JPH05194571A - 新規抗生物質ｎｋ３７４１８６ａ、ｎｋ３７４１８６ｂ、ｎｋ３７４１８６ｂ３及びｎｋ３７４１８６ｃ３、その製造法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目 的】抗菌、抗腫瘍活性、免疫調節活性及び肝再生
促進活性を有する新規抗生物質ＮＫ３７４１８６Ａ、Ｎ
Ｋ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮＫ３７
４１８６Ｃ３を提供する。 【構 成】ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、
ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮＫ３７４１８６Ｃ３はペニ
シリウムｓｐ ＮＫ３７４１８６株（微工研菌寄第１２
２８５号）の培養によって得られ、ＮＫ３７４１８６Ａ
は示性式Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₁₂Ｓ、分子量Ｍ⁺ ７３５（ＦＤ
−ＭＳ ｍ／ｚ）を持ち、ＮＫ３７４１８６Ｂを示性式
Ｃ₃₁Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₉ 、分子量Ｍ⁺ ６５５（ＦＤ−ＭＳ ｍ
／ｚ）を持ち、ＮＫ３７４１８６Ｂ３は示性式Ｃ₃₄Ｈ₆₁
Ｎ₃ Ｏ₉ 、分子量Ｍ⁺ ６５５（ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ）を
持ち、ＮＫ３７４１８６Ｃ３は、示性式Ｃ₃₂Ｈ₅₉Ｎ₃ Ｏ
₇ 、分子量Ｍ⁺ ５９７（ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ）を持つ化
合物である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規抗生物質ＮＫ３７４
１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３
あるいはＮＫ３７４１８６Ｃ３の製造法及びその用途に
関する。本発明の化合物は、抗菌活性、細胞増殖抑制作
用、リンパ球幼若化反応促進作用、移植片対宿主反応促
進作用及び肝再生促進作用を有し、抗菌剤、悪性腫瘍に
対する化学療法剤、免疫調節剤あるいは肝疾患治療薬な
どとして使用される薬理活性物質として期待される。

【０００２】

【従来の技術】従来、抗癌剤としてはアドリアマイシ
ン、ブレオマイシン、シスプラチン、エトポシド等が知
られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、これらは毒性
が強く、満足すべきものでない。一方、既存の免疫調節
剤、肝疾患治療薬もその効果は満足すべきものでない。
これらの用途に適する新規化合物の発明が待たれてい
る。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは微
生物の代謝産物について、種々検索した結果、糸状菌に
属する一菌株が哺乳動物細胞に対する弱い増殖抑制作用
等を有する抗生物質ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３７４１
８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮＫ３７４１８６Ｃ
３を産生する事を見い出した。

【０００５】本発明は、上記知見に基づいて完成された
ものである。上記新規物質ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３
７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮＫ３７４１
８６Ｃ３は、ペニシリウム属に属するＮＫ３７４１８６
Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮ
Ｋ３７４１８６Ｃ３生産菌を培養し、生成蓄積せしめ、
この培養物より抗生物質ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３７
４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮＫ３７４１８
６Ｃ３を採取する事により得られる。

【０００６】ＮＫ３７４１８６Ａ、Ｂ、Ｂ３及びＣ３の
生産菌の代表的なものとして平成元年４月、新潟県弥彦
の雑木林の土壌より分離したＮＫ３７４１８６株（微工
研菌寄第１２２８５号、ＦＥＲＭＰ−１２２８５、以下
ＮＫ３７４１８６株と略す）（微工研条寄第３８７０
号）があげられる。

【０００７】以下にＮＫ３７４１８６株の菌学的性状を
示す。麦芽エキス寒天培地上（２７℃）の生育は良く、
１０日間で、集落の径は、５４．３ｍｍに達する。集落
の表面は、気生菌糸が着生する。培養日数に従い、中央
部より黄→ピンク→灰緑色と変化していく。裏面は、う
す黄から→黄→ピンク→赤と変化する。

【０００８】バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２７℃）
の生育も良く、１０日間で５３．０ｍｍに達する。色調
の変化は、麦芽エキス培地と似ている。

【０００９】ツアペック寒天培地上（２７℃）の生育は
悪く、１０日間で２２．３ｍｍに達する。培養にともな
い裏表とも中央部が、ピンクから赤と変化するが、上記
２培地と異なり、表面は灰緑色に変化しない。ＹｐＳｓ
寒天培地上（２７℃）の生育は良く、１０日間で４３．
６ｍｍに達する。

【００１０】本菌はＹｐＳｓ寒天培地上で楕円形ないし
亜球形（約２μｍ）で粗面なる分生子が連鎖状に、多数
形成する。フィアライドはペン先状にとがり、約１．５
μｍ×８μｍで数本（３〜５本）が輪生体をなす。メト
レは約２μｍ×８μｍで数本（４〜８本）が群生する。
また、生育温度は１０℃〜３７℃で至適温度は、２８℃
前後である。生育ｐＨは２〜１１で生育し、至適ｐＨは
４〜８である。

【００１１】以上の菌学的性質より本菌は、Ｇenus Ｐ
enicillium ＆ Ｉt's Ｔeleomor-phic Ｓtates ；Ｅ
upenicillium ＆ Ｔalaromyces（１９７９年 Ａcade
micＰress, Ｊohn Ｉ．Ｐitt 著）に従い、真正菌類、
不完全菌亜門、不完全糸状菌綱、フィアロ型中のペニシ
リウム属に属する一菌株である事が明らかになり本菌株
Ｐenicillium ｓｐ．ＮＫ３７４１８６株と命名した。

【００１２】本発明に用いるペニシリウム属に属する菌
株は他のペニシリウム属の菌株と同様、その性状が変化
しやすく、例えば紫外線、エックス線および薬品などを
用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるものであ
り、どの様な変異株であっても本発明の対象とする生理
活性物質ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、Ｎ
Ｋ３７４１８６Ｂ３又は（および）ＮＫ３７４１８６Ｃ
３（以下これらを含めて単にＮＫ３７４１８６とい
う。）の生産能を有するものはすべて本発明に使用する
ことができる。

【００１３】本発明によりＮＫ３７４１８６を製造する
には、まず前記菌株をカビが利用し得る栄養物を含有す
る培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から
カビの培養に利用されている公知のものが使用でき、例
えば炭素源としてはグルコース、フラクトース、グリセ
リン、シュークロース、デキストリン、ガラクトース、
有機酸などを単独かまたは組み合わせて用いることがで
きる。

【００１４】無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル・ベジタ
ブル・プロティン、オートミールなどを単独または組み
合わせて用いることができる。

【００１５】その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は１５℃〜３５℃、ｐＨは中性ないし微酸性で
培養を行うことが望ましい。

【００１６】液体培養では通常３〜５日間培養を行うと
ＮＫ３７４１８６物質が培養液中に生成蓄積される。培
養菌体中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、
菌体と培養液をろ別し、目的物を精製単離する。菌体か
ら本物質の精製単離には一般に微生物代謝生産物をその
培養菌体から単離するために、用いられる分離精製の方
法が利用される。

【００１７】即ち、培養液は通常のろ過法でろ液と菌体
部に分離する。菌体部をメタノールで抽出後、得られた
抽出液に等量の水を加え、次いでＨＰ−２０吸着樹脂に
吸着させる。洗浄後６０％アセトン、及びメタノールで
溶出し、画分１及び２を得る。

【００１８】画分１は濃縮乾固後、後記実施例に示すよ
うにして、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＬＨ
−２０カラムクロマトグラフィーに、順次かけ活性画分
を集め、減圧濃縮すると無色のＮＫ３７４１８６Ａ物質
を得る。

【００１９】また、画分２は、濃縮乾固後、後記実施例
に示すようにして、シリカゲルクロマトグラフィーにか
け、３つの活性画分として２ａ、２ｂ、２ｃを得る。画
分２ａ、及び２ｂからはＬＨ−２０クロマトグラフィー
により、無色のＮＫ３７４１８６Ｂ及びＮＫ３７４１８
６Ｂ３を、それぞれ得る事ができる。画分２ｃからは、
シリカゲルクロマトグラフィー、ＬＨ−２０カラムクロ
マトグラフィーに、順次かける事により、ＮＫ３７４１
８６Ｃ３を得る事ができる。

【００２０】上記のようにして得られた抗生物質ＮＫ３
７４１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６
Ｂ３及びＮＫ３７４１８６Ｃ３又はその塩の理化学的性
質を下記に示す。 ａ） ＮＫ３７４１８６Ａ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ７３５） ３） 示性式；Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₁₂Ｓ ４） 溶解性；低級アルコール、クロロホルム、酢酸エ
チルに可溶 ５） シリカゲル薄層（メルク社Ａrt. 5715) クロマト
グラフィーによるＲｆ値；クロロホルム：メタノール
（２０：１）の展開溶媒で０．１２を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図１に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定
したスペクトルを図２に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図３に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図４に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素ートリ
ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性

【００２１】ｂ） ＮＫ３７４１８６Ｂ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ６５５） ３） 示性式；Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₉ ４） 溶解性；低級アルコール、クロロホルム、酢酸エ
チルに可溶 ５） シリカゲル薄層（メルク社Ａrt. 5715) クロマト
グラフィーによるＲｆ値；クロロホルム：メタノール
（２０：１）の展開溶媒で０．３５を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図５に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定
したスペクトルを図６に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図７に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図８に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素ートリ
ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性

【００２２】ｃ） ＮＫ３７４１８６Ｂ３ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ６５５） ３） 示性式；Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₉ ４） 溶解性；低級アルコール、クロロホルム、酢酸エ
チルに可溶 ５） シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
値；クロロホルム：メタノール（２０：１）の展開溶媒
で０．４９を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図９に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定
したスペクトルを図１０に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図１１に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図１２に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素ートリ
ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性

【００２３】ｄ） ＮＫ３７４１８６Ｃ３ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ５９７） ３） 示性式；Ｃ₃₂Ｈ₅₉Ｎ₃ Ｏ₇ ４） 溶解性；低級アルコール、クロロホルム、酢酸エ
チルに可溶 ５） シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
値；クロロホルム：メタノール（２０：１）の展開溶媒
で０．３３を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図１３に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；図１４に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図１５に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
したスペクトルを図１６に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素ートリ
ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性

【００２４】本発明のＮＫ３７４１８６は後記の如く、
抗菌剤、制癌剤、免疫調節剤、及び肝疾患治療薬などの
医薬品として期待されるものである。医薬品として使用
する場合の製剤化および投与方法は従来公知の種々の方
法が適用できる。すなわち、投与方法としては注射、経
口、直腸投与なとが可能である。製剤形態としては注射
剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、坐剤などの形態がとり得
る。

【００２５】製剤化の際にＮＫ３７４１８６に悪影響を
与えない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すな
わち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無
痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用されうる。製剤に
おいて、ＮＫ３７４１８６の含量は製剤形態等により広
範囲に変えることが可能であり、一般にはＮＫ３７４１
８６を０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１
〜７０％（重量）含有し、残りは通常医薬用に使用され
る担体その他の補助剤からなる。

【００２６】ＮＫ３７４１８６の投与量は症状等により
異なるが、成人１人１日当り０．０１〜８００mg程度で
ある。連投を必要とする場合には１日当り使用量をおさ
えることが好ましい。

【００２７】

【作 用】

１． 抗菌活性 抗菌及び抗真菌活性は寒天希釈法により最少生育阻止濃
度（ＭＩＣ）で示した。抗菌試験では、薬剤を含むミュ
ーラーヒントン培地に、菌を塗布後３７℃で一夜培養
し、菌の生育を観察した。抗真菌試験では、ツァペック
培地を用い、２７℃で２〜３日培養後、菌の生育を観察
した。結果を表１に示した。

【００２８】 表１ ＮＫ３７４１８６Ａ，Ｂ，Ｂ３及びＣ３の抗菌活性 ──────────────────────────────────── ＭＩＣ（μｇ／ml） Ｏrganisms ────────────────── Ａ Ｂ Ｂ３ Ｃ３ ──────────────────────────────────── Staphylococcus aureus FDA 209P ＞100 3.13 6.25 3.13 acillus subtilis ATCC 6633 ＞100 ＞100 12.5 ＞100 Bacillus subtilis IAM 1072 ＞100 6.25 not tested Bacillus megaterium ATCC 14945 ＞100 6.25 6.25 3.13 Micrococcus flavus ATCC 10240 12.5 3.13 3.13 3.13 Mycobacterium luteus ATCC 9341 25.0 ＞100 ＞100 ＞100 Escherichia coli NIHJ ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Escherichia coli K-12 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Mucor javanicus IFO 4569 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Aspergillus niger IFO 4407 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Rhizopus hanguchao IFO 4749 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Botrytis fabae IFO 6183 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Trycophyton mentagrophytes IFO 5466 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Candida albicans IFO 1385 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 Penicillium chrysogenum IFO 8645 ＞100 ＞100 ＞100 ＞100 ────────────────────────────────────

【００２９】この表から、明らかな様に、本発明のＮＫ
３７４１８６Ａはミクロコッカス、マイコバクテリウム
に対し、抗菌活性を有する。また、本発明のＮＫ３７４
１８６Ｂ、Ｂ３及びＣ３はバチルス、スタフィロコッカ
ス及びミクロコッカスに強い抗菌活性を有する。

【００３０】２．細胞増殖抑制活性 １０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用
いて、細胞を３７℃、５％ＣＯ₂ 下で培養した。各細胞
を９６穴プレートに播種し、１日間前培養した後、薬剤
を添加した。薬剤処理は２日行い、増殖抑制はＭＴＴ法
により評価した。以下に、ヒト肝癌由来の癌細胞Ｌｉ−
７株、ヒト卵巣癌由来の細胞Ａ２７８０株及びＡ２７８
０株より得られたアドリアマイシン耐性株２７８０ＡＤ
株に対するＮＫ３７４１８６の細胞増殖抑制活性を表２
に示す。

【００３１】 表２ ＮＫ３７４１８６の細胞増殖抑制活性 ────────────────────────── 化合物 ＩＣ₅₀［μｇ／ml］ Ｌｉ−７ Ａ２７８０ ２７８０ＡＤ ────────────────────────── Ａ ４０ ２７ ５９ Ｂ ７．０ ６．６ ３３ Ｂ３ ３．３ １．３ ４．３ Ｃ３ １３ １２ １４ ──────────────────────────

【００３２】この表から、明らかな様に、本発明のＮＫ
３７４１８６Ａ、Ｂ、Ｂ３及びＣ３は、各細胞株に対
し、細胞増殖抑制活性を有する。

【００３３】３．ＮＫ３７４１８６のリンパ球幼若化反
応における免疫調節活性 培養には２０％牛胎児血清、２５ｍＭ Ｈepes buffer
、１００μｇ／mlのストレプトマイシン及び１００単
位／mlのペニシリンＧを添加したＲＰＭＩ１６４０培地
を用いた。培養は９６穴の平底マイクロプレート（ＣＯ
ＳＴＡＲ）で行った。マイトジェンは、リポポリサッカ
ライド（ＬＰＳ）とコンカナバリンＡ（Ｃon Ａ）をそ
れぞれ最終濃度１００、５μｇ／mlで用いた。

【００３４】脾臓細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、
＞２０周齢）から脾臓を取り出し単細胞浮遊液を造り、
ハイパーショック（hyper shock)で赤血球を除去し、Ｌ
ＰＳ用にはこれをそのまま用いて調整し、Ｃon Ａ用に
はＴ細胞分離用ＮＹlon Ｆiber（和光純薬）を通して調
整した。各ウエルに２×１０⁵ 個の脾細胞と、それぞれ
の希釈濃度の被験化合物を加え総量０．２mlとし、これ
を７２時間培養した。培養終了の８時間前にウエル当た
り３７ＫＢｑの〔 ³Ｈ〕−チミジンを添加し、その細胞
内への取り込み量を測定した。効果の判定は、それぞれ
の被験化合物添加群の対照に対する〔 ³Ｈ〕−チミジン
の取り込み量の比率によった（日本免疫学会編、免疫実
験操作法、第２２６７〜２２７６頁）ＮＫ３７４１８６
のマウスのリンパ球幼若化に対する作用を表３に示し
た。

【００３５】 表３ ＬＰＳ及びＣonＡによるマウスリンパ球幼若化反応におけるＮＫ３７４１ ８６の作用 ─────────────────────────────── 濃 度 作用指数（％） サンプル （μｇ／ml) ＬＰＳ Ｃon Ａ ─────────────────────────────── コントロール 100 100 ＮＫ３７４１８６Ａ 0.1 129.3 115.0 1 107.8 117.1 10 45.3 46.7 100 0.7 1.2 ＮＫ３７４１８６Ｂ 0.1 156.3 133.7 1 156.3 168.8 10 94.7 111.6 100 0.8 31.5 ───────────────────────────────

【００３６】ＮＫ３７４１８６Ａ及びＢは、ＬＰＳ、Ｃ
on Ａによるリンパ球の幼若化反応を低濃度で、促進
し、また１０μｇ／ml以上では、強く抑制した。

【００３７】４．ＮＫ３７４１８６の移植片対宿主反応
（ＧＶＨ）における免疫調節作用 Ｆord ら（Ｗ．Ｌ．Ｆord etal.,Ｈandbook of Ｅxper
imental Ｉmmunolo-gy３０（Ｄ．Ｍ．Ｗeir, ed.) ；Ｂ
lackwell Ｓirentific Ｐublications,１９７８，ｐ．
ｌ．）の脾臓重量測定法に従った。供与者として、Ｃ５
７ＢＬ／６マウス（８週令、雄性）から分離した脾細胞
５×１０⁶ 個を雑種第１代受容者であるＢＤＦマウス
（７週令、雄性）の腹腔内に移入した。同時にＮＫ３７
４１８６、対照薬剤（いずれも０．２５％アラビアゴム
に溶解）、又は、溶媒コントロール（０．２５％アラビ
アゴム）を背部皮下に注射した。更に、翌日、翌々日
に、同様の投与を行ない、移入後７日目に脾臓重量を測
定した。この結果を表４に示した。

【００３８】 表４ ＮＫ３７４１８６の移植片対宿主反応に作する効果 ────────────────────────────────── 投与量 脾臓の重さ／体重 インデックス サンプル ［mg／kg］ （×10^-3) ±標準偏差 ────────────────────────────────── 無処置 4.73±0.87 1.00 処 置 8.03±2.77 1.70 0.25％アラビアゴム 6.28±2.04 1.33 ＮＫ３７４１８６Ａ 0.5 7.68±2.57 1.63 〃 5 9.67±2.27 2.05^* 〃 50 10.66±3.14 2.26^* ＮＫ３７４１８６Ｂ 0.5 8.24±1.54 1.74 〃 5 11.32±3.61 2.40^* 〃 50 12.63±3.37 2.67^** ────────────────────────────────── これより明らかな様に、ＮＫ３７４１８６Ａあるい
は、ＮＫ３７４１８６Ｂ投与群において、脾臓の重さ／
体重の値は、用量依存的に上昇し、有意にＧＶＨ反応を
増強した。

【００４０】５．ＮＫ３７４１８６のマウス肝再生に対
する促進作用 ６週令ＩＣＲマウス（雄性）をエーテル麻酔下で、Ｈig
gins ＆ Ａnders-onの方法（Ｇ．Ｍ．Ｈiggins et a
l. Ａrch. Ｐathol. １２，１８６〜２０２（１９
３１））により、右横隔葉、左横隔葉を切除し、７０％
の肝切除を行った。閉腹の際、腹腔内に、１００mg／kg
の投与量となるのＮＫ３７４１８６ＡおよびＢを投与し
た。溶媒コントロールとして、３．５％ＤＭＳＯ＋６．
５％、Ｔween８０＋９０％生理食塩水を同様に投与し
た。手術後３日目に再生した肝臓を摘出し、その重量を
測定した。その結果から、以下の式により肝再生率を算
出した。

【００４１】 この結果を表５に示す。

【００４２】 表５ ＮＫ３７４１８６の肝再生に対する作用 ─────────────────────────────── 化 合 物 投与量 肝再生率（％）±標準偏差 ─────────────────────────────── 溶媒コントロール 38.1±2.3 ＮＫ３７４１８６Ａ 100mg/kg 51.9±1.3 ───────────────────────────────

【００４３】これから、明らかな様に、ＮＫ３７４１８
６Ａには、肝再生を促進する作用を持つと思われる。

【００４４】６．毒 性 ＣＤＦ−１マウス（８週令、雄性）を用い、ＮＫ３７４
１８６Ａ及びＢを１００mg／kgで、１日１回１０日間、
腹腔内へ連続投与した。薬剤は３．５％ＤＭＳＯ＋６．
５％Ｔween８０＋９０％生理食塩水に溶解して用いた。
この結果、両薬剤ともマウスの死亡は認められず、又薬
剤を投与したマウスの臨床症状及び、体重変化も溶媒対
照群のそれらと差は認められなかった。これらより、Ｎ
Ｋ３７４１８６Ａ及びＢの毒性が低い事が判明した。

【００４５】

【発明の効果】以上の結果から明らかなように本発明の
ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４
１８６Ｂ３及びＮＫ３７４１８６Ｃ３は新規抗菌剤とし
て、新規制癌剤として、新規免疫調節剤として、また新
規肝疾患治療薬として期待できる。以下本発明の実施例
を示すが、これは単なる１例示であって何等本発明を限
定するものではなく、種々の変法が可能である。

【００４６】

【実施例】

実施例１． （１）発 酵 下記の組成を有する種培養培地を５００ml容の三角フラ
スコに１００mlを分注し、１２０℃、２０分間オートク
レーブ滅菌した。これにＮＫ３７４１８６株（微工研菌
寄１２２８５号）の一白金耳を接種し、２７℃、２００
回転／分の条件下で２日間培養しこれを一次の種母とし
た。

【００４７】

【００４８】二次の種母培養は、３０リットルジャーフ
ァーメンターに、一次と同じ組成を有する培地２０リッ
トルを仕込み滅菌した後、前記の方法で得られた一次の
種母２００mlを無菌的に移植し、２５℃で毎分２０リッ
トルの空気を通気し、毎分２５０回転で攪拌しながら、
３日間培養を行い、二次の種母とした。

【００４９】本培養は２００リットルジャーファーメン
ターに種培養培地のグリセリン濃度を１．０％に変えた
組成を有する生産培地１５０リットルを仕込み滅菌した
後、前記方法で得られた二次の種母２リットルを無菌的
に移植し２５℃で毎分１５０リットルの空気を通気し、
毎分２５０回転で攪拌しながら４日間培養を行った。２
００リットルジャーファーメンター４基より得られた培
養液から、フィルタープレスを使用してろ過を行い、ろ
液と菌体を分離した。

【００５０】（２） 精 製 得られた菌体にメタノール２００リットルを加え、攪拌
抽出を３時間行った後吸引ろ過で菌体と抽出液を分離し
た。得られた抽出液に等量の水を加えた。この液を１０
リットルのＨＰ−２０カラムに通し、５０％メタノール
で洗浄した後、６０％アセトン２０リットルで溶出し、
画分１を得、次いで１００％メタノール３０リットルで
溶出し、画分２を得た。

【００５１】画分１を４リットルになるまで減圧濃縮
し、ｐＨ＝５．０に調整した後、酢酸エチルで抽出し
た。抽出液を減圧濃縮乾固し、得られた乾固物４１ｇを
酢酸エチルで溶解後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにかけ、酢酸エチルクロロホムル：メタノール（５
０：１）、クロロホルム：メタノール（１０：１）で、
順次溶出し、活性画分１ａを得た。

【００５２】これを再度、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにかけ、酢酸エチル：メタノール（１０：１）
で溶出し、活性画分１ｂを得た。１ｂをメタノールで展
開するＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーにかけ、Ｎ
Ｋ３７４１８６Ａ８００mgが得られた。

【００５３】一方、画分２を減圧濃縮し、２８ｇの乾固
物を得た。これをクロロホルム溶解後、シリカゲルクロ
マトグラフィーにかけ、クロロホルム、クロロホルムメ
タノール（１００：１）、クロロホルム：メタノール
（２０：１）で、順次溶出し、活性画分２ａ、２ｂ、２
ｃを得た。活性画分２ａ、２ｂは、各々、メタノールで
展開するＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーにかけ、
それぞれからＮＫ３７４１８６Ｂを２．０ｇ、ＮＫ３７
４１８６Ｂ３を１．０ｇを得た。画分２ｃは、クロロホ
ルム；メタノール（１００：１）、次いでクロロホル
ム；メタノール（２０：１）で展開するシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーにかけた。得られた活性画分をＬ
Ｈ−２０カラムクロマトグラフィーにかけ、ＮＫ３７４
１８６Ｃ３４３０mgを得た。

【００５４】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＮＫ３７４１８６Ａの紫外部吸収スペクトル。

【図２】ＮＫ３７４１８６Ａの臭化カリウム錠剤で測定
した赤外部吸収スペクトル。

【図３】ＮＫ３７４１８６Ａの重ジメチルスルホキシド
中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル。

【図４】ＮＫ３７４１８６Ａの重ジメチルスルホキシド
中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル。

【００５５】

【図５】ＮＫ３７４１８６Ｂの紫外部吸収スペクトル。

【図６】ＮＫ３７４１８６Ｂの臭化カリウム錠剤で測定
した赤外部吸収スペクトル。

【図７】ＮＫ３７４１８６Ｂの重ジメチルスルホキシド
中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル。

【図８】ＮＫ３７４１８６Ｂの重ジメチルスルホキシド
中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル。

【００５６】

【図９】ＮＫ３７４１８６Ｂ３の紫外部吸収スペクト
ル。

【図１０】ＮＫ３７４１８６Ｂ３の臭化カリウム錠剤で
測定した赤外部吸収スペクトル。

【図１１】ＮＫ３７４１８６Ｂ３の重ジメチルスルホキ
シド中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル。

【図１２】ＮＫ３７４１８６Ｂ３の重ジメチルスルホキ
シド中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル。

【００５７】

【図１３】ＮＫ３７４１８６Ｃ３の紫外部吸収スペクト
ル。

【図１４】ＮＫ３７４１８６Ｃ３の臭化カリウム錠剤で
測定した赤外部吸収スペクトル。

【図１５】ＮＫ３７４１８６Ｃ３の重ジメチルスルホキ
シド中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル。

【図１６】ＮＫ３７４１８６Ｃ３の重ジメチルスルホキ
シド中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:80） (72)発明者 斎藤 清一 千葉県柏市松葉町４−７−２−407

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の理化学的性質を示す抗生物質ＮＫ３
   ７４１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６
   Ｂ３及びＮＫ３７４１８６Ｃ３又はその塩 ａ） ＮＫ３７４１８６Ａ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ７３５） ３） 示性式；Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₁₂Ｓ ４） 溶解性：低級アルコール、クロロホルム、酢酸エ
   チルに可溶 ５） シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
   値；クロロホルム：メタノール（２０：１）の展開溶媒
   で０．１２を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図１に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定
   したスペクトルを図２に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図３に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図４に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素−トリ
   ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性 ｂ） ＮＫ３７４１８６Ｂ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ６５５） ３） 示性式；Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₉ ４） 溶解性：低級アルコール クロロホルム 酢酸エ
   チルに可溶 ５） シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
   値；クロロホルム：メタノール（２０：１）の展開溶媒
   で０．３５を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図５に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定
   したスペクトルを図６に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図７に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図８に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素ートリ
   ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性 ｃ） ＮＫ３７４１８６Ｂ３ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ６５５） ３） 示性式；Ｃ₃₄Ｈ₆₁Ｎ₃ Ｏ₉ ４） 溶解性：低級アルコール クロロホルム 酢酸エ
   チルに可溶 ５） シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
   値；クロロホルム：メタノール（２０：１）の展開溶媒
   で０．４９を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図９に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定
   したスペクトルを図１０に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図１１に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図１２に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、塩素ートリ
   ジン反応に陽性、ニンヒドリンに陰性 ｄ） ＮＫ３７４１８６Ｃ３ １） 外観；無色粉末 ２） 分子量；ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｚ （Ｍ⁺ ５９７） ３） 示性式；Ｃ₃₂Ｈ₅₉Ｎ₃ Ｏ₇ ４） 溶解性：低級アルコール、クロロホルム、酢酸エ
   チルに可溶 ５） シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ
   値；クロロホルム：メタノール（２０：１）の展開溶媒
   で０．３３を示す。 ６） 紫外部吸収スペクトル；図１３に示す。 ７） 赤外部吸収スペクトル；図１４に示す。 ８） 水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図１５に示す。 ９） 炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定
   したスペクトルを図１６に示す。 10) 呈色反応；リンモリブデン酸−硫酸、ライドンス
   ミスに陽性、ニンヒドリンに陰性
2. 【請求項２】ペニシリウム属に属し、抗生物質ＮＫ３７
   ４１８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ
   ３及びＮＫ３７４１８６Ｃ３を生産する能力を有する微
   生物を、培地に培養し、培養物中に抗生物質ＮＫ３７４
   １８６Ａ、ＮＫ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３
   及びＮＫ３７４１８６Ｃ３を生成蓄積せしめ、これを採
   取する事を特徴とする抗生物質ＮＫ３７４１８６Ａ、Ｎ
   Ｋ３７４１８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３及びＮＫ３７
   ４１８６Ｃ３の製造法。
3. 【請求項３】抗生物質ＮＫ３７４１８６Ａ、ＮＫ３７４
   １８６Ｂ、ＮＫ３７４１８６Ｂ３あるいはＮＫ３７４１
   ８６Ｃ３を、有効成分とする抗腫瘍剤、抗菌剤、免疫調
   節剤、あるいは肝疾患治療薬。
4. 【請求項４】ペニシリウム ｓｐ ＮＫ３７４１８６株