JPH10130266A - 新規抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤 - Google Patents
新規抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤Info
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- JPH10130266A JPH10130266A JP9188749A JP18874997A JPH10130266A JP H10130266 A JPH10130266 A JP H10130266A JP 9188749 A JP9188749 A JP 9188749A JP 18874997 A JP18874997 A JP 18874997A JP H10130266 A JPH10130266 A JP H10130266A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 分子式C20H22N4O2で表される動物細胞特
異的な高い増殖阻害活性を有する新規抗腫瘍物質ＮＳＣ
Ｌ−９６Ｆ０３７、次式（Ｉ）： 【化１】 で示される化合物又はその薬学的に許容される塩、及び
それらの製造方法、前記化合物を生産する能力を有する
アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus)、並び
に前記化合物を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫
瘍剤。 【効果】 本発明の化合物は、動物細胞特異的な高い増
殖阻害活性、及び細胞周期阻害活性を有するので、細胞
周期阻害剤及び抗腫瘍剤として有用である。
異的な高い増殖阻害活性を有する新規抗腫瘍物質ＮＳＣ
Ｌ−９６Ｆ０３７、次式（Ｉ）： 【化１】 で示される化合物又はその薬学的に許容される塩、及び
それらの製造方法、前記化合物を生産する能力を有する
アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus)、並び
に前記化合物を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫
瘍剤。 【効果】 本発明の化合物は、動物細胞特異的な高い増
殖阻害活性、及び細胞周期阻害活性を有するので、細胞
周期阻害剤及び抗腫瘍剤として有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規抗腫瘍物質、
該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質
を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤に関す
る。
該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質
を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、微生物代謝産物から単離精製され
た抗腫瘍物質としては、ＤＮＡと結合することによって
抗腫瘍活性を示すアントラサイクリン類、マイトマイシ
ン類等の抗腫瘍抗生物質が知られており、実際に抗腫瘍
剤として用いられてきた（上野芳夫、大村智編：微生物
薬品化学（改訂第二版）、南江堂（１９８６年））。ま
た作用機序を異にする微生物代謝産物から単離精製され
た抗腫瘍物質としては、トリコスタチンＡ、リゾキシ
ン、グリセオフルビン等が知られている（吉田稔、別府
輝彦：蛋白質核酸酵素、第３８巻１１号、１７５３頁
（１９９３年）、岩崎成夫：化学と生物、第３２巻３
号、１５３頁（１９９４年））。しかし、更に高い抗腫
瘍性と、選択性の観点から、特に動物細胞特異的な増殖
阻害活性を備える微生物代謝産物由来の新規な化合物が
求められている。
た抗腫瘍物質としては、ＤＮＡと結合することによって
抗腫瘍活性を示すアントラサイクリン類、マイトマイシ
ン類等の抗腫瘍抗生物質が知られており、実際に抗腫瘍
剤として用いられてきた（上野芳夫、大村智編：微生物
薬品化学（改訂第二版）、南江堂（１９８６年））。ま
た作用機序を異にする微生物代謝産物から単離精製され
た抗腫瘍物質としては、トリコスタチンＡ、リゾキシ
ン、グリセオフルビン等が知られている（吉田稔、別府
輝彦：蛋白質核酸酵素、第３８巻１１号、１７５３頁
（１９９３年）、岩崎成夫：化学と生物、第３２巻３
号、１５３頁（１９９４年））。しかし、更に高い抗腫
瘍性と、選択性の観点から、特に動物細胞特異的な増殖
阻害活性を備える微生物代謝産物由来の新規な化合物が
求められている。
【０００３】一方、人体を構成する細胞は恒常性を維持
するためにその増殖と分化は厳密に制御されている。細
胞は、Ｍ期・Ｇ１期・Ｓ期・Ｇ２期という一連の過程か
らなる細胞周期を回転することにより分裂、増殖を行
う。この細胞周期の制御機構に異常が生じると癌や免疫
疾患になる。最近では、細胞周期の調節機構が分子レベ
ルで解明されつつあり、細胞周期を調節する物質には、
抗腫瘍剤、免疫抑制剤の可能性が知られている。
するためにその増殖と分化は厳密に制御されている。細
胞は、Ｍ期・Ｇ１期・Ｓ期・Ｇ２期という一連の過程か
らなる細胞周期を回転することにより分裂、増殖を行
う。この細胞周期の制御機構に異常が生じると癌や免疫
疾患になる。最近では、細胞周期の調節機構が分子レベ
ルで解明されつつあり、細胞周期を調節する物質には、
抗腫瘍剤、免疫抑制剤の可能性が知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、動物細胞特
異的な増殖阻害活性、及び細胞周期阻害活性を備える新
規な抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方
法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び
抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
異的な増殖阻害活性、及び細胞周期阻害活性を備える新
規な抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方
法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び
抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成すべく鋭意努力した結果、アスペルギルス(Asper
gillus) 属に属する微生物の培養物中に新規抗腫瘍物質
が生産され、これが動物細胞特異的な増殖阻害活性、及
び細胞周期阻害活性を有することを見い出し、この物質
をＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７と命名した。
を達成すべく鋭意努力した結果、アスペルギルス(Asper
gillus) 属に属する微生物の培養物中に新規抗腫瘍物質
が生産され、これが動物細胞特異的な増殖阻害活性、及
び細胞周期阻害活性を有することを見い出し、この物質
をＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７と命名した。
【０００６】即ち、本発明は、下記の理化学的性質を有
する抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７を提供するもの
である。 （ｉ）分子量：350 （FABMS M/Z 351 (M+H) ） （ii）分子式：C20H22N4O2 (iii)赤外線吸収スペクトル：図１のとおり （iv）1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（図２参照）（500MH
z、CDCl3 中で測定、内部標準としてCHCl3 の化学シフ
ト値を7.24ppm とした。）：δ (ppm) 1.47(6H,s),2.94(1H,dd,J=14,10Hz),3.45(1H,dd,J=14,4
Hz),4.33(1H,brd,J=10Hz),5.10(1H,d,J=17Hz),5.14(1H,
d,J=11Hz),5.88(1H,br),6.00(1H,dd,J=17,11Hz),6.86(1
H,s),7.21-7.26(3H,m),7.31(2H,t,J=8Hz),7.53(1H,s),
9.61(1H,br),12.08(1H,br)
する抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７を提供するもの
である。 （ｉ）分子量：350 （FABMS M/Z 351 (M+H) ） （ii）分子式：C20H22N4O2 (iii)赤外線吸収スペクトル：図１のとおり （iv）1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（図２参照）（500MH
z、CDCl3 中で測定、内部標準としてCHCl3 の化学シフ
ト値を7.24ppm とした。）：δ (ppm) 1.47(6H,s),2.94(1H,dd,J=14,10Hz),3.45(1H,dd,J=14,4
Hz),4.33(1H,brd,J=10Hz),5.10(1H,d,J=17Hz),5.14(1H,
d,J=11Hz),5.88(1H,br),6.00(1H,dd,J=17,11Hz),6.86(1
H,s),7.21-7.26(3H,m),7.31(2H,t,J=8Hz),7.53(1H,s),
9.61(1H,br),12.08(1H,br)
【０００７】（ｖ）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（図３
参照）（400MHz、CDCl3 中で測定、内部標準としてCDCl
3 の化学シフト値を77.10ppmとした。）：δ （ｐｐ
ｍ） ２８．０７（ＣＨ３），２８．０７（ＣＨ３），３７．
６９（Ｃ），４１．３３（ＣＨ２），５７．２４（Ｃ
Ｈ），１０５．６７（ＣＨ），１１３．４６（Ｃ
Ｈ２），１２３．７７（ＣＨ），１２７．５６（Ｃ
Ｈ），１２９．１８（ＣＨ），１２９．１８（ＣＨ），
１２９．６２（ＣＨ），１２９．６２（ＣＨ），１３
２．２９（Ｃ），１３２．６４（Ｃ），１３５．５５
（Ｃ），１３６．８８（Ｃ），１４４．７５（ＣＨ），
１６０．０４（Ｃ），１６４．８５（Ｃ）
参照）（400MHz、CDCl3 中で測定、内部標準としてCDCl
3 の化学シフト値を77.10ppmとした。）：δ （ｐｐ
ｍ） ２８．０７（ＣＨ３），２８．０７（ＣＨ３），３７．
６９（Ｃ），４１．３３（ＣＨ２），５７．２４（Ｃ
Ｈ），１０５．６７（ＣＨ），１１３．４６（Ｃ
Ｈ２），１２３．７７（ＣＨ），１２７．５６（Ｃ
Ｈ），１２９．１８（ＣＨ），１２９．１８（ＣＨ），
１２９．６２（ＣＨ），１２９．６２（ＣＨ），１３
２．２９（Ｃ），１３２．６４（Ｃ），１３５．５５
（Ｃ），１３６．８８（Ｃ），１４４．７５（ＣＨ），
１６０．０４（Ｃ），１６４．８５（Ｃ）
【０００８】（ｖｉ）15Ｎ−核磁気共鳴スペクトル（60
0MHz、CDCl3 中で測定、内部標準としてアンモニアの化
学シフト値を０ppm とした。）：δ (ppm) 112,134,161,253 (vii)メタノール中での紫外スペクトルの吸収極大値
は、中性条件下で323nm で、230nm にピークを持つ（図
４参照）。
0MHz、CDCl3 中で測定、内部標準としてアンモニアの化
学シフト値を０ppm とした。）：δ (ppm) 112,134,161,253 (vii)メタノール中での紫外スペクトルの吸収極大値
は、中性条件下で323nm で、230nm にピークを持つ（図
４参照）。
【０００９】(viii)中性条件下、メタノール中で、320
〜340nm の紫外線によって励起され、395 〜400nm に極
大値を持ち、350 〜550nm の波長幅を持つ蛍光を発す
る。 （ix）酢酸エチル、クロロホルム、メタノール、ピリジ
ンに可溶、水、ベンゼン、トルエンに難溶 （ｘ）ニンヒドリン反応陰性、亜硝酸イオンとの呈色反
応陽性（橙色） （xi）物質の色：白色 また、本発明者らは、前記理化学的性質を有する抗腫瘍
物質の構造解析を行った結果、次式（Ｉ）：
〜340nm の紫外線によって励起され、395 〜400nm に極
大値を持ち、350 〜550nm の波長幅を持つ蛍光を発す
る。 （ix）酢酸エチル、クロロホルム、メタノール、ピリジ
ンに可溶、水、ベンゼン、トルエンに難溶 （ｘ）ニンヒドリン反応陰性、亜硝酸イオンとの呈色反
応陽性（橙色） （xi）物質の色：白色 また、本発明者らは、前記理化学的性質を有する抗腫瘍
物質の構造解析を行った結果、次式（Ｉ）：
【００１０】
【化２】
【００１１】で示される化合物であることが判明した。
従って、本発明は、更に、次式（Ｉ）：
従って、本発明は、更に、次式（Ｉ）：
【００１２】
【化３】
【００１３】で示される化合物又はその薬学的に許容さ
れる塩を提供するものである。また、本発明は、抗腫瘍
物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示され
る化合物を生産する能力を有するアスペルギルス・ウス
ツス(Aspergillus ustus) 、好ましくは、直径１８mm、
長さ１８０mmの試験管１本あたり、生産培地（生産培
地：グルコース５g/l 、グリセリン２０ml/l、綿実かす
２０g/l 、酵母エキストラクト２g/l 、塩化ナトリウム
2.5g/l、炭酸カルシウム４g/l （pH６. ５））５mlを入
れて準備した試験管各々に、該菌株の分生子を滅菌水で
懸濁させて調製した菌懸濁液を５０μ接種し、２７℃、
往復振盪（２６０rpm ）で５日間培養せしめ、該培養液
に試験管１本あたり１０mlのアセトンを添加し、室温で
１日間抽出後、濾過によって不溶物を除去した濾液を減
圧濃縮し、アセトンを留去した残水層に酢酸エチル５ml
を３回添加、抽出し、減圧濃縮乾固したものをメタノー
ルに溶解させて調製したものについて、標準として純粋
な抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）
で示される化合物を用いて、高速液体クロマトグラフィ
ーにより測定した場合に、生産培地１Ｌ当たり、２mg以
上、好ましくは８mg以上の量で抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９
６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産す
るアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) 、並
びにアスペルギルス(Aspergillus) 属に属し、抗腫瘍物
質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される
化合物を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、
その培養物から該化合物を採取することを特徴とする抗
腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示
される化合物の製造方法を提供するものである。更に本
発明は、抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式
（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含有する細胞
周期阻害剤及び抗腫瘍剤を提供するものである。
れる塩を提供するものである。また、本発明は、抗腫瘍
物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示され
る化合物を生産する能力を有するアスペルギルス・ウス
ツス(Aspergillus ustus) 、好ましくは、直径１８mm、
長さ１８０mmの試験管１本あたり、生産培地（生産培
地：グルコース５g/l 、グリセリン２０ml/l、綿実かす
２０g/l 、酵母エキストラクト２g/l 、塩化ナトリウム
2.5g/l、炭酸カルシウム４g/l （pH６. ５））５mlを入
れて準備した試験管各々に、該菌株の分生子を滅菌水で
懸濁させて調製した菌懸濁液を５０μ接種し、２７℃、
往復振盪（２６０rpm ）で５日間培養せしめ、該培養液
に試験管１本あたり１０mlのアセトンを添加し、室温で
１日間抽出後、濾過によって不溶物を除去した濾液を減
圧濃縮し、アセトンを留去した残水層に酢酸エチル５ml
を３回添加、抽出し、減圧濃縮乾固したものをメタノー
ルに溶解させて調製したものについて、標準として純粋
な抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）
で示される化合物を用いて、高速液体クロマトグラフィ
ーにより測定した場合に、生産培地１Ｌ当たり、２mg以
上、好ましくは８mg以上の量で抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９
６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産す
るアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) 、並
びにアスペルギルス(Aspergillus) 属に属し、抗腫瘍物
質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される
化合物を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、
その培養物から該化合物を採取することを特徴とする抗
腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示
される化合物の製造方法を提供するものである。更に本
発明は、抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式
（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含有する細胞
周期阻害剤及び抗腫瘍剤を提供するものである。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９
６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産す
る微生物としては、抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７
又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産する能力を有
するアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) で
あれば特に制限はないが、好ましい具体例としては、神
奈川県川崎市の土壌から分離されたアスペルギルス・ウ
スツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアス
ペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ
０３８が挙げられる。また、本発明の微生物は、抗腫瘍
物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示され
る化合物を生産する能力を有するアスペルギルス・ウス
ツス(Aspergillus ustus) を、エチルメタンスルホネー
ト、紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン等の変異原で処理した変異株も包含す
る。
６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産す
る微生物としては、抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７
又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産する能力を有
するアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) で
あれば特に制限はないが、好ましい具体例としては、神
奈川県川崎市の土壌から分離されたアスペルギルス・ウ
スツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアス
ペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ
０３８が挙げられる。また、本発明の微生物は、抗腫瘍
物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示され
る化合物を生産する能力を有するアスペルギルス・ウス
ツス(Aspergillus ustus) を、エチルメタンスルホネー
ト、紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン等の変異原で処理した変異株も包含す
る。
【００１５】アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus u
stus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、通商産業省
工業技術院生命工学工業技術研究所に平成８年９月３日
付けで寄託され、それぞれＦＥＲＭ Ｐ−１５８２９及
びＦＥＲＭ Ｐ−１５８３０の受託番号が付されてい
る。
stus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、通商産業省
工業技術院生命工学工業技術研究所に平成８年９月３日
付けで寄託され、それぞれＦＥＲＭ Ｐ−１５８２９及
びＦＥＲＭ Ｐ−１５８３０の受託番号が付されてい
る。
【００１６】アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus u
stus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、いずれも次
の菌学的性質を有する。 （１）各種培地における生育形態 ツァペック酵母エキス寒天培地（２５℃）での生育は、
速く、７日間で４５〜４６mmである。ツァペック酵母エ
キス寒天培地（３７℃）での生育は、それよりやや遅
く、７日間で３９〜４１mmである。麦芽エキス寒天培地
での集落表面の色調は灰色、裏面は灰緑色である。
stus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、いずれも次
の菌学的性質を有する。 （１）各種培地における生育形態 ツァペック酵母エキス寒天培地（２５℃）での生育は、
速く、７日間で４５〜４６mmである。ツァペック酵母エ
キス寒天培地（３７℃）での生育は、それよりやや遅
く、７日間で３９〜４１mmである。麦芽エキス寒天培地
での集落表面の色調は灰色、裏面は灰緑色である。
【００１７】（２）形態的性状 ツァペック寒天培地上での形態的性状を示す。 分生子頭：放射状 分生子柄：滑面、褐色で長さ１００〜３５０μm 、直径
４〜７μm 頂のう：球形〜フラスコ形で、直径１１〜１５μm 、上
部2/3 〜1/2 よりメトレを形成 メトレ：５〜７×４〜７μm フィアライド：アンプル形で、５〜８×３〜４μm 分生子：褐色で、球形、壁面は粗面、３×５μm
４〜７μm 頂のう：球形〜フラスコ形で、直径１１〜１５μm 、上
部2/3 〜1/2 よりメトレを形成 メトレ：５〜７×４〜７μm フィアライド：アンプル形で、５〜８×３〜４μm 分生子：褐色で、球形、壁面は粗面、３×５μm
【００１８】以上の菌学的性質より、ザ・ジーナス・ア
スペルギルス（K.B. Raper and D.I. Fennel, "The gen
us Aspergillus", Wiliams and Wilkins (1965) ）に従
い、不完全菌亜門、線菌目、アスペルギルス(Aspergill
us) 属ウスツス(ustus) 種に属することが明らかとな
り、本菌株をアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus u
stus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８と命名した。
スペルギルス（K.B. Raper and D.I. Fennel, "The gen
us Aspergillus", Wiliams and Wilkins (1965) ）に従
い、不完全菌亜門、線菌目、アスペルギルス(Aspergill
us) 属ウスツス(ustus) 種に属することが明らかとな
り、本菌株をアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus u
stus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８と命名した。
【００１９】アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus u
stus) に属する公知の菌株には、抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−
９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産
する能力を有するものはなく、アスペルギルス・ウスツ
ス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペル
ギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３
８は、いずれも新菌株であると結論した。
stus) に属する公知の菌株には、抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−
９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を生産
する能力を有するものはなく、アスペルギルス・ウスツ
ス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７及びアスペル
ギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３
８は、いずれも新菌株であると結論した。
【００２０】なお、アスペルギルス・ウスツス(Aspergi
llus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、アスペルギルス・ウ
スツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７の約４倍
の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）
で示される化合物の生産能を有する。
llus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、アスペルギルス・ウ
スツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７の約４倍
の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）
で示される化合物の生産能を有する。
【００２１】アスペルギルス(Aspergillus) 属に属し、
抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で
示される化合物を生産する能力を有する微生物を培地に
培養し、その培養物から該化合物を採取することによ
り、本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前
記式（Ｉ）で示される化合物を製造することができる。
前記微生物は、常法に従って培養することができ、培養
の形態は、液体培養でも固体培養でもよいが、工業的に
有利に培養するためには、前記微生物の菌懸濁液を液体
培地に接種し、通気撹拌培養を行えばよい。培地の栄養
源としては特に限定されることはないが、微生物の培養
に通常用いられる炭素源、窒素源、その他の培地成分を
含有させることができる。炭素源としては、デンプン、
グリセリン、グルコース、シュークロース、ガラクトー
ス等が、窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキ
ス、コーンスティープリカー、綿実かす、アンモニウム
塩、硝酸塩、その他有機又は無機の窒素化合物が用いら
れる。その他、無機塩、微量栄養源を適宜添加してもよ
い。培養温度、培養時間等の培養条件は、使用する菌の
発育に適し、しかもＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式
（Ｉ）で示される化合物の生産が最高となるような条件
を選ぶことが好ましい。例えば、培地のpHは、４〜９が
適当であり、５〜８が好ましく、培養温度は、１５〜３
５℃が適当であり、２３〜２８℃が好ましい。培養時間
は、４８〜１９２時間が適当であり、７２〜１９２時間
が好ましい。しかし、これらの培地組成、培地のpH、培
養温度、培養時間等の培養条件は使用する菌株の種類
や、外部の条件等に応じて、所望の結果が得られるよう
に適宜調整されるべきことはいうまでもない。前記のよ
うな培養物から、代謝産物を採取するのに通常使用され
る手段を適宜用いてＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式
（Ｉ）で示される化合物を採取することができる。例え
ば、ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示され
る化合物と培養物中に含まれる他の物質との有機溶媒に
対する親和性の差を利用する手段、溶解度の差を利用す
る手段、各種樹脂に対する吸着親和力の差を利用する手
段のいずれかを、それぞれ単独で、又は適宜組み合わせ
て、あるいは反復して使用することができる。具体的に
は、イオン交換クロマトグラフィー、非イオン性吸着樹
脂を用いたクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラ
フィー、活性炭、アルミナ、シリカゲル等の吸着剤によ
るクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等
の各種の液体クロマトグラフィー、あるいは、結晶化、
減圧濃縮、凍結乾燥等の手段を、それぞれ単独で、又は
適宜組み合わせて、あるいは反復して使用することがで
きる。
抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で
示される化合物を生産する能力を有する微生物を培地に
培養し、その培養物から該化合物を採取することによ
り、本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前
記式（Ｉ）で示される化合物を製造することができる。
前記微生物は、常法に従って培養することができ、培養
の形態は、液体培養でも固体培養でもよいが、工業的に
有利に培養するためには、前記微生物の菌懸濁液を液体
培地に接種し、通気撹拌培養を行えばよい。培地の栄養
源としては特に限定されることはないが、微生物の培養
に通常用いられる炭素源、窒素源、その他の培地成分を
含有させることができる。炭素源としては、デンプン、
グリセリン、グルコース、シュークロース、ガラクトー
ス等が、窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキ
ス、コーンスティープリカー、綿実かす、アンモニウム
塩、硝酸塩、その他有機又は無機の窒素化合物が用いら
れる。その他、無機塩、微量栄養源を適宜添加してもよ
い。培養温度、培養時間等の培養条件は、使用する菌の
発育に適し、しかもＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式
（Ｉ）で示される化合物の生産が最高となるような条件
を選ぶことが好ましい。例えば、培地のpHは、４〜９が
適当であり、５〜８が好ましく、培養温度は、１５〜３
５℃が適当であり、２３〜２８℃が好ましい。培養時間
は、４８〜１９２時間が適当であり、７２〜１９２時間
が好ましい。しかし、これらの培地組成、培地のpH、培
養温度、培養時間等の培養条件は使用する菌株の種類
や、外部の条件等に応じて、所望の結果が得られるよう
に適宜調整されるべきことはいうまでもない。前記のよ
うな培養物から、代謝産物を採取するのに通常使用され
る手段を適宜用いてＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式
（Ｉ）で示される化合物を採取することができる。例え
ば、ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７又は前記式（Ｉ）で示され
る化合物と培養物中に含まれる他の物質との有機溶媒に
対する親和性の差を利用する手段、溶解度の差を利用す
る手段、各種樹脂に対する吸着親和力の差を利用する手
段のいずれかを、それぞれ単独で、又は適宜組み合わせ
て、あるいは反復して使用することができる。具体的に
は、イオン交換クロマトグラフィー、非イオン性吸着樹
脂を用いたクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラ
フィー、活性炭、アルミナ、シリカゲル等の吸着剤によ
るクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等
の各種の液体クロマトグラフィー、あるいは、結晶化、
減圧濃縮、凍結乾燥等の手段を、それぞれ単独で、又は
適宜組み合わせて、あるいは反復して使用することがで
きる。
【００２２】前記のようにして得られたＮＳＣＬ−９６
Ｆ０３７の理化学的性質は前記のとおりであり、新規化
合物であることが明らかになった。本発明の抗腫瘍物質
ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７及び前記式（Ｉ）で示される化
合物は、塩基性物質であり、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫
酸塩、硝酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエン
スルホン酸塩、クエン酸塩等の薬学的に許容される塩と
して用いることもできる。
Ｆ０３７の理化学的性質は前記のとおりであり、新規化
合物であることが明らかになった。本発明の抗腫瘍物質
ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７及び前記式（Ｉ）で示される化
合物は、塩基性物質であり、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫
酸塩、硝酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエン
スルホン酸塩、クエン酸塩等の薬学的に許容される塩と
して用いることもできる。
【００２３】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３
７及び前記式（Ｉ）で示される化合物は、動物細胞特異
的な高い増殖阻害活性、及び細胞周期阻害活性を有し、
細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤として有用である。
７及び前記式（Ｉ）で示される化合物は、動物細胞特異
的な高い増殖阻害活性、及び細胞周期阻害活性を有し、
細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤として有用である。
【００２４】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３
７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として
含有する細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤は、経口及び非経
口投与のいずれの投与経路でも使用可能であり、経口投
与する場合は、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、シロ
ップ剤等の剤形で投与することができ、また、非経口投
与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤等の皮下あるい
は静脈注射剤、点滴剤、坐薬、塗布薬、軟膏のような剤
形で投与することができる。
７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として
含有する細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤は、経口及び非経
口投与のいずれの投与経路でも使用可能であり、経口投
与する場合は、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、シロ
ップ剤等の剤形で投与することができ、また、非経口投
与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤等の皮下あるい
は静脈注射剤、点滴剤、坐薬、塗布薬、軟膏のような剤
形で投与することができる。
【００２５】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３
７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を細胞周期阻害剤
又は抗腫瘍剤として製剤化するために、界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤及び薬学的に許容される被膜形成物
質、コーティング助剤等を適宜使用することができる。
例えば、界面活性剤としては、アルコール類、エステル
類、硫酸化脂肪族アルコール類等を挙げることができ
る。また、賦形剤としては、ショ糖、乳糖、デンプン、
結晶セルロース、マンニット、軽質無水ケイ酸、アルミ
ン酸マグネシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウ
ム、合成ケイ酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水
素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム等を挙げることができる。滑沢
剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化
油等を挙げることができ、懸濁剤や潤滑剤のごとき佐剤
としては、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生
油、大豆リン脂質等を挙げることができる。被膜形成物
質としては、セルロースや糖類等の炭水化物の誘導体と
して、酢酸フタル酸セルロース、また、ポリビニル誘導
体としてアクリル酸メチル・メタクリル酸共重合体が挙
げられる。コーティング助剤としては、フタル酸エステ
ル類等の可塑剤を挙げることができる。前記の成分の他
に、甘味料、香料、着色料、保存料等を添加してもよ
い。
７又は前記式（Ｉ）で示される化合物を細胞周期阻害剤
又は抗腫瘍剤として製剤化するために、界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤及び薬学的に許容される被膜形成物
質、コーティング助剤等を適宜使用することができる。
例えば、界面活性剤としては、アルコール類、エステル
類、硫酸化脂肪族アルコール類等を挙げることができ
る。また、賦形剤としては、ショ糖、乳糖、デンプン、
結晶セルロース、マンニット、軽質無水ケイ酸、アルミ
ン酸マグネシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウ
ム、合成ケイ酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水
素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム等を挙げることができる。滑沢
剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化
油等を挙げることができ、懸濁剤や潤滑剤のごとき佐剤
としては、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生
油、大豆リン脂質等を挙げることができる。被膜形成物
質としては、セルロースや糖類等の炭水化物の誘導体と
して、酢酸フタル酸セルロース、また、ポリビニル誘導
体としてアクリル酸メチル・メタクリル酸共重合体が挙
げられる。コーティング助剤としては、フタル酸エステ
ル類等の可塑剤を挙げることができる。前記の成分の他
に、甘味料、香料、着色料、保存料等を添加してもよ
い。
【００２６】本発明の細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤は、
成人の患者に対して、有効成分であるＮＳＣＬ−９６Ｆ
０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物として０．１
ｍｇ〜１ｇ／日を１回又は数回に分けて経口又は非経口
投与する。この投与量は、病状、患者の年齢、体重によ
り適宜増減することができる。
成人の患者に対して、有効成分であるＮＳＣＬ−９６Ｆ
０３７又は前記式（Ｉ）で示される化合物として０．１
ｍｇ〜１ｇ／日を１回又は数回に分けて経口又は非経口
投与する。この投与量は、病状、患者の年齢、体重によ
り適宜増減することができる。
【００２７】また、本発明の細胞周期阻害剤を生化学試
験用試薬として使用する場合、有機溶媒又は含水有機溶
媒に溶解して各種培養細胞系へ直接適用すると、細胞周
期の進行をＧ２／Ｍ期で阻止する。使用可能な有機溶媒
としては、例えば、メタノールやジメチルスルホキシド
等を挙げることができる。剤形としては、例えば、粉末
もしくは顆粒等の固形剤又は有機溶媒もしくは含水有機
溶媒に溶解した液剤等を挙げることができる。通常、本
発明の細胞周期阻害剤の効果的な使用量範囲は１〜100
μg/mlであるが、適切な使用量は培養細胞系の種類や使
用目的により異なる。また、必要により前記の範囲外の
量を用いることもできる。
験用試薬として使用する場合、有機溶媒又は含水有機溶
媒に溶解して各種培養細胞系へ直接適用すると、細胞周
期の進行をＧ２／Ｍ期で阻止する。使用可能な有機溶媒
としては、例えば、メタノールやジメチルスルホキシド
等を挙げることができる。剤形としては、例えば、粉末
もしくは顆粒等の固形剤又は有機溶媒もしくは含水有機
溶媒に溶解した液剤等を挙げることができる。通常、本
発明の細胞周期阻害剤の効果的な使用量範囲は１〜100
μg/mlであるが、適切な使用量は培養細胞系の種類や使
用目的により異なる。また、必要により前記の範囲外の
量を用いることもできる。
【００２８】
【実施例】以下、実施例及び試験例により、本発明を更
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらにより何
ら制限されるものではない。
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらにより何
ら制限されるものではない。
【００２９】（実施例１）ＮＳＣ−Ｆ０３７株からのＮ
ＳＣＬ−９６Ｆ０３７の製造 種菌としてアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ust
us) ＮＳＣ−Ｆ０３７を用いた。直径１８mm、長さ１８
０mmの試験管１本あたり滅菌済生産培地（生産培地：グ
ルコース５g/l 、グリセリン２０ml/l、綿実かす２０g/
l 、酵母エキストラクト２g/l 、塩化ナトリウム2.5g/
l、炭酸カルシウム４g/l （pH６. ５））５mlを入れて
準備した試験管１７００本（生産培地計８. ５Ｌ）各々
に、該菌株の分生子を滅菌水で懸濁させて調製した菌懸
濁液を５０μ接種し、２７℃、往復振盪（２６０rpm ）
で５日間培養した。該培養液に試験管１本あたり１０ml
のアセトンを添加し、室温で１日間抽出した。ついで、
濾過によって不溶物を除去した濾液（２０Ｌ）を減圧濃
縮し、アセトンを留去した。残った水層に酢酸エチル９
Ｌを添加し抽出した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで
脱水、減圧濃縮乾固後、シリカゲルオープンカラムクロ
マトグラフィー（クロロホルム−メタノール系）に供
し、抗腫瘍活性画分を分取した。本画分を減圧濃縮乾固
後、少量の７０％メタノールに溶解させ、センシューパ
ックODS-5251-SS ２０mmφ×２５０mm（（株）センシュ
ー科学）を用いる高速液体クロマトグラフィーにより、
７０％メタノールのイソクラティック条件で精製し、抗
腫瘍活性画分を分取した。更に、本画分を減圧濃縮乾固
後、センシューパック アクアシルSS-5251(60) ２０mm
φ×２５０mm（（株）センシュー科学）を用いる高速液
体クロマトグラフィーにより、クロロホルム：メタノー
ル＝９５：５のイソクラティック条件で精製し、抗腫瘍
活性画分を分取した。本画分を減圧濃縮し、透明な油状
物質を得た。これを少量のベンゼンにて懸濁させ、減圧
濃縮乾固することにより、２５mgのＮＳＣＬ−９６Ｆ０
３７を白色粉末として得た。
ＳＣＬ−９６Ｆ０３７の製造 種菌としてアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ust
us) ＮＳＣ−Ｆ０３７を用いた。直径１８mm、長さ１８
０mmの試験管１本あたり滅菌済生産培地（生産培地：グ
ルコース５g/l 、グリセリン２０ml/l、綿実かす２０g/
l 、酵母エキストラクト２g/l 、塩化ナトリウム2.5g/
l、炭酸カルシウム４g/l （pH６. ５））５mlを入れて
準備した試験管１７００本（生産培地計８. ５Ｌ）各々
に、該菌株の分生子を滅菌水で懸濁させて調製した菌懸
濁液を５０μ接種し、２７℃、往復振盪（２６０rpm ）
で５日間培養した。該培養液に試験管１本あたり１０ml
のアセトンを添加し、室温で１日間抽出した。ついで、
濾過によって不溶物を除去した濾液（２０Ｌ）を減圧濃
縮し、アセトンを留去した。残った水層に酢酸エチル９
Ｌを添加し抽出した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで
脱水、減圧濃縮乾固後、シリカゲルオープンカラムクロ
マトグラフィー（クロロホルム−メタノール系）に供
し、抗腫瘍活性画分を分取した。本画分を減圧濃縮乾固
後、少量の７０％メタノールに溶解させ、センシューパ
ックODS-5251-SS ２０mmφ×２５０mm（（株）センシュ
ー科学）を用いる高速液体クロマトグラフィーにより、
７０％メタノールのイソクラティック条件で精製し、抗
腫瘍活性画分を分取した。更に、本画分を減圧濃縮乾固
後、センシューパック アクアシルSS-5251(60) ２０mm
φ×２５０mm（（株）センシュー科学）を用いる高速液
体クロマトグラフィーにより、クロロホルム：メタノー
ル＝９５：５のイソクラティック条件で精製し、抗腫瘍
活性画分を分取した。本画分を減圧濃縮し、透明な油状
物質を得た。これを少量のベンゼンにて懸濁させ、減圧
濃縮乾固することにより、２５mgのＮＳＣＬ−９６Ｆ０
３７を白色粉末として得た。
【００３０】（実施例２）ＮＳＣ−Ｆ０３８株からのＮ
ＳＣＬ−９６Ｆ０３７の製造 アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ
−Ｆ０３７の代わりにアスペルギルス・ウスツス(Asper
gillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８を用いる以外は、実施
例１と同様に処理した結果、アスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、アスペルギ
ルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７
の約４倍の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７生産能を
有することが判明した。結果を表１に示す。
ＳＣＬ−９６Ｆ０３７の製造 アスペルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ
−Ｆ０３７の代わりにアスペルギルス・ウスツス(Asper
gillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８を用いる以外は、実施
例１と同様に処理した結果、アスペルギルス・ウスツス
(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３８は、アスペルギ
ルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０３７
の約４倍の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７生産能を
有することが判明した。結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】（実施例３）ＮＳＣ−Ｆ０３８株からの本
発明化合物（Ｉ）の製造 グルコース０. ５％、グリセリン２％、酵母エキストラ
クト０. ２％、綿実かす２％、塩化ナトリウム０. ２５
％及び寒天１. ５％（ｐＨ６. ５）からなる固形培地
（直径９ｃｍシャーレに２０ｍｌの前記培地）にアスペ
ルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０
３８を５点接種し２６℃で７日間、暗所にて培養し、胞
子を形成させた。０. ０５％の濃度になるようにツゥイ
ーン２０を加えた滅菌水５ｍｌにて胞子を回収し胞子懸
濁液を得た。この胞子懸濁液を前記固形培地２０ｍｌを
含むシャーレ４００枚に０. １ｍｌずつ接種し、２６℃
で８日間、暗所にて培養を行った。この培養物をミキサ
ーにて破砕し、８Ｌの酢酸エチルを加え、２日間放置
し、抽出した。回収した酢酸エチルを減圧濃縮し、褐色
のシロップ１５ｇを得た。
発明化合物（Ｉ）の製造 グルコース０. ５％、グリセリン２％、酵母エキストラ
クト０. ２％、綿実かす２％、塩化ナトリウム０. ２５
％及び寒天１. ５％（ｐＨ６. ５）からなる固形培地
（直径９ｃｍシャーレに２０ｍｌの前記培地）にアスペ
ルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) ＮＳＣ−Ｆ０
３８を５点接種し２６℃で７日間、暗所にて培養し、胞
子を形成させた。０. ０５％の濃度になるようにツゥイ
ーン２０を加えた滅菌水５ｍｌにて胞子を回収し胞子懸
濁液を得た。この胞子懸濁液を前記固形培地２０ｍｌを
含むシャーレ４００枚に０. １ｍｌずつ接種し、２６℃
で８日間、暗所にて培養を行った。この培養物をミキサ
ーにて破砕し、８Ｌの酢酸エチルを加え、２日間放置
し、抽出した。回収した酢酸エチルを減圧濃縮し、褐色
のシロップ１５ｇを得た。
【００３３】このシロップを２０ｍｌの酢酸エチルに溶
解し、酢酸エチルで調製したシリカゲルカラム（ベッド
容積：直径８ｃｍ、長さ２０ｃｍ）に浸潤させ、アセト
ン−酢酸エチル（１：５）にて溶出を行った。溶出液を
５００ｍｌずつ溶出順に従って分画した。本化合物は５
〜１０番目の分画に溶出され、この溶出物を減圧濃縮す
ることにより計４. ６５ｇの濃茶色粉末を得た。
解し、酢酸エチルで調製したシリカゲルカラム（ベッド
容積：直径８ｃｍ、長さ２０ｃｍ）に浸潤させ、アセト
ン−酢酸エチル（１：５）にて溶出を行った。溶出液を
５００ｍｌずつ溶出順に従って分画した。本化合物は５
〜１０番目の分画に溶出され、この溶出物を減圧濃縮す
ることにより計４. ６５ｇの濃茶色粉末を得た。
【００３４】この濃茶色粉末を１０ｍｌのクロロホルム
にて溶解し、クロロホルムで調製したシリカゲルカラム
（ベッド容積：直径４ｃｍ、長さ３０ｃｍ）に浸潤さ
せ、最初にクロロホルム５００ｍｌで溶出し、次にクロ
ロホルム−メタノール（５０：１）にて溶出した。
にて溶解し、クロロホルムで調製したシリカゲルカラム
（ベッド容積：直径４ｃｍ、長さ３０ｃｍ）に浸潤さ
せ、最初にクロロホルム５００ｍｌで溶出し、次にクロ
ロホルム−メタノール（５０：１）にて溶出した。
【００３５】本化合物は、クロロホルム−メタノール
（５０：１）溶液にて溶出され、計１. ０５ｇの茶色粉
末を得た。この茶色粉末に酢酸エチルを加え、よく撹拌
し２日間静置することにより、本化合物を含む白色粉末
（Ａ）６２８ｍｇを析出させた。この白色粉末（Ａ）を
加水分解し、得られたフェニルアラニンを光学活性カラ
ムを用いた高速液体クロマトグラフィーに付したとこ
ろ、Ｒ体及びＳ体のフェニルアラニンの存在が確認さ
れ、前記白色粉末（Ａ）は、前記式（Ｉ）で示される化
合物のＲ体及びＳ体の両者を含むことが判明した。
（５０：１）溶液にて溶出され、計１. ０５ｇの茶色粉
末を得た。この茶色粉末に酢酸エチルを加え、よく撹拌
し２日間静置することにより、本化合物を含む白色粉末
（Ａ）６２８ｍｇを析出させた。この白色粉末（Ａ）を
加水分解し、得られたフェニルアラニンを光学活性カラ
ムを用いた高速液体クロマトグラフィーに付したとこ
ろ、Ｒ体及びＳ体のフェニルアラニンの存在が確認さ
れ、前記白色粉末（Ａ）は、前記式（Ｉ）で示される化
合物のＲ体及びＳ体の両者を含むことが判明した。
【００３６】前記白色粉末（Ａ）を微量のメタノールを
含む酢酸エチルにて溶解し、７日間放置した。この結
果、淡黄色結晶性固体として前記式（Ｉ）で示される化
合物のＲ体、即ち、次式（Ｉ’）：
含む酢酸エチルにて溶解し、７日間放置した。この結
果、淡黄色結晶性固体として前記式（Ｉ）で示される化
合物のＲ体、即ち、次式（Ｉ’）：
【００３７】
【化４】
【００３８】で示される化合物の精製標品を１８７ｍｇ
得た。表２及び表３に精製標品の物性値等を示す。
得た。表２及び表３に精製標品の物性値等を示す。
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】（試験例１） （Ａ）ヒト肺癌由来Ａ−５４９細胞に対する抗腫瘍作用 ＥＭＥＭ培地（ニッスイ製薬（株））、１０％牛胎児血
清の組成からなる培地に105 細胞／mlに調整したヒト肺
癌由来Ａ−５４９細胞を100 μl ずつ９６穴マイクロタ
イタープレートの各穴に分注した。最上段の穴に、実施
例１で得たＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７のメタノール溶液を
添加し、半対数希釈法で検体の希釈、添加を行い、該プ
レートを炭酸ガス細胞培養器内で、３７℃、４８時間培
養した。これにＭＴＴ試薬（３−（４，５−ジメチル−
２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムブロミド）（１mg／ml・ＰＢＳ）を10μl ずつ
加え、炭酸ガス細胞培養器内で、３７℃、６時間培養
し、培地を捨てた後、細胞内に生じたホルマザンの結晶
を100 μl/穴のジメチルスルホキシドで溶解した。続い
てマイクロプレートリーダーにより、595nm の吸光度を
測定した。無処理細胞と既知濃度の検体で処理した細胞
の吸光度を比較することにより、細胞の増殖を５０％阻
害する検体濃度（ＩＣ50）を算出し、ＩＣ50＝ 0.3μg/
mlを得た。
清の組成からなる培地に105 細胞／mlに調整したヒト肺
癌由来Ａ−５４９細胞を100 μl ずつ９６穴マイクロタ
イタープレートの各穴に分注した。最上段の穴に、実施
例１で得たＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７のメタノール溶液を
添加し、半対数希釈法で検体の希釈、添加を行い、該プ
レートを炭酸ガス細胞培養器内で、３７℃、４８時間培
養した。これにＭＴＴ試薬（３−（４，５−ジメチル−
２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラ
ゾリウムブロミド）（１mg／ml・ＰＢＳ）を10μl ずつ
加え、炭酸ガス細胞培養器内で、３７℃、６時間培養
し、培地を捨てた後、細胞内に生じたホルマザンの結晶
を100 μl/穴のジメチルスルホキシドで溶解した。続い
てマイクロプレートリーダーにより、595nm の吸光度を
測定した。無処理細胞と既知濃度の検体で処理した細胞
の吸光度を比較することにより、細胞の増殖を５０％阻
害する検体濃度（ＩＣ50）を算出し、ＩＣ50＝ 0.3μg/
mlを得た。
【００４２】（Ｂ）抗菌試験 グラム陰性菌として大腸菌ＪＭ１０９株、グラム陽性菌
としてBacillus natto菌、カビとしてAspergillus nige
r ＩＦＯ 6341 株を用いて、ろ紙ディスク寒天平板法
（検体100 μg を直径９mmのろ紙に添加、風乾。細菌は
標準寒天培地、カビはポテトデキストロース寒天培地を
使用）で抗菌試験を行ったが、抗菌活性は観察されなか
った。また、酵母Saccharomyces cerevisiae HF7C株を
用いて、液体培地希釈法で抗菌試験を行ったが、抗菌活
性は観察されなかった。以上のことより、本発明の抗腫
瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７は、動物細胞特異的な高
い増殖阻害活性を有することが分かる。
としてBacillus natto菌、カビとしてAspergillus nige
r ＩＦＯ 6341 株を用いて、ろ紙ディスク寒天平板法
（検体100 μg を直径９mmのろ紙に添加、風乾。細菌は
標準寒天培地、カビはポテトデキストロース寒天培地を
使用）で抗菌試験を行ったが、抗菌活性は観察されなか
った。また、酵母Saccharomyces cerevisiae HF7C株を
用いて、液体培地希釈法で抗菌試験を行ったが、抗菌活
性は観察されなかった。以上のことより、本発明の抗腫
瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７は、動物細胞特異的な高
い増殖阻害活性を有することが分かる。
【００４３】（試験例２）本発明化合物の細胞周期阻害
活性 ヒト肺癌由来細胞株Ａ４３１細胞を用いた。Ａ４３１細
胞は３７℃で１０％牛胎児血清、１％ＭＥＭ非必須アミ
ノ酸溶液（シグマＭ２０２５）を含むＥＭＥＭ培地にて
５％炭酸ガスと水蒸気を飽和させた培養器内で培養し、
対数増殖期にある細胞に実施例３で得た本発明化合物
（Ｉ’）の精製標品を添加して、フローサイトメーター
と顕微鏡観察により細胞周期の進行を解析した。結果を
表４に示す。
活性 ヒト肺癌由来細胞株Ａ４３１細胞を用いた。Ａ４３１細
胞は３７℃で１０％牛胎児血清、１％ＭＥＭ非必須アミ
ノ酸溶液（シグマＭ２０２５）を含むＥＭＥＭ培地にて
５％炭酸ガスと水蒸気を飽和させた培養器内で培養し、
対数増殖期にある細胞に実施例３で得た本発明化合物
（Ｉ’）の精製標品を添加して、フローサイトメーター
と顕微鏡観察により細胞周期の進行を解析した。結果を
表４に示す。
【００４４】
【表４】
【００４５】阻害効果の判定基準は、以下のとおりであ
る。 有 ：５０％以上の細胞が細胞周期をＧ２／Ｍ期で停止
した。 軽微：１０％以上５０％未満の細胞が細胞周期をＧ２／
Ｍ期で停止した。 無 ：１０％未満の細胞が細胞周期をＧ２／Ｍ期で停止
した。 表４の結果は本発明の化合物が細胞周期阻害剤として有
用であることを示している。
る。 有 ：５０％以上の細胞が細胞周期をＧ２／Ｍ期で停止
した。 軽微：１０％以上５０％未満の細胞が細胞周期をＧ２／
Ｍ期で停止した。 無 ：１０％未満の細胞が細胞周期をＧ２／Ｍ期で停止
した。 表４の結果は本発明の化合物が細胞周期阻害剤として有
用であることを示している。
【００４６】（試験例３）本発明化合物の細胞増殖抑制
効果 ヒト慢性骨髄性白血病細胞Ｋ−５６２をＲＰＭＩ１６４
０培地（１０％の牛胎児血清を含む）で培養、またヒト
外陰部扁平上皮癌細胞Ａ−４３１をＤＭＥＭ培地（１０
％の牛胎児血清を含む）で培養した。これらに一連の希
釈系列の実施例３で得た本発明化合物（Ｉ’）の精製標
品を加え、４８時間培養した後、ＭＴＴ試薬を加えて生
育を計測した。結果を表５に示す。
効果 ヒト慢性骨髄性白血病細胞Ｋ−５６２をＲＰＭＩ１６４
０培地（１０％の牛胎児血清を含む）で培養、またヒト
外陰部扁平上皮癌細胞Ａ−４３１をＤＭＥＭ培地（１０
％の牛胎児血清を含む）で培養した。これらに一連の希
釈系列の実施例３で得た本発明化合物（Ｉ’）の精製標
品を加え、４８時間培養した後、ＭＴＴ試薬を加えて生
育を計測した。結果を表５に示す。
【００４７】
【表５】
【００４８】表５の結果は本発明の化合物が抗腫瘍剤と
して有用であることを示している。 （製剤例１）注射・点滴剤 本発明の化合物１０ｍｇを含有するように、粉末ブドウ
糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し密封した上、
窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に保存
した。使用前にエタノールに溶解し、０. ８５％生理食
塩水１００ｍｌを添加して静脈内注射剤とし、１日１０
〜１００ｍｌを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与
する。
して有用であることを示している。 （製剤例１）注射・点滴剤 本発明の化合物１０ｍｇを含有するように、粉末ブドウ
糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し密封した上、
窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に保存
した。使用前にエタノールに溶解し、０. ８５％生理食
塩水１００ｍｌを添加して静脈内注射剤とし、１日１０
〜１００ｍｌを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与
する。
【００４９】（製剤例２）注射・点滴剤 本発明の化合物２ｍｇを用いて、製剤例１と同様の方法
により軽症用静脈内注射剤とし、１日１０〜１００ｍｌ
を症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。 （製剤例３）顆粒剤 本発明の化合物１ｇ、乳糖９８ｇ及びヒドロキシプロピ
ルセルロース１ｇを各々とり、よく混合した後、常法に
従って粒状に成形し、これをよく乾燥して篩別してビ
ン、ヒートシール包装等に適した顆粒剤を製造した。１
日１００〜１０００ｍｇを症状に応じて経口で投与す
る。
により軽症用静脈内注射剤とし、１日１０〜１００ｍｌ
を症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。 （製剤例３）顆粒剤 本発明の化合物１ｇ、乳糖９８ｇ及びヒドロキシプロピ
ルセルロース１ｇを各々とり、よく混合した後、常法に
従って粒状に成形し、これをよく乾燥して篩別してビ
ン、ヒートシール包装等に適した顆粒剤を製造した。１
日１００〜１０００ｍｇを症状に応じて経口で投与す
る。
【００５０】
【発明の効果】本発明により、新規抗腫瘍物質及びその
製造方法、当該物質を生産する能力を有するアスペルギ
ルス・ウスツス(Aspergillus ustus) が提供された。本
発明の化合物は、動物細胞特異的な高い増殖阻害活性、
及び細胞周期阻害活性を有するので、細胞周期阻害剤及
び抗腫瘍剤として有用である。
製造方法、当該物質を生産する能力を有するアスペルギ
ルス・ウスツス(Aspergillus ustus) が提供された。本
発明の化合物は、動物細胞特異的な高い増殖阻害活性、
及び細胞周期阻害活性を有するので、細胞周期阻害剤及
び抗腫瘍剤として有用である。
【図１】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７の
赤外線吸収スペクトルを示す図である。
赤外線吸収スペクトルを示す図である。
【図２】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７の
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図３】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７の
13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図４】本発明の抗腫瘍物質ＮＳＣＬ−９６Ｆ０３７の
紫外スペクトルを示す図である。
紫外スペクトルを示す図である。
【図５】実施例３で得た本発明化合物（Ｉ’）の精製標
品のメタノール中の紫外線吸収スペクトルを示す図であ
る。
品のメタノール中の紫外線吸収スペクトルを示す図であ
る。
【図６】実施例３で得た本発明化合物（Ｉ’）の精製標
品の赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）を示す図である。
品の赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）を示す図である。
【図７】実施例３で得た本発明化合物（Ｉ’）の精製標
品の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）を示す
図である。
品の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）を示す
図である。
【図８】実施例３で得た本発明化合物（Ｉ’）の精製標
品の13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）を示す
図である。
品の13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）を示す
図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｚ 17/16 17/16 //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:70） (Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:70） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:70） (72)発明者 原田 武雄 神奈川県川崎市中原区井田３−35−１ 新 日本製鐵株式会社技術開発本部内 (72)発明者 河野 慎吉 神奈川県川崎市中原区井田３−35−１ 新 日本製鐵株式会社技術開発本部内 (72)発明者 加納 周雄 神奈川県川崎市中原区井田３−35−１ 新 日本製鐵株式会社技術開発本部内 (72)発明者 川島 浩 神奈川県川崎市中原区井田３−35−１ 新 日本製鐵株式会社技術開発本部内 (72)発明者 関谷 広勝 神奈川県川崎市中原区井田３−35−１ 新 日本製鐵株式会社技術開発本部内 (72)発明者 大溝 和則 神奈川県川崎市中原区井田３−35−１ 新 日本製鐵株式会社技術開発本部内
Claims (7)
- 【請求項１】 次の理化学的性質を有する抗腫瘍物質Ｎ
ＳＣＬ−９６Ｆ０３７。 （ｉ）分子量：350 （FABMS M/Z 351 (M+H) ） （ii）分子式：C20H22N4O2 (iii)赤外線吸収スペクトル：図１のとおり （iv）1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（500MHz、CDCl3 中
で測定、内部標準としてCHCl3 の化学シフト値を7.24pp
m とした。）：δ (ppm) 1.47(6H,s),2.94(1H,dd,J=14,10Hz),3.45(1H,dd,J=14,4
Hz),4.33(1H,brd,J=10Hz),5.10(1H,d,J=17Hz),5.14(1H,
d,J=11Hz),5.88(1H,br),6.00(1H,dd,J=17,11Hz),6.86(1
H,s),7.21-7.26(3H,m),7.31(2H,t,J=8Hz),7.53(1H,s),
9.61(1H,br),12.08(1H,br) （ｖ）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（400MHz、CDCl3 中
で測定、内部標準としてCDCl3 の化学シフト値を77.10p
pmとした。）：δ (ppm) 28.07(CH3),28.07(CH3),37.69(C),41.33(CH2),57.24(C
H),105.67(CH),113.46(CH2),123.77(CH),127.56(CH),12
9.18(CH),129.18(CH),129.62(CH),129.62(CH),132.29
(C),132.64(C),135.55(C),136.88(C),144.75(CH),160.0
4(C),164.85(C) （vi）15Ｎ−核磁気共鳴スペクトル（600MHz、CDCl3 中
で測定、内部標準としてアンモニアの化学シフト値を０
ppm とした。）：δ (ppm) 112,134,161,253 (vii)メタノール中での紫外スペクトルの吸収極大値
は、中性条件下で323nm で、230nm にピークを持つ。 (viii)中性条件下、メタノール中で、320 〜340nm の紫
外線によって励起され、395 〜400nm に極大値を持ち、
350 〜550nm の波長幅を持つ蛍光を発する。 （ix）酢酸エチル、クロロホルム、メタノール、ピリジ
ンに可溶、水、ベンゼン、トルエンに難溶 （ｘ）ニンヒドリン反応陰性、亜硝酸イオンとの呈色反
応陽性（橙色） （xi）物質の色：白色 - 【請求項２】 次式（Ｉ）： 【化１】 で示される化合物又はその薬学的に許容される塩。
- 【請求項３】 請求項１又は２記載の化合物を生産する
能力を有するアスペルギルス・ウスツス(Aspergillus u
stus) 。 - 【請求項４】 直径１８mm、長さ１８０mmの試験管１本
あたり、生産培地（生産培地：グルコース５g/l 、グリ
セリン２０ml/l、綿実かす２０g/l 、酵母エキストラク
ト２g/l 、塩化ナトリウム2.5g/l、炭酸カルシウム４g/
l （pH６. ５））５mlを入れて準備した試験管各々に、
該菌株の分生子を滅菌水で懸濁させて調製した菌懸濁液
を５０μ接種し、２７℃、往復振盪（２６０rpm ）で５
日間培養せしめ、該培養液に試験管１本あたり１０mlの
アセトンを添加し、室温で１日間抽出後、濾過によって
不溶物を除去した濾液を減圧濃縮し、アセトンを留去し
た残水層に酢酸エチル５mlを３回添加、抽出し、減圧濃
縮乾固したものをメタノールに溶解させて調製したもの
について、標準として純粋な請求項１又は２記載の化合
物を用いて、高速液体クロマトグラフィーにより測定し
た場合に、生産培地１Ｌ当たり、２mg以上の量で請求項
１又は２記載の化合物を生産する請求項３記載のアスペ
ルギルス・ウスツス(Aspergillus ustus) 。 - 【請求項５】 アスペルギルス(Aspergillus) 属に属
し、請求項１又は２記載の化合物を生産する能力を有す
る微生物を培地に培養し、その培養物から該化合物を採
取することを特徴とする請求項１又は２記載の化合物の
製造方法。 - 【請求項６】 請求項１又は２記載の化合物を有効成分
として含有する細胞周期阻害剤。 - 【請求項７】 請求項１又は２記載の化合物を有効成分
として含有する抗腫瘍剤。
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|---|---|---|---|
| JP09188749A JP3131574B2 (ja) | 1996-09-04 | 1997-07-14 | 新規抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8-234477 | 1996-09-04 | ||
| JP23447796 | 1996-09-04 | ||
| JP09188749A JP3131574B2 (ja) | 1996-09-04 | 1997-07-14 | 新規抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10130266A true JPH10130266A (ja) | 1998-05-19 |
| JP3131574B2 JP3131574B2 (ja) | 2001-02-05 |
Family
ID=26505126
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|---|---|---|---|
| JP09188749A Expired - Fee Related JP3131574B2 (ja) | 1996-09-04 | 1997-07-14 | 新規抗腫瘍物質、該物質を製造するための微生物及び方法、並びに該物質を有効成分とする細胞周期阻害剤及び抗腫瘍剤 |
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| US7935704B2 (en) | 2003-08-01 | 2011-05-03 | Nereus Pharmaceuticals, Inc. | Dehydrophenylahistins and analogs thereof and the synthesis of dehydrophenylahistins and analogs thereof |
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-
1997
- 1997-07-14 JP JP09188749A patent/JP3131574B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| JP3131574B2 (ja) | 2001-02-05 |
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