硅胶柱层析分离优选以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比优选为35:1；本发明优选对所述Fr.1部分反复进行第二正相硅胶柱层析分离，这样的作用是除去Fr.1部分中其他类型化合物，如脂肪酸和色素等；具体的，进行所述第二正相硅胶柱层析分离的次数优选为2～3次，或采用TLC监测富集含化合物21和化合物22的粗组分。在本发明中，所述第一Sephadex LH-20柱层析纯化优选以丙酮为洗脱剂。
得到Fr.2部分后，本发明以石油醚-氯仿为洗脱剂，将Fr.2部分进行第三正相硅胶柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分；在本发明中，进行所述第三正相硅胶柱层析分离时，所述洗脱剂中石油醚和氯仿的体积比优选为1:1。本发明优选采用TLC监测，将监测结果相同的流份合并后分别进行减压浓缩，得到所述Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分。本发明通过对所述Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分进行进一步分离纯化，得到相应的目标化合物。
得到Fr.2-1部分后，本发明以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-1部分进行第二大孔树脂柱层析分离，依次得到4个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1-1、Fr.2-1-2、Fr.2-1-3和Fr.2-1-4部分。在本发明中，进行所述第二大孔树脂柱层析分离时，所述梯度洗脱优选包括依次进行的5个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为6:4、7:3、8:2、9:1和1:0；其中，洗脱剂中甲醇和水体积比为6:4时的流份对应所述Fr.2-1-1部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为7:3时的流份对应所述Fr.2-1-2部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为8:2时的流份对应所述Fr.2-1-3部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为9:1和1:0时的流份对应所述Fr.2-1-4部分。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明通过对所述Fr.2-1-1、Fr.2-1-2和Fr.2-1-4部分进行进一步分离纯化，得到相应的目标化合物。
得到Fr.2-1-1部分后，本发明将Fr.2-1-1部分依次进行第四正相硅胶柱层析分离和第一半制备HPLC纯化，得到化合物14和化合物20。在本发明中，所述第四正相硅胶柱层析分离优选以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，洗脱方式优选为等度洗脱，按石油醚和乙酸乙酯的体积比为15:1、18:1和20:1依次进行等度洗脱。本发明优选采用TLC监测，将监测结果相同的流份合并后分别进行减压浓缩，分别得到含化合物14的粗组分(记为粗组分a)和含化合物20的粗组分(记为粗组分b)，之后将所述粗组分a和粗组分b分别进行第一半制备HPLC纯化，分别得到化合物14和化合物20。在本发明中，进行所述第一半制备HPLC纯化时，流动相优选为乙腈-水溶液，所述流动相中乙腈和水的体积比优选为6:4；流速优选为3mL/min，紫外检测波长优选为210nm，色谱柱优选为ZORBAX SB-C18，色谱柱规格优选为5μm、9.4×250mm；其中，化合物14保留时间为10.6min，化合物20保留时间为12.6min。
得到Fr.2-1-2部分后，本发明将Fr.2-1-2部分进行第五正相硅胶柱层析分离，得到化合物8和化合物15。在本发明中，所述第五正相硅胶柱层析分离优选以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，洗脱方式优选为等度洗脱，按石油醚和乙酸乙酯的体积比为20:1和22:1依次进行等度洗脱。
得到Fr.2-1-4部分后，本发明将Fr.2-1-4部分依次进行第六正相硅胶柱层析分离、第一反相C18柱层析分离和第二Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物10、化合物13、化合物18和化合物19。在本发明中，所述第六正相硅胶柱层析分离优选以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，洗脱方式优选为等度洗脱，按石油醚和乙酸乙酯的体积比为25:1和30:1依次进行等度洗脱。本发明优选将Fr.2-1-4部分反复进行第六正相硅胶柱层析分离，这样的作用是进一步充分富集目标化合物；具体的，进行所述第六正相硅胶柱层析分离的次数优选为2～3。在本发明中，所述第一反相C18柱层析分离优选以甲醇-水洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，所述梯度洗脱优选包括依次进行的7个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱5个柱体积。本发明优选采用TLC监测，将甲醇和水的体积比为4:6和5:5时监测结果相同的流份合并，经减压浓缩得含化合物10的粗组分(记为粗组分a)，将甲醇和水的体积比为7:3的流份经减压浓缩，得到含化合物13的粗组分(记为粗组分b)，将甲醇和水的体积比为8:2和9:1的流份合并，经减压浓缩得到含化合物18和化合物19的粗组分(记为粗组分c)；之后将粗组分a～c分别进行第二Sephadex LH-20柱层析纯化，以进一步提高纯度。在本发明中，所述第二Sephadex LH-20柱层析纯化优选以丙酮为洗脱剂。
得到Fr.2-2部分后，本发明将Fr.2-2部分依次进行第一MCI反相柱层析分离、第七正相硅胶柱层析分离和第三Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物1。在本发明中，所述第一MCI反相柱层析分离优选以甲醇-水为洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，所述梯度洗脱优选包括依次进行的4个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为7:3、8:2、9:1和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明优选采用TLC监测，将甲醇和水的体积比为8:2、9:1和1:0的流份合并经减压浓缩，得到含化合物1的粗组分，之后进行第七正相硅胶柱层析分离。在本发明中，所述第七正相硅胶柱层析分离优选以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，洗脱方式优选为等度洗脱，按石油醚和乙酸乙酯的体积比为30:1和25:1依次进行等度洗脱。本发明优选将含化合物1的粗组分反复进行第七正相硅胶柱层析分离，这样的作用是进一步富集化合物1；具体的，进行所述第七正相硅胶柱层析分离的次数优选为2～3，或者采用TLC监测至杂质含量降低且化合物1的含量以及纯度增加。在本发明中，所述第三Sephadex LH-20柱层析纯化优选以丙酮为洗脱剂。
得到Fr.2-3部分后，本发明以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-3部分进行第二反相C18柱层析分离，依次得到5个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分。在本发明中，进行所述第二反相C18柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的5个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为5:5、6:4、7:3、8:2和1:0，分别对应所述Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明通过对Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分进行进一步分离纯化，得到相应的目标化合物。
得到Fr.2-3-1部分后，本发明将Fr.2-3-1部分进行第八正相硅胶柱层析分离，得到化合物12和化合物16。在本发明中，所述第八正相硅胶柱层析分离优选包括依次进行的两个洗脱阶段。具体的，所述第一洗脱阶段优选以石油醚-丙酮为洗脱剂，所述洗脱剂中石油醚和丙酮的体积比优选为12:1；本发明经第一洗脱阶段得到化合物12和含化合物16的粗组分。所述第二洗脱阶段优选以石油醚-乙酸乙酯-乙酸为洗脱剂，所述洗脱剂中石油醚、乙酸乙酯和乙酸的体积比优选为5:2:0.01；本发明经第二洗脱阶段将含化合物16的粗组分进行纯化，得到化合物16。
得到Fr.2-3-2部分后，本发明将Fr.2-3-2部分依次进行第九正相硅胶柱层析分离和第四Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物4。在本发明中，所述第九正相硅胶柱层析分离优选以氯仿-乙酸乙酯为洗脱剂，所述洗脱剂中氯仿和乙酸乙酯的体积比优选为20:1。在本发明中，所述第四Sephadex LH-20柱层析纯化优选以丙酮为洗脱剂。
得到Fr.2-3-4部分后，本发明将Fr.2-3-4部分依次进行第三反相C18柱层析分离、第十正相硅胶柱层析分离和第五Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物11、化合物17、化合物6和化合物7。在本发明中，所述第三反相C18柱层析分离优选以甲醇-水为洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为4.5:5.5、5:5、6:4和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱5个柱体积。本发明优选采用TLC监测，将甲醇和水体积比为4.5:5.5和5:5的流份合并经减压浓缩，之后进行第十正相硅胶柱层析分离。在本发明中，所述第十正相硅胶柱层析分离优选以氯仿和乙酸乙酯为洗脱剂，洗脱方式优选为等度洗脱，按氯仿和乙酸乙酯的体积比为30:1和35:1依次进行等度洗脱，得到含化合物6和化合物7的粗组分(记为粗组分a)，以及含化合物11和化合物17的粗组分(记为粗组分b)。本发明优选将粗组分a和粗组分b分别反复进行第十正相硅胶柱层析分离，以进一步分离化合物，之后再分别进行后续第五Sephadex LH-20柱层析纯化；具体的，粗组分a和粗组分b分别进行所述第十正相硅胶柱层析分离的次数优选为2～3。在本发明中，所述第五Sephadex LH-20柱层析纯化优选以丙酮为洗脱剂。
得到Fr.2-3-5部分后，本发明将Fr.2-3-5部分进行第四反相C18柱层析分离，得到化合物9。在本发明中，所述第四反相C18柱层析分离优选以甲醇-水为洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，所述梯度洗脱包括依次进行的6个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为4.5:5.5、5:5、5.5:4.5、6:4、8:2和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明优选将洗脱剂中甲醇和水体积比为4.5:5.5、5:5和5.5:4.5对应的流份合并，经减压浓缩得到白色结晶，即为化合物9。
下面对B部分和C部分需要进行的相关分离纯化操作进行详细说明。
得到B部分后，本发明将B部分依次进行第三大孔树脂柱层析分离、第十一正相硅胶柱层析分离和第二半制备HPLC纯化，得到化合物3。在本发明中，所述第三大孔树脂柱层析分离优选以甲醇-水为洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，所述梯度洗脱包括依次进行的4个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为6:4、8:2、9:1和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明优选采用TLC监测，将甲醇和水体积比为6:4的流份经减压浓缩，之后进行第十一正相硅胶柱层析分离。在本发明中，所述第十一正相硅胶柱层析分离优选包括依次进行的两个洗脱阶段，其中，第一洗脱阶段优选以石油醚-丙酮为洗脱剂，所述洗脱剂中石油醚和丙酮的体积比优选为6:1；第二洗脱阶段优选以氯仿-丙酮为洗脱剂，所述洗脱剂中氯仿和丙酮的体积比优选为18:1。在本发明中，所述第二半制备HPLC纯化的操作条件优选与第一半制备HPLC纯化的操作条件一致，在此不再赘述；所述化合物3保留时间为13.7min。
得到C部分后，本发明将C部分依次进行第二MCI反相柱层析分离、第十二正相硅胶柱层析分离、第五反相C18柱层析分离、第十三正相硅胶柱层析分离和第六Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物2和化合物5。在本发明中，所述第二MCI反相柱层析分离优选以甲醇-水为洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，所述梯度洗脱包括依次进行的7个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明优选将洗脱剂中甲醇和水体积比为6:4和7:3对应的流份合并，经减压浓缩，将所得混合物组分进行第十二正相硅胶柱层析分离。在本发明中，所述第十二正相硅胶柱层析分离优选以氯仿-丙酮为洗脱剂，所述洗脱剂中氯仿和丙酮的体积比优选为30:1。在本发明中，所述第五反相C18柱层析分离优选以甲醇-水为洗脱剂，洗脱方式优选为梯度洗脱，所述梯度洗脱包括依次进行的6个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成优选依次为4.5:5.5、5:5、5.5:4.5、6:4、8:2和1:0。在本发明中，每个梯度优选洗脱4个柱体积。本发明优选采用TLC监测，将甲醇和水体积比为4.5:5.5和5:5对应的流份合并后经减压浓缩，之后进行第十三正相硅胶柱层析分离。在本发明中，所述第十三正相硅胶柱层析分离优选包括依次进行的两个洗脱阶段，其中，第一洗脱阶段优选以石油醚-丙酮为洗脱剂，所述洗脱剂中石油醚和丙酮的体积比优选为5:1；第二洗脱阶段优选以氯仿-乙酸乙酯为洗脱剂，所述洗脱剂中氯仿和乙酸乙酯的体积比优选为25:1。本发明优选采用TLC监测，将监测结果相同的流份合并，经减压浓缩后得到含化合物2和化合物5的粗组分，将所述含化合物2和化合物5的粗组分进行第六Sephadex LH-20柱层析纯化。在本发明中，所述第六Sephadex LH-20柱层析纯化优选以丙酮为洗脱剂。
本发明采用一维、二维核磁共振、常规和高分辨率质谱和/或X-单晶衍射等波谱学方法测试上述步骤提取所得物质，获得其波谱数据，确定化学结构确实为式1～22所示结构。
本发明提供了一种含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物，包括活性成分和药剂学上可接受的辅料，所述活性成分为上述技术方案所述火把花烷二倍半萜化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的火把花烷二倍半萜化合物。在本发明中，所述药物组合物中活性成分的含量优选为0.1～99.5wt％，进一步优选为0.5～95wt％。本发明对所述药剂学上可接受的辅料的具体种类没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的辅料即可，其物态可以为固体、半固体或液体，具体可以为乳糖、淀粉和硬脂酸镁中的一种或几种。
本发明提供了火把花烷二倍半萜化合物、含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物或火把花总提物在制备抗炎药物或免疫抑制药物中的应用，
其中，所述火把花烷二倍半萜化合物为上述技术方案所述火把花烷二倍半萜化合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的火把花烷二倍半萜化合物；
所述含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物为上述技术方案所述的药物组合物；
所述火把花总提物的制备方法包括以下步骤：
采用有机溶剂对火把花的地上部分进行浸提，得到粗提物；所述有机溶剂为甲醇、体积分数≥80％的甲醇水溶液、乙醇、体积分数≥80％的乙醇水溶液、丙酮或体积分数≥70％的丙酮水溶液；将所述粗提物与水混合，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行萃取，将所得萃取液经减压浓缩，所得乙酸乙酯浸膏为火把花总提物。
在本发明中，所述火把花总提物优选参照上述技术方案中制备火把花烷二倍半萜化合物时获取乙酸乙酯浸膏的方法制备得到，在此不再赘述。本发明中所述火把花总提物中含有化合物1～22，其具有很好的抗炎和免疫抑制活性。
在本发明中，所述抗炎药物或免疫抑制药物可以通过口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于患者。本发明对所述抗炎药物或免疫抑制药物的剂型没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的剂型即可，具体的，用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂或胶囊，制成液体制剂如油悬浮剂、糖浆或酏剂；用于肠胃外给药时，可将其制成注射剂；优选的形式为片剂、胶囊或注射剂。本发明对上述各剂型抗炎药物或免疫抑制药物的制备方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。
本发明中抗炎药物或免疫抑制药物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优选0.1～5mg/kg体重；可以一次或多次施用。
本发明对化合物1～22和火把花总提物进行了抗炎及免疫抑制活性筛选，结果显示其对CD3和CD28单克隆抗体诱导的小鼠T细胞生成的细胞因子IFN-γ具有明显或一定的抑制活性，说明这类化合物具有抗炎及免疫抑制作用。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
将火把花(产地为云南省临沧市凤庆县)地上部分(包括叶、花和嫩茎)阴干，得到干燥火把花，粉碎，得到粒度为30目的粉粹物料(11.0kg)，在室温(25℃)条件下，采用甲醇对所述粉粹物料进行3次浸提，每次浸提时甲醇的用量为25L，每次浸提的时间为12h，每次浸提后经过滤，将所得滤饼与甲醇混合后进行下一次浸提；将3次浸提并过滤的滤液合并后进行减压浓缩，得到粗提物2kg；
将所述粗提物与3L水混合，在室温条件下，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行3次萃取，每次萃取时乙酸乙酯的用量为3L，每次萃取后分离出有机相，将所得水相与乙酸乙酯混合后进行下一次萃取；将3次萃取的有机相合并后进行减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏1.2kg，即火把花总提物1.2kg；
将所述乙酸乙酯浸膏用1.5倍质量的甲醇溶解后再用80～100目硅胶拌样，用200～300目硅胶装柱后进行正相硅胶柱层析分离[洗脱剂氯仿-丙酮依次按体积比1:0、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1梯度洗脱(下述涉及的洗脱剂为混合物时，均按体积比计)，每个梯度洗脱5个柱体积]，并用TLC监测，将监测结果相同的流份合并，最终依次得到6个流份，各流份经减压浓缩依次记为A～F部分；
将A部分[氯仿-丙酮(1:0)流份，437.4g]进行大孔树脂柱层析分离(甲醇-水依次按8:2、9:1和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，并用TLC监测，将监测结果相同的流份合并，最终依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.1、Fr.2和Fr.3部分；
将所述Fr.1部分[甲醇-水(8:2)流份，19g]反复进行正相硅胶柱层析分离(200～300目硅胶拌样及装柱，石油醚-乙酸乙酯35:1)，并用TLC监测富集含化合物21和化合物22的粗组分，最后以丙酮为洗脱剂进行Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物21(6.4mg)和化合物22(6.5mg)；
将所述Fr.2部分[甲醇-水(9:1)流份，149.4g]进行正相硅胶柱层析分离(石油醚-氯仿1:1)，并用TLC监测，将监测结果相同的流份合并，最终依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分；
将所述Fr.2-1部分(100g)进行大孔树脂柱层析分离(甲醇-水依次按6:4、7:3、8:2、9:1和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，减压浓缩甲醇-水(6:4)流份，为Fr.2-1-1部分；减压浓缩甲醇-水(7:3)流份，为Fr.2-1-2部分；减压浓缩甲醇-水(8:2)流份，为Fr.2-1-3部分；减压浓缩甲醇-水(9:1)和(1:0)流份，合并为Fr.2-1-4部分；
将所述Fr.2-1-1部分(5.5g)进行正相硅胶柱层析分离(石油醚-乙酸乙酯依次按15:1、18:1和20:1进行等度洗脱)，并用TLC监测，将监测结果相同的流份合并后分别进行减压浓缩，分别得到含化合物14的粗组分(98.0mg，记为粗组分a)和含化合物20的粗组分(69.5mg，记为粗组分b)，将所述粗组分a和粗组分b分别进行半制备HPLC纯化，分别得到化合物14(4.2mg)和化合物20(2.0mg)；其中，进行所述半制备HPLC纯化时，流动相为乙腈-水(6:4)，流速为3mL/min，紫外检测波长为210nm，色谱柱为ZORBAX SB-C18，色谱柱规格为5μm、9.4×250mm，化合物14保留时间为10.6min，化合物20保留时间为12.6min；
将所述Fr.2-1-2部分(12.0g)进行正相硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯依次按20:1和22:1进行等度洗脱)，得到化合物8(34.4mg)和化合物15(34.4mg)；
将所述Fr.2-1-4部分(60.1g)反复进行正相硅胶柱层析分离(石油醚-乙酸乙酯依次按25:1和30:1进行等度洗脱)，之后进行反相C18柱层析分离(甲醇-水依次按4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱5个柱体积)，并用TLC监测，将甲醇-水(4:6)和(5:5)中监测结果相同的流份合并，经减压浓缩得含化合物10的粗组分a，将甲醇-水(7:3)流份经减压浓缩，得到含化合物13的粗组分b，将甲醇-水(8:2)和(9:1)流份合并，经减压浓缩得到含化合物18和化合物19的粗组分c，最后将粗组分a～c分别以丙酮为洗脱剂进行Sephadex LH-20柱层析纯化，分别得到化合物10(9.9mg)、化合物13(271mg)、化合物18(37.3mg)和化合物19(17.1mg)；
将所述Fr.2-2部分(17.1g)进行MCI反相柱层析分离(甲醇-水依次按体积比7:3、8:2、9:1和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，并用TLC监测，将甲醇-水(8:2)、(9:1)和(1:0)流份合并经减压浓缩，得到含化合物1的粗组分，之后反复进行正相硅胶柱层析分离(以石油醚-乙酸乙酯依次按30:1和25:1进行等度洗脱)，最后以丙酮为洗脱剂进行Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物1(6.3mg)；
将所述Fr.2-3部分(30.0g)进行反相C18柱层析分离(以甲醇-水依次按5:5、6:4、7:3、8:2和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，并用TLC监测，将监测结果相同的流份合并，最终依次得到5个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-3-1部分、Fr.2-3-2部分、Fr-2-3-3部分、Fr.2-3-4部分和Fr.2-3-5部分；
将所述Fr.2-3-1部分(5.6g)进行正相硅胶柱层析分离(石油醚-丙酮12:1)，得到化合物12(34.1mg)和含化合物16的粗组分，随后以石油醚-乙酸乙酯-乙酸(5:2:0.01)为洗脱剂将所述含化合物16的粗组分进行正相硅胶柱层析分离，得到化合物16(64.3mg)；
将所述Fr.2-3-2部分(5.0g)进行中压正相硅胶柱层析分离(300～400目硅胶装柱；所用中压柱的规格为60×4.5cm，id；流速为8mL/min；洗脱剂氯仿-乙酸乙酯20:1)，之后以丙酮为洗脱剂进行Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物4(70.0mg)；
将所述Fr.2-3-4部分(3.5g)进行反相C18柱层析分离(甲醇-水依次按4.5:5.5、5:5、6:4和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱5个柱体积)，并用TLC监测，合并甲醇-水(4.5:5.5)和(5:5)流份，之后反复进行正相硅胶柱层析(氯仿-乙酸乙酯依次按30:1和35:1进行等度洗脱)，得到含化合物6和化合物7的粗组分(记为粗组分a)，以及含化合物11和化合物17的粗组分(记为粗组分b)；最后将所述粗组分a和粗组分b分别以丙酮为洗脱剂进行Sephadex LH-20柱层析纯化，分别得到一对差向异构体化合物6(120mg)和化合物7(130mg)，以及化合物11(11.7mg)和化合物17(26.8mg)；
将所述Fr.2-3-5部分(15g)进行反相C18柱层析分离(甲醇-水依次按4.5:5.5、5:5、5.5:4.5、6:4、8:2和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，并用TLC监测，合并甲醇-水(4.5:5.5)、(5:5)和(5.5:4.5)流份，经减压浓缩得到白色结晶，即为化合物9(482.7mg)；
将B部分[氯仿-丙酮(9:1)流份，152.0g]进行大孔树脂柱层析分离(甲醇-水依次按6:4、8:2、9:1和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，并用TLC监测，将甲醇-水(6:4)流份经减压浓缩后进行正相硅胶柱层析分离(石油醚-丙酮6:1和氯仿-丙酮18:1依次进行等度洗脱)，将所得流份经减压浓缩后进行半制备HPLC纯化，得到化合物3(2.1mg)；其中，进行所述半制备HPLC纯化时，流动相为乙腈-水(6:4)，流速3mL/min，紫外检测波长为210nm，色谱柱为ZORBAX SB-C18，色谱柱规格为5μm、9.4×250mm，化合物3保留时间为13.7min；
将C部分[氯仿-丙酮(8:2)流份，116.8g]进行MCI反相柱层析分离(以甲醇-水依次按4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)；将甲醇-水(6:4)和(7:3)流份合并，经减压浓缩，将所得混合物组分(30.0g)进行正相硅胶柱层析分离(氯仿-丙酮30:1)，之后进行反相C18柱层析(以甲醇-水依次按4.5:5.5、5:5、5.5:4.5、6:4、8:2和1:0进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积)，并用TLC监测，将甲醇-水(4.5:5.5)和(5:5)流份中监测结果相同的流份合并，经减压浓缩后进行正相硅胶柱层析分离(石油醚-丙酮5:1和氯仿-乙酸乙酯25:1依次进行等度洗脱)，并用TLC监测，将监测结果相同的流份合并，经减压浓缩后得到含化合物2和化合物5的粗组分，最后以丙酮为洗脱剂将该粗组分进行Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物2(14.9mg)和化合物5(28.6mg)。
本发明中化合物1～22的物理和光谱数据具体如下：
化合物1：无色油状；[α]D 23+42.1(c 0.3,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)202(3.08),240(3.07),332(2.45)nm；IR(KBr)νmax 3440,2964,2934,2875,1757,1739,1677,1635,1452,1377,1239,1024,947,604,572cm-1；EIMS m/z440[M]+(1),330(44),271(90),229(62),98(60)；HREIMS m/z 440.2563(calcd for C27H36O5,440.2563).1H和13C NMR数据见表1和2。
化合物2：针状结晶；[α]D 20+41.7(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)275(3.10),254(3.12)nm；IR(KBr)νmax 3449,2960,2928,1691,1672,1453,662cm-1；EIMS m/z 428[M]+(6),306(32),305(100),287(8),245(7),122(10)；HREIMS m/z 428.2210(calcd forC25H32O6,428.2199).1H和13C NMR数据见表1和2。
化合物3：无色油状；[α]D 22–28.0(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)210(3.48),242(3.24)nm；IR(KBr)νmax 3441,2968,2929,1760,1735,1446,1377,1360,1324,1240,1025cm-1；EIMS m/z 472[M]+(15),457(31),428(20),397(25),347(100),287(42)；HREIMSm/z 472.2466(calcd for C27H36O7,472.2461).1H和13C NMR数据见表1和2。
化合物4：无色油状；[α]D 23-28.2(c 0.3,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)200(3.15),274(3.50)nm；IR(KBr)νmax 3442,2957,2930,1754,1686,1631,1611,1454,1378,1207,1077,1026,941cm-1；EIMS m/z 428[M]+(1),414(10),319(39),219(47),179(50),87(100)；HREIMS m/z 428.2190(calcd for C25H32O6,428.2199).1H和13C NMR数据见表1和2。
化合物5：无色油状；[α]D 21-15.9(c 0.2,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)281(3.57)nm；IR(KBr)νmax 3440,2956,2926,2869,1686,1454,1338,1312,1207,1081,1026,990,581cm-1；EIMS m/z 428[M]+(10),305(100),287(10),122(34),109(43),83(60)；HREIMS m/z 428.2202(calcd for C25H32O6,428.2199).1H和13C NMR数据见表1和2。
化合物6：无色针状结晶；[α]D 21–12.9(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)212(2.21)nm；IR(KBr)νmax 3446,2967,2930,1781,1760,1679,1636,1227,1023,940cm-1；EIMSm/z 490[M]+(4),430(10),346(7),320(55),307(58),236(100),179(83),167(82)；HREIMSm/z 490.2567(calcd for C27H38O8,490.2567).1H和13C NMR数据见表3和4。
化合物7：无色油状；[α]D 20+5.3(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)211(3.33)nm；IR(KBr)νmax 3440,2956,2926,1761,1684,1635,1437,1384,1208,1025cm-1；EIMS m/z 490[M]+(5),430(12),346(18),320(72),307(52),264(25),236(100),179(99),167(80)；HREIMS m/z 490.2572(calcd for C27H38O8,490.2567).1H和13C NMR数据见表3和4。
化合物8：无色晶体；[α]D 23+28.0(c 0.4,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)208(3.25)nm；IR(KBr)νmax 3428,2955,2928,2869,1683,1466,1384,1374,1312,1206,1025,987,581cm-1；EIMS m/z 431[M]+(88),307(49),289(20),168(41),150(50),110(99)；HREIMS m/z 431.2668(calcd for C25H37NO5,431.2672).1H和13C NMR数据见表3和4。
化合物9：无色油状；[α]D 23+12.3(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)207(2.14)nm；IR(KBr)νmax 3440,2956,2923,1680,1631,1462,1384,1206,1083,1025,988cm-1；EIMSm/z 431[M]+(100),403(8),347(24),307(40),168(55),110(65)；HREIMS m/z 431.2670(calcd for C25H37NO5,431.2672).1H和13C NMR数据见表3和4。
化合物10：无色油状；[α]D 23+24.4(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)206(3.39)nm；IR(KBr)νmax 3430,2956,2929,2869,1683,1453,1379,1207,1080,1026,990cm-1；EIMSm/z 429[M]+(65),401(8),305(98),287(6),109(25),83(45)；HREIMS m/z 429.2516(calcd for C25H35NO5,429.2515).1H和13CNMR数据见表3和4。
化合物11：无色油状；[α]D 23+4.9(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)205(3.49)nm；IR(KBr)νmax 3440,2956,2927,2869,1683,1632,1453,1410,1382,1207,1121,1080,1026cm-1；EIMS m/z 429[M]+(18),305(98),287(6),119(21)；HREIMS m/z 429.2518(calcdfor C25H35NO5,429.2515).1H和13CNMR数据见表5和6。
化合物12：无色油状；[α]D 23-6.7(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)200(2.86),280(3.26)nm；IR(KBr)νmax 3439,2957,2927,2870,1688,1454,1380,1327,1207,1080,1026,991cm-1；EIMS m/z 427[M]+(5),305(99),287(8),109(62),83(68)；HREIMS m/z427.2366(calcd for C25H33NO5,427.2359).1H和13C NMR数据见表5和6。
化合物13：无色油状；[α]D 23+21.9(c 0.2,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)221(3.05)nm；IR(KBr)νmax 3423,2956,2924,2870,1711,1671,1640,1454,1381,1327,1327,1024,988cm-1；EIMS m/z 430[M]+(1),414(30),329(38),319(88),305(100),219(85),179(62)；HREIMS m/z 430.2363(calcd for C25H34O6,430.2355).1H和13C NMR数据见表5和6。
化合物14：无色块状晶体；[α]D 22+35.2(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)204(3.52),238(3.24)nm；IR(KBr)νmax 2952,2917,1769,1694,1652,1380,1223,1189,1089,1023,910cm-1；EIMS m/z 428[M]+(76),410(32),345(25),328(28),318(100),218(27)；HREIMS m/z 428.2204(calcd for C25H32O6,428.2199).1H和13C NMR数据见表5和6。
化合物15：无色油状；[α]D 23+19.0(c 0.1,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)202(2.36),287(1.19)nm；IR(KBr)νmax 3519,3406,2955,2933,2871,1674,1633,1462,1403,1197,1082,1025,1006,992cm-1；EIMS m/z 352[M]+(8),305(45),179(21),109(55),83(99)；HREIMS m/z 352.2251(calcd for C20H32O5,352.2250).1H和13C NMR数据见表5和6。
化合物16：无色油状；[α]D 23+19.2(c 0.2,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)201(2.40)nm；IR(KBr)νmax 3440,2956,2928,2870,1690,1632,1462,1454,1402,1377,1269,1205,1083,1025,990cm-1；EIMS m/z 380[M]+(3),320(16),277(100),204(62),81(61)；HREIMSm/z 380.2204(calcd for C21H32O6,380.2199).1H和13C NMR数据见表7和8。
化合物17：无色油状；[α]D 23+18.5(c 0.2,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)201(2.14)nm；IR(KBr)νmax 3432,2956,2927,2870,1687,1631,1454,1379,1208,1026,990cm-1；EIMSm/z 350[M]+(18),305(20),262(23),179(75),113(84),83(100)；HREIMS m/z 350.2090(calcd for C20H30O5,350.2093).1H和13CNMR数据见表7和8。
化合物18：无色油状；[α]D 23-1.1(c 0.4,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)200(1.56),225(1.26)nm；IR(KBr)νmax 3433,2957,2926,1687,1630,1453,1409,1383,1311,1207,1118,1081,1027,991,579cm-1；EIMS m/z 378[M]+(7),323(8),262(31),225(30),179(50),83(100)；HREIMS m/z 378.2041(calcd for C21H30O6,378.2042).1H和13C NMR数据见表7和8。
化合物19：无色块状晶体；[α]D 22-9.7(c 0.3,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)201(2.56)nm；IR(KBr)νmax 3442,2957,2930,2869,1699,1632,1454,1381,1201,1118,1021cm-1；EIMS m/z 348[M]+(7),304(9),265(28),248(35),179(38),140(72),83(100)；HREIMSm/z 348.1946(calcd for C20H28O5,348.1946).1H和13C NMR数据见表7和8。
化合物20：无色油状；[α]D 22+15.8(c 0.2,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)216(3.26),244(3.25)nm；IR(KBr)νmax 3442,2965,2934,2875,1759,1681,1453,1377,1238,1024,945,605cm-1；EIMS m/z 400[M]+(30),292(28),232(100),177(81),95(60)；HREIMS m/z400.1927(calcd for C23H28O6,418.1886).1H和13C NMR数据见表9。
化合物21：无色油状；EIMS m/z458[M]+(8),412(30),396(31),329(30),305(38),203(99),167(78),109(86)；HREIMS m/z 458.2674(calcd for C27H38O6,458.2668).1H和13CNMR数据见表9。
化合物22：无色油状；[α]D 23+69.9(c 0.2,CH3OH)；UV(CH3OH)λmax(logε)201(3.22),238(3.24)nm；IR(KBr)νmax 3442,2959,2930,2872,1738,1710,1673,1375,1237,1025cm-1；EIMS m/z 460[M]+(2),412(30),396(31),329(30),305(38),203(99),167(78),109(86)；HREIMS m/z 460.2826(calcd for C27H40O6,460.2825).1H和13C NMR数据见表9。
表1化合物1～4的氢谱数据(acetone-d6,δH[ppm],J[Hz],400MHz)
Figure BDA0002976686070000211
Figure BDA0002976686070000221
表2化合物1～4的碳谱数据(acetone-d6,δC[ppm],100MHz)
No. 1 2 3 4
1 23.1q 75.1t 77.4d 19.0q
2 26.1d 33.4d 33.4t 8.6d
3 110.3d 44.8t 38.4t 18.6d
4 155.1s 118.8s 116.8s 109.3s
5 156.4s 160.3s 161.1s 82.5s
6 26.5d 27.5d 26.7d 32.9d
7 49.9d 53.6d 50.7d 46.0d
8 79.6d 76.4d 78.6d 78.2d
9 40.4t 43.4t 40.9t 42.7t
10 36.6d 36.2d 37.8d 38.3d
11 53.0d 52.1d 53.1d 54.4d
12 195.7s 197.5s 196.8s 212.2s
13 137.6s 139.2s 139.5s 64.7d
14 90.5s 88.0s 86.8s 86.0s
15 38.2t 38.2t 33.4t 41.7t
16 20.9t 107.7d 27.6t 109.1d
17 151.2s 142.6s 84.8d 152.9s
18 114.2s 139.5s 169.9s 156.0s
19 113.6d 121.1d 117.4d 116.7d
20 140.7d 171.8s 173.0s 169.4s
21 23.2q 16.6q 23.2q 12.4t
22 23.1q 22.7q 24.0q 15.3q
23 22.1q 21.8q 21.6q 23.9q
24 25.2q 24.7q 26.9q 26.9q
25 9.7q 11.5q 13.9q 11.7q
OAc 170.5s 171.3s
21.1q 21.8q
表3化合物5～9的氢谱数据(acetone-d6,δH[ppm],J[Hz],400MHz)
Figure BDA0002976686070000222
Figure BDA0002976686070000231
表4化合物5～9的碳谱数据(acetone-d6,δC[ppm],100MHz)
No. 5 6 7 8 9
1 18.2q 24.4q 24.4q 24.4q 24.4q
2 8.8d 23.8d 23.9d 24.0d 23.9d
3 19.0d 35.5t 35.7t 35.8t 35.8t
4 108.3s 110.5s 110.5s 110.4s 110.5s
5 81.8s 82.1s 82.2s 82.2s 82.0s
6 32.5d 32.7d 32.7d 32.8d 32.8d
7 45.9d 45.8d 45.8d 45.9d 45.8d
8 78.0d 78.1d 78.1d 78.1d 78.1d
9 42.1t 42.5t 42.5t 42.6t 42.5t
10 37.4d 38.1d 38.1d 38.2d 38.1d
11 53.6d 54.5d 54.5d 54.6d 54.5d
12 211.2s 212.6s 212.7s 212.8s 212.8s
13 63.6d 65.0d 64.8d 65.2d 65.5d
14 85.7s 85.6s 85.7s 86.3s 86.4s
15 42.9t 37.1t 37.4t 39.2t 40.8t
16 106.9d 31.1t 31.7t 27.2t 28.3t
17 142.8s 109.0s 108.8s 61.9d 62.4d
18 148.4s 165.7s 165.8s 162.3s 163.3s
19 120.8d 120.1d 120.0d 123.6d 122.8d
20 171.1s 170.0s 169.9s 174.1s 174.7s
21 12.5t 24.5q 24.5q 24.5q 24.5q
22 15.3q 15.4q 15.4q 15.5q 15.6q
23 23.9q 23.9q 23.9q 23.9q 23.9q
24 26.9q 26.1q 26.3q 26.3q 26.1q
25 11.8q 12.4q 12.5q 14.2q 14.2q
表5化合物10～14的氢谱数据(acetone-d6,δH[ppm],J[Hz],400MHz)
Figure BDA0002976686070000232
Figure BDA0002976686070000241
表6化合物10～14的碳谱数据(acetone-d6,δC[ppm],100MHz)
No. 10 11 12 13 14
1 19.0q 19.0q 19.0q 19.1q 19.0q
2 8.7d 8.8d 9.0d 8.9d 9.6d
3 18.8d 18.8d 18.8d 18.8d 19.0d
4 109.0s 109.0s 109.1s 108.8s 108.8s
5 82.3s 82.3s 82.7s 82.7s 89.0s
6 32.8d 32.9d 32.8d 32.7d 32.1d
7 46.0d 46.0d 46.0d 45.9d 45.5d
8 78.2d 78.2d 78.2d 78.3d 77.9d
9 42.6t 42.6t 42.6t 42.7t 42.2t
10 38.2d 38.2d 38.3d 38.3d 38.3d
11 54.4d 54.4d 54.5d 54.6d 54.0d
12 212.7s 212.5s 212.0s 214.6s 209.9s
13 65.2d 65.3d 64.3d 65.8d 59.9d
14 86.3s 86.4s 86.6s 86.2s 86.3s
15 39.2t 39.9t 42.9t 44.5t 38.9t
16 27.2t 27.9t 107.1d 53.4d 30.7t
17 61.8d 61.8d 142.2s 76.0d 109.9s
18 162.2s 162.3s 149.1s 157.3d 170.7s
19 123.5d 123.3d 121.8d 141.6s 116.3d
20 174.1s 173.9s 171.6s 207.6s 170.4s
21 12.4t 12.4t 12.4t 12.3t 13.2t
22 15.3q 15.2q 15.3q 15.3q 15.4q
23 23.9q 23.9q 23.8q 24.0q 23.7q
24 26.1q 26.3q 27.0q 27.7q 28.0q
25 14.3q 14.4q 11.8q 10.1q 13.0q
表7化合物15～18的氢谱数据(acetone-d6,δH[ppm],J[Hz],400MHz)
Figure BDA0002976686070000251
表8化合物15-18的碳谱数据(acetone-d6,δC[ppm],100MHz)
No. 15 16 17 18
1 19.0q 19.0q 24.4q 24.2q
2 8.7d 8.8d 23.9d 23.8d
3 18.8d 18.7d 35.8t 35.6t
4 109.0s 109.0s 110.5s 110.3s
5 82.4s 82.7s 82.2s 82.4s
6 32.8d 32.7d 32.5d 32.4d
7 46.0d 45.9d 45.7d 45.6d
8 78.2d 78.0d 78.1d 78.1d
9 42.7t 42.6t 42.5t 42.4t
10 38.1d 38.2d 38.1d 38.1d
11 54.5d 54.7d 54.5d 54.4d
12 212.8s 212.7s 213.0s 212.5s
13 65.0d 65.4d 65.1d 65.9d
14 85.8s 85.7s 85.7s 86.4s
15 47.5t 39.7t 47.5t 39.7t
16 59.2t 29.8t 59.3t 29.6t
17 - 175.3s - 175.8s
21 12.3t 12.3t 24.5q 24.5q
22 15.3q 15.3q 15.4q 15.4q
23 23.9q 23.9q 23.9q 23.8q
24 27.5q 26.0q 27.6q 26.2q
表9化合物19～22的氢谱(acetone-d6,δH[ppm],J[Hz],400MHz)
Figure BDA0002976686070000261
表10化合物19～22的碳谱数据(acetone-d6,δC[ppm],100MHz)
Figure BDA0002976686070000262
Figure BDA0002976686070000271
根据表1～10中波谱数据，证明本发明提供的化合物1～22确实具有式1～11所示结构。
实施例2
抗炎和免疫抑制活性测试，包括以下步骤：
将实施例1中化合物1～22及火把花总提物分别进行CD3和CD28单克隆抗体诱导的小鼠T细胞生成细胞因子的抑制活性测试，具体方法为：
首先从6～8周雌性C57BL/6小鼠无菌分离脾细胞，并用尼龙毛柱法分离获得T细胞，然后接种T细胞(4×105/well)于96孔板(包被有浓度为5μg/mL的CD3单抗)，同时各组分别加入浓度为2μg/mL的CD28单抗以及各浓度的化合物1～22及火把花总提物(具体可以先用DMSO配制成存储液，然后用培养基稀释至相应浓度)，置37℃/5％CO2培养箱中培养；培养48h后收集细胞上清，采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)检测上清中干扰素γ(interferonγ，IFN-γ)分泌情况，同时设置环孢菌素(cyclosporineA，CsA)阳性对照组、DMSO阴性对照组、未刺激组及空白对照组；计算化合物对IFN-γ的抑制活性，并应用GraphPad Prism 6.0软件分析抑制率或半数抑制浓度IC50。具体结果见表11。
表11化合物1～22及火把花总提物对CD3和CD28单克隆抗体刺激小鼠T细胞生成细胞因子IFN-γ的抑制活性
Figure BDA0002976686070000272
Figure BDA0002976686070000281
a当抑制率高于50％时测定其IC50；
b测抑制率的化合物浓度为12.5μg/mL；
c环孢菌素(cyclosporineA,CsA)，阳性对照；
d测抑制率的化合物浓度为1μM。
由表11可知，实施例1的化合物1～22和火把花总提物对CD3和CD28单克隆抗体诱导小鼠T细胞生成IFN-γ有明显或一定抑制作用，说明这类化合物具有抗炎及免疫抑制作用。同时，这类化合物与活性之间具有一定的构效关系，为今后的化合物结构优化及改造提供了依据。
实施例3
片剂配方：实施例1提取所得任一种火把花二倍半萜类化合物10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg；
制备方法：将所述火把花二倍半萜类化合物、乳糖和淀粉混合，用丙二醇均匀湿润，将湿润后的混合物过筛后干燥，将干燥后的混合物再次过筛后与硬脂酸镁混合，然后将混合物压片，每片重250mg，其中火把花二倍半萜类化合物含量为10mg。
实施例4
胶囊剂配方：实施例1提取所得任一种火把花二倍半萜类化合物10mg，乳糖187mg，硬脂酸镁3mg；
制备方法：将所述火把花二倍半萜类化合物、乳糖与硬脂酸镁混合，过筛后装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，其中火把花二倍半萜类化合物含量为10mg。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.火把花烷二倍半萜化合物，其特征在于，为 式1~7、13~17、20和22所示结构中的任意一种：
Figure 756787DEST_PATH_IMAGE001
式1，
Figure 877189DEST_PATH_IMAGE002
式2，
Figure 47139DEST_PATH_IMAGE003
式3，
Figure 380032DEST_PATH_IMAGE004
式4，
Figure 148399DEST_PATH_IMAGE005
式5，
Figure 236441DEST_PATH_IMAGE006
式6，
Figure 441157DEST_PATH_IMAGE007
式7，
Figure 295849DEST_PATH_IMAGE008
式13，
Figure 167990DEST_PATH_IMAGE009
式14，
Figure 426933DEST_PATH_IMAGE010
式15，
Figure 135258DEST_PATH_IMAGE011
式16，
Figure 278794DEST_PATH_IMAGE012
式17，
Figure 67759DEST_PATH_IMAGE013
式20，
Figure 153395DEST_PATH_IMAGE014
式22。
2.权利要求1所述火把花烷二倍半萜化合物的制备方法，具有式1~7、13~17、20和22所示结构化合物依次记为化合物1~7、13~17、20和22，其特征在于，包括以下步骤：
（1）采用有机溶剂对火把花的地上部分进行浸提，得到粗提物；所述有机溶剂为甲醇；
将所述粗提物与水混合，采用乙酸乙酯对所得粗提物水分散液进行萃取，将所得萃取液经减压浓缩，得到乙酸乙酯浸膏；
将所述乙酸乙酯浸膏进行第一正相硅胶柱层析分离，其中，所用洗脱剂为第一试剂与第二试剂的混合物，所述第一试剂为氯仿，所述第二试剂为丙酮，洗脱方式为梯度洗脱，依次得到6个流份，各流份经减压浓缩依次记为A~F部分；
（2）以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将A部分进行第一大孔树脂柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.1、Fr.2和Fr.3部分；
将Fr.1部分依次进行第二正相硅胶柱层析分离和第一Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物22；所述第二正相硅胶柱层析分离以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，所述第一Sephadex LH-20柱层析纯化以丙酮为洗脱剂；
以石油醚-氯仿为洗脱剂，将Fr.2部分进行第三正相硅胶柱层析分离，依次得到3个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1、Fr.2-2和Fr.2-3部分；
以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-1部分进行第二大孔树脂柱层析分离，依次得到4个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-1-1、Fr.2-1-2、Fr.2-1-3和Fr.2-1-4部分；
将Fr.2-1-1部分依次进行第四正相硅胶柱层析分离和第一半制备HPLC纯化，得到化合物14和化合物20；所述第四正相硅胶柱层析分离以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，所述第一半制备HPLC纯化以乙腈-水溶液为流动相；
将Fr.2-1-2部分进行第五正相硅胶柱层析分离，得到化合物15；所述第五正相硅胶柱层析分离以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂；
将Fr.2-1-4部分依次进行第六正相硅胶柱层析分离、第一反相C18柱层析分离和第二Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物13；所述第六正相硅胶柱层析分离以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，所述第一反相C18柱层析分离以甲醇-水洗脱剂，所述第二Sephadex LH-20柱层析纯化以丙酮为洗脱剂；
将Fr.2-2部分依次进行第一MCI反相柱层析分离、第七正相硅胶柱层析分离和第三Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物1；所述第一MCI反相柱层析分离以甲醇-水为洗脱剂，所述第七正相硅胶柱层析分离以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，所述第三Sephadex LH-20柱层析纯化以丙酮为洗脱剂；
以甲醇-水为洗脱剂，在梯度洗脱条件下将Fr.2-3部分进行第二反相C18柱层析分离，依次得到5个流份，各流份经减压浓缩依次记为Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分；
将Fr.2-3-1部分进行第八正相硅胶柱层析分离，得到化合物16；所述第八正相硅胶柱层析分离包括依次进行的两个洗脱阶段，其中第一洗脱阶段以石油醚-丙酮为洗脱剂，第二洗脱阶段以石油醚-乙酸乙酯-乙酸为洗脱剂；
将Fr.2-3-2部分依次进行第九正相硅胶柱层析分离和第四Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物4；所述第九正相硅胶柱层析分离以氯仿-乙酸乙酯为洗脱剂，所述第四Sephadex LH-20柱层析纯化以丙酮为洗脱剂；
将Fr.2-3-4部分依次进行第三反相C18柱层析分离、第十正相硅胶柱层析分离和第五Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物17、化合物6和化合物7；所述第三反相C18柱层析分离以甲醇-水为洗脱剂，所述第十正相硅胶柱层析分离以氯仿和乙酸乙酯为洗脱剂，所述第五Sephadex LH-20柱层析纯化以丙酮为洗脱剂；
（3）将B部分依次进行第三大孔树脂柱层析分离、第十一正相硅胶柱层析分离和第二半制备HPLC纯化，得到化合物3；所述第三大孔树脂柱层析分离以甲醇-水为洗脱剂；所述第十一正相硅胶柱层析分离包括依次进行的两个洗脱阶段，其中，第一洗脱阶段以石油醚-丙酮为洗脱剂，第二洗脱阶段以氯仿-丙酮为洗脱剂；所述第二半制备HPLC纯化以乙腈-水溶液为流动相；
（4）将C部分依次进行第二MCI反相柱层析分离、第十二正相硅胶柱层析分离、第五反相C18柱层析分离、第十三正相硅胶柱层析分离和第六Sephadex LH-20柱层析纯化，得到化合物2和化合物5；所述第二MCI反相柱层析分离以甲醇-水为洗脱剂；所述第十二正相硅胶柱层析分离以氯仿-丙酮为洗脱剂；所述第五反相C18柱层析分离以甲醇-水为洗脱剂；所述第十三正相硅胶柱层析分离包括依次进行的两个洗脱阶段，其中，第一洗脱阶段以石油醚-丙酮为洗脱剂，第二洗脱阶段以氯仿-乙酸乙酯为洗脱剂；所述第六Sephadex LH-20柱层析纯化以丙酮为洗脱剂；
所述步骤（2）、步骤（3）和步骤（4）无时间顺序限定。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行所述步骤（1）中第一正相硅胶柱层析分离时，以氯仿-丙酮为洗脱剂，所述梯度洗脱包括依次进行的6个梯度，按氯仿与丙酮体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为1:0、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1，分别对应所述A~F部分。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行所述步骤（2）中第一大孔树脂柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的3个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为8:2、9:1和1:0，分别对应所述Fr.1、Fr.2和Fr.3部分。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行所述步骤（2）中第三正相硅胶柱层析分离时，所述洗脱剂中石油醚和氯仿的体积比为1:1。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行所述步骤（2）中第二大孔树脂柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的5个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为6:4、7:3、8:2、9:1和1:0；其中，洗脱剂中甲醇和水体积比为6:4时的流份对应所述Fr.2-1-1部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为7:3时的流份对应所述Fr.2-1-2部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为8:2时的流份对应所述Fr.2-1-3部分，洗脱剂中甲醇和水体积比为9:1和1:0时的流份对应所述Fr.2-1-4部分。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行所述步骤（2）中第二反相C18柱层析分离时，所述梯度洗脱包括依次进行的5个梯度，按甲醇和水的体积比，每个梯度中洗脱剂的组成依次为5:5、6:4、7:3、8:2和1:0，分别对应所述Fr.2-3-1、Fr.2-3-2、Fr.2-3-3、Fr.2-3-4和Fr.2-3-5部分。
8.一种含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物，其特征在于，包括活性成分和药剂学上可接受的辅料，所述活性成分为权利要求1所述火把花烷二倍半萜化合物或权利要求2~7任一项所述制备方法制备得到的火把花烷二倍半萜化合物。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中活性成分的含量为0.1~99.5wt%。
10.火把花烷二倍半萜化合物或含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物在制备抗炎药物或免疫抑制药物中的应用，
其中，所述火把花烷二倍半萜化合物为权利要求1所述火把花烷二倍半萜化合物或权利要求2~7任一项所述制备方法制备得到的火把花烷二倍半萜化合物；
所述含火把花烷二倍半萜化合物的药物组合物为权利要求8或9所述的药物组合物。
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