JPS61257989A - 微生物の新規な駆虫性発酵生産物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の新規な化合物は、米国特許第 ４．３１０，５１９号に開示されたアベルメクチン化合
物及び米国特許第３，９５０，３６０号に開示されたミ
ルベマイシン化合物に関する。しかしながら、本化合物
は重大な構造的差異を持ち、先行技術の化合物から容易
に弁別することができる。

本発明は新規な化学的化合物に関する。特に、それはス
トレプトマイセス・アベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ　）及びストレプト
マイセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）の菌株のプロトプ
ラスト融合によシ得られた微生物ストレプトマイセスＭ
Ａ−５９２０の菌株を栄養培地中で発酵させることによ
り生産される新規の巨大ラクトン環に関する。それ故、
本発明の目的はそのような新規の化合物及び微生物学的
にそのような生産物を製造する方法を提供することであ
る。本発明の他の目的は発酵培地からそのような化合物
の回収及び精製を提供することである。これらの化合物
は抗寄生虫及び殺虫活性、特に駆虫、殺ダニ及び殺線虫
活性を持ち、このため開示した化合物を含む新規な抗寄
生虫性及び殺虫性組成物を提供することが本発明の第三
の目的である。本発明のさらに他の目的は本発明の以下
の記述から明らかになるであろう。

本発明に従って、以前に記載されたことのない微生物の
菌株ストレプトマイセスＭＡ　　−５９２０を管理され
た条件下で増殖させることにより、製造される新規の化
合物が記載されている。本化合物はこの中で記載するよ
うに発酵によって得られ、実質的に純粋な形で回収され
る。

分類学的研究に基づいて、これらの化合物を生産する能
力のある微生物は、微生物ストレプトマイセスの新菌株
である。培養はメルク−アンド・コンパニー、インコー
ホレーテッド（Ｍｅｒｃｋ　＆　Ｃｏ、　、　Ｉｎｃ、
　、　）　、ローウェー（Ｒａｈｖｒａｙ　）　、ニュ
ーシャーシー（Ｎ、　Ｊ、　）　　の培養コレクション
中で、ＭＡ−５９２０と表示されている。ここで記載し
た化合物を生産する能力のあるこの培養の試料は、利用
について制限を付することなくメリーランド（Ｍｄ、）
２０．８５２、　ロックビル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ　）
、　パークローン・ドライブ（ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒ
ｉｖｅ　）　１２３０１のアメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　）の永久培養コ
レクションに寄託（承認番号−ＡＴＣＣ５３１１０）さ
れている。

ストレプトマイセスＭＡ−５９２０の形態学的及び培養
的特徴は以下の通りである。

培養所見： （ｖ＝栄養増殖；Ａ＝気菌糸；ｓｐ＝可溶性色素） 形態 胞子体は密集したらせん状で堅い球となる。

胞子は吸湿性であシ、培養時間と共に胞子は癒合し、そ
の特徴ある外観を失い、無定形の湿潤な部分となる。

Ｖ：裏面（Ｒｅｖｅｒｓｅ　）−縁辺部は暗灰褐色であ
る灰褐色 Ａ：暗灰色、胞子形成良好 ＳＰ：　　黄褐色 Ｖ：裏面−クリーム色 Ａ：希少、灰白色 ＳＰ：無し、 グリセロールアスパラギン寒天（ＩＳＰ培地５）■＝裏
面−黄褐色 Ａ：培地の色ないし暗灰色、胞子形成良好 ＳＰ：淡黄褐色 無機塩−殿粉寒天（ＩＳＰ培地４） Ｖ：裏面−暗灰色 Ａ：暗灰色 ＳＰ：無し 酵母エキス−麦芽エキス寒天（ＩＳＰ培地２）Ｖ：裏面
−暗褐色 Ａ：暗灰色、濃密な胞子形成 ｓｐ　　淡黄ないし褐色 Ｖ：クリームないし褐色 Ａ：無し ＳＰ：　無し メラニン：陰性 チロシン寒天（ＩＳＰ培地７） Ｖ：暗灰色ないし褐色 Ａ：無し ＳＰ：淡褐色の培地 メラニン：陰性 炭素の利用 プリダム−ゴツトリーブ（Ｐｒｉｄｈａｍ　−Ｇｏｔｔ
ｌｉｅｂ　）基礎培地＋１％炭素原；＋＝発育；±＝貧
弱、または不確かな発育；−二ネガチブ対照（炭素原無
添加）と比較して発育せず グルコース　　　＋ アラビノース　　士 セルロース　　　− フルクトース　　＋ イノシトール　　＋ ラクトース　　　士 マルトース　　　＋ マンニトール　　＋ マンノース　　　＋ ラフィノース　　＋ ラムノース　　　＋ シュクロース　　＋ キシロース　　　土 類寒天 ２８℃−良好な発育と胞子形成 ３７℃−緩慢で貧弱な発育 ４２℃−発育せず ５０℃−発育せず 好気性 すべての読取シは別記せぬ限シ、２８℃で３週間後に行
った。すべての培地のｐ■はほぼ中性であった（６．８
〜７．２）。

色番号表示はカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏ１
ｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）第４版、　１
９５８年、コンテナー、コーポレーション、オフ。アメ
リカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　
ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　）、シカゴ（Ｃｈｉｃａｇｏ　
）　、イリノイ（ｌ１ｌｉｎｏｉｓ　）から採用した。

前述のデータをバージエース・マニュアル・オブ・デタ
ーミネーテイブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第９版；フックスマン（
Ｗａｋｓｍａｎ　）著、ザ・アクチノミセテス（Ｔｈｅ
　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）第２巻（１９６１年）
；インターナショナル−ジャーナル・オブ・システマテ
イツク・バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅｒｎａｔｆｏｎａ
ｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　１８巻、６８〜１８９ペー
ジ、２７９〜３９２ページ（１９６８年）；１９巻、３
９１〜５１２ページ（１９６９年）；２２巻、２６５〜
３９４ページ（１９７２年）を含む公表された記載と注
意深く比較するとストレプトマイセス会ヒグロスコピク
スと同定された細菌の記載並びにＭＡ−５９２０の形態
的及び培養的特徴の間に相関が認められる。ＭＡ−５９
２０株はストレプトマイセス・ヒグロスコピクスの標準
の記載と一致するので、ＭＡ−５９２０は既知の種スト
レプトマイセス・ヒグロスコピクスの一菌株であると決
定され、培養にその名前が与えられた。しかしながらＭ
Ａ−５９２０及びその二つの親株の間には重大な相異が
ある。ＭＡ−５９２０はストレプトマイセス・ヒグロス
コピクスよシよく発育し且つ胞子を形成する。ＭＡ−５
９２０は、それが異なる胞子体の形態及び胞子表面の性
質を持ち、暗褐色の可溶性色素を欠く点でストレプトマ
イセス・アベルミチリスと異なる。更にＭＡ−５９２０
の二次代謝産物は二つの親株により生産されるそれと異
なる。最後に、最も重要なことはＭＡ−５９２０によっ
て生産される生産物はいづれの親株とも異なることであ
る。それ故、ＭＡ−５９２０はストレプトマイセス・ヒ
グロスコピクスの新菌株であると結論される。

上の記述は本化合物の生産に使用することのできるスト
レプトマイセスＭＡ−５９２０の一菌株の例証である。

しかしながら、本発明はまた、上に記載した微生物の変
異株をも含む。

例えば、自然選別により得られた変異株、または紫外線
照射のような電離線照射若しくはニトロソグアニジンの
ような化学変異剤、若しくはその他の処理を含む変異剤
によシ生産されたそれもまた、本発明の範囲内に含まれ
る。

本化合物はストレプトマイセスＭＡ−５９２０の生産株
を用いて以下に記述する条件下で適当な水性栄養培地に
よる好気発酵の過程で生産される。多くの抗生物質の生
産に使用されるような水性培地は、この巨大環状化合物
の生産の方法に使用するのに適している。そのような栄
養培地は微生物によって同化可能な炭素原及び窒素原並
びに一般に少量の無機塩を含む。その上、発酵培地は微
生物の発育及び所望の化合物の生産に必要な痕跡量の金
属を含むことができる。これらは通常、複雑な炭素原及
び窒素原の中に十分な濃度で存在し、栄養原として使用
することができるが、所望なら培地に別に添加するのも
もちろん可能である。

一般に、糖のような炭水化物例えばブドー糖、蔗糖、マ
ルトース、乳糖、デキストラン、セレロース（ｃｅｒｅ
ｌｏｓｅ　）　、コーンミール、オートフラワー（ｏａ
ｔ　ｆｌｏｕｒ　）　　等及び殿粉は栄養培地における
適当な同化可能炭素原である。

培地中で利用される炭素原の正確な量は部分的ては培地
中の他の成分に依存するが、通常は培地の重量の０．５
〜５ｗｔ、％の炭水化物の量が満足すべきものであるこ
とが認められている。これらの炭素原は単独または幾つ
かの炭素原を同−培地中で組み合わせて使用することが
できる。

酵母加水分解物、酵母自己消化物、酵母細胞、トマトペ
ースト、コーンミール、オートフラワー、大豆粕、カゼ
イン加水分解物、酵母エキス、コーンステイープリカー
、デイスティラーズソリュブル（ｄｉｓｔＨｌｅｒｓ　
５ｏｌｕｂｌｅｓ　）、綿実粕、肉エキス等のような種
々の炭素原は本化合物の生産においてストレプトマイセ
スＭＡ−５９２０により容易に同化される。種々な窒素
原は単独または組み合せで培地中重量として０．２〜６
％の範囲で使用することができる。

培地に添加することのできる栄養分中無機塩は、ナトリ
ウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシ
ウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩などのような
イオンをもたらすことのできる通常の塩である。またコ
バルト、マンガンなどのようなトレースメタルも含まれ
る。

以下において、また実施例中で記述される培地は使用す
ることのできる広範囲の培地を単に例示しただけであり
、限定しようとするものではない。

以下の記載はストレプトマイセスＭＡ−５９２０の発育
する菌株に適した培地の実施例である。

ストレプトマイセスＭＡ−５９２０を使用する発酵は約
り０℃〜約４０℃の範囲の温度で実施することができる
。最適なる結果を得るためには、これらの発酵は約り４
℃〜約３０℃の範囲の温度で実施するのが最も便利であ
る。

約２７〜２８℃の温度が最も好ましい。本化合物の生産
に適した栄養培地のｐｉは約５．０〜８．５の間とする
ことができ、好ましくは約６．０〜７．５の範囲である
。

小規模の発酵は好ましくは、適当量の栄養培地をフラス
コに入れ、既知の滅菌方法を用い、ストレプトマイセス
ＭＡ−５９２０の胞子または栄養細胞発育物をフラスコ
に接種し、綿栓をし、約２８℃の一定の室温で回転振盪
（とう）機上で、９５〜３００　ｒｐｍ　、約２〜１０
日間発酵させることにより好便に実施される。

大規模で実施する場合は、発酵培地の攪拌機及び通気装
置を備えた適当なタンクで発酵を行うのが好ましい。栄
養培地はタンクの中で調製し、滅菌後ストレプトマイセ
スＭＡ−５９２０の栄養細胞発育物を接種する。栄養培
地を約２４〜３７℃の範囲の温度で攪拌及び／または通
気しながら１〜８日間発酵を継続する。

通気の程度は発酵槽の大きさ、攪拌速度などのような糧
々な要因に依存する。一般により大規模の発酵は約９５
〜５００ｒｐｍの攪拌速度及び約２〜２０立方フイート
／分（ＣＦＭ　）の通気で行われる。

本発明の新規の化合物はストレプトマイセスＭＡ−５９
２０の発酵の末期において主として菌体中に含まれ、以
下に記載する方法によりそれから除かれ分離されること
ができる。

発酵液からの新規化合物の分離及び前記化合物の回収は
、溶媒抽出並びに種々なりロマトグラフ技術及び溶媒系
を使うクロマトグラフ分画の応用によシ実施される。

本化合物は水に殆んど溶解せず、有機溶媒に可溶である
。この性質は発酵液から化合物を回収するために好便に
使用することができる。それ故、一つの回収法において
は、発酵液をほぼ同量の有機溶媒と混合する。如何なる
有機溶媒も使用できるが酢酸エチル、塩化メチレン、ク
ロロホルムなどのような水に混和しない溶媒を使用する
のが好ましい。一般に最大の回収を得るためには数回の
抽出が望ましい。溶媒は本化合物と本化合物の抗寄生虫
活性を欠く他の物質を除去する。溶媒が水に混和しない
場合は、層を分離し、有機溶媒を減圧下で蒸発する。溶
媒が水と混和する場合は包含する水を分離するために水
に混和しない溶媒で抽出することができる。次いでこの
溶媒を減圧下で濃縮する。残留物を好ましくはシリカゲ
ルを含むクロマトグラフカラム上に置く。カラムは所望
の生成物及び幾らかの不純物を保持し、多くの不純物、
特に非極性不純物を通過させる。カラムは塩化メチレン
またはクロロホルムのような適度の極性有機溶媒で洗浄
して更に不純物を除き、次いで塩化メチレンまたはクロ
ロホルム及び好ましくはアセトン、酢酸エチル、メタノ
ール、及びエタノールなどのような有機溶媒との混合物
で洗浄する。溶媒を蒸発し、シリカゲル、酸化アルモニ
ウム、デキストランゲルなどをクロマトグラフ培地とし
て使用し、種々な溶媒及び溶媒の組成物を溶離剤として
使用するカラムクロマトグラフ、薄層クロマトグラフ、
調製用クロマトグラフ、高圧液体クロマトグラフなどを
用いて更にクロマトグラフを行う。

薄層、高圧液体及び調製用クロマトグラフは本化合物の
存在の検出及び単離に使用することができる。前述の技
術及び轟該技術分野で熟練した者が知っている他の技術
の使用によリ、本化合物を含む精製された組成物が得ら
れる。所望の化合物の存在は種々なりロマト分画につい
て選択された寄生虫に対する生物活性または物理化学的
特性を分析することによシ測定される。本化合物の構造
は化合物の種々なスペクトル特性、特にその核磁気共鳴
、質量、紫外部及び赤外部スペクトルを詳細に分析する
ことによシ決定される。

これらの実験データに基づき本化合物は直前で述べた分
析データに基づいて次の構造式を持つと信じられる。

２８−デオキシ−６−ヒドロキシ−２５−メチルミルベ
マイシンＢと指定される化合物■５４４．３４１６　５
４４３４００　　Ｃ８２Ｈ，、Ｏ，Ｍ”１５３．１２８
１　１５３．１２７９　　ＣｔＯＨＩ　？０重要な断片
イオン：Ｃ１７〜２５を規定する１５３．１８１　　：
　Ｍ＋から１４２（Ｃ１〜５）の喪失による４０２　（
Ｂ系列化合物に一般に認められるＣ１〜６の随伴する喪
失が認められず、Ｃ６位の変換が示唆されることに注意
せよ）。１３７　（０２８−デオキシＢに特徴的）、１
５１　（Ｃ２８、Ｃ６エポキシＡに特徴的）のいづれも
認められず、これもまたＣ６位の変換を示唆している。

化合物はミルベマイシンＢ１と同じ実験式を持つがＭＳ
断片化により区別されることから、Ｃ６位に水酸基が保
持されている０２８、Ｃ６エポキシ基が開環した生産物
と推定される。

２８−デオキシ−２５−メチルミルベマイシンＢと指定
される化合物■ １−ＦｉｌｌＳ　　実測値　　計算値　　分子式　　指
定５２８．３４５８　　５２８．３４５１　　Ｃ５２Ｈ
４ａＯａ　　　Ｍ”５１０．３３４４　　５１０．３３
４５　　Ｃ５，Ｈ４，Ｏ，Ｍ−Ｈ２０３８６，２８１２
３８６，２８２１Ｃ□式、０８Ｍ−１４２３７１，２５
６４３７１，２５８６Ｃｌ５Ｈ３５０３Ｍ−１５７２７
８，１５２５２７８，１５１８Ｃ，ＩＩＨ！、０４Ｍ−
２５０１８１，１２０６１８１，１２２９Ｃ，１Ｈ１７
０゜１５３．１２５１　　１５３．１２７９　　Ｃｌ０
Ｈ１？０１３７．０９６０　　１３７．０９６６　　Ｃ
，Ｈ，，０化合物はモノーＴＭＳ誘導体を形成する。重
要な断片イオン：　１３７　（ＴＭＳ　、　２０９　）
　　典型的な０２８−デオキシＢ系列ｃ６〜１２断片：
　１５３．１８１　（ＴＭＳ、　　変化せず）ｃ１７〜
２５　；　２７８　（ＴＭＳ、　３５０　’）　Ｍ−２
５０，Ｍ＋からＣ１３〜２５の喪失；　３８６．３７１
　（ＴＭＳ。

４５８、変化せず）Ｍ＋から、　それぞれＣ１〜５及び
Ｃ１〜６の喪失したＢ系列に特徴的。

ＣＨ３ ５−デメチル−２８−デオキシ−２５−メチル−５−オ
キシミルベマイシンＢと指定される化合物■ ５１２．３１３８　５１２．３１３８　　Ｃ，ＩＨ，４
０６Ｍ”３６０．１９３７　３６０．１９３７　　Ｃ，
、Ｈ，，０，Ｍ−１５２２６２，１１８８２６２，１２
０５ＣｔｓＨｔａＯａ　　Ｍ−２５０１８１，１２２４
１８１，１２２９Ｃ１１Ｈｔ　７０ｔ化合物はジーＴＭ
Ｓ誘導体を形成する。重要な断片イオン：１５３．１８
１（ＴＭＳ、変化せず）ＣＩ７〜２５　：　２６２　（
ＴＭＳ、　４０６　）　典型的Ｍ−２５０（ＣＩ３〜２
５）　：３６０　（ＴＭＳ　。

５０４　）　Ｍ＋からＣ１８〜２５の典型的な喪失。

５−０−デメチル−２８−デオキシ−２５−メチルミル
ベマイシンＢと指定される化合物■ ５１４．３２９４　５１４．３２９４　　Ｃ３１Ｈ４６
０６Ｍ”３８６．２８１５　３８６．２８２１　　Ｃ＊
ｓＨｓａＯ３Ｍ−１２８２６４，１３４７２６４，１３
６２Ｃ１，Ｈ！。Ｏ，Ｍ−２５０化合物はジーＴＭＳ誘
導体を形成する。重要な断片イオン：　１３７　（ＴＭ
Ｓ、　　２０９　）　　Ｃ６〜１２　：　１５３．１８
１　（ＴＭＳ、　　変化せず）０１７〜２５　：　２６
４　（ＴＭＳ、　　４０８　）　Ｍ＋　から２５０（Ｃ
Ｉ３〜２５）の喪失；３８６．３７１（ＴＭＳ、　４５
８　　及び変化せず）それぞれ、Ｍ＋からＣ１〜５及び
Ｃ１〜６の喪失であり、Ｃ５位に水酸基を持つＢ系列で
あることを示している。

囲 ２８−デオキシ−２５−メチル−２８−オキソミルベマ
イシンＢと指定される化合物ＶＨＲ−ＭＳ　　　実測値
　　計算値　　分子式　　指定化合物はモノーＴＭＳ誘
導体を形成する。重要なイオン：１８１．１５３　（Ｔ
ＭＳ、　　変化せず）通常のＣ１７〜２５部分を規定；
　２９２　（ＴＭＳ。

３６４）分子イオンから２５０　（ＣＩ　３〜２５）の
通常の喪失；４００．３８５　（ＴＭＳ　、　　４７２
及び変化せず）０５位にメトキシル置換基を持つＢ系列
を示す。化合物は２９０　ｎｍに変ったＵＶ最大値を持
ち、共役ジエン−アルデヒド構造を示している。

ＣＨ３ ５−０−デメチル−２８−デオキシ−２５−エチルミル
ベマイシンＢと指定される化合物■ 化合物はジーＴＭＳ誘導体を形成し、ミルベマイシンＢ
１より一つ少ない酸素原子を持つ。重要な断片イオン：
　１３７　（ＴＭＳ、　　２０９　）　　０６〜１２を
規定し、Ｂ系列ミルベマイシンに特徴的（参考、ミルベ
マイシンＢ１においては１５１、ＴＭＳ、　　２２３　
）　：　１６７．１９５　（ＴＭＳ。

変化せず）Ｃ１７〜２５領域におけるＣＨ！の付加を規
定（ミルベマイシンＢ、の１５３．１８１よｐ　１４　
ａｍｕ増加）　　；　２６４　（ＴＭＳ、　　４０８　
）Ｍ＋　より２６４　（ＣＩ　３〜２５）の喪失；４０
０．３８５　（ＴＭＳ、　　４７２及び変化せず）Ｃ１
〜５（Ｍ−１２８）　　及び０１〜６　（Ｍ−１４３）
の喪失で９５．０５位にはＢ１におけるメトキシル基で
はなく水酸基を持つ。

ＯＨ 本発明の新規の化合物は、人間及び動物の健康、及び農
業において駆虫剤、殺虫剤及び殺ダニ剤として重要な抗
寄生虫活性を持つ。

一般に寄生虫症として記述される疾患または疾患群は動
物宿主に寄生虫が感染することによシ起る。寄生虫症は
ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、イヌ、ネコ及び家禽
のような家畜における優勢且つ重大な経済的問題である
。

寄生虫症の中で、線虫として記述される虫の群は種々な
種類の動物に対して広範囲且つしばしば重大な感染を起
す。上に挙げた動物に感染する線虫の最も普通の属はへ
モンクス（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ　）、トリコストロン
ギルス（Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　）、オス
テルタギア（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａ　）、ネマトジルス
（Ｎｅｍａｔｏｄｉｒｕｓ）、クーペリア（Ｃｏｏｐｅ
ｒｉａ　）　、アスカリス（Ａｓｃａｒｊ＆　）　、ブ
ノストマム（Ｂｕｎｏｓｔｏｍｕｍ　）、工−ソファゴ
ストマム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏａｔｏｍｕｍ　）　、チ
ャペルチア（Ｃｈａｂｅｒｔｉａ　）、　トリクリス（
Ｔｒｉｅｈｕｒｉｓ　）　、ストロンギルス（Ｓｔｒｏ
ｎｇｙｌｕｓ　）、トリコネマ（Ｔｒｉｃｈｏｎｅｍａ
　）、ジクチオカウルス（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓ　
）、カピラリア（Ｃｏｐｉｌｌａｒｉａ　）ヘテラキス
（Ｈｅｔｅｒａｋｉｓ　）、　トキソカラ（Ｔｏｘｏｃ
ａｒａ　）　、アスカリジア（Ａｓｃａｒｉｄｉａ　）
、オキシラリス（Ｑｘｙｕｒｉｓ　）　、アンシロスト
マ（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ　）、　ランシナリア（Ｕ
ｎｃｉｎａｒｉａ）、トキサスカリス（Ｔｏｘａｓｃａ
ｒｉｓ　）、及びバラスカリス（Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ
　）である。これらのうちネマトジルス、クーペリア及
びエーソファゴストマムのような属は主に消化管を冒し
、一方へモンクス及びオステルタギアのような属は胃の
中でよシ優勢であり、またジクチオカウルスのような属
は肺の中に見出される。更に他の寄生虫は心臓及び血管
、皮下及びリンパ組織等の体の他の組織及び器官に存在
することができる。寄生虫症として知られる寄生虫感染
は貧血、栄養不良、衰弱、体重減少、消化管壁並びに他
の組織及び器官に対する重大な損傷に導かれ、若し治療
しないで置くと感染宿主の死に至ることもあシ得る。本
発明の化合物は予期しなかったことであるが、これらの
寄生虫に高い活性を示し、更にまたイヌにおけるジロフ
イラリア（Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ　）、唱歯類におけ
るネマトスピロイデス（Ｎｅｍａｔ。

５ｐｉｒｏｉｄｅｓ　）、　シフアジア（５ｙｐｈａｅ
ｉａ　）　、アスピクルリス（Ａｓｐｉｃｕｌｕｒｉｓ
　）　、ダニ、（ｔｉｃｋｓ）、ダニ（ｍ１ｔｅ−８）
、シラミ、ノミ、アオバエ、ヒツジにおけるルシリア・
ニス・ピー（ＬｕｃｉｌｉａＩＩｐ、）、咬癖昆虫及び
ウシにおけるヒポデルマ・ニス・ピー（Ｈｙｐｏｄｅｒ
ｍａ　ｓｐ、　）、ウマにおけるガストロフィルス（Ｇ
ａ５ｔｒｏｐｈｉｌｕａ　）、及び１歯類におけるクテ
レブラ・ニス・ピー（Ｃｕｔｓｒｅｂｒａ　ｓｐ　）、
のような移動性双翅類幼虫のような動物及び鳥類の節足
動物外部寄生虫に対しても活性である。

本化合物はまた人間に感染する寄生虫に対しても有用で
ある。人間の消化管の寄生虫の最も一般的な属はアンシ
ロストマ、ネカトール（Ｎｅｃａｔｏｒ　）　、アスカ
リス、ストロンギルスデス（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅ
ｓ　）　、トリチネラ　（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ　）
　、カピラリア（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ　）、トリクリ
ス及びエンテロビウス（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ　）であ
る。消化管以外の血液または他の組織及び器官に見出さ
れる他の医学的に重要な寄生虫の属はブケレリア（Ｗｕ
ｃｈｅｒｅｒｉａ　）、プルギア（Ｂｒｕｇｉａ　）、
　オンコセルカ（０ｎｃｈｏｃｅｒｃａ）、及びロア（
Ｌｏａ　）、ドラカンクルス（Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ
　）のような糸状虫及び消化管内寄生虫ストロンギルス
デス及びトリチネラの消化管外段階である。化合物はま
た人間に寄生する節足動物、咬癖昆虫及び人間を悩ませ
る双翅類害虫に対しても有用である。

化合物はまたゴキブリ、ブラテラ・ニス・ピー（Ｂｌａ
ｔｅｌｌａ　ａｐ、）　、イガ、チネオラ・ニスφピー
（Ｔｉｎｅｏｌａ　ｓｐ、　　）、マル力ッフシムシ、
アツタゲナス・ニス・ピー（Ａｔｔａｇｅｎｕｓ　ｓｐ
、）、及び、イエバエ、ムスカ・ドメスチ力（Ｍｕ　ｓ
　ｃ　ａｄｏｍｅｓｔｉｃａ　）　　のような家庭害虫
に対しても活性がある。

化合物はまたトリポリウム・ニス・ピー（Ｔｒｉｂｏｌ
ｉｕｍ　ｓｐ、　）、テネブリオ・ニスΦピ”　（Ｔｅ
ｎａｂｒｉｏ　ｓｐ、　）、　のような貯蔵穀物の昆虫
害虫及びスパイダーマイラス（Ｓｐｉｄｅｒｍｉｔｅａ
　）　、（テトラニクス・ニス・ピー（Ｔｅｔｒａｎｙ
ｃｈｕｓ　ｓｐ、　　）　）、　アブラムシ、（アシル
チオシフオン（Ａｃｙｒｔｈｉｏｓｉｐｈｏｎ　）　）
、バッタのような移動性直翅類及び植物組織に住む昆虫
の幼生期に対しても有用である。化合物は農業において
重要であシ得るメロイドジン・ニス・ピー・ピー（Ｍｅ
ｌｏｉｄｏｇｙｎｅ　ｓｐｐ、　　）のような土壌線虫
及び漬物寄生虫の抑制のための殺線虫剤として有用であ
る。

これらの化合物は哺乳動物の駆虫剤として使用する場合
、カプセル、丸薬または錠剤のような単位投与形体、ま
たは液体飲薬として経口的に投与することができる。飲
薬は、通常ベントナイトのような懸濁剤及び湿潤剤など
の賦形剤と共に水中での活性成分の溶液、懸濁液または
分散液である。一般に飲薬は消泡剤を含むこともできる
。飲薬の処方は一般に、ｏ、ｏｏｉ〜０．５重量係の活
性化合物を含む。

好ましい飲薬の処方は０．０１〜０．１重量％を含むこ
とができる。カプセル及び丸薬は殿粉、タルク、ステア
リン酸マグネシウムまたはリン酸二カルシウムのような
担体賦形剤と混合した活性化合物から成る。

本化合物を乾燥した固形の単位投与形体で投与すること
が望ましい時は、活性化合物の所望の量を含むカプセル
、丸薬または錠剤が通常使用される。これらの投与形態
は活性化合物を適当に微粉砕した殿粉、乳糖、タルク、
ステアリン酸マグネシウム、植物ゴムなどのような希釈
剤、充填剤、崩壊剤及び／または結合剤と共に緊密且つ
均一に混合して製造される。そのような単位投与形体は
治療される宿主動物の種類、感染の重篤度及び種類並び
に宿主の体重のような要因によりその全重量及び抗寄生
虫剤の含有量の点で広範囲に変動させることができる。

活性化合物を動物飼料を通して投与する時は飼料中に緊
密に分散するかまたはトップドレッシングとして使用す
るか、またはペレットの形態とし、それを最終飼料に添
加するかまたは随時側に給餌することができる。代りに
本発明の抗寄生虫化合物は非経口的、例えば前胃内、筋
肉内、気管内または皮化注射により動物に投与すること
ができ、この場合活性成分は液体担体賦形剤に溶解する
かまたは分散する。非経口投与のためには、活性物質は
受容し得る賦形剤、好ましくは落花生油、綿実油等の種
々な植物油と適量に混合される。

ソルケターノ呟グリセリン、ホルマールを使用する有機
調製物のような他の非経口用賦形剤及び水性の非経口用
処方もまた使用される。

活性化合物またはその複数化合物は投与のだめの非経口
用処方に溶解し、または懸濁され、そのような処方は一
般に、活性化合物の０．００５〜５重量％を含む。

本発明の抗寄生虫剤は寄生虫症の治療及び／または予防
にその主な用途を見出すが、それらはまた他の寄生虫、
例えば家畜及び家禽におけるダニ（ｔｉｃｋｓ　）　、
ダニ（ｍ１ｔｅｓ　）、シラミ、ノミ及び他の咬癖昆虫
のような節足動物寄生虫によシ起る疾患の予防及び治療
に有用である。それらはまた、人間を含む他の動物に起
る寄生虫疾患の治療に有効である。

もちろん、最良の結果を得るために使用される適量は、
使用する個別の化合物、治療される動物の種類及び寄生
虫感染または侵入のタイプ及び重篤度に依存する。一般
に、我々の新規な化合物について動物体重胸当シ約０．
００１〜１０■を経口投与で与えると良い結果が得られ
、その場合全投与量は１〜５日の：うな比較的短い期間
内に一度にまたは分割投与で与えられる。本発明の好ま
しい化合物について体重紛当り約０．０２５〜０．５Ｗ
ｑを単一投与で投与することにより、動物においてその
ような寄生虫の優れた抑制が得られる。再感染と争わせ
るために必要に応じて反復治療がなされ、それは寄生虫
の種類及び使用する農業技術に依存する。これらの物質
を動物に投与する技術は、獣医学分野で熟練した者にと
って公知である。

ここで記述する化合物を動物の飼料の成分として、また
は飲水に溶解または懸濁して投与する場合、活性化合物
またはその複数化合物は不活性の担体または希釈剤に緊
密に分散されている組成物が提供される。不活性担体と
は抗寄生虫剤と反応せず、動物に安全に投与することが
できるそれを意味する。好ましくは飼料投与のための担
体は動物食料の成分であるかまたはなり得る物である。

適当な組成物は活性成分が比較的多量存在し、動物に対
する直接の給餌または直接もしくは中間の希釈もしくは
混合工程の後に飼料に添加するのに適した飼料プレミッ
クスまたは添加剤を含む。そのような組成物に適した典
型的な担体または希釈剤は、例えばデイステイラース・
ドライド−グレーンズ（ｄｉｓｔｉｔｉｅｒ’ｓ　ｄｒ
ｉｅｄ　ｇｒａｉｎｓ　）、コーンミール、シトラスミ
ール（ｃｉｔｒｕｓ　ｍｅａｌ　）、　発酵残渣、粉砕
カキ殻、小麦廃物、モラセス・ソリュブルス（ｍｏｌａ
ｓｓｅｓ　５ｏｌｕｂｌｅｓ　）　、コーン・コブ・ミ
ール（ｃｏｒｎ　ｃｏｂ　ｍｅａｌ　）、　エディプル
番ビーン・ミル・フィード（ｅｄｉｂｌｅ　ｂｅａｎ　
ｍ１ｌｌ　ｆｅｅｄ　）、ひき割り大豆、粉砕石灰石な
どを含む。活性化合物は粉砕、攪拌、混合のような方法
で担体中に緊密に分散される。活性化合物の約ｏ、ｏｏ
ｓ〜２．０重量％を含む組成物は飼料プレミックスとし
て特に適している。動物に直接給餌される飼料添加剤は
活性化合物の約０．０００２〜０．３重量％を含む。

そのような添加剤は寄生虫疾患の治療及び抑制のために
望まれる活性化合物の濃度の最終飼料を与える量を動物
飼料に添加する。活性化合物の所望の濃度は前述の要因
並びに使用する個別化合物によシ変動するが本発明の化
合物は通常、望ましい抗寄生虫の結果を得るために０．
００００１〜０．００２％の濃度で飼料に添加される。

本発明の化合物を使用する場合、個々の化合物を単離し
精製してその形で使用することができる。代りに個々の
化合物の混合物を使用することができる。発酵液の精製
により得られる種々の化合物を完全に分離する必要はな
い。一般に二つまたはそれ以上の化合物を含む混合物が
得られるが、無関係な化合物はそれから除かれておシ、
そのような混合物はここで記述するように寄生虫疾患の
予防及び治療に使用することができる。そのような混合
物は一般に、等しくない比率の化合物を含むが、すべて
の化合物は実質的な活性を持ち、混合物の抗寄生虫活性
は正確に測定することができる。

その上、本化合物を動物飼料に添加する場合、発酵液か
らの乾燥菌体を利用することが可能である。菌体は優勢
な活性を含み菌体の活性の水準は測定できるから、それ
を直接動物飼料に添加することができる。

本発明の化合物は、多くの内部寄生虫に対して低投与水
準で多くの動物に対して広範囲の活性スペクトルを持つ
。動物体重縁当り約２、５１１ｑの水準で、本化合物の
濃縮した混合物は、ヒツジにおけるヘモンクス・コント
ルタス（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ　ｃｏｎｔｏｒｔｕｓ　
）、　オステルタギア・サーカムシンクタ（Ｏｓｔｅｒ
ｔａｇｉａ　ｃｉｒｃｕｍｅｉｎｃｔａ）、トリコスト
ロンギルス・アグゼー（Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌ
ｕｓ　ａｘｅｉ　）、　トリコストロンギルス・コルプ
リホルミス（Ｔｒｉｃｈｏｇｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　ｃｏ
ｌｕｂｒｉｆｏｒｍｉｓ　）　、クーぺり７・ニス・ピ
ー・ピー及びエーソファゴストマム・コロンビアヌム（
Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍ　ｃｏｌｕｍｂｉａｎ
ｕｍ　）に対して十分な活性を持つ。同様にウシのオス
テルタギア・オステルターゲ（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａ　
ｏｓｔｅｒｔａｇｅ　）、トリコストロンギルス・アグ
ゼー、トリコストロンギルスーフルプリホルミス、エー
ソファゴスト？ムーラジアッム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓ
ｔｏｍｕｍｒａｄｉａｔｕｍ　）及びジクチオ力つルス
・ビピパルス（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓ　ｖｉｖｉｐ
ａｒｕｓ　）に対して本化合物の０．０４３η／Ｋｆの
低い投与量で十分に活性である。その上、ウマバエの幼
虫（ガストロフィルス・インテスチナリス（Ｇａ５ｔｒ
ｏｐｈｉｌｉａｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ　）及びガス
トロフィルス・ヘモロイダリス（Ｇａ５ｔｒｏｐｈｉｌ
ｉｓ　ｈａｅｍｏｒｒｈｏｉｄａｌｉａ　）、大きい及
び小さいストロンギルス及びオキシラリスに感染したウ
マは、本化合物の混合濃縮物の１ＯｒＩＮＩ／Ｋｇ（約
１１ｉ量チの活性化合物ンで治療に成功し、心臓糸状虫
（ジロフィラリアのインミチス（Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉ
ａ　１ｍｍ１ｔｉｓ　）のミクロフィラリ７段階に感染
したイヌは、本化合物の混合濃縮物の１０■／に４（活
性化合物の約１°重量％）の単一経口投与で治療に成功
した。マウスのような１歯類のシフアジア、ネマトスピ
ロイデス及びアスピクルリスの感染は本化合物または菌
体の抽出で得られる濃縮物の経口投与によシ治療に成功
した。

本発明の化合物はまた、発育または貯蔵中の農作物に被
害を与える農業害虫と争わせるのに有用である。化合物
は噴霧剤、粉剤、エマルジョンなどのような公知の技術
を用いて発育または貯蔵中の農作物に対してそのような
農業害虫から保護するために適用される。

本発明化合物の抗寄生虫活性は、飼料、個々の化合物の
試料、化合物の混合物、濃縮抽出物などを通して予めネ
マトスピロイデス・デウビウスを３日前に感染させたマ
ウスに経口投与することによシ測定することができる。

医薬投与開始・後、１１．１２及び１３日目にマウスの
ふんについてネマトスピロイデス・デウとウスの卵を試
験し、次の日マウスを犠牲に供し小腸の隣接部に存在す
る虫の数を測定する。感染し医薬無投与の対照区に比較
して顕著な卵及び虫の数が減少する場合活性化合物が認
められる。

次の実施例は本発明がよシ十分に理解され得るために提
供される。そのような実施例は本発明を制限するものと
解釈すべきではない。

実施例１ 生産培養物の単離 生産培養ＭＡ−５９２０はニス・アベルミチリスＭＡ−
４９９０及びニス・ヒグロスコピクスＭＡ−４８３０の
プロトプラスト融合によシ得られた単離法である。

ＭＡ−４９９０及びＭＡ−４８３０の凍結乾燥物を、５
４１１ｔの培地１を含む２５０１１ｔじゃま板付きエル
レンマイヤ−（Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ　）フラスコに無
菌的に移植し、２８℃、２２０ｒｐｍで３日間培養した
。得られた発育物の０．５　ｍｌを培地２の寒天斜面に
移植した。２８℃で１０日間培養後培地３の５１Ｒ１の
ＭＡ−４９９０の斜面に無菌的に添加し、表面発育物を
液体中にかき落とした。フィッシャー・ボルテックスー
ジェニー（Ｆｉｓｈｅｒ　Ｖｏｒｔｅｘ　−Ｇｅｎ１ｅ
　）　の中程度の速度で３分間攪拌後懸濁液の２．５−
を５０ｍ１の培地３ｋを含む２５０ｔ１１ｔエルレンマ
イヤーフラスコに移植した。ＭＡ−４８３０の種菌を同
様な方法で調製し、培地３または３Ｂの５０７を含む２
５０−エルレンマイヤーフラスコに移植した。

２８℃、２２０ｒｐｍで２日間培養後、各フラスコの内
容物を１５．００Ｏｒｐｍ、　４℃で１５分間の遠心分
離によシ回収し、培地４で２回洗浄した。各フラスコか
らの洗浄細胞をｌ〇−の培地４に再懇濁し、ボルテツク
スージエニー中で中程度の速度で３分間混合した。

各々の５ＴＩＩｔの試料に５艷の卵白リゾチーム懸濁液
（シグマ（ｓｉｇｍａ　）、培地４中２　ｍｙ／ｍ！、
０．２μフイルターを通して無菌濾過）を添加し転置に
よシ混合した。各混合物を周辺温度で６０分間保持しプ
ロトプラストへの変換が完全であるかを検鏡により調べ
た。

懸濁液をベックマン（Ｂｅｃｌａｎａｎ　）　ＴＪ−６
臨床用遠心分離機で室温３０００ｒｐｍ　５分間遠心分
離し、プロトプラストのペレットを培地４０５ｍで一回
洗浄した。各々の洗浄したペレットを５ｄの培地４に再
懸濁し、ＭＡ−４９９０及びＭＡ−４８３０のプロトプ
ラスト懸濁液のそれぞれ１−を混合し、３０００　ｒｐ
ｍ　　１０分間遠心分離することにより再びペレット化
した。

各々のペレットを０．２艷の培地４に懸濁し、培地４中
４０％ポリエチレングリコール６０００（シグマＷ／Ｖ
　）の１．８−を添加し、転置によシ混合した。室温で
６０秒後、混合物を培地４中で５〜５０倍に希釈し、そ
の０．１−を培地５の寒天平板に塗シつけた。２８℃で
１４日間培養後単離株を無作為に培地２の寒天平板に移
植し、２８℃で１０日間培養した。得られ九単離株の一
つをＭＡ−５９２０と指定し、それはＭＡ−４８３０に
類似するがこの単離様はよシ豊富に胞子を形成しよシ大
きな黄色色素生産があるため、更に研究のために選別を
行った。

ＭＡ−５９２０の一つのコロニーの一部分を５４艷の培
地１を含むじゃま板のついた２５０−エルレンマイヤー
フラスコに移植し、２２０ｒｐｍ、２８℃で３日間振盪
した。次いでその１−を４４ｄの培地６まだは７を含む
じゃま板の無い２５０Ｍ！エルレンマイヤーフラスコに
移植した。フラスコを２２Ｏｒｐｍ　、　２８℃テ振盪
し、４日目及び８日目に各フラスコから１０ｓｄを採取
し、ベックマンＴＪ−６臨床用遠心分離機で３００Ｏｒ
ｐｍ　、１０分間遠心分離した。各ペレットに１０−の
メタノールを添加し、チューブを混合し、室温で２時間
後、抽出液を、３０００ｒｐｍ　、　　１０分間遠心分
離することにより透明にした。抽出液はＨＰＬＣで分析
した。

実施例２ ＭＡ−５９２０の凍結乾燥物を５４−の培地１を含ｔｒ
２５０−のじやま板のついたエルレンマイヤーフラスコ
に移植した。フラスコヲ２２０ｒｐｍ　、　２８℃、振
幅２インチの回転振盪機で２日間振盪した。得られる発
育物の２Ｗｔを４４ｒＲｔの培地８を含なじゃま板の無
い２５〇−エルレンマイヤーフラスコに移植した。２８
°、２２０ｒｐｍで５日間培養後、１０ｍを採取し、細
胞を３００Ｏｒｐｍで遠心分離することによりペレット
化しメタノールで抽出してＨＰＬＣで分析した。

培地１ デキストロース　　　　　　　　　　１．Ｏｔデキスト
リン（フィッシャー）　　　　ｔｏ、ｏｒ牛肉エキス（
ディフコ）３．Ｏｆ 酵母自己消化物（アルブミン　　　　５．０　ｒｐｍ、
イースト　プロダクツ） ＮＺアミン、タイプＥ（シｍ　　　　　５．Ｏｆフィー
ルド） Ｍｌｌ　ＳＯ４，７Ｈ２ＯＯ，０５ｆ リン酸緩衝液　　　　　　　　　　　２　ゴＣａＣＯ３
０，５ｔ ｄＨ２０１０００ａｔ ｐ■７．０−７．２ リン酸緩衝液：　　ＫＨ，Ｐｏ、　　　　９１．０ｆＮ
ａｌＨＰ０．　　　　９５．Ｏｆ ｄＨ，ｏ　　　　　　１０００　　ｔｔｐ■７．０ 培地２ 酵母エキス（ディフコ）　　　　　　４．Ｏｆ麦芽エキ
ス（ディフコ）　　　　　　１０．Ｏｔデキストロース
　　　　　　　　　４．０２ｄＨ２０１００〇− 寒天　　　　　　　　　　　　　２０　　ｆｐｉｔ　７
．２ 培地３ トリブチイック・ソイ・プロ　　　３０．０　　？ス（
ディフコ） ｄＨｚＯ１０００ｔｄ ｐ）１７．３ 培地３Ａ グリシン０．８　％を滅菌後添加した培地３（グリシン
は０．２μフイルターで除菌濾過後、２０％溶液、ｗ／
′ｖｄＨ２０とシテ添加）培地３Ｂ グリシン０．２％を滅菌後添加した培地３（グリシンは
０．２μフイルターで除菌濾過後、２０チ溶液Ｗ／Ｖｄ
Ｈ２Ｏとして添加ン培地４ 基礎培地 蔗糖　　　　　　　　　　　　　　１０３ｔＫ、５Ｏ４
０２５？ トレース−エレメント・ミツ　　　２−リスＡ 崎α２・６Ｈ２０２，０３ｒ ｄＨ，ｏ　　　　　　　　　　　７００−に調整滅菌後
添加、基礎培地７００ｒＩｔ当り：Ｃａα２溶液、１０
０ｍ　（３６，８ｆ／１０００ｄ　ｄＨ，Ｏ）ＫＨ，Ｐ
Ｏ，溶液、１００ｍ　（０，５Ｆ／１０００ｄ　ｄＨ！
０　）Ｔｅｓ　　溶液、　１００ｍ　　（０，：ｌ　　
）、リスＨα＋０．１ｆＥＤＴＡ　＋　０．１４５’　
Ｎａα／１０００ｍ　ｄＨ，Ｏ、ｐＨｓ、ｏに調節） 培地５ 基礎培地 蔗糖　　　　　　　　　　　　　１０３９ＫａＳＯ４０
，２５？ グルコース　　　　　　　　　　　１０　９Ｌ−アスパ
ラギン　　　　　　　　　１．８ｔカザミノ酸（ディフ
コ）　　　　　　　ｏ、１ｙ吟α之・６Ｈ，０１（１１
２ｔ トレース・エレメント・ミツ　　　２−リスＡ ｄＨ，０７ｏｏ−＋：ｊ％［ 寒天　　　　　　　　　　　　　　２２．Ｏｆ滅菌後添
加、基礎培地７００−当り： Ｃａα２溶液、１００ｍ　（２９，５ｆ／１０００ｄｄ
）ＩｆｆｉＯ）ＫＨ，ＰＯ４溶液、ＬｏｏＮｔ（０，５
Ｆ／１０００ｍｇｄ１００Ｏ’ｒｅｓ溶液、１００ｗｄ
（０，３ｔ）ｌ）７ｔ　Ｈｃｔ＋０．１ＥＤＴＡ　＋　
０．１４　ｔ　Ｎａ　Ｃｌ／″１０００ゴｄＨ２０，ｐ
Ｈ８，０に 調節） トレース・エレメント・ミックス八組成：Ｆａ　（ＳＯ
４）ｓ　−７Ｈ１０２５０”ｆＭｎα、、４Ｈ２０５０
０７９ Ｃｕαｔ、２ＨｚＯ２５”９ ０ａ（４２，２Ｈｚ０　　　　　　　　　　　　　　１
０００　　　ｍｑＨ３Ｂ０３　　　　　　　　　　　　
　　　　　５０　　　■（ＮＨ４）６Ｍｏ７０２４．４
Ｈ２０２０’ｆＺｎＳＯ＊−７Ｈ２０１００”Ｆ Ｃｏ（ＮＯｘ）ｚ、６Ｈ２０２０Ｗ Ｏ，ＩＮＨα　　　　　　　　　　　　　　　　１００
０　　　ｔｐｔｔ培地６ デキストリン（フィッシャー）４０９ デイステイラース・ンリュブ　　　７ｔルス（グレイン
、プロセシ ング、コーポレーション） 酵母エキス（オキソイド）５９ Ｃｏα、、６Ｈ，０５０Ｆ’１ｆ ｄＨ，０１０００ｍ／ ９）ｌ　７．３ 培地７ デキストロース　　　　　　　　　４５　　Ｐペプトン
化ミルク（シエフイ　　　２４　　ｆ−ルド） アルゾミンｐＨ（イースト、プ　　　凹　ｔロダクッ、
インニーボレー テッド） ポリグリコール２０００　（ダウ）２ｓ−ｄＨ！０　　
　　　　　　　　　　　１０００　　ｍＡｐＨ７，０ 培地８ デキストロース　　　　　　　　　７５　　ｆペプトン
化ミルク（シエフィ　　　１７．５　９−ルド） アルゾミンｐＨ（イースト、プ　　　２．７５９０ダク
ツ、インニーボレー テッド） ｄＨ！０１０００　　ｍｔ ｐＨ７，２ 培地９ デキストロース　　　　　　　　　　２．０　　％酵母
エキス（ディフコ）２．０ カザミノ酸（ディフコ）２．０ ＫＮＯ３０，２ Ｍｇ５ｏ４．７ＨｚＯＯ，０５ Ｎａα　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５Ｆｎ
ＳＯ４、７Ｈ２００，００２５ Ｃａαｔ　、　２Ｈ！　ＯＯ，００２ ＺｎＳＯ４、７Ｈ２００，００１ ＭｎＳＯ４、Ｈ２Ｏ０，０００５ ｐｔ１７．０　（ＮａＯＨ） 培地１０ デキストロース　　　　　　　　　ＯＪ　　チ可溶性殿
粉（フィッシャー）１．０ 牛肉エキス（ディフコ）０３ アルブミンｐｉ　（酵母自己消化　　　０．５物） ＮＺアミン、タイプＥ（シエ　　　０．５フイールド） ＭｇＳＯい７Ｈ，ＯＯ，００５ Ｋ）１．ＰＯ４０，０１８２ ＮａｌＨＰＯ４０，０１９０ ＣａＣＯ８”　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
ｐＨ７，０〜７．２　　（ＮａＯＨ） 膏ｐｆｆ調節後添加 培地１１ デキストロース　　　　　　　　　　０．１　　％可溶
性殿粉（フィッシャー）１．０ 牛肉エキス（ディフコ）０３ 酵母自己消化物（アルブミン　　　０５ｐ■、イースト
、プロダクツ） ＮＺ・アミン、タイプＥ（シ　　　ａＳエフイールド） Ａｌｓｏ、　、　７Ｈ２００，００５ Ｔａ（！　Ｐｏ　４　　　　　　　　　　　　　　０．
０１８２Ｎａ、ＨＰｏ、　　　　　　　　　　　　　　
０．０１９０ＣａＣＯ，”　　　　　　　　　　　　　
　０．０５ｐＨ７，０〜７．２　（ＮａＯＨ） 簀ｐＨ調節後添加 実施例３ 培地調整 培地９は（培地組成：培地９）で表示した成分によシ調
整した。ｐｎ調整後、５０−の培地を各々３本の２５０
−のじゃま板のついたフラスコに分注した。フラスコは
綿栓をし、１２１℃、１６　ｐｓｉで２０分間高圧滅菌
した。

滅菌後、フラスコをオートクレーブから出し、室温まで
冷却した。

培地１０は（培地組成：培地１０）で表示した成分によ
り調整した。ｐｉｔ調節後、５０ｄの培地を各々２５０
−のじゃま板のついていないフラスコまたは３本のじゃ
ま板のついたフラスコに分注した。フラスコに綿栓をし
、１２１℃、１６　ｐｓｉで２０分間高圧滅菌した。

滅菌後、フラスコをオートクレーブから出し、室温まで
冷却した。フラスコは使用するまで室温に保存した。

培地１１は（培地組成：培地１１）で表示した成分によ
シ調整した。ｐＨ調節及び、炭酸カルシウム添加後、５
０−のよく懸濁した培地を各２５０コの３本のじゃま板
のついた振盪フラスコに分注した。フラスコは綿栓をし
、前に記載したように高圧滅菌をした。滅菌後フラスコ
を室温まで冷却した。

培養の形成 １、培養の保存 ＭＡ−４９９０を凍結乾燥状態で保存した。系列１Ｃ〃
凍結乾燥チユーブをこの実験に使用した。ＭＡ−５９２
０は酵母エキス０．４％、麦芽エキス１．０％、デキス
トロース０．４％、寒天２．０％、ｐＨ７，Ｏの培地の
斜面培養として保存した。培養の斜面は斜面に栄養細胞
を接種し斜面が十分に胞子が着生するまで２８℃で培養
することによシ調整し、使用するまで冷蔵庫で保存した
。

この培養の凍結乾燥チューブを無菌的に開放し、内容物
を培地９のフラスコに接種した。

フラスコは２８℃の恒温室におかれた振幅２インチ、２
２０ｒｐｍの往復振盪機にュー・ブランズウィック・サ
イエンティフィック（Ｎｅｗ　Ｂｒｕｎｓｖｒｉｃｋ　
５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　）、モデルＧ５３）の上に乗せ
た。

培地９中で２日間培養後、この一種菌〃培養の２−を各
−生産〃フラスコ（培地１０）に移植した。生産フラス
コを２８℃恒温室中の２２Ｏｒｐｍ振盪機の上に乗せた
。二つのじゃま板のついたフラスコ及び二つのじゃま板
のついていないフラスコを４．６及び８日目に回収し、
フラスコについてこの章の後で述べる方法を用いてミル
ベマイシン生産を分析した。

３、ＭＡ−５９２０ この培養物を含む斜面の一部を取り、無菌的に培地１１
のフラスコへ移植した。前述の培養と同様に、フラスコ
を２８℃恒温室中の、２２０ｒｐｍ往復振盪機にュー・
ブランズウィック・サイエンティフィック、モデルＧ５
３）の上に乗せた。

培地１１中で２日間培養後、この東種菌Ｉ培養の２Ｗｔ
を各気生産〃フラスコ（培地１０）に移植した。生産フ
ラスコを２８℃恒温室中の２２Ｏｒｐｍ振盪機の上に乗
せた。二つのじゃま板のついたフラスコ及び二つのじゃ
ま板のないフラスコを４．６及び８日目に回収し、フラ
スコについてこの章の後で述べる方法を用いてミルベマ
イシン生産を分析した。

抽出方法 次の方法によｐ　ＨＰＬＣ分析用の発酵液試料を調製し
た。

１、二つの繰シ返しの振盪フラスコを合併した（例えば
、２日培養、じゃま板つきフラスコ、ＭＡ−４９９０）
。

Ｚ　発酵液の６０−をツルパル（５ｏｒｖａｌｌ　）Ｒ
Ｃ−５遠心分離機中で９００Ｏｒｐｍ、　　２℃で、２
０分間遠心分離した。

３、　上澄液を傾瀉し、０．４５μミリポア・フィルタ
ーを通して濾過し、ＨＰＬＣ分析に充当した。

４、　細胞ペレットを３０ｄアセトンに再懸濁し激しく
混合した。この工程で２倍の濃縮液が得られた。

５、抽出した細胞を非冷凍ツルパル遠心分離機；モデル
ＧＬＣ−４中で３００Ｏｒｐｍで２０分間再遠心分離し
た。

６、　アセトン分画を傾瀉し、ＨＰＬＣ分析に充当した
。

実施例４ この実験はより多くの物質を生産するために計画された
スケールアップ試験であった。

この発酵の条件は実施例３の振盪フラスコのデータから
外挿された。

培地組成 実施例３と同様であるが培地１０及び１１のみを使用し
た。

培地調製 培地１０を二つの部分に分けて調製した。

セレロースを１．５ｔの蒸留水に溶解し、三つの２ｔフ
ラスコに分注し、綿栓をし、１２１℃、１６　ｐｓｉで
３０分間高圧滅菌した。滅菌しだせレロースは接種時無
菌的に発酵槽に添加した。ペプトン化したミルク及びア
ルブミンｐ■を８ｔの蒸留水に懸濁し、ｐｎを７．０に
調節し、１４Ｌの攪拌しているジャー・ミクロファーム
（Ｍｔｃｒｏｆｅｒｍ　）　　発酵槽（二ニー・ブラン
ズウィック・サイエンティフィック・モデルＭＦ−１１
４）に添加し、１２１℃、１６　ｐｓｉ　で９０分間高
圧滅菌した。

培地１１を前に示したように調製した。更に３００コの
培地１１を各２ｔの三枚のじゃま板のあるフラスコに分
注した。２ｔのフラスコを綿栓をし、綿を金属箔でおお
い次いで１２１℃、１６　ｐｓｉ　で２０分間殺菌した
。

培養の形成 ＭＡ−５９２０の斜面の一部を取シ、無菌的に培地１１
の入った２５０−１三枚のじゃま板のフラスコに移植し
た。このフラスコを実施例１で前述したように培養した
。２日間培養後、この種菌培養の１５１−２本の２ｔ、
三枚のじゃま板のある種菌フラスコに入った培地１１に
移植した。これらのフラスコを２８℃恒温室に置いた振
幅２インチ、２２０ｒｐｍの往復振盪機（二ニー・ブラ
ンズウィック・サイエンティフィック、モデルＧ５３）
の上で２４時間培養した。この培養に続いてフラスコの
全量を培地１０を含む１４を発酵槽に無菌的に移植した
。接種に先立ちまた発酵中、発酵槽の条件は４００ｒｐ
ｍ、通気量０．３　ｖｖｍ、２５℃に定めた。泡立ちを
抑制するために、必要に応じてポリグリコールＰ　−２
０００を添加したが、添加の総量は０．０００１％（ｖ
／ｖ）を超えなかった。

試料を１２時間間隔で発酵槽から抜き取シ、ｐ■、沈降
細胞容量、アンモニア、リン酸塩、グルコース及びミル
ベマイシン生産を試験した。発酵は３２９時間継続し、
その後回収して単離に廻した。

ミルベマイシン生産の分析は、前の実施例で述べた方法
によシ調整した試料につきＨＰＬＣによシ行ったが、例
外として細胞ペレットのみを分析した。何となれば第１
の実験において細胞ペレット中に大部分の活性が認めら
れたからである。また細胞ペレットに添加するアセトン
の量を変えることにより抽出液は必要に応じて濃縮する
ことができた。

実施例５ 培養ＭＡ−５９２０の４０−の発酵液４本から遠心分離
した細胞ペレットのアセトン抽出液を合併し、水を添加
しなから４ｄに濃縮した。

次いで濃縮液を３×４艷の塩化メチレンで抽出した。抽
出液を合併し、濃縮乾燥した。残留物１２．５１Ｎｉを
１００ｍｃｉ　の塩化メチレンに取り、あらかじめ塩化
メチレンで平衡化したイー・メルク・ローパー（ＥｓＭ
ｅｒｃｌｃ　＊　Ｌｏｂｅｒ　）　　サイズＡシリカゲ
ル６０カラムでクロマトグラフを行った。クロマトグラ
フは１−７分で段階的グラジェントにより実施しだ。グ
ラジェントは各６０−の塩化メチレン：９０：１０ｖ／
Ｖ塩化メチレン：酢酸エチル：８５：１５Ｖ／Ｖ塩化メ
チレン：酢酸エチル；７５：２５ｖ／ｖ塩化メチレン：
酢酸エチルから成る。溶離液の３０−をボイド・ボリウ
ム（ｖｏｉｄｖｏｌｕｍｅ　）として集めた後、１３５
の１−分画を集めた。分画は次のように合併した。

分画５３〜５９を濃縮乾燥して１と表示。

分画６９〜７８を濃縮乾燥して２と表示。

分画８９〜９３を濃縮乾燥して３と表示。

分画１０４〜１１６を濃縮乾燥して４と表示。

分画１１７〜１３５を濃縮乾燥して５と表示。

実施例６ 実施例５で得られた試料１を濃縮乾燥し、残留物を１０
０ｍｃｌのメタノールに取シ、６０℃に維持したデュポ
ン−ゾルパックス（ＤｕＰｏｎｔＺｏｒｂａｘ　）　Ｏ
Ｄ　Ｓ逆相Ｃ１８カラム０．４６　Ｘ　２５ｃｒｎ上で
、８５／１５メタノール／水の溶媒系を用いてｔｍｚ／
分の流速でクロマトグラフを行った。溶離液、の流れを
０．０２ＡＵＦＳ　Ｋ設定したＬＤＣスペクトロモニタ
ー（Ｓｐｅｃｔｒｏｍｏｎｉｔｏｒ　ｌ■を用いて２４
０ｎｍで監視した。紫外部追跡に基づいて四つの分画を
集めた。分画Ｎ［Ｌｌは１５．２分〜１６．９分、分画
Ｎａ２は１７．７分〜２０．０分、分画Ｎ［Ｌ　３は２
３．８分〜２５．３３分及び分画Ｎα４は２４．３分〜
３１．０分であった。四つの分画を濃縮乾燥した。分画
３は２８−デオキシ−６−ヒドロキシ−２５−メチルミ
ルベマイシンＢ（化合物Ｉ）と同定され、分画４は２８
−デオキシ−２５−メチルミルベマイシンＢ（化合物■
）と同定した。

実施例７ ＭＡ−５９２０の培養の発酵で得られた７ｔの発酵液を
スーパーセル（５ｕｐｅｒ−ｅｅｌ　）を濾過混和剤及
びプレコート剤として使用して濾過した。６ｔの戸液は
排棄した。しめった濾過ケーキを４ｔのアセトンでスラ
リーとし、−夜攪拌した。アセトンスラリーを濾過し、
濾過ケーキを排棄した。透明なＦｉを水を添加しながら
５００ｄＫ濃縮した。次いで水性濃縮液を３　Ｘ　５０
０−の塩化メチレンで抽出した。

抽出液を合併し、硫酸ナトリウムで乾燥し、１００コに
濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフ用カラ
ムを、０．０４〜０．０６ｍの粒径のイー・メルク（Ｅ
、　Ｍｅｒｃｋ　）・シリカゲル６０の３２５２を乾燥
状態で詰め、５　ｐａｔの空気圧で塩化メチレンで平衡
化した。１００ｄの濃縮液の内５０−をシリカゲルにか
け、各段階で１．３ｔを使用する段階的グラジェントに
よりクロマトグラフを実施した。

段階１．塩化メチレン 段階２．　９０　：　１０　ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸
エチル 段階３．　８０　：　２０　ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸
エチル 段階４．　７０：３０ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸エチル 段階５．　６０：４０ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸エチル 段階６．　５０　：　４０　：　１０　ｖ／ｖ／ｖ塩化
メチレン：酢酸エチル：メタノール 各々約２５０ｔｌｔの３２分画を集めた。

実施例８ 実施例７で得られた分画１ｏを濃縮して６９８．１ηの
油状の残留物を得た。１ゴの塩化メチレンを残留物、容
量１．７艷に添加した。

この溶液を二つの部分に分け２９℃に維持したワットマ
ン・バーチシル（Ｗｈａｔｍａｎ　Ｐａｒｔａｇｉｌ）
シリカゲル間９カラム０．９４Ｘ２Ｓｃｒｎ上で、９８
：　２　Ｖ／Ｖ塩化メチレン：アセトニトリルの溶媒系
を用いて１０−７分の流速でクロマトグラフを行った。

溶離液の流れを０．６４ＡＵＦＳに設定した１ｍの流路
長のセルを持つＬＤＣスペクトロモニター■を使用して
２４３　ｎｍ　で監視した。紫外部進路に基づいて分画
を集めだ。

部分１から１１分画を、部分２から６分画を集めた。部
分１から得られた分画１〜１３及び部分２から得られた
分画５〜７を合併した。

実施例７から得られた分画Ｎａ１ｌを濃縮して４３０．
３■の油状の残留物を得た。１．５コの塩化メチレンを
残留物知添加し、溶液をワットマン・バーチシルΦシリ
カゲルＭ９カラム上で上に記載したようにクロマトグラ
フを行い、１０分画を集めた。このクロマトグラフから
得られた分画５〜７を分画Ｎ［Ｌｌｏのクロマトグラフ
で得られた選択された分画と合併し、濃縮乾燥した。残
留物は１８．７■であった。

実施例９ 実施例８で得られた残留物１８．７■を１−のメタノー
ルに取シ、４０℃に維持したデュポンゾルパックスＯＤ
Ｓ逆相Ｃ１８カラム２．１×２５ｃＩｎ上で８５／１５
メタノール／水の溶媒系を用いて１０ｆＲｔ／分の流速
でクロマトグラフを行った。溶離液の流れを０．３２Ａ
ＵＦＳに設定した、ＩＴｒａの流路長のセルを持つＬＤ
Ｃスペクトロモニター■を使用して２４０ｎｍで監視し
た。紫外部追路に基づいて１０分画を集めた。分画２〜
４を合併し、濃縮乾燥して７．７■の残留物を得た。残
留物を４００ｍｃｉのメタノールに取シ、デュポンゾル
パックスＯＤＳ逆相Ｃ１８カラム０．９４Ｘ２５ａｎ　
上で、室温で８５／１５メタノール／水の溶媒系を用い
５−７分で再クロマトグラフを行った。溶離液の流れを
Ｏ，％３２ＡＵＦＳに設定した。ＩＷａＲ流路長のセル
を持つＬＤＣスペクトロモニター■を使用して２４０　
ｎｍ　で監視した。紫外部追跡に基づいて４分画を集め
た。分画２及び３を合併し蒸発乾燥した。残留物は４．
１■であり、５−デメチル−２８−デオキシ−２５−メ
チル−５−オキソミルベマイシンＢ（化合物■）と同定
した。

実施例１０ 実施例７で得られた分画２０〜２４を合併し、蒸発乾燥
して１３８．５１１１ｙの残留物を得た。

残留物を１．５−の８２　：　１８　ｖ／ｖメタノール
：水に取シ、４０℃に維持したデュポン・ゾルパックス
ＯＤＳ逆相Ｃ１８カラム２．ｌＸ２５α上で、８２／１
８メタノール／水の溶媒系を用いて１０＋ｄ／分の流速
で′クロマトグラフを行った。溶離液の流れを０．３２
ＡＵＦＳに設定した１＋＋＋ｍの流路長のセルを持つＬ
ＤＣスペクトルモニター■を使用して２４０　ｎｍで監
視した。紫外部追跡に基づいて２２の分画を集めた。分
画２１及び２２を合併し、蒸発乾燥して８．０■の残留
物を得、５−０−デメチル−２８−デオキシ−２５−メ
チルミルベマイシンＢ（化合物ＩＶ　）と同定された。

実施例１１ 実施例７で得られた分画１３〜１５を合併し、蒸発乾燥
して３８５．７■の残留物を得だ。

残留物を２Ｔｎｔのメタノールに取り、３０℃に維持し
たデュポンゾルパックスＯＤＳ逆相Ｃ１８カラム２．Ｉ
　Ｘ　２５ｃｒｎ上で、８５／１５メタノール／水の溶
媒系を用いて１０−７分の流速でクロマトグラフを行っ
た。溶離液の流れを０．３２ＡＵＦＳに設定した、１ｍ
ｍの流路長のセルを持つＬＤＣスペクトロモニター■を
使用して２４０　ｎｍで監視した。紫外部追跡に基づい
て１１分画を集めた。分画ＮＩＩＬ８を濃縮乾燥した。

化合物は２９０　ｎｍ　に紫外部吸収の極大値を持ち、
２８−デオキシ−２５−メチル−２８−オキソミルベマ
イシンＢ（化合物Ｖ）と同定された。

実施例１２ 実施例７で得られた分画１６〜１９を合併し、濃縮乾燥
して５０８．６■の残留物を得た。

残留物を２−のメタノールに取り３０℃に維持したデュ
ポン・ゾルパックスＯＤＳ逆相Ｃ１８カラム２．　Ｉ　
Ｘ　２５　ｃｍ上で、８５／１５メタノール／水の溶媒
系を用いて１０ｄ／分でクロマトグラフを行った。溶離
液の流れを０．３２ＡＵＦＳに設定した、１■の流路長
のセルを持つＬＤＣスペクトロモニター■を使用して２
４０　ｎｍで監視した。紫外部追跡に基づいて２３分画
を集めた。分画２１〜２３を合併し、濃縮乾燥して５−
０−デメチル−２８−デオキシ−２５−エチルミルベマ
イシンＢ（化合物■）を得た。

出　願　人　：　メルク　エンド　カムパニーインコー
ポレーテツド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ２、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ３、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ４、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ５、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ６、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ７、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を発酵させ、発酵培地から
   前記化合物を単離することから 成る特許請求の範囲第１項に記載の化合物 の製造法。 ８、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を発酵させ、発酵培地から
   前記化合物を単離することから 成る特許請求の範囲第２項に記載の化合物 の製造法。 ９、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を発酵させ、発酵培地から
   前記化合物を単離することから 成る特許請求の範囲第３項に記載の化合物 の製造法。 １０、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５
   ９２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を発酵させ、発酵培地か
   ら前記化合物を単離することから 成る特許請求の範囲第４項に記載の化合物 の製造法。 １１、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５
   ９２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を発酵させ、発酵培地か
   ら前記化合物を単離することから 成る特許請求の範囲第５項に記載の化合物 の製造法。 １２、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５
   ９２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を発酵させ、発酵培地か
   ら前記化合物を単離することから 成る特許請求の範囲第６項に記載の化合物 の製造法。 １３、特許請求の範囲第１項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １４、特許請求の範囲第２項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １５、特許請求の範囲第３項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １６、特許請求の範囲第４項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １７、特許請求の範囲第５項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １８、特許請求の範囲第６項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １９、不活性担体及び特許請求の範囲第１項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。 ２０、不活性担体及び特許請求の範囲第２項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。 ２１、不活性担体及び特許請求の範囲第３項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。 ２２、不活性担体及び特許請求の範囲第４項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。 ２３、不活性担体及び特許請求の範囲第５項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。 ２４、不活性担体及び特許請求の範囲第６項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。