JPH11290087A - 新規生理活性物質ｎｆ０７５１１、その製造法及びその用途 - Google Patents
新規生理活性物質ｎｆ０７５１１、その製造法及びその用途Info
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- JPH11290087A JPH11290087A JP10112901A JP11290198A JPH11290087A JP H11290087 A JPH11290087 A JP H11290087A JP 10112901 A JP10112901 A JP 10112901A JP 11290198 A JP11290198 A JP 11290198A JP H11290087 A JPH11290087 A JP H11290087A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】癌細胞に対して強い増殖抑制活性を有する新規
生理活性物質を提供する。 【解決手段】不完全糸状菌類クラドリヌム ＮＦ ０７
５１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２）を培養し、分子
式Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 、分子量４３２を持つ化合物Ｎ
Ｆ０７５１１を得た。
生理活性物質を提供する。 【解決手段】不完全糸状菌類クラドリヌム ＮＦ ０７
５１１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２）を培養し、分子
式Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 、分子量４３２を持つ化合物Ｎ
Ｆ０７５１１を得た。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規生理活性物質
ＮＦ０７５１１及びその塩、その製造法、それを有効成
分とする医薬並びに制癌剤、及びその生産菌に関する。
ＮＦ０７５１１及びその塩、その製造法、それを有効成
分とする医薬並びに制癌剤、及びその生産菌に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、制癌剤としてはアドリアマイシ
ン、シスプラチンなどが使用されている。
ン、シスプラチンなどが使用されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来、使用されている
制癌剤は効力、毒性などの点で不十分であり、また耐性
などの問題もあり、新しい制癌剤が求められている。
制癌剤は効力、毒性などの点で不十分であり、また耐性
などの問題もあり、新しい制癌剤が求められている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
微生物の代謝産物について、種々検索した結果、不完全
糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属
に属する一菌株が制癌作用を有する新規生理活性物質Ｎ
Ｆ０７５１１を産生する事を見い出した。すなわち、本
発明は次の（１）〜（７）に関する。
微生物の代謝産物について、種々検索した結果、不完全
糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属
に属する一菌株が制癌作用を有する新規生理活性物質Ｎ
Ｆ０７５１１を産生する事を見い出した。すなわち、本
発明は次の（１）〜（７）に関する。
【０００５】（１）下記の物理化学的性質を示す生理活
性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に許容しうる
塩。 １）外観；白色粉末 ２）分子量；４３２ ３）分子式；Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 ４）溶解性；低級アルコール、クロロホルム、ジメチル
スルホキシドに可溶、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎーヘキサン：アセトン（２：１）の展開溶媒で０．２
５を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（３００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（７５ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示した。 δ（多重度） １９３．５（ｓ）、１６４．９（ｓ）、１５７．７
（ｓ）、１５６．９（ｓ）、１５２．１（ｄ）、１３
１．６（ｄ）、１２９．２（ｄ）、１２４．７（ｄ）、
１２３．７（ｄ）、１２１．０（ｓ）、１１１．１
（ｄ）、 ９６．０（ｓ）、８６．７（ｄ）、 ８３．
８（ｓ）、 ７１．６（ｓ）、５６．１（ｄ）、 ２
９．６（ｔ）、 ２７．２（ｑ）、２３．２（ｔ） １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素、塩化パラジ
ウムに陽性。
性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に許容しうる
塩。 １）外観；白色粉末 ２）分子量；４３２ ３）分子式；Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 ４）溶解性；低級アルコール、クロロホルム、ジメチル
スルホキシドに可溶、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎーヘキサン：アセトン（２：１）の展開溶媒で０．２
５を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（３００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（７５ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示した。 δ（多重度） １９３．５（ｓ）、１６４．９（ｓ）、１５７．７
（ｓ）、１５６．９（ｓ）、１５２．１（ｄ）、１３
１．６（ｄ）、１２９．２（ｄ）、１２４．７（ｄ）、
１２３．７（ｄ）、１２１．０（ｓ）、１１１．１
（ｄ）、 ９６．０（ｓ）、８６．７（ｄ）、 ８３．
８（ｓ）、 ７１．６（ｓ）、５６．１（ｄ）、 ２
９．６（ｔ）、 ２７．２（ｑ）、２３．２（ｔ） １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素、塩化パラジ
ウムに陽性。
【０００６】（２）不完全糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌ
ａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０
７５１１を生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中に生理活性物質ＮＦ０７５１１を生成蓄積
せしめ、これを採取する事を特徴とする生理活性物質Ｎ
Ｆ０７５１１またはその薬学的に許容しうる塩の製造
法。 （３）生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分とする医薬。 （４）生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分として含有する制癌剤。
ａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０
７５１１を生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中に生理活性物質ＮＦ０７５１１を生成蓄積
せしめ、これを採取する事を特徴とする生理活性物質Ｎ
Ｆ０７５１１またはその薬学的に許容しうる塩の製造
法。 （３）生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分とする医薬。 （４）生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分として含有する制癌剤。
【０００７】（５）不完全糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌ
ａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０
７５１１を生産する能力を有する微生物。 （６）不完全糸状菌類クラドリヌム ＮＦ ０７５１１
（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ ＮＦ ０７５１１）株
（工業技術院生命工学工業技術研究所 受託番号ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６６８２号）及びその変異株。
ａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０
７５１１を生産する能力を有する微生物。 （６）不完全糸状菌類クラドリヌム ＮＦ ０７５１１
（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ ＮＦ ０７５１１）株
（工業技術院生命工学工業技術研究所 受託番号ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６６８２号）及びその変異株。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明における制癌活性を有する
生理活性物質ＮＦ０７５１１生産菌は不完全糸状菌類ク
ラドリヌム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、例
えば本発明者らが分離した不完全糸状菌類クラドリヌム
ＮＦ ０７５１１（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ ＮＦ
０７５１１）株（工業技術院生命工学工業技術研究所
受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２号）は、本発明に最
も有効に使用される菌株の一例であり、次の菌学的及び
生理学的性質を有する。
生理活性物質ＮＦ０７５１１生産菌は不完全糸状菌類ク
ラドリヌム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、例
えば本発明者らが分離した不完全糸状菌類クラドリヌム
ＮＦ ０７５１１（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ ＮＦ
０７５１１）株（工業技術院生命工学工業技術研究所
受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２号）は、本発明に最
も有効に使用される菌株の一例であり、次の菌学的及び
生理学的性質を有する。
【０００９】
【菌学的性質】１．各種培地での生育 本菌株は、オートミール寒天培地上での生育は良好であ
り、２５℃、３日間培養を行うと集落の径は４２〜４４
ｍｍに達する。集落の形態は綿毛状となる。集落表面は
白色、灰色、灰褐色、灰黒色を呈する。裏面は灰褐色と
なる。ポテト・デキストロース寒天培地上での生育も良
好であり、２５℃、３日間培養を行うと集落の径は４１
〜４８ｍｍに達する。気生菌糸は薄く広がり、粗い綿毛
状となる。集落表面は白色、黄褐色、灰色を呈する。裏
面は黄白色、灰黄色、淡褐色を呈する。ときに培地中に
黄色素を産生する。麦芽エキス寒天培地上での生育も良
好であり、２５℃、３日間培養を行うと集落の径は４１
〜４３ｍｍに達する。気生菌糸は綿毛状に薄く広がる。
集落表面は白色、淡褐色、灰色を呈する。裏面は淡褐
色、淡黄褐色を呈する。
り、２５℃、３日間培養を行うと集落の径は４２〜４４
ｍｍに達する。集落の形態は綿毛状となる。集落表面は
白色、灰色、灰褐色、灰黒色を呈する。裏面は灰褐色と
なる。ポテト・デキストロース寒天培地上での生育も良
好であり、２５℃、３日間培養を行うと集落の径は４１
〜４８ｍｍに達する。気生菌糸は薄く広がり、粗い綿毛
状となる。集落表面は白色、黄褐色、灰色を呈する。裏
面は黄白色、灰黄色、淡褐色を呈する。ときに培地中に
黄色素を産生する。麦芽エキス寒天培地上での生育も良
好であり、２５℃、３日間培養を行うと集落の径は４１
〜４３ｍｍに達する。気生菌糸は綿毛状に薄く広がる。
集落表面は白色、淡褐色、灰色を呈する。裏面は淡褐
色、淡黄褐色を呈する。
【００１０】２．形態的特徴 オートミール寒天培地上で２５℃、４週間培養した本菌
を光学顕微鏡下で観察したときの形態的特徴を以下に記
載する。菌糸は、無色または褐色を帯び、隔壁を有す
る。幅は１．６〜１０．９μｍ。分生子柄は、菌糸より
単生し波状に湾曲する。そして、ほぼ垂直に分枝を繰り
返し、その分生子柄先端細胞および分生子柄の途中の細
胞が分生子形成細胞となり、そこから分生子を産生す
る。分生子柄は無色または褐色を帯び、隔壁を有する。
分生子柄先端細胞には、円筒形のフィアリド（ｐｈｉａ
ｌｉｄｅ）が形成され、その先端部に分生子を生じる。
大きさは、長さ６．４〜１５．４μｍ、幅２．６〜３．
８μｍ。分生子柄途中細胞には、側面に１ないし2個の
疣状の突起が形成され頸形となり、その先端部に分生子
を生じる。途中細胞の大きさは、長さ３．８〜１２．２
μｍ、幅２．６〜３．８μｍ。頸形突起の大きさは、長
さ１．６〜５．８μｍ、幅１．０〜２．６μｍ。先端部
には両方とも明瞭なカラー（ｃｏｌｌａｒｅｔｔｅ）を
形成する。分生子形成様式は、両方ともフィアロ型で分
生子形成細胞の先端部より塊状に形成され淡褐色を帯び
る。分生子は、単細胞性、無色、平滑、球形または涙形
で基部は裁断状となる。大きさは１．９〜３．８μｍ。
培地中には菌核様構造が菌糸より形成し、大きさは３５
０μｍに達する。構成する単細胞は、黒褐色を帯び、球
形または楕円形、大きさは９．０〜３０．０μｍ。有性
生殖形態は観察されない。
を光学顕微鏡下で観察したときの形態的特徴を以下に記
載する。菌糸は、無色または褐色を帯び、隔壁を有す
る。幅は１．６〜１０．９μｍ。分生子柄は、菌糸より
単生し波状に湾曲する。そして、ほぼ垂直に分枝を繰り
返し、その分生子柄先端細胞および分生子柄の途中の細
胞が分生子形成細胞となり、そこから分生子を産生す
る。分生子柄は無色または褐色を帯び、隔壁を有する。
分生子柄先端細胞には、円筒形のフィアリド（ｐｈｉａ
ｌｉｄｅ）が形成され、その先端部に分生子を生じる。
大きさは、長さ６．４〜１５．４μｍ、幅２．６〜３．
８μｍ。分生子柄途中細胞には、側面に１ないし2個の
疣状の突起が形成され頸形となり、その先端部に分生子
を生じる。途中細胞の大きさは、長さ３．８〜１２．２
μｍ、幅２．６〜３．８μｍ。頸形突起の大きさは、長
さ１．６〜５．８μｍ、幅１．０〜２．６μｍ。先端部
には両方とも明瞭なカラー（ｃｏｌｌａｒｅｔｔｅ）を
形成する。分生子形成様式は、両方ともフィアロ型で分
生子形成細胞の先端部より塊状に形成され淡褐色を帯び
る。分生子は、単細胞性、無色、平滑、球形または涙形
で基部は裁断状となる。大きさは１．９〜３．８μｍ。
培地中には菌核様構造が菌糸より形成し、大きさは３５
０μｍに達する。構成する単細胞は、黒褐色を帯び、球
形または楕円形、大きさは９．０〜３０．０μｍ。有性
生殖形態は観察されない。
【００１１】
【生理学的性質】本菌株は、好気性で、至適ｐＨは６．
０前後である。生育至適温度は３０℃付近で、３７℃で
も生育は良好である。４２℃では生育しない。
０前後である。生育至適温度は３０℃付近で、３７℃で
も生育は良好である。４２℃では生育しない。
【００１２】以上の菌学的および生理学的性質より本菌
株は、ホークスワース（Ｄ．Ｌ．Ｈａｗｋｓｗｏｒｔ
ｈ）、サットン（Ｂ．Ｃ．Ｓｕｔｔｏｎ）、エーンズワ
ース（Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ）編、「エーンズワ
ース・アンド・ビスビーズ・ディクショナリー・オブ・
ザ・ファンジャイ第７版（Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ
Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｆｕｎｇｉ， ７ｔｈ ｅｄ．（１９８３））」に従
い、真菌門、不完全菌亜門、不完全糸状菌綱、クラドリ
ヌム属菌に分類されることが判明した。よって本菌株を
クラドリヌムエスピー．ＮＦ０７５１１（Ｃｌａｄｏｒ
ｒｈｉｎｕｍ ｓｐ． ＮＦ ０７５１１）と同定し
た。なお、該菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託番号ＦＥＲＭ−１６６８２として寄託されてい
る。
株は、ホークスワース（Ｄ．Ｌ．Ｈａｗｋｓｗｏｒｔ
ｈ）、サットン（Ｂ．Ｃ．Ｓｕｔｔｏｎ）、エーンズワ
ース（Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ）編、「エーンズワ
ース・アンド・ビスビーズ・ディクショナリー・オブ・
ザ・ファンジャイ第７版（Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ
Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｆｕｎｇｉ， ７ｔｈ ｅｄ．（１９８３））」に従
い、真菌門、不完全菌亜門、不完全糸状菌綱、クラドリ
ヌム属菌に分類されることが判明した。よって本菌株を
クラドリヌムエスピー．ＮＦ０７５１１（Ｃｌａｄｏｒ
ｒｈｉｎｕｍ ｓｐ． ＮＦ ０７５１１）と同定し
た。なお、該菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託番号ＦＥＲＭ−１６６８２として寄託されてい
る。
【００１３】本発明に用いる不完全糸状菌類クラドリヌ
ム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属する菌株は不完
全糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）
の他の菌株と同様、その性状が変化しやすく、例えば、
紫外線、エックス線および薬品などを用いる人工的な変
異手段で容易に変異しうるものであり、どの様な変異株
であっても本発明の対象とする生理活性物質ＮＦ０７５
１１の生産能を有するものは、すべて本発明に使用する
事ができる。
ム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）属に属する菌株は不完
全糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ）
の他の菌株と同様、その性状が変化しやすく、例えば、
紫外線、エックス線および薬品などを用いる人工的な変
異手段で容易に変異しうるものであり、どの様な変異株
であっても本発明の対象とする生理活性物質ＮＦ０７５
１１の生産能を有するものは、すべて本発明に使用する
事ができる。
【００１４】本発明によりＮＦ０７５１１を製造するに
は、まず前記菌株を菌が利用し得る栄養物を含有する培
地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から菌の
培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば炭
素源としてはグルコース、フラクトース、グリセリン、
シュークロース、デキストリン、ガラクトース、有機酸
などを単独または組み合わせて用いることができる。
は、まず前記菌株を菌が利用し得る栄養物を含有する培
地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から菌の
培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば炭
素源としてはグルコース、フラクトース、グリセリン、
シュークロース、デキストリン、ガラクトース、有機酸
などを単独または組み合わせて用いることができる。
【００１５】無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実粕、
カザミノ酸、バクトソイトン、オートミールなどを単独
または組み合わせて用いることができる。その他、必要
に応じて食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫
酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化コバル
ト、燐酸塩などの無機塩類を加えることができる。ま
た、有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や、無機物を必要に応じて添加してもよい。培養法とし
ては液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適してい
る。培養温度は２０℃〜４５℃、ｐＨは微酸性ないし微
アルカリ性で培養を行うことが望ましい。
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実粕、
カザミノ酸、バクトソイトン、オートミールなどを単独
または組み合わせて用いることができる。その他、必要
に応じて食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫
酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化コバル
ト、燐酸塩などの無機塩類を加えることができる。ま
た、有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や、無機物を必要に応じて添加してもよい。培養法とし
ては液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適してい
る。培養温度は２０℃〜４５℃、ｐＨは微酸性ないし微
アルカリ性で培養を行うことが望ましい。
【００１６】液体培養では通常３〜５日間培養を行うと
ＮＦ０７５１１物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、菌体
と培養液をろ別し、菌体より目的物を精製単離する。菌
体から本物質の精製単離には、一般に微生物代謝生産物
をその培養菌体から単離するために用いられる分離精製
の方法が利用される。例えば、培養液を通常のろ過法で
ろ液と菌体部に分離する。得られた菌体部をアセトンに
懸濁し、ろ過後、アセトン抽出液を得る。そのろ液から
減圧下アセトンを留去し水と混ざらない一般的な有機溶
媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム等に
転溶し、減圧下有機溶媒をエバポレートし濃縮すること
によりＮＦ０７５１１物質を含む油状物質を得る。
ＮＦ０７５１１物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、菌体
と培養液をろ別し、菌体より目的物を精製単離する。菌
体から本物質の精製単離には、一般に微生物代謝生産物
をその培養菌体から単離するために用いられる分離精製
の方法が利用される。例えば、培養液を通常のろ過法で
ろ液と菌体部に分離する。得られた菌体部をアセトンに
懸濁し、ろ過後、アセトン抽出液を得る。そのろ液から
減圧下アセトンを留去し水と混ざらない一般的な有機溶
媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム等に
転溶し、減圧下有機溶媒をエバポレートし濃縮すること
によりＮＦ０７５１１物質を含む油状物質を得る。
【００１７】その油状物質はさらに脂溶性物質の精製に
使用される一般的な方法、即ち、シリカゲルあるいはＯ
ＤＳ、分子篩を用いるカラムクロマトグラフィーあるい
は再結晶化法を単独に又は適時組み合わせることにより
精製する。精製に好適な例としては分子篩を用い、溶出
液としてメタノールを用いるカラムクロマトグラフィー
法があげられる。得られた活性画分についてさらに、Ｏ
ＤＳカラムクロマトグラフィー（移動相：水−メタノー
ル）を行いＮＦ０７５１１を単離する。
使用される一般的な方法、即ち、シリカゲルあるいはＯ
ＤＳ、分子篩を用いるカラムクロマトグラフィーあるい
は再結晶化法を単独に又は適時組み合わせることにより
精製する。精製に好適な例としては分子篩を用い、溶出
液としてメタノールを用いるカラムクロマトグラフィー
法があげられる。得られた活性画分についてさらに、Ｏ
ＤＳカラムクロマトグラフィー（移動相：水−メタノー
ル）を行いＮＦ０７５１１を単離する。
【００１８】上記のようにして得られた生理活性物質Ｎ
Ｆ０７５１１の理化学的性質を下記に示す。 １）外観；白色粉末 ２）分子量；４３２ ３）分子式；Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 ４）溶解性；低級アルコール、クロロホルム、ジメチル
スルホキシドに可溶、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎーヘキサン：アセトン（２：１）の展開溶媒で０．２
５を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（３００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（７５ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示した。 δ（多重度） １９３．５（ｓ）、１６４．９（ｓ）、１５７．７
（ｓ）、１５６．９（ｓ）、１５２．１（ｄ）、１３
１．６（ｄ）、１２９．２（ｄ）、１２４．７（ｄ）、
１２３．７（ｄ）、１２１．０（ｓ）、１１１．１
（ｄ）、 ９６．０（ｓ）、８６．７（ｄ）、 ８３．
８（ｓ）、 ７１．６（ｓ）、５６．１（ｄ）、 ２
９．６（ｔ）、 ２７．２（ｑ）、２３．２（ｔ） １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素、塩化パラジ
ウムに陽性。
Ｆ０７５１１の理化学的性質を下記に示す。 １）外観；白色粉末 ２）分子量；４３２ ３）分子式；Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 ４）溶解性；低級アルコール、クロロホルム、ジメチル
スルホキシドに可溶、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎーヘキサン：アセトン（２：１）の展開溶媒で０．２
５を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（３００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（７５ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示した。 δ（多重度） １９３．５（ｓ）、１６４．９（ｓ）、１５７．７
（ｓ）、１５６．９（ｓ）、１５２．１（ｄ）、１３
１．６（ｄ）、１２９．２（ｄ）、１２４．７（ｄ）、
１２３．７（ｄ）、１２１．０（ｓ）、１１１．１
（ｄ）、 ９６．０（ｓ）、８６．７（ｄ）、 ８３．
８（ｓ）、 ７１．６（ｓ）、５６．１（ｄ）、 ２
９．６（ｔ）、 ２７．２（ｑ）、２３．２（ｔ） １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素、塩化パラジ
ウムに陽性。
【００１９】ＮＦ０７５１１及びその薬学的に許容し得
る塩は、公知の方法によって製造することができ、例え
ば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび塩酸、硫酸
などを含む溶液で処理することによって得ることができ
る。医薬品として使用する場合の製剤化および投与方法
は従来公知の種々の方法が適用できる。すなわち、投与
方法としては注射、経口、直腸投与などが可能である。
製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、坐剤
などの形態がとり得る。
る塩は、公知の方法によって製造することができ、例え
ば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび塩酸、硫酸
などを含む溶液で処理することによって得ることができ
る。医薬品として使用する場合の製剤化および投与方法
は従来公知の種々の方法が適用できる。すなわち、投与
方法としては注射、経口、直腸投与などが可能である。
製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、坐剤
などの形態がとり得る。
【００２０】製剤化の際にＮＦ０７５１１に悪影響を与
えない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すなわ
ち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛
化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されうる。製剤にお
いて、ＮＦ０７５１１の含量は製剤形態等により広範囲
に変えることが可能であり、一般にはＮＦ０７５１１を
０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１〜７０
％（重量）含有し、残りは通常医薬用に使用される担体
その他の補助剤からなる。
えない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すなわ
ち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛
化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されうる。製剤にお
いて、ＮＦ０７５１１の含量は製剤形態等により広範囲
に変えることが可能であり、一般にはＮＦ０７５１１を
０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１〜７０
％（重量）含有し、残りは通常医薬用に使用される担体
その他の補助剤からなる。
【００２１】ＮＦ０７５１１の投与量は症状等により異
なるが、成人１人１日当り０．０１〜８００ｍｇ程度で
ある。連投を必要とする場合には１日当り使用量をおさ
えることが好ましい。
なるが、成人１人１日当り０．０１〜８００ｍｇ程度で
ある。連投を必要とする場合には１日当り使用量をおさ
えることが好ましい。
【００２２】
【作用】以下に実験例を挙げて、ＮＦ０７５１１の制癌
作用について述べる。実験例ヒト卵巣癌由来のＡ２７８
０細胞を２×１０4 個／ｍｌに調整した細胞懸濁液を９
６穴プレートに２００μｌずつ接種した。２４時間培養
後、メタノールに溶解したＮＦ０７５１１を生理食塩水
で希釈し種々の濃度で細胞に添加した。その後、３７
℃、５％ＣＯ２存在下で７２時間培養した後、生細胞数
をＭＴＴ法（Denizot, F. & Lang, R. , J. Immunol. M
ethod, 89, 271(1986)）によって５６０ｎｍの吸光度を
測定し、その吸光度からコントロールに対する増殖阻害
度を求めた。結果を表１に示す。
作用について述べる。実験例ヒト卵巣癌由来のＡ２７８
０細胞を２×１０4 個／ｍｌに調整した細胞懸濁液を９
６穴プレートに２００μｌずつ接種した。２４時間培養
後、メタノールに溶解したＮＦ０７５１１を生理食塩水
で希釈し種々の濃度で細胞に添加した。その後、３７
℃、５％ＣＯ２存在下で７２時間培養した後、生細胞数
をＭＴＴ法（Denizot, F. & Lang, R. , J. Immunol. M
ethod, 89, 271(1986)）によって５６０ｎｍの吸光度を
測定し、その吸光度からコントロールに対する増殖阻害
度を求めた。結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】 表１に示すように、本化合物はヒト卵巣癌細胞に対して
増殖抑制作用（ＩＣ５００．１０μｇ／ｍｌ）を示し
た。
増殖抑制作用（ＩＣ５００．１０μｇ／ｍｌ）を示し
た。
【００２４】
【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、これは単な
る一例であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。
る一例であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。
【００２５】製造法 ロータリー型振とう機用５００ｍｌ三角フラスコにグル
コース２．０％、シュークロース２．０％、大豆粉０．
５％、ファーマメディア１．０％、肉エキス０．３％、
燐酸１カリウム０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５
％、硫酸鉄０．０００１１％、硫酸銅０．０００６４
％、硫酸亜鉛０．０００１５％、塩化マンガン０．００
０７９％、プロナール（ＳＴ−１）０．０１％、炭酸カ
ルシウム０．２％の培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌを分
注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。こ
れにＮＦ ０７５１１株（工業技術院生命工学工業技術
研究所 ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２）の１白金耳を接種
し、２５℃、２２０回転／分、の条件で２日間振とう培
養し種培養とした。引き続きロータリー型振とう機用５
００ｍｌ三角フラスコにグルコース２．０％、可溶性で
んぷん３．０％、大豆粉１．０％、グルテンミール１．
０％、酵母エキス０．２％、燐酸１カリウム０．０５
％、硫酸マグネシウム０．０５％、塩化カリウム０．１
％、硫酸鉄０．０００１１％、硫酸銅０．０００６４
％、硫酸亜鉛０．０００１５％、塩化マンガン０．００
０７９％、塩化コバルト０．０００１％の培地（ｐＨ
６．７）１００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オー
トクレーブ滅菌したフラスコに前記の種培養液１ｍｌを
移植し、２５℃、２２０回転／分、の条件で３日間振と
う培養した。
コース２．０％、シュークロース２．０％、大豆粉０．
５％、ファーマメディア１．０％、肉エキス０．３％、
燐酸１カリウム０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５
％、硫酸鉄０．０００１１％、硫酸銅０．０００６４
％、硫酸亜鉛０．０００１５％、塩化マンガン０．００
０７９％、プロナール（ＳＴ−１）０．０１％、炭酸カ
ルシウム０．２％の培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌを分
注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。こ
れにＮＦ ０７５１１株（工業技術院生命工学工業技術
研究所 ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２）の１白金耳を接種
し、２５℃、２２０回転／分、の条件で２日間振とう培
養し種培養とした。引き続きロータリー型振とう機用５
００ｍｌ三角フラスコにグルコース２．０％、可溶性で
んぷん３．０％、大豆粉１．０％、グルテンミール１．
０％、酵母エキス０．２％、燐酸１カリウム０．０５
％、硫酸マグネシウム０．０５％、塩化カリウム０．１
％、硫酸鉄０．０００１１％、硫酸銅０．０００６４
％、硫酸亜鉛０．０００１５％、塩化マンガン０．００
０７９％、塩化コバルト０．０００１％の培地（ｐＨ
６．７）１００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オー
トクレーブ滅菌したフラスコに前記の種培養液１ｍｌを
移植し、２５℃、２２０回転／分、の条件で３日間振と
う培養した。
【００２６】得られた培養液（５Ｌ）を通常のろ過方法
でろ液と菌体に分離した。得られた菌体にアセトン（３
Ｌ）を加えて攪拌し、その抽出液を濾過することにより
菌体のアセトン抽出液を得た。その抽出液のアセトン留
去後、６Ｎ塩酸を用いてｐＨ４に調節し、酢酸エチル
（２×８００ｍｌ）で抽出した。その酢酸エチル層の減
圧濃縮物（３．１１ｇ）について、ｎ−ヘキサン−アセ
トン（２：１）で展開するシリカゲルＢＷ７００（富士
シリシア化学社製）カラムクロマトグラフィー（φ３．
０×１２ｃｍ）を行い、活性画分（Ｆ．２２〜３３）を
濃縮し、濃縮乾固物（１１２ｍｇ）を得た。この濃縮乾
固物をセファデックスＬＨ−２０（ファルマシアバイオ
テク社製）カラムクロマトグラフィー（φ３．０×８７
ｃｍ、移動相：メタノール）を行い活性画分（Ｆ．４１
〜４３、１１．８ｍｇ ）を得、さらにコスモシール４
０Ｃ１８−ＰＲＥＰ（ナカライテスク社製）カラムクロ
マトグラフィー（φ１×４５ｃｍ、水−メタノール（６
０：４０〜０：１００））を行い精製することでＮＦ０
７５１１（４．４ｍｇ）を得た。精製したＮＦ０７５１
１を用いて、外観、分子量、溶解性、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーによるＲｆ値、紫外部吸収スペクト
ル、赤外吸収スペクトル、水素核磁気共鳴スペクトル、
炭素核磁気共鳴スペクトルを測定した。ＮＦ０７５１１
の物理化学的性質は前記した通りの値を示した。
でろ液と菌体に分離した。得られた菌体にアセトン（３
Ｌ）を加えて攪拌し、その抽出液を濾過することにより
菌体のアセトン抽出液を得た。その抽出液のアセトン留
去後、６Ｎ塩酸を用いてｐＨ４に調節し、酢酸エチル
（２×８００ｍｌ）で抽出した。その酢酸エチル層の減
圧濃縮物（３．１１ｇ）について、ｎ−ヘキサン−アセ
トン（２：１）で展開するシリカゲルＢＷ７００（富士
シリシア化学社製）カラムクロマトグラフィー（φ３．
０×１２ｃｍ）を行い、活性画分（Ｆ．２２〜３３）を
濃縮し、濃縮乾固物（１１２ｍｇ）を得た。この濃縮乾
固物をセファデックスＬＨ−２０（ファルマシアバイオ
テク社製）カラムクロマトグラフィー（φ３．０×８７
ｃｍ、移動相：メタノール）を行い活性画分（Ｆ．４１
〜４３、１１．８ｍｇ ）を得、さらにコスモシール４
０Ｃ１８−ＰＲＥＰ（ナカライテスク社製）カラムクロ
マトグラフィー（φ１×４５ｃｍ、水−メタノール（６
０：４０〜０：１００））を行い精製することでＮＦ０
７５１１（４．４ｍｇ）を得た。精製したＮＦ０７５１
１を用いて、外観、分子量、溶解性、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーによるＲｆ値、紫外部吸収スペクト
ル、赤外吸収スペクトル、水素核磁気共鳴スペクトル、
炭素核磁気共鳴スペクトルを測定した。ＮＦ０７５１１
の物理化学的性質は前記した通りの値を示した。
【００２７】
【発明の効果】以上より明らかなように、本発明の新規
生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に許容で
きる塩はヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に対して強い増
殖抑制活性を有し、制癌効果を示す。上記のように新規
生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に許容で
きる塩は制癌作用を有しているので、制癌剤などの医薬
として使用できる。
生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に許容で
きる塩はヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に対して強い増
殖抑制活性を有し、制癌効果を示す。上記のように新規
生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬学的に許容で
きる塩は制癌作用を有しているので、制癌剤などの医薬
として使用できる。
【図１】ＮＦ０７５１１のメタノール中で測定した紫外
部吸収スペクトル
部吸収スペクトル
【図２】ＮＦ０７５１１の臭化カリウム錠剤で測定した
赤外吸収スペクトル
赤外吸収スペクトル
【図３】ＮＦ０７５１１の重クロロホルム中で測定した
水素核磁気共鳴スペクトル
水素核磁気共鳴スペクトル
【図４】ＮＦ０７５１１の重クロロホルム中で測定した
炭素核磁気共鳴スペクトル
炭素核磁気共鳴スペクトル
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 13/00 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (6)
- 【請求項１】下記の理化学的性質を示す生理活性物質Ｎ
Ｆ０７５１１またはその薬学的に許容しうる塩。 １）外観；白色粉末 ２）分子量；４３２ ３）分子式；Ｃ19Ｈ16Ｎ2 Ｏ6 Ｓ2 ４）溶解性；低級アルコール、クロロホルム、ジメチル
スルホキシドに可溶、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎーヘキサン：アセトン（２：１）の展開溶媒で０．２
５を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（３００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトル（７５ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示した。 δ（多重度） １９３．５（ｓ）、１６４．９（ｓ）、１５７．７
（ｓ）、 １５６．９（ｓ）、１５２．１（ｄ）、１３１．６
（ｄ）、 １２９．２（ｄ）、１２４．７（ｄ）、１２３．７
（ｄ）、 １２１．０（ｓ）、１１１．１（ｄ）、 ９６．０
（ｓ）、 ８６．７（ｄ）、 ８３．８（ｓ）、 ７１．６
（ｓ）、 ５６．１（ｄ）、 ２９．６（ｔ）、 ２７．２
（ｑ）、 ２３．２（ｔ） １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素、塩化パラジ
ウムに陽性。 - 【請求項２】不完全糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌａｄｏ
ｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０７５１
１を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養
物中に生理活性物質ＮＦ０７５１１を生成蓄積せしめ、
これを採取する事を特徴とする生理活性物質ＮＦ０７５
１１またはその薬学的に許容しうる塩の製造法。 - 【請求項３】生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬
学的に許容しうる塩を有効成分とする医薬。 - 【請求項４】生理活性物質ＮＦ０７５１１またはその薬
学的に許容しうる塩を有効成分として含有する制癌剤。 - 【請求項５】不完全糸状菌類クラドリヌム（Ｃｌａｄｏ
ｒｒｈｉｎｕｍ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０７５１
１を生産する能力を有する微生物。 - 【請求項６】不完全糸状菌類クラドリヌム ＮＦ ０７
５１１（Ｃｌａｄｏｒｒｈｉｎｕｍ ＮＦ ０７５１
１）株（工業技術院生命工学工業技術研究所 受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１６６８２号）及びその変異株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10112901A JPH11290087A (ja) | 1998-04-09 | 1998-04-09 | 新規生理活性物質ｎｆ０７５１１、その製造法及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10112901A JPH11290087A (ja) | 1998-04-09 | 1998-04-09 | 新規生理活性物質ｎｆ０７５１１、その製造法及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11290087A true JPH11290087A (ja) | 1999-10-26 |
Family
ID=14598339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10112901A Pending JPH11290087A (ja) | 1998-04-09 | 1998-04-09 | 新規生理活性物質ｎｆ０７５１１、その製造法及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11290087A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002026744A1 (fr) * | 2000-09-27 | 2002-04-04 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Derives de mpc1001 |
-
1998
- 1998-04-09 JP JP10112901A patent/JPH11290087A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002026744A1 (fr) * | 2000-09-27 | 2002-04-04 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Derives de mpc1001 |
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