JP3111470B2

JP3111470B2 - 新規ポリペプチド化合物およびその製造法

Info

Publication number: JP3111470B2
Application number: JP02305797A
Authority: JP
Inventors: 俊朗岩元; 昭彦藤江; 久美子新田; 泰久鶴海; 伸治重松; 千義笠原; 資弘日野; 正国奥原
Original assignee: 藤沢薬品工業株式会社
Priority date: 1989-11-13
Filing date: 1990-11-08
Publication date: 2000-11-20
Anticipated expiration: 2015-11-20
Also published as: ZA908892B; IL96272A0; JPH03184921A; ES2075115T3; EP0431350A1; CN1051757A; EP0431350B1; DE69021176T2; ATE125550T1; NO904904L; NO904904D0; KR910009729A; DK0431350T3; HU907105D0; DE69021176D1; CA2029766A1; AU6655790A; PT95876A; FI905575A0; HUT58820A

Description

【発明の詳細な説明】「産業上の利用分野」この発明は新規ポリペプチド化合物およびその塩類に
関する。

さらに詳細には、この発明は抗微生物活性、とりわ
け、抗真菌活性を有する新規ポリペプチド化合物および
その塩類、その製造法、並びに、それを有効成分として
含有する感染症治療剤に関するものであり、医薬の分野
において有用である。

「課題を解決するための手段」この発明の目的とするポリペプチド化合物は新規であ
り、下記一般式［Ｉ］で示すことができる。

（式中、R¹は水素またはヒドロキシ基、 R²は水素またはヒドロキシ基、 R³はヒドロキシ基またはヒドロキシスルホニルオキシ
基を意味する。

但し、R¹が水素である場合には、R²は水素である。）この発明のポリペプチド化合物［Ｉ］は下記反応式で
説明される製造法により製造することができる。

（式中、R¹およびR²はそれぞれ前と同じ意味）。

目的化合物［Ｉ］の好適な塩類は常用の無毒性モノま
たはジ塩類であり、例えばナトリウム塩、カリウム塩等
のアルカリ金属塩および例えばカルシウム塩、マグネシ
ウム塩等のアルカリ土金属塩のような金属塩、アンモニ
ウム塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチルアミン
塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン
塩、N,N−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機塩基
塩、例えばギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレ
イン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンス
ルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩等の有機酸付加塩、
例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩、硫酸塩、
リン酸塩等の無機酸付加塩、例えばアルギニン塩、アス
パラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸との塩等が
挙げられる。

この発明の目的化合物［Ｉ］の製造法を以下詳細に説
明する。

製造法１目的化合物［I a］またはその塩類は発酵法により製
造することができる。

発酵法を以下詳細に説明する。

この発明の化合物［I a］またはその塩類は、コレオ
フォマ・エスピーＦ−11899（Coleophoma sp.F−1189
9）のようなコレオフォマ属に属する化合物［I a］また
はその塩類−産生菌株を栄養培地中で発酵させることに
より産生することができる。

（ｉ）微生物化合物［I a］またはその塩類の産生に使用される微
生物の特性を以下説明する。

菌株Ｆ−11899は福島県いわき市で採取された土壌試
料から分離された。この菌株は種々の培地上でやや抑制
的に生育し、暗灰色ないし褐灰色の集落を形成した。ア
ナモルフ（分生子果）は三浦のLCA平板¹⁾上、または、
コーンミール平板上に置いた蒸気滅菌した葉片に、分離
株を接種した場合に形成したが、寒天培地上ではテレオ
モルフもアナモルフも生成しなかった。その形態学的特
徴、培養上の特徴および生理学的特徴は下記のとおりで
ある。

種々の寒天培地上での培養上の特徴を表１にまとめて
示す。

バレイショデキストロース寒天上での培養物はやや速
やかに生育し、25℃、２週間後に直径3.5−4.0cmに達し
た。この集落表面は平坦でフェルト状であり、やゝしわ
が多く、褐灰色であった。集落中心は淡灰色ないし褐灰
色であり、気菌糸で覆われていた。裏面の色は暗灰色で
あった。

麦芽エキス寒天上の集落はより抑制的に生育し、同条
件で直径2.5−3.0cmに達した。表面は平坦で薄いか、な
いしはフェルト状で、オリーブ褐色であった。集落中心
は黄灰色であり、気菌糸で覆われていた。裏面は褐灰色
であった。

形態学的特徴は三浦のLCA平板にのせた滅菌葉片上の
培養物に基づいて決定した。分生子果は葉片上にのみ生
成した。これらは分生子殻状（pychidial）、表在性、
単独で、円盤状ないしアンプル状、底部で平たくなって
おり、単室、薄壁であり、黒色で、直径90−160（−20
0）μｍ、高さ40−70μｍであった。孔口はしばしば単
一、円形で中心にあり、乳頭状で、直径10−30μｍ、高
さ10−20μｍであった。分生子柄は分生子殻内壁の下層
から生成した。これらは無色で、分枝しないか、または
ごく僅かに分枝しており、隔膜があって滑面であった。
分生子形成細胞は内生出芽型、フィアロ型、末端に分生
子を有し、アンプル状ないし倒西洋梨型で無色、滑面で
５−８×４−６μｍであり、カラーを有していた。カラ
ーは鐘状ないし筒状で14−18×３−５μｍであった。分
生子は無色、筒状で、薄壁であり、隔膜が無く滑面で、
14−16（−18）×２−３μｍであった。

栄養菌糸は隔膜があり、褐色、滑面で分枝していた。
菌糸細胞は筒状で太さ２−７μｍであった。厚膜胞子は
無かった。

菌株Ｆ−11899はバレイショデキストロース寒天上で
生育温度範囲０℃ないし31℃、至適温度23℃ないし27℃
を有していた。

上記特性は菌株Ｆ−11899がコエロミセテス（Coelomy
cetes）目に属することを示す。^{２）,3）,4）}そこで、
発明者らはこの菌株を「コエロミセテス菌株Ｆ−1189
9」と命名した。

これらの特徴は25℃、14日間培養後に観察した。色名
記載はザ・メス−エン・ハンドブック・オブ・カラー
（The Methuen Handbook of Colour）⁵⁾に基づいた。

１）三浦、および工藤：アン・アガ−メディアム・フォ
ー・アクアチック・ハイホミセテス（Anagar−medium f
or aquatic Hyphomycetes）、Trans.Ycolo.Soc.Japan,
第11巻、116−118頁、1970年。

２）アークス・ジェー・エー・フォン（Arx,J.A.vo
n）：ザ・ジェネラ・オブ・フンジー・スポルレーチン
グ・イン・ピュア・カルチャー（The Genera of Fungi
−Sporulating in Pure Culture）第三版、315頁、ジェ
ー・クレーマー、バダズ（J.Cramer Vaduz）、1974年。

３）サットン・ビー・シー（Sutton,B.C）：ザ・コエロ
ミセテス−フンジー・インパーフェクチ・ウイズ・ピク
ニディア；アセルブリ・アンド・ストロマータ（The Co
elomycetes−Fungi Imperfecti with Pycnidia;Acervul
i and Stromate）、696頁、コモンウェルス・マイコロ
ジカル・インスチチュート、キュー（Commonwealth Myc
ological Institute,Kew）、1980年。

４）ホークスウォース・デー・エル（Hawksworth,D.
L.）、ビー・シー・サットン（B.C.Sutton）およびジー
・シー・エインスウォース（G.C.Ainsworth）：ディク
ショナリー・オブ・ザ・フンジー（Dictionary of the
Fungi）第７版、445頁、コモンウェルス・マイコロジカ
ル・インスチチュート、キュー（Commonwealth Mycolog
ical Institute,Kew）、1983年。

５）コーネラップ・エー（Kornerup A.）およびワンシ
ャー・ジェー・エイチ（Wanscher J.H.）：メスーエン
・ハンドブック・オブ・カラー（Methuen Handbook of
Colour）第三版、252頁、メスーエン、ロンドン（Methu
en,London）、1983年。

コエロミセテス菌株Ｆ−11899は茨城県つくば市東
１丁目１−３に所在の工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研条寄第2635号（FERM BP−2635）として1989年1
0月26日付で寄託された。

しかしながらその後、発明者らはさらに菌株Ｆ−1189
9の分類の研究を行って、菌株Ｆ−11899がコエロミセテ
ス目に属するコレオフォマ・エンペトリ（ロストラッ
プ）ペトラーク［Coleophoma empetri（Rostrup）Petra
k］1929年^{２）,3）,4）}に類似しているが、ただ、分生
子殻の特徴、すなわち、丸味を帯びているか底部が平ら
であること、埋没していることおよび乳頭状の孔口部が
ないことの点で幾つか異なることを見出した。

これらの特徴を考慮して、発明者らはこの菌株をさら
に詳しく分類し、「コレオフォマ・エスピーＦ−11899
（Coleophoma sp.F−11899）」と命名した。

これに関連して、発明者らは工業技術院微生物工業技
術研究所に1990年９月21日付で、「コエロミセテス菌
株Ｆ−11899」という名前を「コレオフォマ・エスピー
Ｆ−11899」に訂正する手続を取った。

（ii）化合物［I a］またはその塩類の産生この発明の化合物［I a］またはその塩類は、コレオ
フォマ属に属する化合物［I a］またはその塩類−産生
菌株を、同化し得る炭素源および窒素源を含む栄養培地
中、例えば振とう培養、深部培養等の好気条件下に生育
せしめる時に産生される。

栄養培地中の好ましい炭素源は、グルコース、スクロ
ース、デンプン、フルクトースまたはグリセリン等のよ
うな炭水化物である。

好ましい窒素源は酵母エキス、ペプトン、グルテン
粉、綿実粉、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、乾
燥酵母、小麦胚芽等並びに、例えば硝酸アンモニウム、
硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウ
ム塩類、尿素、アミノ酸等のような無機および有機窒素
化合物である。

炭素源および窒素源は組合わせて使用すると有利では
あるが、痕跡程度の生育因子およびかなりの量の無機栄
養素を含む低純度のものも使用に適しているので、それ
らを純粋な形で使用する必要はない。

所望に応じて、培地に炭酸ナトリウムまたは炭酸カル
シウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム、塩化
ナトリウムまたは塩化カリウム、沃化ナトリウム、また
は沃化カリウム、マグネシウム塩類、銅塩類、亜鉛塩
類、またはコバルト塩類等のような無機塩類を加えても
よい。

必要に応じて、とりわけ培養培地が激しく発泡する場
合には、流動パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油または
シリコン等のような消泡剤を加えてもよい。

他の生物学的活性物質の大量生産のために使用される
望ましい方法の場合のように、化合物［I a］またはそ
の塩類の大量生産には深部好気培養条件が望ましい。

少量産生の場合には、フラスコ中またはビン中の振と
う培養または表面培養が行われる。

さらに、生育を大型タンク内で行う場合には、化合物
［I a］またはその塩類の生産工程における生育遅延を
回避するために、生産タンクに接種するのに菌を栄養細
胞の形で使用するのが望ましい。すなわち、まず比較的
少量の培養培地に菌の胞子または菌糸体を接種し、その
接種培地を培養することにより栄養細胞を生産し、これ
を大型タンクに移すのが望ましい。栄養細胞を生産する
培地は化合物［I a］またはその塩類の生産に利用する
培地と実質的に同じであるかまたは異なってもよい。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で行えばよ
い。攪拌はプロペラまたはこれに類似の機械的攪拌装
置、回転または振とう発酵装置、種々のポンプ装置、ま
たは培地中の滅菌空気の通過によって行えばよい。通気
は発酵混合物中を滅菌空気を通過させることにより行え
ばよい。

発酵は通常約10℃と40℃との間の温度、好ましくは20
℃ないし30℃で、約50時間ないし150時間行われるが、
発酵条件と規模とに従って変化させてもよい。

発酵が完了すれば、培養ブロスは次いで化合物［I
a］またはその塩類を回収するために、例えば適切な溶
媒または数種の溶媒の混合物による溶媒抽出、クロマト
グラフィー、または適切な溶媒または数種の溶媒の混合
物からの再結晶等の、生物学的活性物質の回収および精
製に常用される種々の操作法に付される。

この発明によれば、化合物［I a］またはその塩類は
一般的に培養菌糸体中および培養ブロス中の両方に見出
される。従って、化合物［I a］またはその塩類はブロ
ス全体からアセトンまたは酢酸エチル、またはこれらの
溶媒の混合物等のような適切な有機溶媒を用いる抽出に
よって抽出される。

抽出液は化合物［I a］またはその塩類を得られるよ
うな常法、例えば抽出液を溶媒留去または蒸留により濃
縮して少量とし、活性物質、すなわち化合物［I a］ま
たはその塩類を含む残渣を、例えばクロマトグラフィー
または適切な溶媒または数種の溶媒の混合物からの再結
晶により精製することにより処理され、目的物が得られ
る。

化合物［I a］がその塩類として単離された場合に
は、常法により遊離の化合物［I a］または化合物［I
a］の別の塩類に導くことができる。

製造法２化合物［I b］またはその塩類は、化合物［I a］また
はその塩類をスルホ基の脱離反応に付すことにより製造
することができる。

化合物［I b］の好適な塩類については、化合物
［Ｉ］で例示した酸付加塩が挙げられる。

脱離反応は酵素との反応等のようなこの技術分野にお
ける常法に従って行われる。

酵素との反応は化合物［I a］またはその塩類を、ス
ルホ基の脱離反応に適した酵素と反応させることにより
行うことができる。

前記酵素の好適な例としては、アエロバクター・アエ
ロゲネス（Aerobacter aerogenes）等により産生された
スルファターゼVI型のようなスルファターゼが挙げられ
る。

この脱離反応は通常、リン酸塩緩衝液、トリス−HCl
緩衝液のような溶媒中で行われるが、反応に悪影響を及
ぼさない溶媒であれば、その他のいかなる溶媒中でも反
応を行うことができる。

反応温度は特に限定されず、室温または加温下に反応
を行うことができる。

化合物［Ｉ］の生物学的性質化合物［Ｉ］の生物学的作用を示すため、生物学的試
験結果数例を以下に説明する。

試験１抗微生物活性（１） FR901379物質［実施例１（１）の化合物］の抗微生物
活性を、酵母の窒素を基礎としたデキストロース培地
（YNBD培地）を使用して、96ウェルマルチ・トレイ中マ
イクロ・ブロス希釈法により測定した。倍々希釈系列の
50μ試料溶液に生理食塩水中微生物懸濁液50μを加
えて１×10⁵/mlの終濃度を得た。カンジダ（Candida）
およびアスペルギルス（Aspergillus）培養物は37℃で2
2時間、クリプトコッカス（Cryptococcus）培養物は30
℃で48時間インキュベートした。インキュベート後、各
ウェル中の微生物の生育を懸濁測定により決定した。濁
度が試料無しのウェル中の濁度の半分になった濃度をIC
₅₀値として示した。結果を表２に示す。

試験２ FR901379物質のCandida albicans全身感染に対
する効果生後４週齢のICR系雌性マウス１群当り５匹の動物に
2.5×10⁶Candida albicans FP633を静脈内注射した。薬
物を感染１時間後および３日連続して１日１回皮下投与
した。結果を感染後９日間観察した。結果を表３に示
す。

試験３ FR901379物質の急性毒性 FR901379物質の急性毒性を、生後４週齢のICR系雌性
マウスに、腹腔内への注射（１回）により投与し、測定
した。500mg/kgの投与量で毒性症状は観察されなかっ
た。

試験４抗微生物活性（２） FR901379物質およびFR133302物質（実施例２の化合
物）のCandida albicans FP633に対する抗微生物活性
を、パルプ−ディスク拡散検定法により37℃下、YNBD寒
天培地上16時間測定した。結果は以下に各化合物２μｇ
を含むディスクが示した阻止帯の直径として示した。結
果を表４に示す。

試験結果からこの発明のポリペプチド化合物［Ｉ］は
抗微生物活性、とりわけ、抗真菌活性を有することが明
らかである。

この発明の医薬組成物は、例えば、外用投与、経口投
与、非経口投与に適した有機もしくは無機担体または賦
形剤と混合して、ポリペプチド化合物［Ｉ］またはその
塩類を有効成分として含有する固体状、半固体状または
液状の医薬製剤の形として使用することができる。有効
成分は、例えば通常の無毒性の医薬として許容される担
体と、錠剤、ペレット、カプセル、坐剤、溶液、エマル
ジョン、懸濁液およびその他の使用に適したあらゆる形
に混合すればよい。また、必要に応じてさらに、助剤、
安定剤、増粘剤、および着色剤および芳香剤を使用して
もよい。ポリペプチド化合物［Ｉ］またはその塩類は医
薬組成物中に、疾患の過程または条件に所望の抗微生物
効果を発揮するのに十分な量含有される。

組成物を人に適用するのには、静脈内投与、筋肉内投
与または経口投与するのが望ましい。ポリペプチド化合
物［Ｉ］の医薬としての有効投与量は治療すべき各個々
の患者の年齢および条件によって変化するが、静脈注射
の場合人の体重1kg当りポリペプチド化合物［Ｉ］１日
投与量0.01−10mg、筋肉内注射の場合人の体重1kg当り
ポリペプチド化合物１日投与量0.1−10mg、経口投与の
場合人の体重1kg当り１日投与量0.5−50mgが一般的に感
染症治療に投与される。

「実施例」以下実施例に従ってこの発明をさらに詳細に説明す
る。

実施例１（１）スクロース４％、綿実粉２％、乾燥酵母１％、ペ
プトン１％、KH₂PO₄0.2％、CaCO₃0.2％、およびツイー
ン80（半井化学社製）0.1％よりなる前培養培地（160m
l）を500mlエルレンマイヤーフラスコ２個それぞれに注
ぎ、121℃、30分間滅菌する。コレオフォマ・エスピー
Ｆ−11899の斜面培養物１白金耳を各培地に接種し、振
とう条件下25℃で４日間培養する。

パインデックス＃３（松谷化学社製）３％、グルコー
ス１％、小麦胚芽１％、綿実粉0.5％、KH₂O₄2％、Na₂HP
O₄・12H₂O1.5％、ZnSO₄・7H₂O0.001％およびアデカノー
ル（消泡剤、旭電化社製）0.05％よりなる生産培地（20
）を30ジャーファーメンターに注ぎ、121℃、30分
間滅菌する。

前培養ブロス（320ml）を生産培地に接種し、200rpm
の攪拌下および毎分20の通気下25℃、４日間培養す
る。このようにして得られる培養ブロス（20）に等容
量のアセトンを加える。暫時室温で時々攪拌後、ブロス
を濾過する。濾液を減圧濃縮してアセトンを留去する。
水性濾液（10）を酢酸エチル等容量で２回洗浄し、ｎ
−ブタノール（10）で２回抽出する。ｎ−ブタノール
層を合わせ、減圧濃縮して残渣をシリカゲル60（E.メル
ク社製）のカラム（300ml）にかけ、ジクロロメタン−
メタノールよりなる有機溶媒混合物で段階的に溶出す
る。抗カンジダ作用を有する画分を溶媒混合物（3:1か
ら1:1）の範囲で溶出する。活性画分を合わせ、減圧下
に濃縮乾固する。残渣を50％メタノール水溶液（15ml）
に溶解し、ODS YMC GEL（山村化学研究所製）のカラム
（250ml）にかける。カラムを50％メタノール水溶液で
洗浄し、80％メタノール水溶液で溶出する。溶出液を濃
縮し、さらに上部固定相の溶媒系ｎ−ブタノール：メタ
ノール：水（4:1:5）および下降方式に底部可動相を用
いて遠心分離パーチションクロマトグラフィー（CPC）
により精製する。目的化合物（主成分）を含む画分を集
めて減圧濃縮し、シリカゲル60のカラム（35ml）にかけ
る。カラムをｎ−ブタノール：酢酸：水（6:1:1）で展
開する。活性画分を合わせ、減圧下に濃縮乾固し、少容
量の50％メタノール水溶液に溶解する。溶液をODS YMC
GELのカラム（3.5ml）を通過させる。カラムを50％メタ
ノール水溶液で洗浄し、メタノールで溶出する。溶出液
を濃縮乾固し、少容量の水に溶解して0.01N NaOH水溶液
でpH7.0に調整する。溶液を凍結乾燥して、前記化合物
をナトリウム塩（11mg）の形で（FR901379物質と呼称）
白色粉末として得る。

CPC後の２つの少量成分を含む画分を減圧濃縮し、リ
クロソルブ（Lichrosorb）RP−18（商標、メルク社製;2
50×φ25mm）の分取用高速液体クロマトグラフィー（HP
LC）カラムにより、45％CH₃CN水溶液−0.5％NH₄H₂PO₄よ
りなる可動相を用いて9.9ml/分の流量で精製する。２成
分の一つを含む画分を等容量の水で希釈し、ODS YMC GE
Lのカラム（1ml）を通過させる。カラムを40％メタノー
ル水溶液で洗浄し、メタノールで溶出する。溶出液を減
圧下に濃縮乾固し、次いで少容量の水に溶解し、凍結乾
燥して、前記化合物をアンモニウム塩（2.2mg）の形で
（FR901381物質と呼称）白色粉末として得る。

同様にして、別の少量成分をアンモニウム塩（1.2m
g）の形で（FR901382物質と呼称）白色粉末として得
る。

上記で得られるFR901379物質は下記物理化学的性質を
有する。

外観：白色粉末性質：中性物質融点:215−221℃（分解）比旋光度：▲［α］²³ _D▼−20.3゜（C:0.5,H₂O）分子式:C₅₁H₈₁N₈O₂₁SNa 元素分析:C₅₁H₈₁N₈O₂₁SNaとして、計算値:C,51.17;H6.77;N,9.36;S,2.68（％）実測値:C,49.61;H7.58;N,7.65;S,2.14（％）分子量:HRFAB−MS 1219,5078 （C₅₁H₈₂N₈O₂₁S＋2Na−Ｈとしての計算値:121
9,5032）溶解性：メタノール、水に可溶酢酸エチル、アセトンに微溶クロロホルム、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：沃素蒸気反応、硫酸セリウム反応、塩化第二
鉄反応、ニンヒドリン反応に陽性ドラーゲンドルフ反応、エールリッヒ反応に
陰性薄層クロマトグラフィー（TLC）：紫外吸収スペクトル： ▲λ^{メタノ-ル} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:207（169）,276（1
3.5）,225（sh）,283（sh）nm ▲λ^{メタノ-ル+0.01N-NaOH} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:209（23
2）,244（59.5）,284（13.5）,294（sh）赤外吸収スペクトル： ▲ν^KBr _max▼:3350,2920,2840,1660,1625,1530,1510,
1435,1270,1240,1070,1045,800,755,710cm^-1 ¹ H核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,400MHz） δ:7.30（1H,d,J＝2Hz）,7.03（1H,dd,J＝８および2H
z）,6.85（1H,d,J＝8Hz）,5.23（1H,d,J＝3Hz）,5.06
（1H,d,J＝4Hz）,4.93（1H,d,J＝3Hz）,4.59−4.51（3
H,m）,4.47−4.35（5H,m）,4.29（1H,dd,J＝６および2H
z）,4.17（1H,m）,4.07（1H,m）,3.95−3.89（2H,m）,
3.76（1H,ブロードd,J＝11Hz）,3.36（1H,m）,2.75（1
H,dd,J＝16および4Hz）,2.50（1H,m）,2.47（1H,dd,J＝
16および9Hz）,2.38（1H,m）,2.21（2H,m）,2.03−1.93
（3H,m）,1.57（2H,m）,1.45−1.20（24H,m）,1.19（3
H,d,J＝6Hz）,1.08（3H,d,J＝6Hz）,0.90（3H,t,J＝7H
z）上記物理的性質および化学的性質の解析およびさらに
化学構造の同定を研究した結果から、FR901379物質の化
学構造は下記のとおりに同定された。

上記で得られるFR901381物質は下記物理化学的性質を
有する。

外観：白色性質：中性物質融点:218−223℃（分解）比旋光度：▲［α］²³ _D▼−10.5゜（C:0.5,MeOH）分子式:C₅₁H₈₁N₈O₂₀S・NH₄ 分子量:HRFAB−MS 1203,5100 （C₅₁H₈₂N₈O₂₀S＋2Na−Ｈとしての計算値:120
3,5083）溶解性：メタノール、エタノールに可溶水、アセトンに
微溶クロロホルム、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：沃素蒸気反応、硫酸セリウム反応に陽性ドラーゲンドルフ反応、エールリッヒ反応に
陰性薄層クロマトグラフィー（TLC）：紫外吸収スペクトル： ▲λ^{メタノ-ル} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:206（196）,278
（４）,243（sh）,284（sh）nm ▲λ^{メタノ-ル+0.01N-NaOH} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:208（25
2）,290（５）,241（sh）nm 赤外吸収スペクトル： ▲ν^KBr _max▼:3350,2900,2840,1680,1660,1640,1620,
1510,1460,1430,1330,1240,1040,960cm^-1 ¹ H核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,400MHz） δ:7.18（1H,d,J＝2Hz）,6.90（1H,dd,J＝２および8.
5Hz）,6.81（1H,d,J＝8.5Hz）,5.29（1H,d,J＝3Hz）,5.
08（1H,d,J＝3.5Hz）,4.98（1H,d,J＝3Hz）,4.63（1H,d
d,J＝７および11Hz）,4.58−4.51（3H,m）,4.46−4.38
（3H,m）,4.37（1H,d,J＝2Hz）,4.16（1H,dd,J＝２およ
び5Hz）,4.07（1H,dd,J＝7.5および9.5Hz）,4.02−3.94
（2H,m）,3.78（1H,ブロードd,J＝11Hz）,3.38（1H,t,J
＝9.5Hz）,2.69（1H,dd,J＝4.5および15Hz）,2.63−2.5
0（3H,m）,2.46（1H,m）,2.43（1H,dd,J＝９および15H
z）,2.21（2H,t,J＝7.5Hz）,2.07−1.95（3H,m）,1.58
（2H,m）,1.29（24H,m）,1.16（3H,d,J＝6.5Hz）,1.07
（3H,d,J＝7Hz）,0.89（3H,t,J＝6.5Hz）¹³ C核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,100MHz） δ:176.7（ｓ）,175.9（ｓ）,174.4（ｓ）,174.0
（ｓ）,172.8（ｓ）,172.5（ｓ）,172.5（ｓ）,169.4
（ｓ）,149.1（ｓ）,141.1（ｓ）,131.1（ｓ）,128.0
（ｄ）,125.3（ｄ）,118.3（ｄ）,75.9（ｄ）,74.0
（ｄ）,73.9（ｄ）,71.3（ｄ）,70.7（ｄ）,70.5
（ｄ）,70.2（ｄ）,68.2（ｄ）,62.4（ｄ）,58.6
（ｄ）,58.4（ｄ）,57.2（ｔ）,55.5（ｄ）,52.9
（ｔ）,51.4（ｄ）,40.8（ｔ）,39.9（ｔ）,39.1
（ｄ）,39.0（ｔ）,36.7（ｔ）,35.0（ｔ）,33.1
（ｔ）,30.8（t x5）,30.7（ｔ）,30.7（ｔ）,30.5
（ｔ）,30.4（ｔ）,30.3（ｔ）,27.0（ｔ）,23.7
（ｔ）,19.5（ｑ）,14.4（ｑ）,11.1（ｑ）上記物理的性質および化学的性質の解析、ならびにさ
らに化学構造の同定を研究した結果から、FR901381物質
の化学構造は下記のとおりに同定された。

上記で得られるFR901382物質は下記物理化学的性質を
有する。

外観：白色粉末性質：中性物質融点:208−217℃（分解）比旋光度：▲［α］²³ _D▼−9.4゜（C:0.5,MeOH）分子式:C₅₁H₈₁N₈O₁₉S・NH₄ 分子量:HRFAB−MS 1187,5139 （C₅₁H₈₂N₈O₁₉S＋2Na−Ｈとしての計算値 118
7,5134）溶解性：メタノール、エタノールに可溶水、アセトンに微溶クロロホルム、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：沃素蒸気反応、硫酸セリウム反応に陽性ドラーゲンドルフ反応、エーテルリッヒ反応
に陰性薄層クロマトグラフィー（TLC）：紫外吸収スペクトル： ▲λ^{メタノ-ル} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:205（180）,276（1
3）,224（sh）,283（sh）nm ▲λ^{メタノ-ル+0.01N-NaOH} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:208（26
2）,281（12）,241（sh）,295（sh）nm 赤外吸収スペクトル： ▲ν^KBr _max▼:3350,2900,2840,1680,1660,1640,1620,
1510,1430,1330,1245,1080,1040,960cm^-1 ¹ H核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,400MHz） δ:7.18（1H,d,J＝2Hz）,6.90（1H,dd,J＝２および8.
5Hz）,6.80（1H,d,J＝8.5Hz）,5.37（1H,dd,J＝３およ
び11Hz）,5.08（1H,d,J＝3.5Hz）,5.00（1H,d,J＝3H
z）,4.61（1H,dd,J＝７および11Hz）,4.59（1H,d,J＝2H
z）,4.58−4.52（2H,m）,4.46−4.35（3H,m）,4.29（1
H,d,J＝2Hz）,4.12（1H,dd,J＝２および4.5Hz）,4.07
（1H,dd,J＝８および9.5Hz）,4.01（1H,dd,J＝３および
11Hz）,3.77（1H,ブロードd,J＝11Hz）,3.37（1H,t,J＝
9.5Hz）,2.69（1H,dd,J＝4.5および15.5Hz）,2.63−2.5
0（3H,m）,2.45（1H,m）,2.43（1H,dd,J＝９および15.5
Hz）,2.24（2H,m）,2.09−1.95（3H,m）,1.76−1.66（2
H,m）,1.59（2H,m）,1.29（24H,m）,1.15（3H,d,J＝6.5
Hz）,1.06（3H,d,J＝7Hz）,0.89（3H,t,J＝7Hz）¹³ C核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,100MHz） δ:176.7（ｓ）,176.0（ｓ）,175.1（ｓ）,174.0
（ｓ）,172.8（ｓ）,172.6（ｓ）,172.5（ｓ）,169.1
（ｓ）,149.1（ｓ）,141.1（ｓ）,131.1（ｓ）,128.1
（ｄ）,125.3（ｄ）,118.2（ｄ）,76.1（ｄ）,74.0
（ｄ）,71.8（ｄ）,71.3（ｄ）,70.5（ｄ）,70.3
（ｄ）,68.3（ｄ）,62.5（ｄ）,58.5（ｄ）,58.2
（ｄ）,57.2（ｔ）,55.4（ｄ）,52.9（ｔ）,52.1
（ｄ）,40.8（ｔ）,39.8（ｔ）,39.1（ｄ）,38.9
（ｔ）,36.8（ｔ）,33.1（ｔ）,30.9（ｔ）,30.8（t x
5）,30.7（ｔ）,30.7（ｔ）,30.5（ｔ）,30.4（ｔ）,3
0.3（ｔ）,27.3（ｔ）,26.9（ｔ）,23.7（ｔ）,19.4
（ｑ）,14.4（ｑ）,11.1（ｑ）上記物理的性質および化学的性質の解析、ならびにさ
らに化学構造の同定を研究した結果から、FR901382物質
の化学構造は下記のとおりに同定された。

実施例２ FR901379物質（60mg）の50mMトリス−HCl緩衝液（pH
7.1、30ml）溶液に、Aerobacter aerogenesから得たス
ルファターゼタイプVI（シグマ、Ｓ−1629号）（200U）
を加える。37℃、30時間インキュベート後、生成する脱
スルホFR901379物質（FR133302物質と呼称）をｎ−ブタ
ノール等容量で抽出し、１回水洗する。抽出液を減圧濃
縮し、0.5％NH₄H₂PO₄を含む47％アセトニトリル水溶液
で平衡にしたリクロプレプ（LiChroprep）RP−18（40−
63μｍ）を予じめ充填したサイズＢのカラム（メルク社
製）にかけ、同溶液で展開する。FR133302物質を含む画
分を等容量の水で希釈し、ODS YMC GEL（山村化学研究
所製）のカラムを直接通過させる。カラムを水洗し、メ
タノールで溶出する。溶出液を減圧下に蒸発させてメタ
ノールを留去し、凍結乾燥してFR133302物質（26mg）を
白色粉末として得る。

上記で得られるFR133302物質は下記物理化学的性質を
有する。

外観：白色粉末性質：中性物質融点:218−222℃（分解）比旋光度：▲［α］²² _D▼−30゜（C:1.0,MeOH）分子式:C₅₁H₈₂N₈O₁₈ 分子量:HRFAB−MS 1117.5659 （C₅₁H₈₂N₈O₁₈＋Naとしての計算値:1117.564
5）溶解性：メタノール、エタノールに可溶水、酢酸エチルに微溶クロロホルム、ｎ−ヘキサンに不溶呈色反応：沃素蒸気反応、硫酸セリウム反応に陽性ドラーゲンドルフ反応、モーリッシュ反応に
陰性薄層クロマトグラフィー（TLC）：紫外吸収スペクトル： ▲λ^{メタノ-ル} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:207（353）,282（2
5）,232（sh）nm ▲λ^{メタノ-ル+0.01N-NaOH} _max▼（▲Ｅ^1% _1cm▼）:208（46
2）,246（54.5）,293（31.2）nm 赤外吸収スペクトル： ▲ν^KBr _max▼:3350,2925,2855,1660,1630,1530,1445,
1285,1250,1065cm^-1 ¹ H核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,400MHz） δ:6.79（1H,d,J＝2Hz）,6.71（1H,d,J＝8Hz）,6.61
（1H,dd,J＝８および2Hz）,5.25（1H,d,J＝2.5Hz）,5.0
6（1H,d,J＝4Hz）,4.96（1H,d,J＝3Hz）,4.60−4.20（9
H,m）,4.15（1H,m）,4.08（1H,m）,3.99（1H,m）,3.91
（1H,m）,3.77（1H,m）,3.34（1H,m）,2.80（1H,dd,J＝
15および3Hz）,2.54−2.40（3H,m）,2.20（2H,t,J＝7H
z）,2.05−1.96（3H,m）,1.56（2H,m）,1.35−1.20（24
H,m）,1.15（3H,d,J＝6Hz）,1.02（3H,d,J＝7Hz）,0.89
（3H,t,J＝7Hz）¹³ C核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD,100MHz） δ:177.2（ｓ）,175.8（ｓ）,174.5（ｓ）,173.4
（ｓ）,172.7（ｓ）,172.6（ｓ）,172.5（ｓ）,169.1
（ｓ）,149.4（ｓ）,146.3（ｓ）,133.7（ｓ）,120.1
（ｄ）,116.2（ｄ）,115.3（ｄ）,76.9（ｄ）,75.9
（ｄ）,75.8（ｄ）,74.0（ｄ）,71.3（ｄ）,70.6
（ｄ）,70.6（ｄ）,70.1（ｄ）,68.2（ｄ）,62.5
（ｄ）,58.4（ｄ）,57.1（ｔ）,56.4（ｄ）,55.6
（ｄ）,53.0（ｔ）,51.5（ｄ）,39.5（ｔ）,39.0
（ｄ）,38.5（ｔ）,36.7（ｔ）,34.8（ｔ）,33.1
（ｔ）,30.8（t x5）,30.7（ｔ）,30.6（ｔ）,30.5
（ｔ）,30.4（ｔ）,30.3（ｔ）,26.9（ｔ）,23.7
（ｔ）,19.7（ｑ）,14.4（ｑ）,11.1（ｑ） FR133302物質の化学構造は下記のとおりである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者重松伸治茨城県つくば市梅園２―５―４―601 (72)発明者笠原千義大阪府池田市緑丘２―２―13 (72)発明者日野資弘茨城県土浦市東崎町13―３―1003 (72)発明者奥原正国茨城県つくば市梅園２―14―10 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 7/56 C12N 1/14 C12P 21/04 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式：（式中、R¹は水素またはヒドロキシ基、 R²は水素またはヒドロキシ基、 R³はヒドロキシ基またはヒドロキシスルホニルオキシ基
を意味する。但し、R¹が水素である場合には、R²は水素である。）で示されるポリペプチド化合物またはその塩類。
【請求項２】R¹およびR²がそれぞれヒドロキシ基であ
り、 R³がヒドロキシスルホニルオキシ基である請求項１）記
載のポリペプチド化合物またはその塩類。
【請求項３】（ｉ）式［I a］：（式中、R¹は水素またはヒドロキシ基、 R²は水素またはヒドロキシ基を意味する。但し、R¹が水素である場合には、R²は水素である。）で示される化合物またはその塩類を産生し得るコレオフ
ォマ（Coleophoma）属に属する菌株を栄養培地中で発酵
させ、化合物［I a］またはその塩類を回収して化合物
［I a］またはその塩類を得るか、または、（ii）このようにして得られた化合物［I a］またはそ
の塩類をスルホ基の脱離反応に付して式［I b］：（式中、R¹およびR²はそれぞれ前と同じ意味）で示される化合物を得ることにより、下記一般式：（式中、R¹およびR²はそれぞれ前と同じ意味であり、 R³はヒドロキシ基またはヒドロキシスルホニルオキシ基
を意味する。）で示される化合物またはその塩類を得ることを特徴とす
る新規ポリペプチド化合物の製造法。
【請求項４】有効成分として、請求項１）記載のポリペ
プチド化合物またはその塩類を含有する感染症治療剤。
【請求項５】微生物コレオフォマ・エスピーＦ−11899
（Coleophoma sp.F−11899）（微工研条寄第2635号）の
生物学的純粋培養物。