JPH10234396A - 新規抗腫瘍剤およびソヤサポゲノールｂの製造法 - Google Patents
新規抗腫瘍剤およびソヤサポゲノールｂの製造法Info
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- JPH10234396A JPH10234396A JP9055459A JP5545997A JPH10234396A JP H10234396 A JPH10234396 A JP H10234396A JP 9055459 A JP9055459 A JP 9055459A JP 5545997 A JP5545997 A JP 5545997A JP H10234396 A JPH10234396 A JP H10234396A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】新規な抗腫瘍剤を提供する。
【解決手段】ソヤサポゲノールＢを有効成分とする抗腫
瘍剤。
瘍剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は生理活性物質ソヤサポゲ
ノールＢを有効成分とする抗腫瘍剤およびソヤサポゲノ
ールＢの新規製造法に関する。
ノールＢを有効成分とする抗腫瘍剤およびソヤサポゲノ
ールＢの新規製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ソヤサポゲノールＢは大豆（Ｇｌｙｃｉ
ｎｅ ｍａｘ ＭＥＲＲＩＬＬ）種子から単離・構造決
定され（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２４，１
２１−１２９，１９７６；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕ
ｌｌ．，３０，２２９４−２２９７，１９８２）、抗補
体活性及び血小板凝集抑制作用、腎炎、リューマチ、全
身性紅斑性狼瘡等の免疫疾患または自己免疫疾患の予防
及び治療薬並びに血栓症の予防及び治療薬として知られ
ている（特開昭６１−３７７４９）。また、血管新生及
び毛髪の成長の促進、皮膚の老化及び抜毛予防の効果が
知られている（ＦＲ２６６９２２５）。微生物によるソ
ヤサポゲノールＢの生産はストレプトミセス エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ｈ １０８２−Ｍ
Ｙ １５）のみが知られている（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｂｕｌｌ．，３２，１２８７−１２９３，１９８
４）。
ｎｅ ｍａｘ ＭＥＲＲＩＬＬ）種子から単離・構造決
定され（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２４，１
２１−１２９，１９７６；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕ
ｌｌ．，３０，２２９４−２２９７，１９８２）、抗補
体活性及び血小板凝集抑制作用、腎炎、リューマチ、全
身性紅斑性狼瘡等の免疫疾患または自己免疫疾患の予防
及び治療薬並びに血栓症の予防及び治療薬として知られ
ている（特開昭６１−３７７４９）。また、血管新生及
び毛髪の成長の促進、皮膚の老化及び抜毛予防の効果が
知られている（ＦＲ２６６９２２５）。微生物によるソ
ヤサポゲノールＢの生産はストレプトミセス エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ｈ １０８２−Ｍ
Ｙ １５）のみが知られている（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｂｕｌｌ．，３２，１２８７−１２９３，１９８
４）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来の癌患者に対する
化学療法にはアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、ス
テロイド剤、葉酸拮抗剤、植物アルカロイド等が知られ
ているが、まだ十分ではなく、従来の制癌剤では効果の
発現が難しいといわれている大腸癌、消化器癌、肺癌等
に効果を示す薬剤が望まれている。
化学療法にはアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、ス
テロイド剤、葉酸拮抗剤、植物アルカロイド等が知られ
ているが、まだ十分ではなく、従来の制癌剤では効果の
発現が難しいといわれている大腸癌、消化器癌、肺癌等
に効果を示す薬剤が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記作用を
示す抗腫瘍剤を見出すべく鋭意研究の結果、ソヤサポゲ
ノールＢが抗腫瘍活性を有する化合物である事、またペ
ニシリウム属に属しソヤサポゲノールＢ産生能を有する
微生物を培地中で培養し、ソヤサポゲノールＢを生成蓄
積せしめ、得られた培養液からそれを採取できる事を見
出し本発明に到達したものである。即ち、本発明は次の
（１）〜（３）に関する。
示す抗腫瘍剤を見出すべく鋭意研究の結果、ソヤサポゲ
ノールＢが抗腫瘍活性を有する化合物である事、またペ
ニシリウム属に属しソヤサポゲノールＢ産生能を有する
微生物を培地中で培養し、ソヤサポゲノールＢを生成蓄
積せしめ、得られた培養液からそれを採取できる事を見
出し本発明に到達したものである。即ち、本発明は次の
（１）〜（３）に関する。
【０００５】（１）生理活性物質ソヤサポゲノールＢを
有効成分とする抗腫瘍剤。 （２）ペニシリウム属に属し、生理活性物質ソヤサポゲ
ノールＢ産生能を有する微生物を培地中で培養し、培養
液中に生理活性物質ソヤサポゲノールＢを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とするソヤサポゲノール
Ｂの製造法。 （３）ペニシリウム エスピー ＮＦ０３９００株およ
びその変異株。
有効成分とする抗腫瘍剤。 （２）ペニシリウム属に属し、生理活性物質ソヤサポゲ
ノールＢ産生能を有する微生物を培地中で培養し、培養
液中に生理活性物質ソヤサポゲノールＢを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とするソヤサポゲノール
Ｂの製造法。 （３）ペニシリウム エスピー ＮＦ０３９００株およ
びその変異株。
【０００６】本発明の抗腫瘍剤を用いる場合、単独また
は賦形剤あるいは担体と混合して注射剤、経口剤または
座薬等として投与される。賦形剤あるいは担体としては
薬理学的に許容されるものが選ばれ、その種類及び組成
は投与経路や投与方法によって決まる。例えば液体担体
として水、アルコール類もしくは大豆油、ピーナッツ
油、ゴマ油、ミネラル油等の動植物油、または合成油が
用いられる。固体担体としてマルトース、シュークロー
ス等の糖類、アミノ酸類、ヒドロキシプロピルセルロー
ス誘導体、ステアリン酸マグネシュウム等の有機酸塩類
等が使用される。
は賦形剤あるいは担体と混合して注射剤、経口剤または
座薬等として投与される。賦形剤あるいは担体としては
薬理学的に許容されるものが選ばれ、その種類及び組成
は投与経路や投与方法によって決まる。例えば液体担体
として水、アルコール類もしくは大豆油、ピーナッツ
油、ゴマ油、ミネラル油等の動植物油、または合成油が
用いられる。固体担体としてマルトース、シュークロー
ス等の糖類、アミノ酸類、ヒドロキシプロピルセルロー
ス誘導体、ステアリン酸マグネシュウム等の有機酸塩類
等が使用される。
【０００７】注射剤の場合、担体として一般には生理食
塩水、各種緩衝液、グルコース、イノシトール、マンニ
トール等の糖類溶液、エチレングリコール、ポリエチレ
ングリコール等のグリコール類が望ましい。また、イノ
シトール、マンニトール、グルコース、マンノース、マ
ルトース、シュークロース等の糖類、フェニルアラニン
等のアミノ酸等の賦形剤と共に凍結乾燥剤とし、それを
投与時に注射用の適当な溶剤、例えば滅菌水、生理食塩
水、ブドウ糖液、電解質溶液、アミノ酸等の静脈投与用
液体に溶解して投与することもできる。
塩水、各種緩衝液、グルコース、イノシトール、マンニ
トール等の糖類溶液、エチレングリコール、ポリエチレ
ングリコール等のグリコール類が望ましい。また、イノ
シトール、マンニトール、グルコース、マンノース、マ
ルトース、シュークロース等の糖類、フェニルアラニン
等のアミノ酸等の賦形剤と共に凍結乾燥剤とし、それを
投与時に注射用の適当な溶剤、例えば滅菌水、生理食塩
水、ブドウ糖液、電解質溶液、アミノ酸等の静脈投与用
液体に溶解して投与することもできる。
【０００８】製剤中における本化合物の含量は製剤によ
り種々異なるが、通常０. ０１〜１００重量％好ましく
は０. １〜５０重量％である。例えば注射液の場合に
は、通常０. １〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量
％の有効成分を含むようにすることが良い。経口投与す
る場合には、前記固体担体もしくは液状担体とともに錠
剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロップ
剤等の形態で用いられる。カプセル、錠剤、顆粒、粉剤
は一般に５〜１００重量％、好ましくは２５〜９８重量
％の有効成分を含む。
り種々異なるが、通常０. ０１〜１００重量％好ましく
は０. １〜５０重量％である。例えば注射液の場合に
は、通常０. １〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量
％の有効成分を含むようにすることが良い。経口投与す
る場合には、前記固体担体もしくは液状担体とともに錠
剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロップ
剤等の形態で用いられる。カプセル、錠剤、顆粒、粉剤
は一般に５〜１００重量％、好ましくは２５〜９８重量
％の有効成分を含む。
【０００９】投与量は患者の年令、体重、症状、治療目
的等により決定されるが、治療量は一般に、非経口投与
で１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、経口投与で５〜５００ｍ
ｇ／ｋｇ／日程度がよい。本発明の抗腫瘍剤は固型癌特
に大腸癌などの消化器系癌に特に優れた作用を示し、固
型癌治療剤特に大腸癌治療剤として有用である。
的等により決定されるが、治療量は一般に、非経口投与
で１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、経口投与で５〜５００ｍ
ｇ／ｋｇ／日程度がよい。本発明の抗腫瘍剤は固型癌特
に大腸癌などの消化器系癌に特に優れた作用を示し、固
型癌治療剤特に大腸癌治療剤として有用である。
【作用】次に本発明の抗腫瘍作用を実験例により示す。 実験例 ヒト大腸癌細胞を５．０×１０4 個／ｍｌ、あるいはヒ
ト卵巣癌細胞を２×１０4 個／ｍｌの割合で９６穴培養
プレートに２００μｌ接種し、２４時間培養後、被験薬
を生理食塩水で希釈したものを種々の濃度で添加した。
その後、３７℃、５％ＣＯ2 インキュベータで７２時間
培養した。培養後、生細胞数をＭＴＴ法により測定し、
その吸光度からコントロールに対する５０％増殖阻害濃
度（ＩＣ50）を求めた。結果を表１に示す。
ト卵巣癌細胞を２×１０4 個／ｍｌの割合で９６穴培養
プレートに２００μｌ接種し、２４時間培養後、被験薬
を生理食塩水で希釈したものを種々の濃度で添加した。
その後、３７℃、５％ＣＯ2 インキュベータで７２時間
培養した。培養後、生細胞数をＭＴＴ法により測定し、
その吸光度からコントロールに対する５０％増殖阻害濃
度（ＩＣ50）を求めた。結果を表１に示す。
【００１０】
【表１】 表１． 各種癌細胞に対する増殖抑制作用 細胞名 ＩＣ50（μｇ／ｍｌ） ＳＷ４８０（ヒト大腸癌） ２．７ Ａ２７８０（ヒト卵巣癌） ７．５ 表１に示すように、本化合物は各種癌細胞に対して強い
増殖抑制作用を示した。
増殖抑制作用を示した。
【００１１】上記のように生理活性物質ソヤサポゲノー
ルＢは各種癌細胞に対する増殖抑制作用を示した。
ルＢは各種癌細胞に対する増殖抑制作用を示した。
【００１２】本発明で使用されるソヤサポゲノールＢの
生産菌はペニシリウム属に属し、ソヤサポゲノールＢ生
産能を有する菌株であればいずれも使用可能であり。好
的なものとしては、例えば、ホークスワース（Ｄ．Ｌ．
Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ）、サットン（Ｂ．Ｃ．Ｓｕｔｔ
ｏｎ）、エーンズワース（Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔ
ｈ）編、「エーンズワース・アンド・ビスビーズ・ディ
クショナリー・オブ・ザ・ファンジャイ第７版（Ａｉｎ
ｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏ
ｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ，７ｔｈ ｅｄ．
（１９８３）」に従い、真菌門、不完全菌亜門、不完全
糸状菌綱、ペニシリウム属菌に分類されることが判明
し、本菌株をペニシリウム エスピー ＮＦ０３９００
（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＮＦ０３９００）と
命名した。なお、該菌株は、工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５９０１として寄
託されている。この菌株は通常の変異方法例えば紫外線
照射、放射線照射などの方法に変異させることができ、
ソヤサポゲノールＢの生産能を有する限り、これらの変
異株も使用できる。以下、ＮＦ０３９００株の菌学的性
質および生理学的性質を示す。
生産菌はペニシリウム属に属し、ソヤサポゲノールＢ生
産能を有する菌株であればいずれも使用可能であり。好
的なものとしては、例えば、ホークスワース（Ｄ．Ｌ．
Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ）、サットン（Ｂ．Ｃ．Ｓｕｔｔ
ｏｎ）、エーンズワース（Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔ
ｈ）編、「エーンズワース・アンド・ビスビーズ・ディ
クショナリー・オブ・ザ・ファンジャイ第７版（Ａｉｎ
ｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏ
ｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ，７ｔｈ ｅｄ．
（１９８３）」に従い、真菌門、不完全菌亜門、不完全
糸状菌綱、ペニシリウム属菌に分類されることが判明
し、本菌株をペニシリウム エスピー ＮＦ０３９００
（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ．ＮＦ０３９００）と
命名した。なお、該菌株は、工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５９０１として寄
託されている。この菌株は通常の変異方法例えば紫外線
照射、放射線照射などの方法に変異させることができ、
ソヤサポゲノールＢの生産能を有する限り、これらの変
異株も使用できる。以下、ＮＦ０３９００株の菌学的性
質および生理学的性質を示す。
【００１３】
１．各種培地での生育 各種培地上で２５℃、７日間培養したときの生育状態を
表２に示す。本菌株は、ツアペック・イーストエキス寒
天培地上での生育は良好で、ビロード状、フェルト状と
なり、放射状のしわを形成し中央部はやや盛り上がる。
集落の表面は中央部から周縁にかけて灰橙色、黄白色、
白色、後に灰緑色を呈する。また無色の浸出液を生じ
る。裏面は橙褐色、クリーム色、後に褐色を呈しする。
分生子形成は良好である。ポテト・デキストロース寒天
培地、麦芽エキス寒天培地上での生育は良好で粉状、ビ
ロード状の平坦な集落となる。集落の表面は青緑色、灰
緑色、灰色を呈する。また無色の浸出液を生じる。裏面
は黄白色、灰黄色を呈する。まれに緑色となることもあ
る。ツアペック寒天培地上での生育は制限的で気生菌糸
が薄く広がり平坦な集落となる。表面は灰色、後に灰橙
色、灰緑色を呈する。裏面は白色、後に灰橙色となる。
分生子形成はやや悪い。
表２に示す。本菌株は、ツアペック・イーストエキス寒
天培地上での生育は良好で、ビロード状、フェルト状と
なり、放射状のしわを形成し中央部はやや盛り上がる。
集落の表面は中央部から周縁にかけて灰橙色、黄白色、
白色、後に灰緑色を呈する。また無色の浸出液を生じ
る。裏面は橙褐色、クリーム色、後に褐色を呈しする。
分生子形成は良好である。ポテト・デキストロース寒天
培地、麦芽エキス寒天培地上での生育は良好で粉状、ビ
ロード状の平坦な集落となる。集落の表面は青緑色、灰
緑色、灰色を呈する。また無色の浸出液を生じる。裏面
は黄白色、灰黄色を呈する。まれに緑色となることもあ
る。ツアペック寒天培地上での生育は制限的で気生菌糸
が薄く広がり平坦な集落となる。表面は灰色、後に灰橙
色、灰緑色を呈する。裏面は白色、後に灰橙色となる。
分生子形成はやや悪い。
【００１４】２．形態的特徴 麦芽エキス寒天培地上で生育した本菌株の光学顕微鏡下
での形態的特徴を以下に記載する。菌糸は幅１．０−
３．５μｍ、無色、滑面、隔壁を有する。分生子柄は基
中菌糸あるいは気生菌糸より生じる。大きさは２４−５
５×２．０−３．５μｍ。表面は滑面またはやや粗面。
メトレは分生子柄の頂端より２−４本輪生する。大きさ
は７−１０×２．０−３．５μｍ。表面は滑面又は粗
面。フィアリドはメトレより２−７本輪生する。大きさ
は８−１０×２．０−３．０μｍ。形はアンプル形、ほ
こ先形、ペン先形。表面は滑面。分生子はフィアロ型分
生子でフィアリドの先端より生じ鎖状に連なる。大きさ
は２．０−３．５μｍ。形は球形、亜球形、楕円形とな
る。表面は滑面又はやや粗面。
での形態的特徴を以下に記載する。菌糸は幅１．０−
３．５μｍ、無色、滑面、隔壁を有する。分生子柄は基
中菌糸あるいは気生菌糸より生じる。大きさは２４−５
５×２．０−３．５μｍ。表面は滑面またはやや粗面。
メトレは分生子柄の頂端より２−４本輪生する。大きさ
は７−１０×２．０−３．５μｍ。表面は滑面又は粗
面。フィアリドはメトレより２−７本輪生する。大きさ
は８−１０×２．０−３．０μｍ。形はアンプル形、ほ
こ先形、ペン先形。表面は滑面。分生子はフィアロ型分
生子でフィアリドの先端より生じ鎖状に連なる。大きさ
は２．０−３．５μｍ。形は球形、亜球形、楕円形とな
る。表面は滑面又はやや粗面。
【００１５】
【生理学的性質】本菌株は、好気性で、麦芽エキス寒天
培地において生育ｐＨ範囲は２−１２と広く、至適ｐＨ
は７−８である。また、生育至適温度は３０−３２℃
で、５℃で生育しないが３７℃では生育する。
培地において生育ｐＨ範囲は２−１２と広く、至適ｐＨ
は７−８である。また、生育至適温度は３０−３２℃
で、５℃で生育しないが３７℃では生育する。
【００１６】
【表２】 ＣＹＡ；ツアベックイーストエキス寒天培地、ＭＥＡ；麦芽エキス寒天培地、 ＰＤＡ；ポテトデキストロース寒天培地、ＣＺＡ；ツアベック寒天培地、 Ｇ２５Ｎ；２５％グリセロール硝酸塩寒天培地、ＯＭＡ；オートミール寒天 培地、ＳＡ；サブロー寒天培地、ＣＭＡ；コーンミール寒天培地、 −; 無し, ＋; 少量, ＋＋; 普通, ＋＋＋；多量．
【００１７】本発明により生理活性物質ソヤサポゲノー
ルＢを製造するにはペニシリウム属に属し、生理活性物
質ソヤサポゲノールＢを産生する能力を有する微生物を
培地中で培養し培養物中に生理活性物質ソヤサポゲノー
ルＢ異性体を生成蓄積せしめ、ついでこれを採取すれば
よい。培養方法は原則的には糸状菌の培養方法に準ずる
が、通常は液体培養による深部培養法が有利である。培
養に用いられる培地としてはＮＦ０３９００株が利用す
る栄養源を含有する培地であればよい。
ルＢを製造するにはペニシリウム属に属し、生理活性物
質ソヤサポゲノールＢを産生する能力を有する微生物を
培地中で培養し培養物中に生理活性物質ソヤサポゲノー
ルＢ異性体を生成蓄積せしめ、ついでこれを採取すれば
よい。培養方法は原則的には糸状菌の培養方法に準ずる
が、通常は液体培養による深部培養法が有利である。培
養に用いられる培地としてはＮＦ０３９００株が利用す
る栄養源を含有する培地であればよい。
【００１８】栄養源としては従来から糸状菌の培養に利
用されている公知のものが使用でき、通常 炭素源、窒
素源および無機塩類からなる郡から選ばれる１種または
２種以上を含むものであればよく、例えば、炭素源とし
て、グルコース、ガラクトース、マンニトール、デキス
トリン、澱粉、水飴（澱粉麦芽糖化物）、大豆油など単
独または組み合わせて用いることができる。無機および
有機窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、窒素、硝酸アンモニウム、硝酸ソーダ、ペプト
ン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチー
プ・リカー、大豆油カス、オートミール、カザミノ
酸、、バクトソイトン、ソリブルベジタブルプロテイン
など単独または組み合わせて用いることができる。
用されている公知のものが使用でき、通常 炭素源、窒
素源および無機塩類からなる郡から選ばれる１種または
２種以上を含むものであればよく、例えば、炭素源とし
て、グルコース、ガラクトース、マンニトール、デキス
トリン、澱粉、水飴（澱粉麦芽糖化物）、大豆油など単
独または組み合わせて用いることができる。無機および
有機窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、窒素、硝酸アンモニウム、硝酸ソーダ、ペプト
ン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチー
プ・リカー、大豆油カス、オートミール、カザミノ
酸、、バクトソイトン、ソリブルベジタブルプロテイン
など単独または組み合わせて用いることができる。
【００１９】その他、必要に応じて食塩、硫酸マグネシ
ウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウ
ム、燐酸塩などの無機塩を加えることができる他、本菌
の生育や、生理活性物質ソヤサポゲノールＢの生産を促
進する有機物、例えば核酸類、アミノ酸、ビタミン類や
無機物を適当に添加することができる。培養温度は通常
２０〜３７℃、好ましくは２５℃〜３２℃、ｐＨは中性
ないし微酸性で培養を行うことが望ましい。液体培養で
は通常３〜６日間培養を行うと生理活性物質ソヤサポゲ
ノールＢが培養液中に蓄積される。
ウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウ
ム、燐酸塩などの無機塩を加えることができる他、本菌
の生育や、生理活性物質ソヤサポゲノールＢの生産を促
進する有機物、例えば核酸類、アミノ酸、ビタミン類や
無機物を適当に添加することができる。培養温度は通常
２０〜３７℃、好ましくは２５℃〜３２℃、ｐＨは中性
ないし微酸性で培養を行うことが望ましい。液体培養で
は通常３〜６日間培養を行うと生理活性物質ソヤサポゲ
ノールＢが培養液中に蓄積される。
【００２０】培養液からのソヤサポゲノールＢの単離に
は、一般に微生物代謝産物をその培養液から単離するた
めに用いられる分離精製の方法が用いられる。例えば、
培養液中のソヤサポゲノールＢの生成量が最大に達した
時に培養を停止し、菌体を濾別して得られる培養濾液中
より目的物を精製単離する。培養濾液は有機溶媒例え
ば、酢酸エチルで活性物質を有機溶媒相に抽出する。有
機溶媒層は減圧濃縮し、粗物質を得る。粗物質はさらに
脂溶性物質の精製に通常用いられる公知の方法、例え
ば、シリカゲル等を用いるクロマトグラフィーあるいは
再結晶化法を単独にまたは適宜組み合わせることにより
精製する。精製に好適な例としてシリカゲルを用い、溶
出液としてｎ−ヘキサン−アセトンを用いるカラムクロ
マトグラフィー法が挙げられる。これらの方法で精製、
濃縮し、ソヤサポゲノールＢを無色粉末として得ること
ができる。
は、一般に微生物代謝産物をその培養液から単離するた
めに用いられる分離精製の方法が用いられる。例えば、
培養液中のソヤサポゲノールＢの生成量が最大に達した
時に培養を停止し、菌体を濾別して得られる培養濾液中
より目的物を精製単離する。培養濾液は有機溶媒例え
ば、酢酸エチルで活性物質を有機溶媒相に抽出する。有
機溶媒層は減圧濃縮し、粗物質を得る。粗物質はさらに
脂溶性物質の精製に通常用いられる公知の方法、例え
ば、シリカゲル等を用いるクロマトグラフィーあるいは
再結晶化法を単独にまたは適宜組み合わせることにより
精製する。精製に好適な例としてシリカゲルを用い、溶
出液としてｎ−ヘキサン−アセトンを用いるカラムクロ
マトグラフィー法が挙げられる。これらの方法で精製、
濃縮し、ソヤサポゲノールＢを無色粉末として得ること
ができる。
【００２１】以下本発明の実施例を示すが、これは単な
る一例示であって何等本発明を限定するものではなく、
種々の変法が可能である。
る一例示であって何等本発明を限定するものではなく、
種々の変法が可能である。
【００２２】実施例１ ロータリー型振盪機用５００ｍｌ容三角フラスコにグル
コース１％、シュークロース２％、アジプロン（味の素
社製）１．５％、ペプトン０．３％、イーストエキスト
ラクト０．２％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸
マグネシウム０．０２５％、プロナールＳＴ−Ｉ ０．
０１％、硫酸鉄・７水和物０．０００１１％、硫酸銅・
５水和物０．０００６４％、硫酸亜鉛・７水和物０．０
００１５％、および塩化マンガン・４水和物０．０００
７９％の培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌを分注し、１２
０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。これにソヤサ
ポゲノールＢの生産菌株（ＦＥＲＭ−１５９０１）の１
白金耳を接種し、２７℃、２２０回転／分、２日間振盪
し、種培養とした。本培養はロータリー型振盪機用５０
０ｍｌ容三角フラスコにグルコース１％、シュークロー
ス２％、アジプロン（味の素社製）２％、リン酸二水素
カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０２５％、プ
ロナールＳＴ−Ｉ ０．０１％、硫酸鉄・７水和物０．
０００１１％、硫酸銅・５水和物０．０００６４％、硫
酸亜鉛・７水和物０．０００１５％、および塩化マンガ
ン・４水和物０．０００７９％の培地（ｐＨ６．５）１
００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ
滅菌したフラスコに前記種培養液２ｍｌを移植し、２５
℃、２２０回転／分の条件下で７日振盪培養を行った。
培養液を吸引ろ過し、菌体とろ液に分別した。
コース１％、シュークロース２％、アジプロン（味の素
社製）１．５％、ペプトン０．３％、イーストエキスト
ラクト０．２％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸
マグネシウム０．０２５％、プロナールＳＴ−Ｉ ０．
０１％、硫酸鉄・７水和物０．０００１１％、硫酸銅・
５水和物０．０００６４％、硫酸亜鉛・７水和物０．０
００１５％、および塩化マンガン・４水和物０．０００
７９％の培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌを分注し、１２
０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。これにソヤサ
ポゲノールＢの生産菌株（ＦＥＲＭ−１５９０１）の１
白金耳を接種し、２７℃、２２０回転／分、２日間振盪
し、種培養とした。本培養はロータリー型振盪機用５０
０ｍｌ容三角フラスコにグルコース１％、シュークロー
ス２％、アジプロン（味の素社製）２％、リン酸二水素
カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０２５％、プ
ロナールＳＴ−Ｉ ０．０１％、硫酸鉄・７水和物０．
０００１１％、硫酸銅・５水和物０．０００６４％、硫
酸亜鉛・７水和物０．０００１５％、および塩化マンガ
ン・４水和物０．０００７９％の培地（ｐＨ６．５）１
００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ
滅菌したフラスコに前記種培養液２ｍｌを移植し、２５
℃、２２０回転／分の条件下で７日振盪培養を行った。
培養液を吸引ろ過し、菌体とろ液に分別した。
【００２３】培養液からのソヤサポゲノールＢの単離に
は、以下の操作を行った。培養を停止し、菌体を濾別し
て得られる培養濾液１０リットルをｐＨ９に調製した
後、この培養濾液から活性物質を常法に従い酢酸エチル
で抽出を行い、粗物質６２９．５ｍｇを得た。粗物質は
さらにダイアイオンＣＨＰ−２０（三菱化成社製）に吸
着させ、５０％アセトニトリル水０．５リットルからア
セトニトリル０．５リットルへのリニアグラジエントで
溶出すると有効物質が溶出された。活性画分はシリカゲ
ルカラム（マイクロビーズシリカゲル４Ｂ（３０−５０
ｕ）、フジ・シリシア・ケミカル社製）を用い、ｎ−ヘ
キサン−アセトン（６：１）で精製を行い、有効物質を
得た。これをさらにセファデックスＬＨ−２０（ファル
マシア社製）カラム１００ｍｌを用い、メタノールで溶
出、活性画分を濃縮し２６．４ｍｇのソヤサポゲノール
Ｂを得た。
は、以下の操作を行った。培養を停止し、菌体を濾別し
て得られる培養濾液１０リットルをｐＨ９に調製した
後、この培養濾液から活性物質を常法に従い酢酸エチル
で抽出を行い、粗物質６２９．５ｍｇを得た。粗物質は
さらにダイアイオンＣＨＰ−２０（三菱化成社製）に吸
着させ、５０％アセトニトリル水０．５リットルからア
セトニトリル０．５リットルへのリニアグラジエントで
溶出すると有効物質が溶出された。活性画分はシリカゲ
ルカラム（マイクロビーズシリカゲル４Ｂ（３０−５０
ｕ）、フジ・シリシア・ケミカル社製）を用い、ｎ−ヘ
キサン−アセトン（６：１）で精製を行い、有効物質を
得た。これをさらにセファデックスＬＨ−２０（ファル
マシア社製）カラム１００ｍｌを用い、メタノールで溶
出、活性画分を濃縮し２６．４ｍｇのソヤサポゲノール
Ｂを得た。
【００２４】上記実施例で得られたソヤサポゲノールＢ
の物理化学的性状および各種スペクトルデータはすべて
公知のソヤサポゲノールＢと合致したので、実施例で得
られた物質はソヤサポゲノールＢであることが確認され
た。
の物理化学的性状および各種スペクトルデータはすべて
公知のソヤサポゲノールＢと合致したので、実施例で得
られた物質はソヤサポゲノールＢであることが確認され
た。
【００２５】
【発明の効果】生理活性物質ソヤサポゲノールＢは各種
癌細胞に対する増殖抑制作用を有し、かつ比較的低毒性
であるので抗腫瘍剤として有用である。
癌細胞に対する増殖抑制作用を有し、かつ比較的低毒性
であるので抗腫瘍剤として有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 33/00 Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:80）
Claims (3)
- 【請求項１】生理活性物質ソヤサポゲノールＢを有効成
分とする抗腫瘍剤。 - 【請求項２】ペニシリウム属に属し、生理活性物質ソヤ
サポゲノールＢ生産能を有する微生物を培地中で培養
し、培養液中に生理活性物質ソヤサポゲノールＢを生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とするソヤサポ
ゲノールＢの製造法。 - 【請求項３】ペニシリウム エスピー ＮＦ０３９００
株およびその変異株
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9055459A JPH10234396A (ja) | 1997-02-25 | 1997-02-25 | 新規抗腫瘍剤およびソヤサポゲノールｂの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9055459A JPH10234396A (ja) | 1997-02-25 | 1997-02-25 | 新規抗腫瘍剤およびソヤサポゲノールｂの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10234396A true JPH10234396A (ja) | 1998-09-08 |
Family
ID=12999198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9055459A Pending JPH10234396A (ja) | 1997-02-25 | 1997-02-25 | 新規抗腫瘍剤およびソヤサポゲノールｂの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10234396A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001081612A1 (fr) * | 2000-04-25 | 2001-11-01 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Procede de production de soyasapogenol b et nouveaux micro-organismes |
| WO2002101053A1 (en) * | 2001-06-06 | 2002-12-19 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-digesting enzymes, genes thereof and soyasapogenol b mass production system |
| WO2006046557A1 (ja) * | 2004-10-28 | 2006-05-04 | Fancl Corporation | 異常蛋白質除去用組成物 |
| US7575892B2 (en) | 2004-02-25 | 2009-08-18 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Expression vector encoding a triterpene hydroxylase polypeptide |
| WO2013001890A1 (ja) * | 2011-06-28 | 2013-01-03 | 株式会社Ｊ－オイルミルズ | ソーヤサポゲノール組成物 |
-
1997
- 1997-02-25 JP JP9055459A patent/JPH10234396A/ja active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6878535B2 (en) | 2000-04-25 | 2005-04-12 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Process for producing soyasapogenol B and novel microorganisms |
| WO2001081612A1 (fr) * | 2000-04-25 | 2001-11-01 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Procede de production de soyasapogenol b et nouveaux micro-organismes |
| US7335498B2 (en) | 2001-06-06 | 2008-02-26 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-decomposing enzyme, gene thereof and large-scale production system for producing soyasapogenol B |
| US7022508B2 (en) | 2001-06-06 | 2006-04-04 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-digesting enzymes, genes thereof and soyasapogenol B mass production system |
| US7144718B2 (en) | 2001-06-06 | 2006-12-05 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-decomposing enzyme, gene thereof and large-scale production system for producing soyasapogenol B |
| WO2002101053A1 (en) * | 2001-06-06 | 2002-12-19 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-digesting enzymes, genes thereof and soyasapogenol b mass production system |
| US7553640B2 (en) | 2001-06-06 | 2009-06-30 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-decomposing enzyme, gene thereof and large-scale production system for producing soyasapogenol B |
| US7670803B2 (en) | 2001-06-06 | 2010-03-02 | Meji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-decomposing enzyme, gene thereof and large-scale production sytem for producing soyasapogenol B |
| US7790425B2 (en) | 2001-06-06 | 2010-09-07 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Saponin-decomposing enzyme, gene thereof and large-scale production system for producing soyasapogenol B |
| US7575892B2 (en) | 2004-02-25 | 2009-08-18 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Expression vector encoding a triterpene hydroxylase polypeptide |
| WO2006046557A1 (ja) * | 2004-10-28 | 2006-05-04 | Fancl Corporation | 異常蛋白質除去用組成物 |
| WO2013001890A1 (ja) * | 2011-06-28 | 2013-01-03 | 株式会社Ｊ－オイルミルズ | ソーヤサポゲノール組成物 |
| JPWO2013001890A1 (ja) * | 2011-06-28 | 2015-02-23 | 株式会社Ｊ−オイルミルズ | ソーヤサポゲノール組成物 |
| US9216187B2 (en) | 2011-06-28 | 2015-12-22 | J-Oil Mills, Inc. | Soyasapogenol composition |
| JP2016193941A (ja) * | 2011-06-28 | 2016-11-17 | 株式会社Ｊ−オイルミルズ | ソーヤサポゲノール組成物 |
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