JPH05170784A

JPH05170784A - 抗真菌性物質ｂｅ−２９６０２

Info

Publication number: JPH05170784A
Application number: JP33252691A
Authority: JP
Inventors: Hiromasa Okada; 裕正岡田; Masao Nagashima; 正生長嶋; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Shigeru Nakajima; 中島　　茂; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1991-11-21
Filing date: 1991-11-21
Publication date: 1993-07-09

Abstract

(57)【要約】【構成】式【化１】で表される化合物、その製法及びその用途並びに新規微
生物フザリウム・エスピー（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓ
ｐ．）に関する。【効果】本発明のＢＥ−２９６０２は、抗真菌剤とし
ての利用が期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、さらに詳細には、抗真菌効果を発揮する新規化合
物、その製法及びその用途並びに新規微生物フザリウム
・エスピーＦ２９６０２（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．
Ｆ２９６０２）に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】細菌感染症に対する化学療法の分野にお
いては、すでに多くの化合物が医薬として実用化されて
いる。しかしながら、これらの化学療法剤の使用等によ
り、カビ、酵母などいわゆる真菌類の感染による深在性
真菌症が臨床上の大きな問題となっている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】真菌に対してより強い
抗真菌活性を有する新しい抗真菌剤を見出すことが本発
明が解決しようとする課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく、抗真菌活性を有する物質について微生物
代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記一般式で
表される化合物が優れた抗真菌作用を示すことを見出し
て本発明を完成した。

【０００５】即ち、本発明は、式

【０００６】

【化２】で表される新規な抗真菌性物質ＢＥ−２９６０２又はそ
の薬学的に許容しうる塩、その製造法及びその用途、並
びに、本発明はＢＥ−２９６０２を産生する能力を有す
るフザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属に属する微生物に
関するものである。

【０００７】以下に、本発明化合物の理化学的性状を示
す。ＢＥ−２９６０２の理化学的性状性状：白色粉末分子式：Ｃ₄₅Ｈ₆₂Ｏ₁₆ マススペクトル：高分解能ＦＡＢ−ＭＳ；ｍ／ｚ８５
９．４１４７［Ｍ＋Ｈ］⁺ ＵＶスペクトル：λ［ＭｅＯＨ，ｍａｘ，ｎｍ］２０
４，２２６，２３０（Ｓｈｏｕｌｄｅｒ），２６３ＩＲスペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４１８，２９３
２，２８６０，１７１０，１６４１，１６２０，１３４
４，１２６９，１１４９，１０７１，１０３８，１００
２Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ，δ
ｐｐｍ）：０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８），０．９
１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８），１．２２〜１．５０（１
２Ｈ，ｍ），２．０６（２Ｈ，ｍ），２．３３（２Ｈ，
ｍ），２．３８（２Ｈ，ｍ），３．４６（２Ｈ，ｍ），
３．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２），３．７５（１Ｈ，
ｂｒｓ），３．７８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１１．８），
３．９１〜４．０５（３Ｈ，ｍ），４．１５（２Ｈ，
ｍ），４．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．６，６．
２），４．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４），４．３６
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．２），５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１２．８），５．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８），
５．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．２，８．２），５．
５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．２，６．７），５．６７
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．０，６．９），５．８４〜
６．３６（１０Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
１５．６，１０．８），７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
５．６，１１．８）Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ，δ
ｐｐｍ）：１４．８（２×ｃ），２４．１（２×ｃ），
２９．７，３０．６（２×ｃ），３３．０（２×ｃ），
３４．１，４２．８，６２．０，６５．２，７０．８，
７２．３，７３．１（２×ｃ），７４．４（２×ｃ），
７５．２，７５．３，７６．９，７８．３，１００．
５，１０３．５，１０６．０，１１２．４，１１７．
０，１２２．２（２×ｃ），１２８．０，１３１．６，
１３２．５，１３２．６，１３４．５，１３６．６，１
４１．７，１４２．０，１４３．８，１４６．０，１４
６．５，１５５．１，１６２．１，１６９．１，１６
９．５溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに溶
け易く、クロロホルム、水に溶けにくい。

【０００８】酸性、中性、塩基性物質の区別：弱酸性物
質Ｒｆ値：０．４５（メルク社製、キーゼルゲル６０使
用，展開溶媒：クロロホルム／メタノール（４：１））呈色反応：過マンガン酸カリウム反応陽性、硫酸反応
陽性ＢＥ−２９６０２の薬理作用寒天希釈法によるＢＥ−２９６０２の最小発育阻止濃度
（ＭＩＣ，単位 μｇ／ｍｌ）を第１表に示す。

【０００９】

【表１】上記の通り、ＢＥ−２９６０２は、各種酵母、一部のカ
ビ、グラム陽性菌に対して強い発育阻害活性を示す。従
って、本発明は抗真菌剤として有用である。

【００１０】次に、ＢＥ−２９６０２の製造法について
説明する。

【００１１】本発明の抗真菌性物質ＢＥ−２９６０２の
製造に使用する微生物又はその変異株は、ＢＥ−２９６
０２を産生するものならばいずれでも良いが、例えば以
下の菌学的性状を有する微生物Ｆ２９６０２を挙げるこ
とができる。１．形態Ｆ２９６０２のフィアライドは変形した円筒状で、気生
菌糸から単生し、表面は滑面、大きさは１１〜１５×
３．０〜３．５μｍである。大型分生子は三日月型で、
１〜５隔壁を有し、１〜３隔壁の胞子の大きさは４２〜
５５×３．５〜４．０μｍ、４〜５隔壁の胞子の大きさ
は、５３〜６７×３．０〜４．０μｍである。また、下
記の培地では、小型分生子、子のう胞子及び厚膜胞子は
形成されない。２．培養性状各種寒天培地を用い、２５℃で１０日間培養した結果を
第２表に示す。

【００１２】

【表２】表中、（）内はメツエン・ハンドブック・オブ・カラ
ー（ＭｅｔｈｕｅｎＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＣｏｌｏ
ｒ）、第３版、１９８４年による色名の記載である。

【００１３】Ｆ２９６０２株の生育温度範囲は１０〜３
５℃、至適温度は２５℃である。また生育ｐＨ範囲はｐ
Ｈ４．０〜９．５、至適ｐＨはｐＨ７．５である。本菌
株の生育はやや遅く、コロニーは扁平な盾形、中央部に
は白色から赤色のなわ状菌糸束を形成する。

【００１４】以上の菌学的諸性質により、Ｆ２９６０２
株は、フザリウム属に属すると考えられる。したがっ
て、Ｆ２９６０２株をフザリウム・エスピー・Ｆ２９６
０２（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．Ｆ２９６０２）と称
することとした。

【００１５】なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託されており、その微工研受託番
号は微工研菌寄第１２５０３号（ＦＥＲＭＰ−１２５
０３）である。

【００１６】本発明で使用する抗真菌性物質ＢＥ−２９
６０２を産生する微生物の変異株は、例えばＸ線若しく
は紫外線等の照射処理、例えばナイトロジェン・マスタ
ード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくは
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合等の通常用いられる菌種変
換処理方法によりＢＥ−２９６０２産生菌を変異させた
微生物である。

【００１７】本発明のＢＥ−２９６０２を製造するにあ
たり、ＢＥ−２９６０２の生産菌株を栄養源含有培地に
接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−２９６
０２を含む培養物が得られる。栄養源としては、真菌の
栄養源として公知のものが使用できる。例えば、炭素源
としては、市販されているブドウ糖、グリセリン、麦芽
糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独
又は混合物として用いられる。窒素源としては、市販さ
れている大豆粉、コーンスティープリカー、肉エキス、
酵母エキス、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、無機
アンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合
物として用いられる。無機塩としては、市販されている
炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
マグネシウム又は各種リン酸塩などを使用することがで
きる。その他必要に応じて、鉄、マンガン又は亜鉛など
の重金属塩を微量添加することもできる。また、発泡の
著しい時には、消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁
油等の植物油、オクタデカノール等の高級アルコール
類、各種シリコン化合物等を適宜添加しても良い。これ
らのもの以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−２９６０
２の生産に役立つものであれば、いずれも使用すること
ができる。

【００１８】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行えばよく、固体培養でも液体培養
でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、振
盪培養又は通気培養などのいずれを実施してもよいが、
特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が好ましい。培養温
度は２０℃〜３７℃が適当であるが、好ましくは２５℃
〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は４８時間〜２４０時間、好ましくは１２
０時間〜１６８時間である。

【００１９】培養物から目的とするＢＥ−２９６０２を
採取するには、微生物の生産する代謝物を培養物から採
取するのに通常使用される分離手段が適宜利用される。

【００２０】ＢＥ−２９６０２は主に菌体中に存在する
ので、菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イ
オン交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグラフィ
ー法及びゲル濾過法等を単独又は組合せて行うことによ
り精製できる。また高速液体クロマトグラフィーや薄層
クロマトグラフィーなども抽出精製に利用可能である。

【００２１】好ましい分離−精製の例としては次の方法
が挙げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得ら
れた菌体からメタノール又はアセトン等の有機溶媒を用
いて抽出する。この菌体抽出液を減圧下で溶媒を除去
後、酢酸エチル、クロロホルムあるいはメチルエチルケ
トンなどの水と混和しにくい有機溶媒を用いて抽出す
る。抽出液を濃縮乾固後、クロロホルム−メタノールを
溶出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー、次
いでメタノールを溶出液としたセファデックスＬＨ２０
を用いたゲル濾過カラムクロマトグラフィーに付せば、
ＢＥ−２９６０２の白色固体を得ることができる。

【００２２】本発明化合物を抗真菌剤として使用する際
に、本発明の化合物は薬学的に許容しうる塩としても使
用される。薬学的に許容しうる塩の典型例としては、ナ
トリウム、カルシウム等のアルカリ金属又はアルカリ土
類金属塩等を挙げることができる。

【００２３】本発明化合物を抗真菌剤として使用する際
の投与形態としては各種の形態を選択でき、例えば錠
剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤若しくは液剤等の経口
剤、又は例えば溶液若しくは懸濁液等の殺菌した液状の
非経口剤が挙げられる。

【００２４】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
等の糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米等の澱
粉類、例えばステアリン酸等の脂肪酸、例えばメタケイ
酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン酸カルシウ
ム等の無機塩、例えばポリビニルピロリドン若しくはポ
リアルキレングリコール等の合成高分子、例えばステア
リン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウム等
の脂肪酸塩、例えばステアリルアルコール若しくはベン
ジルアルコール等のアルコール類、例えばメチルセルロ
ース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース
若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等の合成
セルロース誘導体、その他、水、ゼラチン、タルク、植
物油、アラビアゴム等通常用いられる添加物が挙げられ
る。

【００２５】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末等の固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、好
ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００２６】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナツ油若しくはゴマ油等の植物由来の油等
液状製剤において通常用いられる適当な添加物を使用
し、懸濁液、シロップ剤若しくは注射剤等の形態として
製造される。

【００２７】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈内注射
又は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例
えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉内注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
等の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内
注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００２８】これらの注射剤は予め溶解したものの他、
粉末のまま或いは適当な添加物を加えたものを用時溶解
する形態もとり得る。これらの注射液は、通常０．１〜
１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含
む。

【００２９】また、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤等
の液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３０】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、配合された組成物の種類、適用頻度及び治療すべき
特定部位、宿主によって変化することに注意すべきであ
る。例えば、１日当りの成人１人当りの投与量は、経口
投与の場合、１０〜５００ｍｇであり、非経口投与、好
ましくは静脈内注射の場合、１日当り１０〜１００ｍｇ
である。なお、投与回数は投与方法及び症状により異な
るが、１回ないし５回である。

【００３１】次に実施例を挙げ、本発明を具体的に説明
する。しかしながら、本発明は実施例に限定されるもの
ではなく、実施例の修飾手段はもちろん、本発明によっ
て明らかにされたＢＥ−２９６０２の性状に基づいて、
公知の手段を用いてＢＥ−２９６０２を生産、濃縮、抽
出、精製する方法すべてを包含する。

【００３２】

【実施例】

実施例１斜面寒天培地に培養した真菌Ｆ２９６０２株をポリペプ
トン０．３％、グルコース１％、小麦胚芽１．０％、グ
ルテンミール０．５％、麦芽エキス０．３％、マルトー
ス３．０％、塩化ナトリウム０．２％、硝酸ナトリウム
０．１％、リン酸一カリウム０．１％、硫酸マグネシウ
ム０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第二銅
０．００００４％、塩化マンガン０．００００４％、塩
化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０．００００８
％、ホウ酸ナトリウム０．００００８％及びモリブデン
酸アンモニウム０．０００２４％からなる培地（ｐＨ
６．０）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラスコ
４本に接種し、２８℃で７２時間、回転振盪機（毎分１
８０回転）上で培養した。この培養液を２ｍｌずつ、上
記の培地を１１０ｍｌ含む５００ｍｌ容の三角フラスコ
１００本に接種し、２８℃で７２時間、回転振盪機（毎
分１８０回転）上で培養した。

【００３３】培養によって得られた培養液（約１０Ｌ）
を濾過し、菌体を得た。菌体にメタノール約４Ｌを加え
室温で１時間撹拌した後、菌体を濾去し、メタノール抽
出液を得た。メタノール抽出を再度行い、合わせて約８
Ｌのメタノール抽出液を減圧下に約６００ｍｌに濃縮し
た。この濃縮液より酢酸エチル１Ｌを２回に分けて用い
て抽出し、得られた酢酸エチル抽出液を減圧濃縮乾固し
た。この粗物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィ
ー（内径３ｃｍ，長さ４５ｃｍ，キーゼルゲル６０，メ
ルク社）にかけ、クロロホルム（５００ｍｌ）で洗浄
後、クロロホルム／メタノールの混合溶媒（９：１）１
Ｌ、（４：１）１Ｌを用いて順次溶出を行った。ＢＥ−
２９６０２を含む画分を減圧下で濃縮乾固し、粗物質５
５０ｍｇを得た。次いで、この粗物質をシリカゲルカラ
ム（内径２ｃｍ、長さ４５ｃｍ）にかけ、クロロホルム
／メタノールの混合溶媒（９：１）１Ｌ、（４：１）１
Ｌを用いたクロマトグラフィーを行った。活性画分を減
圧下で濃縮乾固し、得られた粗ＢＥ−２９６０２（２２
０ｍｇ）を、メタノールを溶出液とするセファデックス
ＬＨ２０カラムクロマトグラフィー（内径１．５ｃ
ｍ、長さ９０ｃｍ）に２度かけ、純粋なＢＥ−２９６０
２を含む画分を減圧下、濃縮乾固することにより、１
６．０ｍｇのＢＥ−２９６０２を白色固体として得た。

【００３４】

【発明の効果】本発明のＢＥ−２９６０２は、第１表に
示した如く抗真菌活性を有する。したがって、ＢＥ−２
９６０２は抗真菌剤としての利用が期待される。

【００３５】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:77） (Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:77） (72)発明者中島茂東京都目黒区下目黒２丁目９番３号萬有製薬株式会社中央研究所内 (72)発明者須田寛之東京都目黒区下目黒２丁目９番３号萬有製薬株式会社探索研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表される化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項２】請求項１記載の化合物を有効成分とするこ
とを特徴とする抗真菌剤。
【請求項３】請求項１記載の化合物を産生する微生物又
はその変異株を培養することを特徴とする請求項１記載
の化合物の製法。
【請求項４】フザリウム・エスピーＦ２９６０２（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍｓｐ．Ｆ２９６０２）株又はその変異
株を培養することを特徴とする請求項３記載の製法。
【請求項５】抗真菌性物質ＢＥ−２９６０２を産生する
能力を有するフザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属に属す
る微生物又はその変異株。
【請求項６】フザリウム・エスピーＦ２９６０２（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍｓｐ．Ｆ２９６０２）株又はその変異
株であることを特徴とする請求項５記載の微生物。