JPH11106344A - 新規生理活性物質ｎｆ０６３０７、その製造法及びその用途 - Google Patents
新規生理活性物質ｎｆ０６３０７、その製造法及びその用途Info
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- JPH11106344A JPH11106344A JP28110397A JP28110397A JPH11106344A JP H11106344 A JPH11106344 A JP H11106344A JP 28110397 A JP28110397 A JP 28110397A JP 28110397 A JP28110397 A JP 28110397A JP H11106344 A JPH11106344 A JP H11106344A
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- Japan
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- physiologically active
- aspergillus
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】制癌剤として有用な新規生理活性物質を提供す
ること。 【解決手段】アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産する
能力を有する微生物を培地に培養し、培養液中に生理活
性物質ＮＦ０６３０７を生成蓄積せしめ、これを採取す
ることにより生理活性物質ＮＦ０６３０７を得た。
ること。 【解決手段】アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産する
能力を有する微生物を培地に培養し、培養液中に生理活
性物質ＮＦ０６３０７を生成蓄積せしめ、これを採取す
ることにより生理活性物質ＮＦ０６３０７を得た。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規生理活性物質
ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩、その
製造法、それを有効成分とする医薬並びに制癌剤、及び
その生産菌に関する。
ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩、その
製造法、それを有効成分とする医薬並びに制癌剤、及び
その生産菌に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、制癌剤としてはアドリアマイシ
ン、アクチノマイシンなどが使用されている。
ン、アクチノマイシンなどが使用されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来、使用されている
制癌剤は効力、毒性などの点で不十分であり、また耐性
などの問題もあり、新しい制癌剤が求められている。
制癌剤は効力、毒性などの点で不十分であり、また耐性
などの問題もあり、新しい制癌剤が求められている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
微生物の代謝産物について、種々検索した結果、アスペ
ルギルス属に属する一菌株が制癌作用を有する新規生理
活性物質ＮＦ０６３０７を産生する事を見い出した。す
なわち、本発明は次の（１）〜（７）に関する。
微生物の代謝産物について、種々検索した結果、アスペ
ルギルス属に属する一菌株が制癌作用を有する新規生理
活性物質ＮＦ０６３０７を産生する事を見い出した。す
なわち、本発明は次の（１）〜（７）に関する。
【０００５】（１）下記式（Ｉ）で表される新規生理活
性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩
性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩
【０００６】
【化２】
【０００７】（２）下記の理化学的性質を示す生理活性
物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩
物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩
【０００８】１）外観；白色粉末 ２）分子量；５４８ ３）分子式；Ｃ26Ｈ46ＮＯ9 Ｐ ４）溶解性；低級アルコールに可溶、ヘキサン、石油エ
ーテル、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：１ｖ／ｖ）
の展開溶媒で０．４３を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（４００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（１００ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示す。 δ（ｐｐｍ） １６７．５（ｓ）、 １４４．５（ｄ）、１３２．０
（ｄ）、１３１．５（ｄ）、 １２５．９（ｄ）、 ７
５．８（ｄ）、７７．２（ｄｄ）、 ７３．８（ｄ）、
７２．５（ｄ）、６２．９（ｔｄ）、 ５９．４
（ｄ）、 ５９．２（ｄｄ）、４１．７（ｔｄ）、 ３
７．２（ｔ）、 ３６．２（ｔ）、３３．９（ｔ）、
３３．２（ｔ）、 ３３．２（ｔ）、３２．８
（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、２
９．８（ｔ）、 ２９．６（ｔ）、 ２８．８
（ｔ）、２６．６（ｔ）、 ２６．４（ｔ）、 ２
０．３（ｔ）． １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素に陽性。 （３）アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に
属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産する能力を有
する微生物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質Ｎ
Ｆ０６３０７を生成蓄積せしめ、これを採取する事を特
徴とする生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的
に許容しうる塩の製造法。 （４）生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分とする医薬。 （５）生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分として含有する制癌剤。
ーテル、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：１ｖ／ｖ）
の展開溶媒で０．４３を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（４００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（１００ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示す。 δ（ｐｐｍ） １６７．５（ｓ）、 １４４．５（ｄ）、１３２．０
（ｄ）、１３１．５（ｄ）、 １２５．９（ｄ）、 ７
５．８（ｄ）、７７．２（ｄｄ）、 ７３．８（ｄ）、
７２．５（ｄ）、６２．９（ｔｄ）、 ５９．４
（ｄ）、 ５９．２（ｄｄ）、４１．７（ｔｄ）、 ３
７．２（ｔ）、 ３６．２（ｔ）、３３．９（ｔ）、
３３．２（ｔ）、 ３３．２（ｔ）、３２．８
（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、２
９．８（ｔ）、 ２９．６（ｔ）、 ２８．８
（ｔ）、２６．６（ｔ）、 ２６．４（ｔ）、 ２
０．３（ｔ）． １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素に陽性。 （３）アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に
属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産する能力を有
する微生物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質Ｎ
Ｆ０６３０７を生成蓄積せしめ、これを採取する事を特
徴とする生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的
に許容しうる塩の製造法。 （４）生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分とする医薬。 （５）生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に
許容しうる塩を有効成分として含有する制癌剤。
【０００９】（６）アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産
する能力を有する微生物。 （７）アスペルギルス エスピー ＮＦ０６３０７（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．ＮＦ０６３０７）株（工業
技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−
１６０６４号）及びその変異株。
ｌｕｓ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産
する能力を有する微生物。 （７）アスペルギルス エスピー ＮＦ０６３０７（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．ＮＦ０６３０７）株（工業
技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−
１６０６４号）及びその変異株。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明における制癌活性を有する
生理活性物質ＮＦ０６３０７生産菌はアスペルギルス
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属し、例えば本発明者
らが分離したアスペルギルス エスピー ＮＦ０６３０
７（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＮＦ０６３０７）
株（工業技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６０６４号）は、本発明に最も有効に使用さ
れる菌株の一例であり、次の菌学的及び生理学的性質を
有する。
生理活性物質ＮＦ０６３０７生産菌はアスペルギルス
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属し、例えば本発明者
らが分離したアスペルギルス エスピー ＮＦ０６３０
７（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＮＦ０６３０７）
株（工業技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６０６４号）は、本発明に最も有効に使用さ
れる菌株の一例であり、次の菌学的及び生理学的性質を
有する。
【００１１】菌学的性質 １．各種培地での生育 各種培地上で２５℃、１０日間培養したときの生育状態
を表１に示す。
を表１に示す。
【００１２】
【表１】 培地 形態 表面色調 裏面色調 分生子 色素産生 コロニーの径 形成 ──────────────────────────────────── ＭＥＡ ビロード状 淡黄褐色 淡褐色 良好 − ６８−７１ｍｍ シナモン色 黄褐色 ＰＤＡ ビロード状 淡黄褐色 淡黄色 良好 黄色 ７４−７６ｍｍ シナモン色 暗黄色 ＣＺＡ ビロード状 淡黄褐色 黄褐色 良好 帯黄色 ３０−３２ｍｍ シナモン色 暗黄色 ＣＹＡ ビロード状 淡黄色 黄褐色 良好 黄色 ７８−８１ｍｍ 淡黄褐色 ＣＭＡ ビロード状 淡黄色 灰黄色 良好 黄色 ２３−２６ｍｍ 淡黄褐色 ＭＹ２０ ビロード状 淡黄色 黄橙色 良好 黄色 ８０ｍｍ以上 橙褐色 Ｍ４０Ｙ ビロード状 淡黄色 淡黄色 良好 黄色 ８０ｍｍ以上 淡黄褐色 ──────────────────────────────────── ＭＥＡ：麦芽エキス寒天培地、ＰＤＡ：ポテトデキストロース寒天培地 ＣＺＡ：ツァペック寒天培地、ＣＹＡ：ツァペック酵母エキス寒天培地 ＣＭＡ：コーンミール寒天培地 ＭＹ２０：麦芽酵母エキス２０％グルコース寒天培地 Ｍ４０Ｙ：麦芽酵母エキス４０％ショ糖寒天培地
【００１３】本菌株は、麦芽エキス寒天培地上での生育
は良好で、ビロード状となる。集落の表面は淡黄褐色、
シナモン色を呈する。裏面は淡褐色、黄褐色を呈する。
分生子形成は良好である。ポテトデキストロース寒天培
地上での生育は良好でビロード状の集落となる。集落の
表面は淡黄褐色、シナモン色を呈する。裏面は淡黄色、
暗黄色を呈する。培地中に黄色素を産生する。ツァペッ
ク寒天培地上での生育は制限的でビロード状の平坦な集
落となる。表面は淡黄褐色、シナモン色を呈する。裏面
は暗黄色、黄褐色となる。
は良好で、ビロード状となる。集落の表面は淡黄褐色、
シナモン色を呈する。裏面は淡褐色、黄褐色を呈する。
分生子形成は良好である。ポテトデキストロース寒天培
地上での生育は良好でビロード状の集落となる。集落の
表面は淡黄褐色、シナモン色を呈する。裏面は淡黄色、
暗黄色を呈する。培地中に黄色素を産生する。ツァペッ
ク寒天培地上での生育は制限的でビロード状の平坦な集
落となる。表面は淡黄褐色、シナモン色を呈する。裏面
は暗黄色、黄褐色となる。
【００１４】２．形態的特徴 麦芽エキス寒天培地上で２５℃、２週間培養した本菌株
を光学顕微鏡下で観察したときの形態的特徴を以下に記
載する。菌糸は幅１．０−１２．０μｍ、無色、滑面、
隔壁を有する。分生子頭は、密な円筒形となり、褐色を
呈する。長さ１００−１７５μｍ、直径３７．５−８
７．３μｍとなる。分生子柄は、基中菌糸あるいは気生
菌糸より生じ、無色、滑面、長さ８０−３５０μｍ、直
径２．５−７．５μｍとなる。頂のうは、分生子柄先端
に形成され、半球形、フラスコ型、上部１／２よりメト
レを生じる。直径１０．０−２３．８μｍ。メトレは、
円筒形、無色、大きさは６．０−８．０×２．０−３．
０μｍ。フィアリドは、アンプル形、無色、メトレより
数本輪生する。大きさは５．０−８．０×１．５−３．
０μｍ。分生子は、２種類形成される。１つはフィアロ
型分生子でフィアリドの先端より生じ鎖状に連なり、球
形、亜球形、滑面。大きさは２．０−３．０μｍ。もう
１つは、アレウロ型分生子で菌糸上より単生し、球形、
亜球形、楕円形、大きさは４．０−７．５μｍ。
を光学顕微鏡下で観察したときの形態的特徴を以下に記
載する。菌糸は幅１．０−１２．０μｍ、無色、滑面、
隔壁を有する。分生子頭は、密な円筒形となり、褐色を
呈する。長さ１００−１７５μｍ、直径３７．５−８
７．３μｍとなる。分生子柄は、基中菌糸あるいは気生
菌糸より生じ、無色、滑面、長さ８０−３５０μｍ、直
径２．５−７．５μｍとなる。頂のうは、分生子柄先端
に形成され、半球形、フラスコ型、上部１／２よりメト
レを生じる。直径１０．０−２３．８μｍ。メトレは、
円筒形、無色、大きさは６．０−８．０×２．０−３．
０μｍ。フィアリドは、アンプル形、無色、メトレより
数本輪生する。大きさは５．０−８．０×１．５−３．
０μｍ。分生子は、２種類形成される。１つはフィアロ
型分生子でフィアリドの先端より生じ鎖状に連なり、球
形、亜球形、滑面。大きさは２．０−３．０μｍ。もう
１つは、アレウロ型分生子で菌糸上より単生し、球形、
亜球形、楕円形、大きさは４．０−７．５μｍ。
【００１５】生理学的性質 本菌株は、好気性で、麦芽エキス寒天培地において生育
至適ｐＨは７−９である。生育至適温度は３２℃付近
で、１０℃では生育しない。４２℃では生育する。また
高糖濃度のＭＹ２０、Ｍ４０Ｙ寒天培地上での生育も良
好なことから本菌株には条件的好濃性がある。
至適ｐＨは７−９である。生育至適温度は３２℃付近
で、１０℃では生育しない。４２℃では生育する。また
高糖濃度のＭＹ２０、Ｍ４０Ｙ寒天培地上での生育も良
好なことから本菌株には条件的好濃性がある。
【００１６】以上の菌学的および生理学的性質より本菌
株は、ホークスワース（Ｄ．Ｌ．Ｈａｗｋｓｗｏｒｔ
ｈ）、サットン（Ｂ．Ｃ．Ｓｕｔｔｏｎ）、エーンズワ
ース（Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ）編、「エーンズワ
ース・アンド・ビスビーズ・ディクショナリー・オブ・
ザ・ファンジャイ第７版（Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ
Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｆｕｎｇｉ， ７ｔｈｅｄ．（１９８３））」に従い、
真菌門、不完全菌亜門、不完全糸状菌綱、アスペルギル
ス属菌に分類されることが判明し、種レベルの検索を行
ったところ、アスペルギルス テレウス（Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）の記載とほぼ一致したの
で本菌株をアスペルギルス テレウス ＮＦ０６３０７
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ＮＦ０６
３０７）と同定した。なお、該菌株は、工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−１６０
６４号として寄託されている。
株は、ホークスワース（Ｄ．Ｌ．Ｈａｗｋｓｗｏｒｔ
ｈ）、サットン（Ｂ．Ｃ．Ｓｕｔｔｏｎ）、エーンズワ
ース（Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ）編、「エーンズワ
ース・アンド・ビスビーズ・ディクショナリー・オブ・
ザ・ファンジャイ第７版（Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ
Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｆｕｎｇｉ， ７ｔｈｅｄ．（１９８３））」に従い、
真菌門、不完全菌亜門、不完全糸状菌綱、アスペルギル
ス属菌に分類されることが判明し、種レベルの検索を行
ったところ、アスペルギルス テレウス（Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）の記載とほぼ一致したの
で本菌株をアスペルギルス テレウス ＮＦ０６３０７
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ＮＦ０６
３０７）と同定した。なお、該菌株は、工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−１６０
６４号として寄託されている。
【００１７】本発明に用いるアスペルギルス属に属する
菌株はアスペルギルス属の他の菌株と同様、その性状が
変化しやすく、例えば、紫外線、エックス線および薬品
などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるもの
であり、どの様な変異株であっても本発明の対象とする
生理活性物質ＮＦ０６３０７の生産能を有するものは、
すべて本発明に使用する事ができる。
菌株はアスペルギルス属の他の菌株と同様、その性状が
変化しやすく、例えば、紫外線、エックス線および薬品
などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるもの
であり、どの様な変異株であっても本発明の対象とする
生理活性物質ＮＦ０６３０７の生産能を有するものは、
すべて本発明に使用する事ができる。
【００１８】本発明によりＮＦ０６３０７を製造するに
は、まず前記菌株を菌が利用し得る栄養物を含有する培
地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から菌の
培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば炭
素源としてはグルコース、フラクトース、グリセリン、
シュークロース、デキストリン、ガラクトース、有機酸
などを単独かまたは組み合わせて用いることができる。
は、まず前記菌株を菌が利用し得る栄養物を含有する培
地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から菌の
培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば炭
素源としてはグルコース、フラクトース、グリセリン、
シュークロース、デキストリン、ガラクトース、有機酸
などを単独かまたは組み合わせて用いることができる。
【００１９】無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、オートミールなどを
単独または組み合わせて用いることができる。
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、オートミールなどを
単独または組み合わせて用いることができる。
【００２０】その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は２０〜４５℃、ｐＨは微酸性ないし微アルカ
リ性で培養を行うことが望ましい。
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は２０〜４５℃、ｐＨは微酸性ないし微アルカ
リ性で培養を行うことが望ましい。
【００２１】液体培養では通常３〜５日間培養を行うと
ＮＦ０６３０７物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、菌体
と培養液をろ別し、菌体より目的物を精製単離する。菌
体から本物質の精製単離には一般に微生物代謝生産物を
その培養菌体から単離するために、用いられる分離精製
の方法が利用される。
ＮＦ０６３０７物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、菌体
と培養液をろ別し、菌体より目的物を精製単離する。菌
体から本物質の精製単離には一般に微生物代謝生産物を
その培養菌体から単離するために、用いられる分離精製
の方法が利用される。
【００２２】即ち、培養液は通常のろ過法でろ液と菌体
部に分離する。得られた菌体部をアセトンに懸濁し、ろ
過後、アセトン抽出液を得る。そのろ液から減圧下アセ
トンを留去し水と混ざらない一般的な有機溶媒に転溶
し、減圧濃縮することによりＮＦ０６３０７物質を含む
油状物質を得る。
部に分離する。得られた菌体部をアセトンに懸濁し、ろ
過後、アセトン抽出液を得る。そのろ液から減圧下アセ
トンを留去し水と混ざらない一般的な有機溶媒に転溶
し、減圧濃縮することによりＮＦ０６３０７物質を含む
油状物質を得る。
【００２３】その油状物質はさらに脂溶性物質の精製に
使用される公知の方法、即ち、シリカゲルあるいはＯＤ
Ｓ、分子篩を用いるカラムクロマトグラフィーあるいは
再結晶化法を単独に又は適時組み合わせることにより精
製する。精製に好適な例として分子篩を用い、溶出液と
してメタノールを用いるカラムクロマトグラフィー法が
あげられる。得られた活性画分についてさらに、ＯＤＳ
カラムクロマトグラフィー（移動相：水−アセトニトリ
ル）を行い、ＮＦ０６３０７を得る。
使用される公知の方法、即ち、シリカゲルあるいはＯＤ
Ｓ、分子篩を用いるカラムクロマトグラフィーあるいは
再結晶化法を単独に又は適時組み合わせることにより精
製する。精製に好適な例として分子篩を用い、溶出液と
してメタノールを用いるカラムクロマトグラフィー法が
あげられる。得られた活性画分についてさらに、ＯＤＳ
カラムクロマトグラフィー（移動相：水−アセトニトリ
ル）を行い、ＮＦ０６３０７を得る。
【００２４】上記のようにして得られた生理活性物質Ｎ
Ｆ０６３０７の理化学的性質を下記に示す。
Ｆ０６３０７の理化学的性質を下記に示す。
【００２５】１）外観；白色粉末 ２）分子量；５４８ ３）分子式；Ｃ26Ｈ46ＮＯ9 Ｐ ４）溶解性；低級アルコールに可溶、ヘキサン、石油エ
ーテル、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：１ｖ／ｖ）
の展開溶媒で０．４３を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；
臭化カリウム錠剤で測定したスペクトルを図２に
示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（４００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（１００ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示す。 δ（ｐｐｍ） １６７．５（ｓ）、 １４４．５（ｄ）、１３２．０
（ｄ）、１３１．５（ｄ）、 １２５．９（ｄ）、 ７
５．８（ｄ）、７７．２（ｄｄ）、 ７３．８（ｄ）、
７２．５（ｄ）、６２．９（ｔｄ）、 ５９．４
（ｄ）、 ５９．２（ｄｄ）、４１．７（ｔｄ）、 ３
７．２（ｔ）、 ３６．２（ｔ）、３３．９（ｔ）、
３３．２（ｔ）、 ３３．２（ｔ）、３２．８
（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、２
９．８（ｔ）、 ２９．６（ｔ）、 ２８．８
（ｔ）、２６．６（ｔ）、 ２６．４（ｔ）、 ２
０．３（ｔ）． １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素に陽性。
ーテル、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：１ｖ／ｖ）
の展開溶媒で０．４３を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；
臭化カリウム錠剤で測定したスペクトルを図２に
示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（４００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（１００ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示す。 δ（ｐｐｍ） １６７．５（ｓ）、 １４４．５（ｄ）、１３２．０
（ｄ）、１３１．５（ｄ）、 １２５．９（ｄ）、 ７
５．８（ｄ）、７７．２（ｄｄ）、 ７３．８（ｄ）、
７２．５（ｄ）、６２．９（ｔｄ）、 ５９．４
（ｄ）、 ５９．２（ｄｄ）、４１．７（ｔｄ）、 ３
７．２（ｔ）、 ３６．２（ｔ）、３３．９（ｔ）、
３３．２（ｔ）、 ３３．２（ｔ）、３２．８
（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、２
９．８（ｔ）、 ２９．６（ｔ）、 ２８．８
（ｔ）、２６．６（ｔ）、 ２６．４（ｔ）、 ２
０．３（ｔ）． １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素に陽性。
【００２６】ＮＦ０６３０７の薬学的に許容し得る塩
は、公知の方法によって製造することができ、例えば水
酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび塩酸、硫酸など
を含む溶液で処理することによって得ることができる。
は、公知の方法によって製造することができ、例えば水
酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび塩酸、硫酸など
を含む溶液で処理することによって得ることができる。
【００２７】医薬品として使用する場合の製剤化および
投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すなわ
ち、投与方法としては注射、経口、直腸投与などが可能
である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠
剤、坐剤などの形態がとり得る。
投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すなわ
ち、投与方法としては注射、経口、直腸投与などが可能
である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠
剤、坐剤などの形態がとり得る。
【００２８】製剤化の際にＮＦ０６３０７またはその塩
に悪影響を与えない限り、医薬用に用いられる種々の補
助剤、すなわち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、
防腐剤、無痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されう
る。製剤において、ＮＦ０６３０７またはその塩の含量
は製剤形態等により広範囲に変えることが可能であり、
一般にはＮＦ０６３０７またはその塩を０．０１〜１０
０％（重量）、好ましくは０．１〜７０％（重量）含有
し、残りは通常医薬用に使用される担体その他の補助剤
からなる。
に悪影響を与えない限り、医薬用に用いられる種々の補
助剤、すなわち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、
防腐剤、無痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されう
る。製剤において、ＮＦ０６３０７またはその塩の含量
は製剤形態等により広範囲に変えることが可能であり、
一般にはＮＦ０６３０７またはその塩を０．０１〜１０
０％（重量）、好ましくは０．１〜７０％（重量）含有
し、残りは通常医薬用に使用される担体その他の補助剤
からなる。
【００２９】ＮＦ０６３０７またはその塩の投与量は症
状等により異なるが、成人１人１日当り０．０１〜８０
０ｍｇ程度である。連投を必要とする場合には１日当り
の使用量をおさえることが好ましい。
状等により異なるが、成人１人１日当り０．０１〜８０
０ｍｇ程度である。連投を必要とする場合には１日当り
の使用量をおさえることが好ましい。
【００３０】作用 以下に実験例を挙げて、ＮＦ０６３０７の制癌作用につ
いて述べる。 実験例 ヒト卵巣癌細胞を２×１０4 個／ｍｌの割合で９６穴培
養プレートに２００μｌ接種し、２４時間培養後、被験
薬（ＮＦ０６３０７）をジメチルスルホキシドで希釈し
たものを種々の濃度で添加した。その後、３７℃、５％
ＣＯ2 インキュベータで７２時間培養した。培養後、生
細胞数をＭＴＴ法により測定し、その吸光度からコント
ロールに対する増殖阻害度を求めた。結果を表２に示
す。
いて述べる。 実験例 ヒト卵巣癌細胞を２×１０4 個／ｍｌの割合で９６穴培
養プレートに２００μｌ接種し、２４時間培養後、被験
薬（ＮＦ０６３０７）をジメチルスルホキシドで希釈し
たものを種々の濃度で添加した。その後、３７℃、５％
ＣＯ2 インキュベータで７２時間培養した。培養後、生
細胞数をＭＴＴ法により測定し、その吸光度からコント
ロールに対する増殖阻害度を求めた。結果を表２に示
す。
【００３１】
【表２】 ヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に対する増殖抑制作用 ────────────────────────── 試験濃度（μｇ／ｍｌ） 増殖抑制度（％） ────────────────────────── １００ ９５ ３３．３ ９１ １１．１ ８４ ３．７ ５６ １．２ −７ ──────────────────────────
【００３２】表２に示すように、本化合物はヒト卵巣癌
細胞に対して増殖抑制作用を示した。
細胞に対して増殖抑制作用を示した。
【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、これは単な
る一例であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。
る一例であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。
【００３３】製造法 ロータリー型振とう機用５００ｍｌ三角フラスコにグル
コース１．０％、シュークロース２．０％、大豆粉２．
０％、燐酸２カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．
０５％の培地（ｐＨ６．４）１００ｍｌを分注し、１２
０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。これにＮＦ０
６３０７株（工業技術院生命工学工業研究所受託番号Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１６０６４号）の１白金耳を接種し、２５
℃、２２０回転／分、の条件で２日間振とう培養し種培
養とした。引き続きロータリー型振とう機用５００ｍｌ
三角フラスコにグルコース１．０％、シュークロース
２．０％、大豆粉２．０％、燐酸２カリウム０．１％、
硫酸マグネシウム０．０５％の培地（ｐＨ６．４）１０
０ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅
菌したフラスコに前記の種培養液１ｍｌを移植し、２５
℃、２２０回転／分、の条件で４日間振とう培養した。
コース１．０％、シュークロース２．０％、大豆粉２．
０％、燐酸２カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．
０５％の培地（ｐＨ６．４）１００ｍｌを分注し、１２
０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。これにＮＦ０
６３０７株（工業技術院生命工学工業研究所受託番号Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１６０６４号）の１白金耳を接種し、２５
℃、２２０回転／分、の条件で２日間振とう培養し種培
養とした。引き続きロータリー型振とう機用５００ｍｌ
三角フラスコにグルコース１．０％、シュークロース
２．０％、大豆粉２．０％、燐酸２カリウム０．１％、
硫酸マグネシウム０．０５％の培地（ｐＨ６．４）１０
０ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅
菌したフラスコに前記の種培養液１ｍｌを移植し、２５
℃、２２０回転／分、の条件で４日間振とう培養した。
【００３４】得られた培養液（５Ｌ）を通常のろ過方法
でろ液と菌体に分離した。得られた菌体にアセトン（３
Ｌ）を加えて攪拌し、その抽出液を濾過することにより
菌体のアセトン抽出液を得た。その抽出液のアセトン留
去後、酢酸エチル、ｎ−ブタノールで順次抽出した。そ
のｎ−ブタノール層の減圧濃縮物について、メタノール
で展開するトヨパールＨＷ４０（東ソー社製）カラムク
ロマトグラフィー（φ２．０×６０ｃｍ）を行い、活性
画分（Ｆ．１６−１８）を濃縮し、濃縮乾固物（０．３
ｇ）を得た。この濃縮乾固物をセファデックスＬＨ−２
０（ファルマシアバイオテク社製）カラムクロマトグラ
フィー（φ２．０×７０ｃｍ、移動相：メタノール）を
行い活性画分（Ｆ．１２−１３）を得、さらにＯＤＳカ
ラムクロマトグラフィー（φ２．０×３０ｃｍ、水−ア
セトニトリル（１００：０〜５５：４５ｖ／ｖ））を行
い精製することでＮＦ０６３０７（２８．１ｍｇ）を得
た。精製したＮＦ０６３０７を用いて、外観、分子量、
溶解性、シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
値、紫外部吸収スペクトル、赤外吸収スペクトル、 1 Ｈ
−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを測定し
た。ＮＦ０６３０７の理化学的性質は前記した通りの値
を示した。
でろ液と菌体に分離した。得られた菌体にアセトン（３
Ｌ）を加えて攪拌し、その抽出液を濾過することにより
菌体のアセトン抽出液を得た。その抽出液のアセトン留
去後、酢酸エチル、ｎ−ブタノールで順次抽出した。そ
のｎ−ブタノール層の減圧濃縮物について、メタノール
で展開するトヨパールＨＷ４０（東ソー社製）カラムク
ロマトグラフィー（φ２．０×６０ｃｍ）を行い、活性
画分（Ｆ．１６−１８）を濃縮し、濃縮乾固物（０．３
ｇ）を得た。この濃縮乾固物をセファデックスＬＨ−２
０（ファルマシアバイオテク社製）カラムクロマトグラ
フィー（φ２．０×７０ｃｍ、移動相：メタノール）を
行い活性画分（Ｆ．１２−１３）を得、さらにＯＤＳカ
ラムクロマトグラフィー（φ２．０×３０ｃｍ、水−ア
セトニトリル（１００：０〜５５：４５ｖ／ｖ））を行
い精製することでＮＦ０６３０７（２８．１ｍｇ）を得
た。精製したＮＦ０６３０７を用いて、外観、分子量、
溶解性、シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
値、紫外部吸収スペクトル、赤外吸収スペクトル、 1 Ｈ
−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを測定し
た。ＮＦ０６３０７の理化学的性質は前記した通りの値
を示した。
【００３５】
【発明の効果】以上より明らかなように、本発明の新規
生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容で
きる塩はヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に対して強い増
殖抑制活性を有し、制癌効果を示す。上記のように新規
生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容で
きる塩は制癌作用を有しているので、制癌剤などの医薬
として使用できる。
生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容で
きる塩はヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に対して強い増
殖抑制活性を有し、制癌効果を示す。上記のように新規
生理活性物質ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容で
きる塩は制癌作用を有しているので、制癌剤などの医薬
として使用できる。
【図１】ＮＦ０６３０７のメタノール中で測定した紫外
部吸収スペクトル
部吸収スペクトル
【図２】ＮＦ０６３０７の臭化カリウム錠剤で測定した
赤外吸収スペクトル
赤外吸収スペクトル
【図３】ＮＦ０６３０７の重メタノール中で測定した水
素核磁気共鳴スペクトル
素核磁気共鳴スペクトル
【図４】ＮＦ０６３０７の重メタノール中で測定した炭
素核磁気共鳴スペクトル
素核磁気共鳴スペクトル
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:66）
Claims (7)
- 【請求項１】下記式（Ｉ）で表される新規生理活性物質
ＮＦ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩 【化１】 - 【請求項２】下記の理化学的性質を示す生理活性物質Ｎ
Ｆ０６３０７またはその薬学的に許容しうる塩 １）外観；白色粉末 ２）分子量；５４８ ３）分子式；Ｃ26Ｈ46ＮＯ9 Ｐ ４）溶解性；低級アルコールに可溶、ヘキサン、石油エ
ーテル、水に不溶。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：１ｖ／ｖ）
の展開溶媒で０．４３を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（４００ＭＨｚ）を図３に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重メタノール中で測定
したスペクトル（１００ＭＨｚ）を図４に示す。そし
て、化学シフト値を以下に示す。 δ（ｐｐｍ） １６７．５（ｓ）、 １４４．５（ｄ）、１３２．０
（ｄ）、 １３１．５（ｄ）、 １２５．９（ｄ）、 ７５．８
（ｄ）、 ７７．２（ｄｄ）、 ７３．８（ｄ）、 ７２．５
（ｄ）、 ６２．９（ｔｄ）、 ５９．４（ｄ）、 ５９．２（ｄ
ｄ）、 ４１．７（ｔｄ）、 ３７．２（ｔ）、 ３６．２
（ｔ）、 ３３．９（ｔ）、 ３３．２（ｔ）、 ３３．２
（ｔ）、 ３２．８（ｔ）、 ３０．２（ｔ）、 ３０．２
（ｔ）、 ２９．８（ｔ）、 ２９．６（ｔ）、 ２８．８
（ｔ）、 ２６．６（ｔ）、 ２６．４（ｔ）、 ２０．３
（ｔ）． １０）呈色反応；バニリン−硫酸、ヨウ素に陽性。 - 【請求項３】アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）属に属し、生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産する
能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に生理活
性物質ＮＦ０６３０７を生成蓄積せしめ、これを採取す
る事を特徴とする生理活性物質ＮＦ０６３０７またはそ
の薬学的に許容しうる塩の製造法。 - 【請求項４】新規生理活性物質ＮＦ０６３０７またはそ
の薬学的に許容しうる塩を有効成分とする医薬。 - 【請求項５】新規生理活性物質ＮＦ０６３０７またはそ
の薬学的に許容しうる塩を有効成分として含有する制癌
剤。 - 【請求項６】アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）属に属し、新規生理活性物質ＮＦ０６３０７を生産
する能力を有する微生物。 - 【請求項７】アスペルギルス エスピー ＮＦ０６３０
７（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＮＦ０６３０７）
株（工業技術院生命工学工業技術研究所受託番号ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６０６４号）及びその変異株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28110397A JPH11106344A (ja) | 1997-09-30 | 1997-09-30 | 新規生理活性物質ｎｆ０６３０７、その製造法及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28110397A JPH11106344A (ja) | 1997-09-30 | 1997-09-30 | 新規生理活性物質ｎｆ０６３０７、その製造法及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11106344A true JPH11106344A (ja) | 1999-04-20 |
Family
ID=17634399
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28110397A Pending JPH11106344A (ja) | 1997-09-30 | 1997-09-30 | 新規生理活性物質ｎｆ０６３０７、その製造法及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11106344A (ja) |
-
1997
- 1997-09-30 JP JP28110397A patent/JPH11106344A/ja active Pending
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