JPH02138187A - 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、微生物から得られる駆虫薬として有効な新規
物質、それらの製法、それらを含む薬剤組成物、並びに
ヒトまたは動物の医療におけるそれらの使用に関する。

〔従来の技術〕

数多くの微生物が特に土壌サンプルから分離され、これ
らの微生物のあるものＦ′ｉ種々の代謝産物を産生ずる
ことが見出されている。これらの代謝産物は単離され、
いくつかは有用な生理活性を示すことが分かつ大。この
ような代謝産物の１つのグループにミルベマイシン（ｍ
ｉｌｂｅｍｙｃｉｎ）類があシ、これらはストレプトマ
イセス（Ｓｔｒｓｐｔｏ−ｍｙｃｅｓ）属の微生物の培
養によって製造され、英国特許第１３９０３３６号；Ｊ
、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　２９（３）、７６−１
４〜７６−１６および２９（６）　、　７６−３５〜７
６−４２：米国特許第４１４４３５２号明細書および英
国特許第２０５６９８６号明細書に記載されている。

α系列のミルベマイシンは弐Ａ： Ｈ （式中、Ｒａ１ｊメチル、エチル１−ｅはインプロピル
である）で表これる化合物を包含する。米国特許第４１
４４３５２号において、これらの化合物および関連化合
物は駆虫作用を有することが報告され★。

種々のミルベマイシン誘導体は米国特許第４０９３６２
９号明細書および同第４１３４９７３号明糺（書に記載
されている。

欧州特許第０１７０００６号明細書および英国特許第２
１６６４３６号明細書は弐Ｂ： （式中Ｒｈ　はヒドロキシまたはメトキシであシ、Ｒｅ
はメチル、エチルまりはイソプロピルである）で表され
る６種類の化合物を開示している。これらの化合物もス
トレプトマイセス属微生物の培養により製造され、駆虫
作用をもつと述べられている。

〔発明の構成〕

本発明者らは今やストレプトマイセスＭｅ生物の培養に
より得られる新しいグループの化合物を見出した。これ
らの化合物は駆虫作用をもつために、ヒトや動物の掃去
病の治療に有用である。

従って１本発明は式（Ｉ）： Ｒ１ て示す。

本発明化合物の絶対配置は次の通シであると考えられる
： （式中、Ｒ１およびＲＺは下記の表Ｉ：表Ｉ 本発明の広範な面は式（■）： に示す通りである）で表される化合物を提供する。

本発明化合物の同定データは以下の実施例におい（式中
、Ｒ３は場合により保護されていてもよいヒドロキシ基
であり、Ｒ４およびＲ１の一方は場合により保護されて
いてもよいヒドロキシ基であって、他方は水素原子であ
る）で表される化合物を提供する。

ヒドロキシ基のための適当な保砕基はアシル基、例えば
表Ｉに示したアシル基である。他の適当な保護基、およ
びヒドロキシ基の保護ま★は脱保護方法は、例えば“有
機合成における保捗基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｑｒｏ
ｕｐｓ　　ｉｎ　ＱｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓ　ｉ　
ｓ）　”、　Ｔｈｅｏｄｏｒａ　Ｗ、　Ｇｒｅｅｎｅ、
Ｗｉ　１ｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｅｉｅｎｅｅ　　１９８１
　Ｃｈ２．１０−８６に記載されている。

本発明はまた、産生用微生物を培養し、その後その培養
物から本発明化合物またはその誘導体を分離することか
ら成る、本発明化合物またはその誘導体の製造方法を提
供する。

本発明はさらに、他の物質が混じっている溶液から本発
明化合物またはその誘導体をクロマトグラフィーにより
分離して１本発明化合物またはその誘導体を含む両分と
その他の画分とに分けることから成る、本発明化合物ま
たはその誘導体の調製方法を提供する。

本明細書中で用いる１培！”（およびその派生語）は炭
素、窒素、硫黄および無機塩の資化可能な供給源の存在
下で微生物を計画的、好気的に生育させることを意味す
る。このような好気的生育は固体または半固体の栄養培
地、もしくけ栄養素が溶解または懸濁している液体培地
中で行われる。

培養は好気的表面上で、あるいけ深部培養により行われ
る。栄養培地は複合栄養から成るか、または化学的に規
定される。

本発明培養法で用いるのに適した微生物は、本発明化合
物を産生じ得るストレプトマイセス属に属する細菌株で
あることが見出された。さらに、このような菌株の例に
は土壌から分離されたストレプトマイセスＥ２２５、そ
の突然変異株および天然変異株（例えばストレプトマイ
セスＥ２２５Ｂ）が含まれることが判明した。

本明細書で用いる“突然変異株”なる用語は、自然に起
こるか又は外力が計画的に加えられようとその他の方法
で加えられようと外力の作用によって起こるあらゆる突
然変異株を包含する。突然変異株をつくるための適当な
方法は、１産業微生物の六めの放射線およびラジオアイ
ソトープ（Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｉ
ｓｏｔｏｐｅｓ　ｆｏｔＩｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃ
ｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）　’　　シンポジウム会報、
ウィーン、１９７３．ＴＬ　２４１．国際原子力エネル
ギー機関に掲載されているアドラー（Ｈ，１，Ａｄｌｅ
ｒ）による”微生物の発生技術（’ｌ’ｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）”　に概略される方法
であり、これらには （１）電離線（例、Ｘ線およびＸ線）、紫外線、紫外線
＋光増′感剤（例、８−メトキーシダソウジン）、亜硝
酸、ヒドロキシルアミン、ピリミジン塩基類似体（例、
５−ブロモウラシル）、アクリジン、アルキ°ル化剤（
例、からしガス。

メタンスルホン酸エチル）、過酸化水素、フェノール、
ホルムアルデヒド、ニトロソクアニジン、熱、および （ｉＤ　　遺伝子技術、例えば１組み換え、形質転換。

形質導入、溶原化、溶原変換、プロトプラスト融合、お
よび自然発生変異株の選択的手法が含まれる。

ストレプトマイセスＥ２２５およびストレプトマイセス
Ｅ２２５Ｂｌｄ欧州特許第０２５４５８３号およびＵＳ
ＳＮ第０７６２７４号に記載されている。それらはスコ
ツトランド、アバディーン、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１
１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｎｄ　
Ｍａｒｉｎｅ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　　に寄託され、これ
らの寄託（ＮＣＩＢ１２３１０および１２５０９：寄託
日付１９８６年７月２３日および１９８７年７月２０日
）Ｆｉ特許手続上の微生物の寄託の国際的承昭に関する
ブダペスト条約に基づいて行われた。

ストレプトマイセスＥ２２５の特性は次の通シである： 澱粉カゼイン寒天培地上２７℃で７〜１４日間生長させ
た後、ストレプトマイセスｇ２２５ｉＪ褐色の栄養菌糸
体（この菌糸は球状ま★は杆状部分に分断されなかった
）と、黄色または白色の気中菌糸体（培養物が老化する
Ｋつれて灰色に変わった）を形成した。この培養物はま
た可溶性の黄色の色素を産生じ、いくつかのコロニーは
黄色の小滴を滲出することが観察され穴。芽胞柄はまっ
すぐな又は曲がった気中菌糸に沿って１つずつ又は対に
なって配置され、真の輪状分枝は全く見られず、末端が
４〜６回転のらせん形状であった。

いくつかの芽胞柄はいぼ状外観を呈し、比較的老化した
培養物では胞子が１塊になった湿った暗黒色部分を形成
した。

ストレプトマイセスＥ２２５は酵母−麦芽寒天培地上で
胞子を形成しなかった。

産生菌を培養するための発酵培地は適当には資化可能な
炭素源、資化可能な窒素源および無機塩を含む。適当な
窒素源は酵母エキス、大豆粉、肉エキス、綿実粉、麦芽
、蒸留器乾燥可溶物（ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ　　ｄｒｉ
ｅｄ　　５ｏｌｕｂｌｅｓ）、アミノ酸、タンパク質加
水外解物、アンモニウム窒素およびニトレート窒素など
である。適当な炭素源はグルコース、ラクトース、マル
トース、澱粉およびグリセ。−ヤなどである。適当には
、培地はさらにアルカリ金属イオン（例、ナトリウム）
、アルカリ土類金属イオン（例、カルシウムおよびマグ
ネシウム）、／％ロゲンイオン（例、塩素イオン）、お
よび微量元素（例、鉄、亜鉛、銅、マンガンおよびコバ
ルト）を含有する。

培養は約２０〜３５℃、有利には２７〜２８℃で行われ
、培養物は本発明の目的化合物の最高収量を得るために
発酵開始後２〜３５日、有利ＫＶｉ。

約５〜２０日後に収穫される。

その後、目的化合物またはその誘導体は培地から単離さ
れ、そして慣用技法により精製される。

目的生産物は菌糸体の生長または培養Ｆ液から得られる
。従って、最初の分離工程は、例えば濾過ま７１１１：
け遠心によって発酵培地から固体物質を分離して、透明
な培！＃Ｐ液と固体物質を得ることが有利である。別法
として、発酵培地は直接抽出することもできる。

分離・精製方法において、有機溶剤（適当にはブタノー
ル又はトルエンのような溶剤）を用いる抽出工程を１行
うのが有利である。

目的化合物の更なる分離はクロマトグラフィー技術によ
シ効果的に達成される。抽出物は夾雑物質を含んでおシ
、こうしてクロマトグラ、フィー分離は複数の両分をも
たらし、それらのうち目的化合物またはその誘導体を含
む１つまたはそれ以上の画分が所望画分である。

所望画分灯駆虫活性について試験することＫよシおよび
／まなはそれぞれの両分をクロマトグラフィーで監視す
ることにより、−船釣方法で容易に同定することができ
る。所望側ｆ＋はとのような方法によって目的化合物ｉ
たはその誘導体を含むとして同定された１つまたはそれ
以上の画分である。

必要に応じて、クロマトグラフィー分離を通常のやり方
で繰り返すことができる。′９＋離方法の各段階におい
て、目的化合物ま一＋ｈその誘導体を含む画５）は−緒
に合わせて、更なる精製段階にかける。初期分離工程で
は、単に駆虫活性をもつものとして所望画分を同定して
、それらの両分を全都合わせることが有利である。後期
分離段階では、目的化合物またはその誘導体を、存在し
うる他の物質から分離するために、より精密に所望画分
を同定する必要がある。分離は本質的に目的化合物また
はその誘導体から成る１つまたはそれ以上の両分が得ら
れるまで続けられる。

１本質的に目的化合物またはその誘導体から成る画分”
という表現は、その両分中に存在する唯一の成分として
、あるいはその両分中に存在する主要成分（他の成５）
ハ活性であっても不活性夾雑物であってもよい）として
、目的化合物またはその誘導体を含む画分を意味する。

“主要成分”なる表現は、他の個々の成５）（溶剤を除
く）に比べて最も多量に存在する成分を意味する。適当
には、主要成５）は他のすべての成分（溶剤を除く）の
合計量よシも多い量で存在する。さらに適当には、主要
成分はその両分中に存在する活性物質の総量に対して、
ｔたはその時々に応じて活性であろうと不活性であろう
とすべての物質（溶媒を除く）の総量に対して、少なく
とも６０％、有利にケア０チ以上、好ましくは８０％以
上、特に９０〜１００チ、の量で存在する。一般に、本
発明化合物は相互に混ざり合った状態で主意され、従っ
て本質的に２種類以上の本発明化合物の混合物から成る
両分が得られる。

シリカゲルによるクロマトグラフィー分離（例えば、シ
リカ６０カラムを使用）を行うことが効果的であると分
かった。２以上のクロマトグラフィー分離工種を順次実
施することができる。カラムからの溶出は有機溶剤を用
いて、例えばヘキサン／アセトン、ジエチルエーテル／
石油エーテルまたはメタノール／クロロホルムのような
混合溶剤、もしくは単独の溶剤を用いて有利に行われる
。

本発明化合物またはそれらの混合物は実質的に純粋な形
で１例えば５０チ以上の純度、適当には６０チ以上の純
度、有利には７５％以上の純度、好ましくけ８５％以上
の純度、より好ましくけ９５チ以上の純度、特に９８％
以上の純度で揚供される（百分率はすべて重量／重量と
して計算）。

不純な、すなわち純度の低い本発明化合物は、例えば、
医療用途に適する純度のよシ高い同一化合物または関連
化合物（例えば対応する誘導体）を製造する念めに使用
される。

本発明化合物は１例えばトリコストロンギルス・コルプ
リホルミス（Ｔｒｉｅｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓｃｏｌ
ｕｂｒｉｆｏｒｍｉｓ）のような線虫に対して駆虫作用
を有し、ヒトおよび家畜（飼育動物を含む）を含め六晴
乳動物のような動物における傾虫病の治療に有用である
。

従って、本発明はまたヒトや動物の治療、特に内部およ
び外部寄生虫感染症の治療、とりわけ家庭用および飼育
用動物の禰虫病の治療、Ｋ用いる鉤虫、肺虫、糸状虫（
フィラリア）および駆虫のｍ＝ような寄生虫の侵入によ
って起こる人畜の鰭気を包含する。本発明化合物はまた
土壌中に存在する又は植物に寄生する線虫に対しても使
用できる。

本発明化合物はさらに節足動物に対しても有効である。

節足動物間はサシバエ、シラミ、ナンキンムシ、甲虫、
ノミのような昆虫綱およびダニマダニのようなりモガタ
綱を含む。

従って１本発明の広範な面は１本発明化合物またはその
誘導体を節足動物またけ線虫もしくはそれらの環境に適
用することから成る、節足動物また汀線虫の侵入を根絶
する方法を提供する。

こうして１本発明は本発明化合物またはその誘導体を適
当なキャリアーまたは賦形剤と共に含有してなる殺虫剤
組成物（例えばエーロゾル配合物）を提供する。

本発明はまた、本発明化合物またはその薬学的に許容さ
れる誘導体を、ヒトまたは家畜の医薬として許容烙れる
キャリアーもしくけ賦形剤と共に含有してなる。ヒトま
たは家畜用薬剤組成物を提供する。

本発明はまた、無毒かつ有効素の本発明化合物またはそ
の薬学的に許容される誘導体もしくは本発明組成物を患
者に投与することから成る。動物（特にヒトおよび家畜
）の内部および外部寄生虫感染症（％に嬬虫病）を治療
または予防する方法を提供する。

本発明組成物は、ヒトまたは家畜用の医薬として有利な
方法で投与するために、他の駆虫薬から類推して配合さ
れる。

適当な組成物において、その薬物は経口的に（ペースト
、飲薬、巨丸剤、カプセル、または錠剤として）、非経
口的に、経皮的に、食品添加物として（例、顆粒、ペレ
ットまたは粉末）投与されるか、あるいけエーロゾル噴
霧配合物として調製される。

本発明化合物はそれら同士との混合物および／またに他
の駆虫薬、駆虫薬、殺ダニ本または他の薬学的に活性な
物質との混合物として配合きれる。

適当には１本発明化合物は１回あたり００１〜１００ｑ
／ＫＱ（動物ｏ体１ｉ）、　好ＶＬ、（ｔｉｌ、ｏ　〜
１００　ｗ７Ｑｑ、の活性成分の用量をもたらすのに十
分な物質から成る。

本発明組成物は投与方法に応じて適当には０１重量％か
ら、好ましく　ｔｌｉｌ、　０重ｔ％から６０重重量ま
での本発明化合物（組成物の全型量基準）を含有する。

ある種の情況下では、粗製の発酵培地が、例えば凍結乾
燥発酵培地を動物の飼料に配合することによって、投与
されてもよい。

いくつかの場合には、感染し六又は感染し光可能性のあ
るヒトまたは家畜への本発明化合物の投薬は、駆虫薬に
対して通常用いられる投薬療法に従って、繰υ返すこと
が得策であると理解されるであろう。

以下の実施例は本発明を例示するためのものである。

実施例１ 培養物 ストレプトマイセス種ＮＣＩＢ　１２５０９を液体窒素
中に栄ＩＩ菌糸体として貯蔵した。

１段階播種 １００−の培地Ｙをガーゼ綿栓で密封した５００ｄエル
レンマイヤーフラスコ中で滅ｉｔ、ｉ。

培地Ｙは以下の諸成分を含んでいた： 来スペシャル・ペプトン　　　　　　　０．２５％米ラ
ブう　ｖムコＱ、ａｂ　Ｌｅｍｅｏ）　　　　０．２５
％来トリプトン　　　　　　　　　　　　０．２５チ米
中和大豆ペプトン　　　　　　　　　０．２５％来麦芽
エキス　　　　　　　　　　　　０．２５％可溶性澱粉
　　　　　　　　　　　　０２５％２５％グルコ−スル
　　　　　　　　０．２５チグリセロール　　　　　　
　　　　０．２５チφ微量元素溶ｉけ次の諸成分を含ん
でいた二ＣａＣｔ、　”　２Ｈ２０１，０％ ＭｇＣ１ｔ・６Ｈ２０１，０％ ＮａＣ１１，Ｏ％ Ｆｏｃｉ、　　　　　　　　　０．３％ＺｎＣ１！０．
０５％ ＣｕＣ１，−２Ｈ，ｏ　　　　　　Ｏ，０５％Ｍｎ　Ｓ
　０４　・４　Ｌ　ＯＯ，０５％ＣＯＣｌ、・６山０　
　　　　０．０５％（＊：これらの製品は英国ノ飄ンプ
シャー、ベーシングストーク、０ｘｏｉｄ　Ｌｔｄ、か
ら入手した）培地Ｙを入れた１つのフラ、スコに、保存
培養物の１本のアンプルの内容物（１，ｓｉ）を接種し
た。

このフラスコを旋回振とり器上２４０ｒｐｍ、２５℃で
４８時間インキュベートした。

２段階播種 １００−の培地Ｃをガーゼ綿栓で密封した５００ｍ／エ
ルレンマイジンフラスコ中でＭＩＦｌｌ。

培地Ｃは次の諸成分を含んでいた： アルカソイ（Ａｒｋａｓｏｙ）５０　　１．０％グルコ
ース−水和物　　　　　　２．０チ噴稈乾燥コーン浸出
沿　　　　　０５％（アルカソイ５０け英国マンチェス
ターＢｒ１ｔｉｓｈ　Ａｒｋａｄｙ　Ｃｏ、から入手し
た）（コーン浸出液は英国ケント、タンブリッジウｘ　
、Ｉ！／　、（、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ　ＵＫ　Ｔ、ｔｄ、
から入手した）培地Ｃのフラスコに１段階播種の接種物
４％を接種した。これらを旋回振とう器上２４　Ｏｒｐ
ｍ。

２６℃で７２時間インキュベートした。

ユ遣１０１Ｌ １ｓｔの培地Ｃをポリプロピレングリコール（Ｐ２００
０　）　０．１　ｖ／ｖＴｏと共に２０６のバイオラフ
イツト発酵槽（仏国ポアセイ、　Ｂｉｏｌａｆｉｔｔｅ
社）中で滅菌した。この発酵槽は完全に遮断し、３−枚
の羽根車を取シ付けた。無菌空気をｌｖｖｍで辿し。

２０Ｏｒｐｍで攪拌した。

２個の２段階播種フラスコの内容物を１つの２０１発酵
槽に接種し、２６℃で４８時間インキュベートした。

１１」す」！ １００ｔの培地Ｃを１５０ｔブラウン発酵槽（西独国メ
ルスンゲン、Ｂ、Ｂｒａｕｎ社）中１２１１℃で滅菌し
た。１０％プルロニックＬ８１／大豆油から成る０、１
％消泡剤を培地に加えた（プルロニックＬ８１は英国ク
ロイドン、Ｂｌａｇｄｅｎ−Ｃａｍｐｂｅ　１１Ｃｈａ
ｍｉｃａｌ　Ｃｏ、から入手した）。

この発酵槽は完全に遮断し、３枚の羽根車を取り付けた
。１２０ｒｐｍ　で攪拌し、無菌空気をｌｖｖｍで通気
した。発酵槽に３段階播種の接種物４ｔを接種し、２８
℃で４８時間インキュベートした。

発酵段階 ３０００ｔの培地Ｆ１を４５００ｔのバイオエンジニア
リング発酵槽（スイス、　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ−Ｗａｌｄ社）中で滅菌した。培地Ｆ１は次の諸成分
を含んでいた： アルカソイ　５０　　　　　　　１．０チグルコース〜
水和物　　　　　２．０％デキストリン０７００５　　
　　２．　Ｏチカゼイン　　　　　　　　　　０．２チ
ＭｇＳＯ４０，１チ ＣａＣ０，０，５チ １０％プルロニックＬ８し大豆油　０．１％（デキスト
リン０７００５ｔ−１英国マンチェスターＣｏｒｎ　Ｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ　Ｉ、ｔｄ、から入手した）（カゼイン
は英国）・ンブシャー、　０ｚｏｉｄ　Ｌｔｄ。

から入手した） ｐＨを６．０ＫｖＩ４整ＬＩ。

この発酵槽は完全に遮断し、３枚の羽根車を取シ付けた
。無菌空気を０．５マｖｍで供給した。

この発酵槽に４段階播種の接種物１００ｔを接種し、２
６℃でインキュベートしな。攪拌速度は次の速度に維持
した： ０−２日　　　５０ｒｐｍ ２−３日　　　　７５ｒｐｍ ３日−収穫　　１００１００ ｒｐ日間発酵を行い、必要に応じて消泡剤を追加し★。

分離方法 収穫の際に全培地を別の攪拌容器に移し、１０ｖ／ｖ％
のブタン−１−オールを加えた。この混合物を７℃で１
６時間攪拌した。その後、全培地（２３３９ｔ）を５ｔ
／分で、同時にブタン−１−オールを１．７ｔ／分でウ
エストファリアＳ　Ａ　７−０３−０７６液体／液体／
固体遠心分離機（西独−オエルデ、Ｗｅａｔｆａｌｉａ
　５ｅｐａｒａｔｏｒ　Ｌｔｄ、）に送った。沈殿した
固体は必要に応じて断続的に除去し大。

ラフィネートと菌糸体とを合わせ、２回目のブタン−１
−オールでの抽出にかけた。合わせたブタノール抽出物
を２０１に真空濃縮した。４０１のペトロリウムスピリ
ットを加えて着色不純物を析出させ、遠心により除去し
た。その上清を１５ｔに真空濃縮した。

クロマトグラフィー精製 濃縮物はシリカゲル（西独国シールズ、Ｒｌｅｄｅｌｄ
ｅ　Ｈａｅｎ　：　３２〜６３　ｐｍ）のカラム（直径
６００ｍｍＸ２００ｍｍ）　　でクロマトグラフィーに
かけ、ペトロリウムスピリット（６０°〜８０°）中の
酢酸エチルの段階的勾配で溶出した。ＶＭ４７７０４お
よび他の活性物質を含む両分（〉８チ酢酸エチルを用い
て得られた両分）は別にしておいた。残りのミルベマイ
シン含有画分をすべて同様のカラムで再度クロマトグラ
フィーにかけ、追加量のＶＭ４７７０４と他の活性物質
を分離し、これはす１°゛ｌコ分離して蒸発させておい
た油状濃縮物（２０８Ｆ）と−緒に合わせた。

これを再びシリカゲル（１５０ｍｍｘ１８０ｍｍカラム
）でクロマトグラフィーにかけ、ペトロリウムスピリッ
ト（６００〜８００）中の酢酸エチルの段階的勾配（３
，３１の純粋なペトロリウムスピリット、続いてペトロ
リウムスピリット中の１５％、２５％。

３０チ、３５チおよび４０チ（ｖ／ｖ）酢酸エチルをそ
れぞれ６，６を使用）で溶出した。初めの２５ｔの溶出
物を捨て、その後２ｔの両分を集めた。画分３〜８を合
わせ、濃縮して油状物を得六〇この物質ヲセファデツク
ス（Ｒ）Ｌ　Ｈ２０（英国ミルトンケイネス、　ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ社）のカラム（直伊７５ｍｍＸ５ＱＯｍｍ
）でクロマトグラフィーにかけ、メタノールで溶出した
。ミルベマイシン成分を含む両分を全部合わせた。

逆相シリカでのクロマトグラフィーを用いてさらに精製
した。マドレックスＬＲ）　Ｃ＋ｓシリカ、２０〜４５
μｍ、孔径６０Ｘ（英国ストーンノ・ウス、Ａｍ　ｉ　
ｃ　ｏ　ｎ社）をその後のすべてのカラムに対して使用
した。セファデックス（Ｒ′ＬＨ２０カラムから得られ
た生成物１’ｊ　ＣＩｓシリカのカラム（直径１００ｍ
ｍｘ１８０ｍｍ）　　でクロマトグラフィーにかけ。

８５チメタノールで溶出した。初めの１ｔの溶出物を捨
て、その後２０Ｘ１００−画分（すべてミルベマイシン
成分を含む）を集めて、−緒に合わせた。

このようにして得られた溶液を同様のカラムでクロマト
グラフィーにかけ、最初８５％メタノールで溶出し、そ
の後８７．５％メタノールで溶出した。初めの１ｔの溶
出物を捨てた後、８５−ずつの３６画分（ＶＭ４７７０
４以外の活性物を含む）を集めた。その後８７．５　％
メタノールを使用することによりＶＭ４７７０４　を溶
出し、これは他の活性物質と混ざり合っていた。

後者の画分を直径１００ｍｍｘ２６０ｍｍカラム（２２
■と呼ぶ）でクロマトグラフィーにかけ。

８５チメタノールで溶出し六。１０〇−両分を集めた。

ＶＭ４７７０４の濃縮が画分４２−５５に観察された。

画分３５−４１は別の生成物を含んでいた。

カラム２２Ｉからの画分４２−５５を同様のカラム（２
２Ｊと呼ぶ）でクロマトグラフィーにかけ、８２．５　
％メタノールで溶出した。初めの７．２ｔを捨て、その
後１００−画分を集めた。ＶＭ４７７０４は大部分が画
分６６−８５に見られ、純度の低い生成物が画分５７−
６５に存在していた。

カラム２２Ｉおよび２２Ｊからの純度の低い両分を合わ
せ、カラム（直径８０ｍｍｘ６００ｍｍ）でクロマトグ
ラフィーにかけ、８１％メタノールで溶出し六。初めの
９．３６を捨て、そのＡｌｌＯＯｒｎｌ画分を集め大。

主にＶＭ４７７０４を含む両分７６−８６をカラム２２
Ｊからの画分６６−８５と合わせ、同じカラムでクロマ
トグラフィーにかけ７９チメタノールで溶出した。初め
の２０１を捨て、１００を画分を集めた。画分３４−５
５を蒸発乾固させテ２０９　ｔｌＰ（７）ＶＭ４７７０
４を得た。

ＶＭ４７７０４の同定データ ｍａｓｓ（電子衝撃質量分析法）（Ｍ：）＋＝６８４：
δ１３Ｃ（ＣＤＣＩ、）　１７３．０．１７２．９．１
４２．９．１３９．１゜１３７．１．１３６．４．１３
４．８．１２３．６．１２３．３．１２１．７゜１２０
．５４．１２０．４７．９８．８．８１．９．８０．３
．７９．０゜７１．５．６８．８．６８．４．６７．９
．６４．６．６４．１．４８．４゜４５．５．　４３．
２．　３６．８．　３６．４．　３６．３．　３５．９
．　３４．６゜３２．０．　２５．６．　２２．４．　
２２２．　１７．４．　１５．５．　１３．１゜１０．
９゜ 実施例２および３ 播種段階および発酵段階は実施例１のように行った。但
し１発酵段階において、攪拌を次の速度に維持した： ０−３日　　　　５０ｒｐｍ ３日−収穫　　　１１００ｒｐ 発酵培地は４０４時間後に収穫した。全培地を発酵槽か
ら取り出してブタノールで飽和させた。

生放物１７ｊｉｎ−１ｉｎｅ静止ミキサー、次にウエス
トファリア液体／液体／固体遠心分離機を用いて晃容量
のブタノールで抽出した。培地を５１１分で処理し、約
８０１率を得た。２回目の類似の抽出を行い１本質的に
定量的な回収を得た。

ブタノール抽出物を合わせ、小容ｔ（１９ｚ）に濃縮し
、２倍容量のペトロリウムスピリット（６００〜８・０
°）を加えて着合不純物を析出させた。

再濃縮して１０．８１の褐色油状物を得、これを直径６
００ｍｍ０カラムに充填し念シリカゲル２８′ＫＩ！で
クロマトグラフィーを行った。溶出はベトロール中の次
第に増加する濃度（５０チまで）の酢酸エチルを用いた
。

ＶＭ４８１３０およびＶＭ４８６３３を含む両分を同定
し、更なるクロマトグラフィーにかけ念。

ＶＭ４８１３０（実施例２）およびＶＭ４８６３３（実
施例３） ＶＭ４８１３０おｊびＶＭ４８６３３を含む両分１．８
ｆＶ′ｉダイナブツクスー６０Ａ　Ｃ−１８カラム（５
００Ｘ２１．４ｍｍ：米国ＲＪＬ　ｉ　ｎ　ｉ　ｎ　　
ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社）を用いるｐｉＩＲ用逆相ＨＰ
ＬＣにかけ、メタノール／水の勾配（メタノール／水８
２：１８から１４０分かけて１００％メタノールへ上昇
）を用いて１０献／分で溶出し、２４４ｐｍでＵＶ分光
分析により監視した。　ＶＭ４８１３０とＶＭ４８６３
３は同一画分中に検出され、これらの両分をプールし、
溶媒を蒸発させて９７．４　ａｔの物質を得た。これは
さらにダイナマックス−６０Ａ　ｓｉカラム（２５０Ｘ
　２１’、　４ｍｍ）を用いる調製用シリカＩＨＰＩ、
Ｃにかけ、ヘキサン／アセトン勾配（１０−７分で１２
０分かけて８７：１３から８２：１８へ）で溶出するこ
とにより精製した。両分を集め、ＴＬＣ（シリカゲルプ
レートはへキサン／アセトン６０：４０で展開し★）で
同定し六〇 これは実質的に純粋なＶＭ４８６３３を４．９１１？も
な仝 らした。λｍａｘ（ＣＨｓＯＨ）２４”ｆｆ１ｍ、ｍａ
ｓｓ（ＦＡ１３Ｎａ＋／Ｎ０ＢＡ　）　［ＭＮａ）＋＝
　７０５．δ１３ｃ　（ＣＤＣＩ、）１７３．２，１６
６４，１５７．８，１４２．９，１３９．２゜１３７．
２，１３６．８，１３４．１，１２３．７．１２３．４
．１２１．４゜１２０．６．１２０．５．１１５．６．
９８．９．８１．９．８０．３゜７９．１．７１．６．
６８．８．６８．５．６８．０．６４．７．６３．５゜
４８．５．４５．６．３６９．３６．４５．３６３７．
３６．０゜３４．６．３２．１．２７．５．２２．３．
２０．３．１７．５．１５．５゜１３．１．１０．９　
ｐｐｍ。

ＶＭ４８１３０　　を含む両分１０．６■は半調製用Ｈ
ＰＬＣ（”イパーシル５ｐｍＯＤＳ２５０ｘｌＯｍｍカ
ラム：　ＨＰＬＣＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌｔｄ、）に
よる最終精製を必要とし、メタノール／水の勾配（３−
７分で６０分かけてメタノール／水７７：２３から８５
：１５へ上昇）で溶出し、２４４ｎｍでＵＶ分光分析に
より監視した。これは実質的に純粋なＶＭ４８１３０を
４．１ηもたらした。λｍａｘ（ＣＨｓＯＨ）２４４ｎ
ｍ、　ｍａ　ｓ　ｓ　（ＦＡＢ、　ＮａｙＮＯＢＡ）　
（ＭＮａ’ｌ”＝　６９３　：δ１３ｅ（ＣＤＣＩ、）
　１７７．８．１７３．７．１４２．８．１３９．５゜
１３７．９．１３７．４．１３３．１．１２４．９．１
２３．４．１２０．４゜１２０．３．１１８．１．１０
０．２．８０．２．７９．２．７６０゜７５．４．６８
．５．６８．１．６７．７．４８．５．４５．７．３７
．７゜３６２１、３６．１４．３６０．３４．６．３４
．３．２２．３．１９．９゜１９．２．１９．０．１５
．６．１３．２．１３．０．１０．８ｐｐｍ。

それらは下記条件でＨＰＬＣにかけたとき１２３分（Ｖ
Ｍ４８１３０）および１２９分（ＶＭ４８６３３）の保
持時間を有する：ウルトラスフェア０Ｄ８５μｍカラム
２５０ｘ４．６ｍｍ（Ａｌｔｅｘ）にかけ、１ｒｎｅ／
分の流速でメタノール／水（８５：１５）Ｋより溶出し
、２４４ｎｍでＵＶ分光分析によシ監視した。

実施例４ 播種段階および発酵段階は実施例１のように行った。

全培地（３ｍりをトルエン（１ｍ”）と混合し。

２５ｅｓＨｔｓＯａを用いてｐＨ２，５に調節し、その
後７５℃に加熱してこの温度で１時間保つ六。３０℃に
冷却後、この混合物をＳＡ７型分離機（英国ミルトンケ
イネス、オールトウオルハードン、）−一ビッグハウス
、Ｗｅｓｔｆａｌｉａ　５ｅｐａｒａｔｏｒＬｔｄ、）
に通して粒状物を含まないトルエン抽出物を得た。１　
ｗ／ｖ％炭酸水素ナトリウム水溶液（２５０ｄｍ’　）
を加え、酸性の不純物を抽出するつもりでこの混合物を
攪拌した。しかしながら、処理しにくい乳濁液が生じて
しまい、相分離を可能にするためにｐＨ３および６０℃
で処理する必要があった。水相を捨てた。

このトルエン溶液に１ｗ／ｖ％活性炭（ＮｏｒｉｔＧＳ
Ｘ　ニゲラスゴー、キャンパスラング・インダストリア
ｆｉｙ　−ニステート、　Ｎｏｒｉ　ｔ　（ＵＫ）Ｌｔ
ｄ、　）を加えて５０分間攪拌しｐ０１ｗ’ｖ％濾過助
剤（デイカライド４７８；ベルギー　ヘント、　Ｄｉｃ
ａｌｉｔｅＥｕｒｏｐｅ　Ｎｏｒｄ）を加え、この混合
物を真９濾過した。Ｐ液を減圧下で１１ｄｍ３．　　に
濃縮し、ペトロリウムスピリット（６０°〜８０°、４
４ｄｍ’）を加えた。

透明な溶液を沈殿固体からデカントし、真空濃縮して黄
褐色清秋物６．４７Ｋｆを得た。

この物質をベトロリウムスピリット（６０°〜８０°）
で充填したシリカゲル（キーゼルゲルＳ、３２〜６３ｇ
ｍ；西独国シーズ、Ｒｉｅｄｅｌ　ｊｉｅＨａｅｎ）２
８Ｋｙを含む直径６００ｍｍｘ高さ１３９ｍｍ　のカラ
ムでクロマトグラフィーにかけた。下記容量でベトロジ
ウムスピリット中の酢酸エチルの段階的勾配を用いて溶
出した： ３０％酢酸エチル溶出物の後半部分と５０％酢酸エチル
溶出物を合わせ、濃縮して油状物１４９？を得、これを
５０℃で８０％メタノールに溶解し、その後周囲温度に
おいてオクタデシルシリカ（マドレックスＣ１ｌ　シリ
カ、２０〜４５！Ｒ１孔径６　ｎ　ｍ　：英国クロスタ
ーシャー　ストーンハウス、Ａｍｌｃｏｎ社）を用いて
クロマトグラフィーにかけた。

このカラムは直径が１００ｍｍであシ、２００ｍｍの深
さにまで充填し、８０　Ｖマチメタノールで溶出した。

初めの溶出物（８６０ｃｗ”　）を捨て、その後８６　
Ｘ　９０　ｃｍ”画分を集めた。画分４１−８６を合わ
せ、濃縮して油状物（２２，６Ｆ）を得た。これを同様
の条件下でクロマトグラフィーにかけ、初めの溶出物（
６００ｃｒＲ’）を捨て、その後１６０　Ｘ　９０　ｃ
ｍ３両分を集めた。画分１１２−１３５を合わせ、濃縮
して油状物（生成物Ａ、ｓｒ）を得た。画分１０９−１
１１と画分１３６−１５１を一緒に合わせ、濃縮して油
状物（生成物Ｂ、３．５Ｆ）を得た。

生成物Ａ１１ｔオクタデシルシリカのカラム（直径８０
ｍｍＸ６００ｍｍ）でりＯマドグラフィーにかけ。

８０　／ｖ　％メタノールで溶出し★。初めの溶出物（
７，７ｄｍりを捨て念。その後８５　Ｘ　９０　ｃｍ”
画分を集めた。画分６０−７５を合わせ、蒸発乾固させ
な（６０ＯＮ）。生成物Ｂけ溶離剤として７７．５　Ｖ
／ｙ％メタノールを用いて同様にカラムクロマトグラフ
ィーＫかけた。初めの溶出液（１５，７５ｄｍ３）　を
捨て念。その後１０６　Ｘ　９０　ａｎ３両分を集めた
。画分４５−６１を合わせ、蒸発乾固させた（１６６岬
）。

精製し穴生成物ＡおよびＢを合わせ（７６６ｗ？９）。

溶離剤として７６３チメタノールを用いて同様にカラム
クロマトグラフィーにかけた。初めの溶出物（２０ｄｍ
３）を捨てた。その後、１１３　Ｘ　９０　ｃｍ”画分
を集めな。両分４５−７６を合わせ、蒸発乾固させ六（
３８０ｖ）。

この物質はさらにダイナマックス６０−Ａシリカカラム
（２１，４Ｘ２５０ｍｍ：米国ＲａｉｎｉｎＪｎｓｔｒ
ｕｍｅｎｔ　社）を用いる調製用’ＨＰＬ、Ｃによりク
ロマトグラフィーＫかけ％　１０−７分でポンプ輸送し
六ヘキサン／アセトン勾配（ヘキサン／ア七トン８７：
１３を１２０分かけて８２：１８に変え。

その後８２：１８に保持する）で溶出し大。全体を通し
て１０ｍ／両分を集め、分析用ＴＬＣ（シリカプレート
、ヘキサン／アセトン６０：４０で展開した）で調べた
。このカラムからの画分９５−１６２をプールし、溶媒
を蒸発させて純粋でない物質１２８．７■を得た。

この物質は調製用逆相ＨＰＬＣ（ダイナマックス−６０
Ａ　Ｃ−１８，２１，４Ｘ２５０ｍｍ：米国Ｒａｉｎｌ
ｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社）にかけ、移動相としてアセ
トニトリル／水を用いて１−７分で溶出し、１１ｗ１画
分を集め、ＵＶ吸光度（２４４ｍｍ）により監視した。

これを２回実施した。

初めのクロマトグラフィーではアセトニトリル／水７５
：２５を使用し、目的とする物質は速やかに溶出され、
画分３−２０に見出された。これを乾燥し、アセトニト
リルに溶解し、濾過し、アセトニトリル／水６５：３５
を用いて再度クロマトグラフィーニかけた。ＶＭ４８６
４２　Ｖｉ画分４２−５０に溶出され、これらをプール
し、乾燥して１２．２１Ｓ’を得た。

同定データ ＶＭ４８６４２ ＦＡＢ憤’１分析は７０８の分子量を示し六。

１３ｃ（ＣＤＣＩ、）１７３．１，１７０．９，１４３
．０８゜１４３．０５．　１４０．５，１３９．１，１
３７．２．　１３６２．　１３４．１゜１２３．７，１
２３．３，１２２．１，１２０．５９，１２０．５７゜
１１７．１．　１１１．３．　９８．９．　８１．９．
　８０．３．　７９．０．　７１．６゜６８．９．　６
８．５．　６８．０．　６４．８．　６４．７．　４８
．５．　４５．５゜３６８．３６．４３，３６３７，３
６．０，３４．６．　３２．１，３０．８゜２２．３．
　１７．５．　１５．５．　１３．１．　１０．９．　
　ｐｐｍ。

それは、逆相ＨＰＬＣ（マイクロソルブＣ−１８，４，
６Ｘ　２５０ｍｍカラム；米国Ｒａ　ｉ　ｎ　ｉ　ｎ　
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社）にかけ、メタノール／水８５
：１５を用いて１献／分で溶出し、２４４ｎｍでのＵＶ
分光分析法により監視するとき、１２．７８分の保持時
間を有する。

実施例５ 生物学的活性 生後４週間目のモンゴルネズミ（雌雄混合）のそれぞれ
に胃管挿入（＠ａｖａｇｅ）によｐ７５０匹のトリコス
トロンギルス・コルプリホルミス（’ｌ’ｒｉｃｈｏｓ
ｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　　ｅｏｌｕｂＹｉｆｏｒｍｉｓ）
の伝染性幼虫を感染させた。感染の２８日後、これらの
動物をランダムにグループ分けした。同じ日に、各グル
ープからの糞試料に含まれる寄生虫の卵の数を計数し、
感染が確立されたことを確望し、そして投薬前の卵の数
を決定した。

感染後２９日１に、各グループの動物を１岬／（および
０．１ｗｑ／Ｋｑ）用ｆ（７）ＶＭ４８１３０．ＶＭ４
８６３３およびＶＭ４７７０４で処置した。すべての処
置は胃管挿入により経口的に投与された。試験化合物ｉ
ｊ　０．２−メタノールに溶解し、０．０５％ツイー／
２０を含む水１献あたりＩＷｑの濃度に希釈しな。

ｏ、ｏｓｓ　　ライ−７２０を含む水を用いてＶ＠製し
た別の１／１ｏ希釈物（すなわち０．１　ｗＪ／　ｒｓ
ｆ、　）を用意し、動物に投与するために使用した。

処置後３白目と４日月に、各グループから集めた糞試料
に含まれる寄生虫の卵の数を数え、それにより処置の効
果を調べた。駆虫活性は次のように表した： これらの結果を表■に要約する。

表■

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（II）： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｒ＾３は場合により保護されたヒドロキシ基で
   あり、Ｒ＾４およびＲ＾５の一方は場合により保護され
   たヒドロキシ基であつて、Ｒ＾４およびＲ＾５の他方は
   水素原子である）で表される化合物。 ２、（ａ）Ｒ＾３はヒドロキシ基、Ｒ＾４は水素原子、
   Ｒ＾５は２−メチル−プロパノイルオキシ基であるか、
   または（ｂ）Ｒ＾３はヒドロキシ基、Ｒ＾４は３−メチ
   ル−ブト−２−エノイルオキシ基、３−メチル−ブタノ
   イルオキシ基または２−フラン−３−イル−アセチルオ
   キシ基、Ｒ＾５は水素原子である請求項１記載の化合物
   。 ３、先に定義したＶＭ４８１３０、ＶＭ４８６３３、Ｖ
   Ｍ４７７０４またはＶＭ４８６４２。 ４、実質的に純粋な形である、請求項１〜３のいずれか
   １項記載の化合物。 ５、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
   属の微生物を培養することから成る請求項１〜４のいず
   れか１項記載の化合物の製法。 ６、該微生物は￥ストレプトマイセス￥￥Ｅ２２５￥￥
   ＮＣ１Ｂ￥￥１２３１０￥または￥ストレプトマイセス
   ￥￥Ｅ２２５Ｂ￥￥ＮＣ１Ｂ￥￥１２５０９￥もしくは
   その突然変異株である請求項５記載の方法。 ７、請求項２記載の化合物が微生物により直接生産され
   る該化合物を製造するための請求項５または６記載の方
   法。 ８、ヒトまたは動物の内部および外部寄生虫感染症を治
   療または予防するための請求項１〜４のいずれか１項記
   載の化合物。 ９、有効量の請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物
   またはその誘導体を節足動物または線虫もしくはそれら
   の環境に適用することから成る節足動物または線虫の侵
   入を根絶する方法。 １０、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物または
   その誘導体を不活性キャリアーまたは賦形剤と共に含有
   してなる殺虫剤組成物。 １１、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物または
   その薬学的もしくは獣医学的に許容される誘導体を、薬
   学的もしくは獣医学的に許容されるキャリアーまたは賦
   形剤と共に含有してなるヒトまたは動物用医薬組成物。