JPH0586065A - 既知の微生物から生産される新規アベルメクチン - Google Patents
既知の微生物から生産される新規アベルメクチンInfo
- Publication number
- JPH0586065A JPH0586065A JP3262427A JP26242791A JPH0586065A JP H0586065 A JPH0586065 A JP H0586065A JP 3262427 A JP3262427 A JP 3262427A JP 26242791 A JP26242791 A JP 26242791A JP H0586065 A JPH0586065 A JP H0586065A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ivermectin
- medium
- streptomyces griseus
- bacillus subtilis
- aglycone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 抗寄生虫活性を有する新規なイベルメクチン
化合物を提供する。 【構成】 １３−デオキシイベルメクチンアグリコンを
バチルス・ズブチリスおよびストレプトミセス・グリゼ
ウスの菌株と一緒にインキュベートすることにより生産
される、Ｉ及びIIの構造を有する主生成物の１３−βイ
ベルメクチンモノグルコピラノシドおよび副生成物の５
−βイベルメクチンモノグルコピラノシド。
化合物を提供する。 【構成】 １３−デオキシイベルメクチンアグリコンを
バチルス・ズブチリスおよびストレプトミセス・グリゼ
ウスの菌株と一緒にインキュベートすることにより生産
される、Ｉ及びIIの構造を有する主生成物の１３−βイ
ベルメクチンモノグルコピラノシドおよび副生成物の５
−βイベルメクチンモノグルコピラノシド。
Description
【０００１】イベルメクチンがその一員であるアベルメ
クチンファミリーは、ほ乳動物における内外寄生虫、作
物の内部および外部および土壌中の寄生虫にたいし広範
囲のスペクトルを有する一連の重要な抗寄生虫薬剤を包
含する。イベルメクチンはChabala およびFisherにたい
して１９８０年４月２２日に発行された米国特許第４，
１９９，５６９号に開示されている。アベルメクチンは
第１３位にα−Ｌ−オレアンドロシル−α−Ｌ−オレア
ンドロシル基からなるジサッカライド部分を有してい
る。米国特許第４，２０６，２０５号に記載されるよう
にこのジサッカライド部分を取り除くと１３位に水酸基
を有する対応するアグリコン誘導体にすることができ
る。米国特許第４，１７１，３１４号および第４，１７
３，５７１号に記載されるように、第１３位の水酸基を
除去して対応する１３−デオキシ化合物にすることがで
きる。米国特許第３，９５０，３６０号に記載されてい
るミルベマイシンと呼ばれる他の化合物群は、アベルメ
クチンと同じ１６員環を有するがジサッカライド部分を
欠き、いくつかの置換基が異なっている。
クチンファミリーは、ほ乳動物における内外寄生虫、作
物の内部および外部および土壌中の寄生虫にたいし広範
囲のスペクトルを有する一連の重要な抗寄生虫薬剤を包
含する。イベルメクチンはChabala およびFisherにたい
して１９８０年４月２２日に発行された米国特許第４，
１９９，５６９号に開示されている。アベルメクチンは
第１３位にα−Ｌ−オレアンドロシル−α−Ｌ−オレア
ンドロシル基からなるジサッカライド部分を有してい
る。米国特許第４，２０６，２０５号に記載されるよう
にこのジサッカライド部分を取り除くと１３位に水酸基
を有する対応するアグリコン誘導体にすることができ
る。米国特許第４，１７１，３１４号および第４，１７
３，５７１号に記載されるように、第１３位の水酸基を
除去して対応する１３−デオキシ化合物にすることがで
きる。米国特許第３，９５０，３６０号に記載されてい
るミルベマイシンと呼ばれる他の化合物群は、アベルメ
クチンと同じ１６員環を有するがジサッカライド部分を
欠き、いくつかの置換基が異なっている。
【０００２】研究の主なゴールは、新規な活性のあるア
ベルメクチンおよびミルベマイシン化合物を提供するこ
とにある。すなわち本発明の目的は新規のイベルメクチ
ン化合物を提供することにある。他の目的はこれらの新
規イベルメクチン化合物の製造方法を提供することにあ
る。さらなる目的はこれらの新規イベルメクチン化合物
を使用するための方法および組成物を提供することであ
る。これらおよびその他の本発明の目的は以下に記載さ
れる。本発明を要約すると、１３−デオキシイベルメク
チンアグリコンを、バチルス・ズブチリス（Bacillus s
ubtilis ）およびストレプトミセス・グリゼウス（Stre
ptomyces griseus）の誘導化休止細胞の混合培養中でイ
ンキュベートすることにより、二つの生物変換標品、主
生成物である１３−βイベルメクチンモノグルコピラノ
シドと副生成物である５−βイベルメクチンモノグルコ
ピラノシドが得られる。
ベルメクチンおよびミルベマイシン化合物を提供するこ
とにある。すなわち本発明の目的は新規のイベルメクチ
ン化合物を提供することにある。他の目的はこれらの新
規イベルメクチン化合物の製造方法を提供することにあ
る。さらなる目的はこれらの新規イベルメクチン化合物
を使用するための方法および組成物を提供することであ
る。これらおよびその他の本発明の目的は以下に記載さ
れる。本発明を要約すると、１３−デオキシイベルメク
チンアグリコンを、バチルス・ズブチリス（Bacillus s
ubtilis ）およびストレプトミセス・グリゼウス（Stre
ptomyces griseus）の誘導化休止細胞の混合培養中でイ
ンキュベートすることにより、二つの生物変換標品、主
生成物である１３−βイベルメクチンモノグルコピラノ
シドと副生成物である５−βイベルメクチンモノグルコ
ピラノシドが得られる。
【０００３】以下本発明を詳細に説明する。本発明は新
規な二つの化合物を記載する。制御された条件下で１３
−デオキシイベルメクチンアグリコンを基質として２種
の微生物、Bacilllus subtilisＭＢ−４９７４株とStre
ptomyces griseusＨＣＡ−１８５株の混合培養を行なう
ことにより、これら化合物を製造することができる。こ
れら化合物は発酵により得られ、ここに記載されるよう
に実質的に純品として回収される。ＭＢ−４９７４と呼
ばれるB.subtilisの培養株はメルク社（Rahway, ニュー
ジャージー）の菌株コレクション中にある。ＨＣＡ−１
８５と呼ばれるＳ． ｇｒｉｓｅｕｓの培養株と共同で
ここに記載する化合物を生産できる本菌株のサンプル
は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（パーク
ローンドライブ１２３０１、ロックビル、メリーランド
２０８５２）の永久保存菌株として入手可能であり、寄
託番号はＡＴＣＣ５５０６０である。ＨＣＡ−１８５と
呼ばれるＳ． ｇｒｉｓｅｕｓの培養株はメルク社（Ra
hway, ニュージャージー）の菌株コレクション中にあ
る。ＭＢ−４９７４と呼ばれるB.subtilisの培養株と共
同でここに記載する化合物を生産できる本菌株のサンプ
ルは、上記アメリカンタイプカルチャーコレクションの
永久保存菌株として入手可能であり、寄託番号はＡＴＣ
Ｃ５５０７０である。上記記載の微生物は、共同で１３
−βイベルメクチンモノグルコピラノシドおよび５−β
イベルメクチンモノグルコピラノシドを生産するのに用
いることのできるB. subtilis とS. griseusの実例とな
るものである。しかしながら、上記記載の微生物の変異
株、たとえば自然突然変異株の選択またはＸ線照射、紫
外線照射、ナイトロジェンマスタードなどの変異剤によ
り得られる１３−βおよび５−βイベルメクチンモノグ
ルコピラノシド生産性変異株も本発明の範囲内にあるこ
とは理解されるであろう。
規な二つの化合物を記載する。制御された条件下で１３
−デオキシイベルメクチンアグリコンを基質として２種
の微生物、Bacilllus subtilisＭＢ−４９７４株とStre
ptomyces griseusＨＣＡ−１８５株の混合培養を行なう
ことにより、これら化合物を製造することができる。こ
れら化合物は発酵により得られ、ここに記載されるよう
に実質的に純品として回収される。ＭＢ−４９７４と呼
ばれるB.subtilisの培養株はメルク社（Rahway, ニュー
ジャージー）の菌株コレクション中にある。ＨＣＡ−１
８５と呼ばれるＳ． ｇｒｉｓｅｕｓの培養株と共同で
ここに記載する化合物を生産できる本菌株のサンプル
は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（パーク
ローンドライブ１２３０１、ロックビル、メリーランド
２０８５２）の永久保存菌株として入手可能であり、寄
託番号はＡＴＣＣ５５０６０である。ＨＣＡ−１８５と
呼ばれるＳ． ｇｒｉｓｅｕｓの培養株はメルク社（Ra
hway, ニュージャージー）の菌株コレクション中にあ
る。ＭＢ−４９７４と呼ばれるB.subtilisの培養株と共
同でここに記載する化合物を生産できる本菌株のサンプ
ルは、上記アメリカンタイプカルチャーコレクションの
永久保存菌株として入手可能であり、寄託番号はＡＴＣ
Ｃ５５０７０である。上記記載の微生物は、共同で１３
−βイベルメクチンモノグルコピラノシドおよび５−β
イベルメクチンモノグルコピラノシドを生産するのに用
いることのできるB. subtilis とS. griseusの実例とな
るものである。しかしながら、上記記載の微生物の変異
株、たとえば自然突然変異株の選択またはＸ線照射、紫
外線照射、ナイトロジェンマスタードなどの変異剤によ
り得られる１３−βおよび５−βイベルメクチンモノグ
ルコピラノシド生産性変異株も本発明の範囲内にあるこ
とは理解されるであろう。
【０００４】本発明の化合物は、以下に記載される条件
下で、Bacillus subtilis ＭＢ−４９７４とStreptomyc
es griseusＨＣＡ−１８５の混合培養システムを用い、
適当な水溶性栄養培地の好気性発酵中に１３−デオキシ
イベルメクチンアグリコンから製造される。多くの抗生
物質の生産に用いられる液体培地が、これらマクロライ
ド化合物の生産プロセスにおいて用いるのにも適してい
る。これらの液体培地は、微生物によって資化される炭
素および窒素源を含み一般に低レベルの無機塩を含んで
いる。くわえて発酵培地は微生物の生育および所望の化
合物の生産に必要な金属を微量に含むことができる。こ
れらは通常栄養源として用いられる複合炭素および窒素
源中に十分量存在するが、必要ならば培地に別々に加え
ても良いのはもちろんである。本発明の１３−βイベル
メクチンモノグルコピラノシドおよび５−βイベルメク
チンモノグルコピラノシドは別々にあるいは一緒に用い
ることができる。本発明の出発物質として用いられる１
３−デオキシイベルメクチンアグリコンは、米国特許第
４，１７１，３１４号、第４，１７３，５７１号および
Mrozikらの報文（テトラヘドロンレターズ２４巻４８号
５３３３−５３３６頁（１９８３）) に開示されている
ようにして製造することができる。下記の培地が以下の
実施例において用いられた。 １．大豆−グルコース培地 ｇ/ Ｌ デキストロース ２０．０ 大豆ミール ５．０ Fidco イーストエキス ５．０ ＮａＣｌ ５．０ ＭＥＳバッファー ９．８ ｐＨ７．０に調整 ２．培地Ａ ｇ/ Ｌ デキストロース １．０ デキストリン １０．０ ビーフエキス ３．０ アルダミン（Ardamine）ｐＨ ５．０ ＮＺ アミンタイプＥ ５．０ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．３ ｐＨ７．０に調整後 ＣａＣＯ3 を添加 ０．５ 培地Ｂ ｇ/ Ｌ グルコース １０．０ ハイケースＳＦ ２．０ ビーフエキス １．０ コーンスチープリカー ３．０ ｐＨ７．０に調整
下で、Bacillus subtilis ＭＢ−４９７４とStreptomyc
es griseusＨＣＡ−１８５の混合培養システムを用い、
適当な水溶性栄養培地の好気性発酵中に１３−デオキシ
イベルメクチンアグリコンから製造される。多くの抗生
物質の生産に用いられる液体培地が、これらマクロライ
ド化合物の生産プロセスにおいて用いるのにも適してい
る。これらの液体培地は、微生物によって資化される炭
素および窒素源を含み一般に低レベルの無機塩を含んで
いる。くわえて発酵培地は微生物の生育および所望の化
合物の生産に必要な金属を微量に含むことができる。こ
れらは通常栄養源として用いられる複合炭素および窒素
源中に十分量存在するが、必要ならば培地に別々に加え
ても良いのはもちろんである。本発明の１３−βイベル
メクチンモノグルコピラノシドおよび５−βイベルメク
チンモノグルコピラノシドは別々にあるいは一緒に用い
ることができる。本発明の出発物質として用いられる１
３−デオキシイベルメクチンアグリコンは、米国特許第
４，１７１，３１４号、第４，１７３，５７１号および
Mrozikらの報文（テトラヘドロンレターズ２４巻４８号
５３３３−５３３６頁（１９８３）) に開示されている
ようにして製造することができる。下記の培地が以下の
実施例において用いられた。 １．大豆−グルコース培地 ｇ/ Ｌ デキストロース ２０．０ 大豆ミール ５．０ Fidco イーストエキス ５．０ ＮａＣｌ ５．０ ＭＥＳバッファー ９．８ ｐＨ７．０に調整 ２．培地Ａ ｇ/ Ｌ デキストロース １．０ デキストリン １０．０ ビーフエキス ３．０ アルダミン（Ardamine）ｐＨ ５．０ ＮＺ アミンタイプＥ ５．０ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．３ ｐＨ７．０に調整後 ＣａＣＯ3 を添加 ０．５ 培地Ｂ ｇ/ Ｌ グルコース １０．０ ハイケースＳＦ ２．０ ビーフエキス １．０ コーンスチープリカー ３．０ ｐＨ７．０に調整
【０００５】抗生物質の製造に用いられるような他の液
体培地も、本化合物の生産プロセスで用いられるのに適
している。このような栄養培地は微生物により資化され
る炭素源及び窒素源、また一般的に低レベルの無機的塩
類を含んでいる。更に発酵培地中には、微生物の発育や
所望の化合物の生成に必要な金属が微量含まれている。
炭素及び窒素の複合源が栄養源として使用されるときは
これら微量金属は通常十分に含まれているが、もし必要
ならばそれらを別々に培地に加えても結構である。一般
的に、栄養培地中の資化しうる炭素源として適切なもの
は糖などの様な炭水化物、例えば、グルコース、シュク
ロース、マルトース、ラクトース、デキストラン、セレ
ロース、コーンミール、オート麦粉など、それにスター
チである。培地中の利用可能な炭素源の正確な量は、い
くぶん培地中の他の成分に左右されるが、通常、炭水化
物の量は培地中１〜１０ｇ／１あれば、十分である。こ
れらの炭素源は別々に用いられたり、一つの培地中にそ
のような炭素源を数種組み合わせて用いたりもする。種
々の窒素源、例えば、酵母加水分解物、酵母自己消化
物、酵母細胞、トマトペースト、コーンミール、オート
麦粉、大豆ミール、カゼイン水解物、酵母エキス、コー
ンスティーブリカー、ディスティラーズソリュブル、コ
ットンシードミール、肉エキスなどが本化合物の生成に
際して上記微生物より容易に資化されうる窒素源であ
る。これらの窒素源は単独あるいは併用した状態で培地
中で１〜５ｇ／１の量において使用される。
体培地も、本化合物の生産プロセスで用いられるのに適
している。このような栄養培地は微生物により資化され
る炭素源及び窒素源、また一般的に低レベルの無機的塩
類を含んでいる。更に発酵培地中には、微生物の発育や
所望の化合物の生成に必要な金属が微量含まれている。
炭素及び窒素の複合源が栄養源として使用されるときは
これら微量金属は通常十分に含まれているが、もし必要
ならばそれらを別々に培地に加えても結構である。一般
的に、栄養培地中の資化しうる炭素源として適切なもの
は糖などの様な炭水化物、例えば、グルコース、シュク
ロース、マルトース、ラクトース、デキストラン、セレ
ロース、コーンミール、オート麦粉など、それにスター
チである。培地中の利用可能な炭素源の正確な量は、い
くぶん培地中の他の成分に左右されるが、通常、炭水化
物の量は培地中１〜１０ｇ／１あれば、十分である。こ
れらの炭素源は別々に用いられたり、一つの培地中にそ
のような炭素源を数種組み合わせて用いたりもする。種
々の窒素源、例えば、酵母加水分解物、酵母自己消化
物、酵母細胞、トマトペースト、コーンミール、オート
麦粉、大豆ミール、カゼイン水解物、酵母エキス、コー
ンスティーブリカー、ディスティラーズソリュブル、コ
ットンシードミール、肉エキスなどが本化合物の生成に
際して上記微生物より容易に資化されうる窒素源であ
る。これらの窒素源は単独あるいは併用した状態で培地
中で１〜５ｇ／１の量において使用される。
【０００６】培養培地中に組み込まれる栄養的無機塩類
としてはナトリウム、カリウム、マグネシウム、アンモ
ニウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、カル
ボン酸塩、及び類似イオンを生ずる普通の塩類である。
同様に微量金属としては鉄、亜鉛、マンガン、銅、ホウ
素、モリブデンなどが含まれる。この後に、及び実施例
において記載されている培地は単に使用され得る培地の
多様性を説明したものであり、それらに限定され得るも
のではないということは注意すべき点である。以下は
B.subtilis および S.griseusの菌株の発育に適切な培
地の例である。
としてはナトリウム、カリウム、マグネシウム、アンモ
ニウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、カル
ボン酸塩、及び類似イオンを生ずる普通の塩類である。
同様に微量金属としては鉄、亜鉛、マンガン、銅、ホウ
素、モリブデンなどが含まれる。この後に、及び実施例
において記載されている培地は単に使用され得る培地の
多様性を説明したものであり、それらに限定され得るも
のではないということは注意すべき点である。以下は
B.subtilis および S.griseusの菌株の発育に適切な培
地の例である。
【０００７】培地の組成 培地 １ グルコース ５０ｇ ＮａＣｌ ５ｇ (ＮＨ4）2ＳＯ4 ２ｇ ＣａＣＯ3 ６ｇ 大豆粉エキス ３０ｇ 蒸留水 １０００ml ｐＨ ７.０に調整
【０００８】培地 ２ デキストロース ２０ｇ ペプトン ５ｇ 肉エキス ５ｇ プライマリー イースト ３ｇ ＮａＣｌ ５ｇ ＣａＣＯ3 ３ｇ 蒸留水 １０００ml ｐＨ ７.０に調整
【０００９】 培地 ３ 可溶性スターチ １０ｇ アルダミン ｐＨ ５ｇ ＮＺアミン Ｅ ５ｇ ビーフエキス ３ｇ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.５ｇ セレロース １.０ｇ Ｎａ2ＨＰＯ4 ０.１９０ｇ ＫＨ2ＰＯ4 ０.１８２ｇ ＣａＣＯ3 ０.０５ｇ 蒸留水 １０００ml
【００１０】 培地 ４ セレロース １０ｇ コーンスターチ ４０ｇ グリシン ７.５ｇ チロシン ０.９ｇ トリオレイン ２.５ｇ ＮａＣｌ ２.０ｇ Ｋ2ＨＰＯ4 １.５６ｇ ＫＨ2ＰＯ4 ０.７８ｇ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.５ｇ ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０.００１ｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０２ｇ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０.００１ｇ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０５ｇ ＣａＣＯ3 ３.０ｇ 蒸留水 １０００ml
【００１１】培地 ５（斜面培地） イーストエキス ４ｇ マルツエキス １０ｇ デキストロース ４ｇ バクトアガー ２０ｇ 蒸留水 １０００ml ｐＨ ７.０
【００１２】培地 ６ セレロース １５ｇ 大豆ミール １５ｇ ＣａＣＯ3 １.０ｇ 蒸留水 １０００ml ｐＨ ７.０〜７.２に調整
【００１３】Ｂ．ズブチリスとＳ．グリセウスを用いる
発酵法はその温度範囲が約２０℃から約４０℃で行われ
る。最適な結果を得るにはこれらの発酵温度の範囲は約
２４℃から約３６℃であり、最も好ましくは約２８℃か
ら約３４℃の間である。本化合物の生産に適切な栄養培
地のｐＨは約６．５から約８．０まで変化させることが
でき、好ましい範囲は約６．８から約７．３である。
発酵法はその温度範囲が約２０℃から約４０℃で行われ
る。最適な結果を得るにはこれらの発酵温度の範囲は約
２４℃から約３６℃であり、最も好ましくは約２８℃か
ら約３４℃の間である。本化合物の生産に適切な栄養培
地のｐＨは約６．５から約８．０まで変化させることが
でき、好ましい範囲は約６．８から約７．３である。
【００１４】出発化合物である１３−デオキシイベルメ
クチンアグリコンを上記微生物の発酵中に発酵培地１リ
ッター当たり約０．１から約１．０ｇ加える。好ましく
は１リッター当たり約０．１から約０．５ｇである。１
３−デオキシイベルメクチンアグリコン化合物は発酵サ
イクルのどの段階で加えてもよい。この化合物は植菌及
び発酵開始前に培地成分中に加えられてもあるいは発酵
過程中に加えられてもよい。培養菌が効果的に生体内変
化するのに十分な時間が持てる様に、出発化合物である
１３−デオキシイベルメクチンアグリコンは発酵進行度
が５０％に到達する前に加えられるのが好ましく、２５
％前がより好ましい。
クチンアグリコンを上記微生物の発酵中に発酵培地１リ
ッター当たり約０．１から約１．０ｇ加える。好ましく
は１リッター当たり約０．１から約０．５ｇである。１
３−デオキシイベルメクチンアグリコン化合物は発酵サ
イクルのどの段階で加えてもよい。この化合物は植菌及
び発酵開始前に培地成分中に加えられてもあるいは発酵
過程中に加えられてもよい。培養菌が効果的に生体内変
化するのに十分な時間が持てる様に、出発化合物である
１３−デオキシイベルメクチンアグリコンは発酵進行度
が５０％に到達する前に加えられるのが好ましく、２５
％前がより好ましい。
【００１５】少量の発酵は、適切な栄養培地を無菌的に
フラスコ中に入れ、そこへ前記微生物の胞子あるいは栄
養菌糸を植菌した後、かるく綿栓をし約３０℃の室温中
において９５から３００ｒｐｍの回転攪拌機を用いて約
２日から１０日間、発酵させるのが便利である。大量発
酵に際しては、アジテーターやエアレーター装置を備え
た適切なタンクの制御が必要である。タンク中に栄養培
地を調製して滅菌操作後に植菌し、栄養培地をアジテー
ション及び／あるいはエアレーションして約２４℃から
３７℃の温度範囲において約１日から８日間発酵を続け
させる。エアレーションの度合いは発酵装置のサイズ、
アジテーションの速度及びその他の要素に左右されるも
のである。一般的に大量発酵のアジテーションは約９５
から３００ｒｐｍであり、エアレーションは約５０から
５００ ｌ／ｍｉｎ（ＬＰＭ）である。
フラスコ中に入れ、そこへ前記微生物の胞子あるいは栄
養菌糸を植菌した後、かるく綿栓をし約３０℃の室温中
において９５から３００ｒｐｍの回転攪拌機を用いて約
２日から１０日間、発酵させるのが便利である。大量発
酵に際しては、アジテーターやエアレーター装置を備え
た適切なタンクの制御が必要である。タンク中に栄養培
地を調製して滅菌操作後に植菌し、栄養培地をアジテー
ション及び／あるいはエアレーションして約２４℃から
３７℃の温度範囲において約１日から８日間発酵を続け
させる。エアレーションの度合いは発酵装置のサイズ、
アジテーションの速度及びその他の要素に左右されるも
のである。一般的に大量発酵のアジテーションは約９５
から３００ｒｐｍであり、エアレーションは約５０から
５００ ｌ／ｍｉｎ（ＬＰＭ）である。
【００１６】全発酵培地中からの新規化合物の分離及び
回収は溶媒抽出及び種々のクロマトグラフィー技術及び
溶媒系を用いたクロマトグラフィー分画より行われる。
本化合物は水に対する可溶性は低いが有機溶媒にはよく
溶ける。この特性は発酵培地中からの化合物の回収に都
合の良いものである。よって回収方法の１つは、総発酵
培地を適切な有機溶媒の等量と混合するものである。有
機溶媒を用いるならば、酢酸エチル、塩化メチレン、ク
ロロホルム等の水とは混和しえない溶媒の使用が好まし
い。最高の回収を望むのならば、一般的には数種の抽出
操作が必要である。溶媒は本化合物の他に、本化合物の
抗寄生虫活性を持たない物質なども取り出すものであ
る。溶媒が水と混和しえない溶媒ならば、二層分離後、
有機溶媒を減圧下で蒸発させる。残留物をシリカゲルよ
りなるクロマトグラフのカラムにかける。カラムは期待
される生成物と若干の不純物を保持するが、大部分の不
純物、特に非極性の不純物は素通りさせる。不純物を除
くためにカラムを塩化メチレンやクロロホルム等の様な
中程度に極性の有機溶媒で洗浄し、更に塩化メチレンあ
るいはクロロホルムと、好ましくはアセトン、メタノー
ル、またはエタノール等の有機溶媒の１つとの混合液に
より洗浄する。溶媒を蒸発させた後、残留物は更にクロ
マトグラフィー樹脂としてシリカゲル、酸化アルミニウ
ム、イオン交換樹脂、デキストランゲルなどを用い、溶
離剤として種々の溶媒及びそれらの溶媒の組み合わせを
用いたカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフ
ィー、調製用薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマ
トグラフィーなどにかける。薄層、高速、液体及び調製
用薄層クロマトグラフィーは本化合物の検出、単離に使
用される。これらの技術の使用は、その他、当業者にと
って知られている方法と同様に本化合物の組成を精製す
るときにも用いられる。期待される化合物はクロマトグ
ラフィー画分の生物学的、物理化学的特性の解析によっ
て検出される。本化合物の構造は核磁気共鳴、マススペ
クトル、紫外線・赤外線スペクトル等の種々の特性スペ
クトルにより詳細に解析されている。
回収は溶媒抽出及び種々のクロマトグラフィー技術及び
溶媒系を用いたクロマトグラフィー分画より行われる。
本化合物は水に対する可溶性は低いが有機溶媒にはよく
溶ける。この特性は発酵培地中からの化合物の回収に都
合の良いものである。よって回収方法の１つは、総発酵
培地を適切な有機溶媒の等量と混合するものである。有
機溶媒を用いるならば、酢酸エチル、塩化メチレン、ク
ロロホルム等の水とは混和しえない溶媒の使用が好まし
い。最高の回収を望むのならば、一般的には数種の抽出
操作が必要である。溶媒は本化合物の他に、本化合物の
抗寄生虫活性を持たない物質なども取り出すものであ
る。溶媒が水と混和しえない溶媒ならば、二層分離後、
有機溶媒を減圧下で蒸発させる。残留物をシリカゲルよ
りなるクロマトグラフのカラムにかける。カラムは期待
される生成物と若干の不純物を保持するが、大部分の不
純物、特に非極性の不純物は素通りさせる。不純物を除
くためにカラムを塩化メチレンやクロロホルム等の様な
中程度に極性の有機溶媒で洗浄し、更に塩化メチレンあ
るいはクロロホルムと、好ましくはアセトン、メタノー
ル、またはエタノール等の有機溶媒の１つとの混合液に
より洗浄する。溶媒を蒸発させた後、残留物は更にクロ
マトグラフィー樹脂としてシリカゲル、酸化アルミニウ
ム、イオン交換樹脂、デキストランゲルなどを用い、溶
離剤として種々の溶媒及びそれらの溶媒の組み合わせを
用いたカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフ
ィー、調製用薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマ
トグラフィーなどにかける。薄層、高速、液体及び調製
用薄層クロマトグラフィーは本化合物の検出、単離に使
用される。これらの技術の使用は、その他、当業者にと
って知られている方法と同様に本化合物の組成を精製す
るときにも用いられる。期待される化合物はクロマトグ
ラフィー画分の生物学的、物理化学的特性の解析によっ
て検出される。本化合物の構造は核磁気共鳴、マススペ
クトル、紫外線・赤外線スペクトル等の種々の特性スペ
クトルにより詳細に解析されている。
【００１７】本発明の化合物はヒト、動物、そして農業
における駆虫剤、殺虫剤及び殺ダニ剤として顕著な殺寄
生虫活性を持つ物質である。一般的に蠕虫病と言われる
病気及び疾病群は蠕虫類として知られる寄生虫の動物宿
主への感染によるものである。豚、羊、馬、牛、ヤギ、
犬、猫、及び家禽等の家畜にとっては、この蠕虫病は流
行性であり経済的にも重要な問題である。蠕虫類の中で
も、線虫類の様な寄生虫群は種々の動物群において広範
かつ時として重症な感染を引き起こす。上記にあるよう
に動物に感染する最も一般的な線虫類として捻転胃虫
属、毛様線虫属、オステルタジア属、ネマトディルス
属、クーペリア属、回虫属、ブノストムム属、腸結節虫
属、キャベルチア属、鞭虫属、円形線虫属、旋毛虫属、
肺虫属、毛頭虫属、ヘテラキス属、トキソカラ属、アス
カリディア属、蟯虫属、鉤虫属、ウンシナリア属、イヌ
小回虫属、ウマ回虫属がある。なかでもネマトディル
ス、クーペリア、及び腸結節虫は主として腸管を攻撃
し、捻転胃虫、オステルタジア等は胃中に広がり、肺虫
等は肺に見出される。更に他の寄生虫は他の組織及び臓
器において、例えば心臓、血管、皮下、リンパ組織等に
存在する。蠕虫病として知られる寄生虫感染は、貧血、
栄養不良、虚弱、体重減少、腸管壁及び他の組織あるい
は臓器における重度の損傷をもたらし、もし治療をしな
かったならば、その感染宿主は死滅するであろう。本発
明の化合物は予想以上の高活性をこれらの寄生虫に対し
て示し、かつまたイヌのイヌ糸状虫属、げっ歯動物のネ
マトスピロイデス属、シファチア属、アスピカルリス
属、動物及び鳥類の外部寄生虫である節足動物、ダニ
類、シラミ、ノミ、クロバエ、羊のミドリキンバエ種、
吸血性昆虫及び牛のウシバエ種、馬のウマバエ種、そし
てげっ歯動物のヒフバエ種等の移動性の双翅類の幼虫に
対しても同様な活性を示した。本化合物はヒトに感染す
る寄生虫に対しても同様に有効である。ヒトの胃腸管に
おいて最も一般的な寄生虫は鉤虫、アメリカ鉤虫、回
虫、糞線虫、旋毛虫、毛頭虫、鞭虫、及び蟯虫属であ
る。血液中、あるいは胃腸管以外の他の組織や臓器にお
いて発見される、医療上重要な寄生虫属としては、ブケ
レリア属、ブルギア属、オンコセルカ属、ドラクンクル
ス属及びロア糸状虫があり、また腸内寄生虫ではあるが
腸管外に存在している糞線虫属、及び旋毛虫属などもあ
る。また本化合物はヒトに寄生する節足動物、吸血性昆
虫及びヒトを悩ます双翅類害虫にも同様に効果がある。
また、ゴキブリ類、イガ、ヒロズコガ種、カツオブシム
シ、アタネガス種、及びイエバエ等の家庭害虫に対して
も効力を示すものである。
における駆虫剤、殺虫剤及び殺ダニ剤として顕著な殺寄
生虫活性を持つ物質である。一般的に蠕虫病と言われる
病気及び疾病群は蠕虫類として知られる寄生虫の動物宿
主への感染によるものである。豚、羊、馬、牛、ヤギ、
犬、猫、及び家禽等の家畜にとっては、この蠕虫病は流
行性であり経済的にも重要な問題である。蠕虫類の中で
も、線虫類の様な寄生虫群は種々の動物群において広範
かつ時として重症な感染を引き起こす。上記にあるよう
に動物に感染する最も一般的な線虫類として捻転胃虫
属、毛様線虫属、オステルタジア属、ネマトディルス
属、クーペリア属、回虫属、ブノストムム属、腸結節虫
属、キャベルチア属、鞭虫属、円形線虫属、旋毛虫属、
肺虫属、毛頭虫属、ヘテラキス属、トキソカラ属、アス
カリディア属、蟯虫属、鉤虫属、ウンシナリア属、イヌ
小回虫属、ウマ回虫属がある。なかでもネマトディル
ス、クーペリア、及び腸結節虫は主として腸管を攻撃
し、捻転胃虫、オステルタジア等は胃中に広がり、肺虫
等は肺に見出される。更に他の寄生虫は他の組織及び臓
器において、例えば心臓、血管、皮下、リンパ組織等に
存在する。蠕虫病として知られる寄生虫感染は、貧血、
栄養不良、虚弱、体重減少、腸管壁及び他の組織あるい
は臓器における重度の損傷をもたらし、もし治療をしな
かったならば、その感染宿主は死滅するであろう。本発
明の化合物は予想以上の高活性をこれらの寄生虫に対し
て示し、かつまたイヌのイヌ糸状虫属、げっ歯動物のネ
マトスピロイデス属、シファチア属、アスピカルリス
属、動物及び鳥類の外部寄生虫である節足動物、ダニ
類、シラミ、ノミ、クロバエ、羊のミドリキンバエ種、
吸血性昆虫及び牛のウシバエ種、馬のウマバエ種、そし
てげっ歯動物のヒフバエ種等の移動性の双翅類の幼虫に
対しても同様な活性を示した。本化合物はヒトに感染す
る寄生虫に対しても同様に有効である。ヒトの胃腸管に
おいて最も一般的な寄生虫は鉤虫、アメリカ鉤虫、回
虫、糞線虫、旋毛虫、毛頭虫、鞭虫、及び蟯虫属であ
る。血液中、あるいは胃腸管以外の他の組織や臓器にお
いて発見される、医療上重要な寄生虫属としては、ブケ
レリア属、ブルギア属、オンコセルカ属、ドラクンクル
ス属及びロア糸状虫があり、また腸内寄生虫ではあるが
腸管外に存在している糞線虫属、及び旋毛虫属などもあ
る。また本化合物はヒトに寄生する節足動物、吸血性昆
虫及びヒトを悩ます双翅類害虫にも同様に効果がある。
また、ゴキブリ類、イガ、ヒロズコガ種、カツオブシム
シ、アタネガス種、及びイエバエ等の家庭害虫に対して
も効力を示すものである。
【００１８】更に、貯蔵穀物におけるコクヌストモドキ
種、チャイロコメノゴミムシダマシ種、農作物における
ハダニ（Tetranychus sp.)、アブラムシ、アシルチオシ
フォン（Acyrthiosiphon）移動性の直翅類であるイナゴ
及び植物組織に生存している昆虫の幼虫などにも有効で
ある。また、土壌中の線虫を制御するための殺線虫剤と
して、また植物に寄生する根瘤線虫種などにも効果的に
使用され、農業上重要性がある。
種、チャイロコメノゴミムシダマシ種、農作物における
ハダニ（Tetranychus sp.)、アブラムシ、アシルチオシ
フォン（Acyrthiosiphon）移動性の直翅類であるイナゴ
及び植物組織に生存している昆虫の幼虫などにも有効で
ある。また、土壌中の線虫を制御するための殺線虫剤と
して、また植物に寄生する根瘤線虫種などにも効果的に
使用され、農業上重要性がある。
【００１９】本化合物は経口投与でき、その投与単位形
態として、カプセル、丸薬、あるいは錠剤として、ある
いは活性成分を含む水をベントナイトなどの懸濁剤及び
湿潤剤あるいは類似の賦形剤と共に、懸濁し分散した状
態の水薬としての形態をとるものである。一般的に水薬
には消泡剤が含まれている。水薬の処方は活性化合物を
約０．００１から約０．５％重量含むものであり、好ま
しくは約０．０１から約０．１％重量である。カプセル
及び丸薬には活性成分と共に、スターチ、タルク、ステ
アリン酸マグネシウム、あるいはリン酸２カルシウムな
どの担体が含まれている。
態として、カプセル、丸薬、あるいは錠剤として、ある
いは活性成分を含む水をベントナイトなどの懸濁剤及び
湿潤剤あるいは類似の賦形剤と共に、懸濁し分散した状
態の水薬としての形態をとるものである。一般的に水薬
には消泡剤が含まれている。水薬の処方は活性化合物を
約０．００１から約０．５％重量含むものであり、好ま
しくは約０．０１から約０．１％重量である。カプセル
及び丸薬には活性成分と共に、スターチ、タルク、ステ
アリン酸マグネシウム、あるいはリン酸２カルシウムな
どの担体が含まれている。
【００２０】本化合物を乾燥固形の単位用量として投与
する場合、常に本化合物の必要量が含まれているカプセ
ル、丸薬、あるいは錠剤が用いられる。これらの単位用
量形態は活性成分と適切かつ細かく区分けした希釈液、
充填剤、崩壊剤及び／あるいはスターチ、ラクトース、
タルク、ステアリン酸マグネシウム、植物性樹脂及び類
似物質とを十分にかつ均等に混合させることにより調製
される。この様な単位用量の処方においては、治療を受
ける宿主動物のタイプ、感染の度合い、及びタイプ、か
つまた宿主の体重などの因子により抗寄生虫剤の総重量
及びその内容成分は幅広く変化する。
する場合、常に本化合物の必要量が含まれているカプセ
ル、丸薬、あるいは錠剤が用いられる。これらの単位用
量形態は活性成分と適切かつ細かく区分けした希釈液、
充填剤、崩壊剤及び／あるいはスターチ、ラクトース、
タルク、ステアリン酸マグネシウム、植物性樹脂及び類
似物質とを十分にかつ均等に混合させることにより調製
される。この様な単位用量の処方においては、治療を受
ける宿主動物のタイプ、感染の度合い、及びタイプ、か
つまた宿主の体重などの因子により抗寄生虫剤の総重量
及びその内容成分は幅広く変化する。
【００２１】本発明の化合物を動物の飼料と共に投与す
るには、飼料中に充分に分散するか、調製済みの飼料の
上にふりかけるか、あるいは、ペレット形態で添加する
か、あるいは、飼料とは切り離して与えるものである。
別法としては、本発明の抗寄生虫化合物を非経口で動物
に投与するもので例えば、ルーメン内、筋中、気管内、
あるいは皮下等に活性成分を水溶性担体中に溶解、分散
した状態で注入投与するものである。非経口投与に際し
ては、その活性物質を許容しうる賦形剤、好ましくはピ
ーナッツ油、綿実油などの種々の植物油と適切に混合す
ることである。他の非経口賦形剤としては、ソルケター
ル、グリセロール、ホルマール及び水性非経口調剤とし
て用いられている有機製剤なども同様に使用される。本
発明の化合物は、投与用の非経口調剤中に溶解、懸濁さ
れる；一般的な処方として、本化合物の重量パーセント
は約０．５５％から約５％である。
るには、飼料中に充分に分散するか、調製済みの飼料の
上にふりかけるか、あるいは、ペレット形態で添加する
か、あるいは、飼料とは切り離して与えるものである。
別法としては、本発明の抗寄生虫化合物を非経口で動物
に投与するもので例えば、ルーメン内、筋中、気管内、
あるいは皮下等に活性成分を水溶性担体中に溶解、分散
した状態で注入投与するものである。非経口投与に際し
ては、その活性物質を許容しうる賦形剤、好ましくはピ
ーナッツ油、綿実油などの種々の植物油と適切に混合す
ることである。他の非経口賦形剤としては、ソルケター
ル、グリセロール、ホルマール及び水性非経口調剤とし
て用いられている有機製剤なども同様に使用される。本
発明の化合物は、投与用の非経口調剤中に溶解、懸濁さ
れる；一般的な処方として、本化合物の重量パーセント
は約０．５５％から約５％である。
【００２２】本発明の化合物の主たる適応面は、寄生
虫、例えば節足動物であるダニ類、シラミ、ノミ、及び
他の吸血性昆虫による家畜及び家禽の病気の治療及び／
あるいは予防及び治療のための抗寄生虫剤であるが、そ
の化合物は同時にヒトをも含めた他の動物中で寄生虫に
より引き起こされる病気の治療にも効果的である。好結
果をもたらすための使用しうる至適用量は、治療を受け
る動物種及び寄生虫感染や侵襲の度合いやタイプに左右
されるのは当然である。一般的に、この新規化合物に関
しては、経口投与なら、一度にまとめて、あるいは１〜
５日という比較的短い期間内で数回に分けて投与する総
用量が動物体重ｋｇ当たり約０．００１から約１０ｍｇ
のときに良い結果が得られる。本発明の新規化合物では
もっとも良好な寄生虫コントロールは約０．０２５から
約０．５ｍｇ／ｋｇ体重で単回投与された動物中で得ら
れる。再感染に対しては、繰り返し治療も行なわれる
が、それは寄生虫の種及び使用されている農業上の技術
にも依存している。これらの物質を動物に投与するとき
の技術というものは獣医学の分野ではよく知られるとこ
ろである。
虫、例えば節足動物であるダニ類、シラミ、ノミ、及び
他の吸血性昆虫による家畜及び家禽の病気の治療及び／
あるいは予防及び治療のための抗寄生虫剤であるが、そ
の化合物は同時にヒトをも含めた他の動物中で寄生虫に
より引き起こされる病気の治療にも効果的である。好結
果をもたらすための使用しうる至適用量は、治療を受け
る動物種及び寄生虫感染や侵襲の度合いやタイプに左右
されるのは当然である。一般的に、この新規化合物に関
しては、経口投与なら、一度にまとめて、あるいは１〜
５日という比較的短い期間内で数回に分けて投与する総
用量が動物体重ｋｇ当たり約０．００１から約１０ｍｇ
のときに良い結果が得られる。本発明の新規化合物では
もっとも良好な寄生虫コントロールは約０．０２５から
約０．５ｍｇ／ｋｇ体重で単回投与された動物中で得ら
れる。再感染に対しては、繰り返し治療も行なわれる
が、それは寄生虫の種及び使用されている農業上の技術
にも依存している。これらの物質を動物に投与するとき
の技術というものは獣医学の分野ではよく知られるとこ
ろである。
【００２３】本明細書中における化合物を動物の飼料の
一部としてあるいは飼料水中に溶解あるいは懸濁された
状態で投与するときは、組成物はそこに含まれる活性化
合物が、不活性担体あるいは希釈液中で十分に分散して
いる様に調製される。不活性担体とは、抗寄生虫剤とは
反応しない物質であり、かつ動物投与においても安全な
物質であるということを意味するものである。好ましく
は、飼料投与される担体ならば動物飼料の素材の一つが
良いであろう。
一部としてあるいは飼料水中に溶解あるいは懸濁された
状態で投与するときは、組成物はそこに含まれる活性化
合物が、不活性担体あるいは希釈液中で十分に分散して
いる様に調製される。不活性担体とは、抗寄生虫剤とは
反応しない物質であり、かつ動物投与においても安全な
物質であるということを意味するものである。好ましく
は、飼料投与される担体ならば動物飼料の素材の一つが
良いであろう。
【００２４】適切な組成物は、そこにおいて本化合物が
比較的多く存在し、直接動物に与えるあるいは飼料に追
加添加するのに適した飼料プレミックスまたは添加物を
含む。飼料に添加する場合は直接あるいは、中間的な希
釈あるいは混合段階を経て加える。組成物として適切な
担体あるいは希釈液の代表例として、ジスティラーズ！
乾燥グレーン、コーンミール、シトラスミール、発酵残
留物、カキ殻粉、小麦ショート、廃糖密ソリュブル、コ
ーンコブミール、食用豆粉飼料、大豆グリッツ、粉砕ラ
イムストーンなどがある。本発明の化合物はグラインデ
ィング、攪拌、ミリング、あるいはタンブリングにより
担体中に十分に分散される。組成物として、本化合物を
重量として約０．００５％から約２．０％を含むものが
特に飼料プレミックスとして適切である。動物に直接食
べさせる飼料添加物としては、本化合物の重量が約０．
０００２％から約０．３％を含むものである。
比較的多く存在し、直接動物に与えるあるいは飼料に追
加添加するのに適した飼料プレミックスまたは添加物を
含む。飼料に添加する場合は直接あるいは、中間的な希
釈あるいは混合段階を経て加える。組成物として適切な
担体あるいは希釈液の代表例として、ジスティラーズ！
乾燥グレーン、コーンミール、シトラスミール、発酵残
留物、カキ殻粉、小麦ショート、廃糖密ソリュブル、コ
ーンコブミール、食用豆粉飼料、大豆グリッツ、粉砕ラ
イムストーンなどがある。本発明の化合物はグラインデ
ィング、攪拌、ミリング、あるいはタンブリングにより
担体中に十分に分散される。組成物として、本化合物を
重量として約０．００５％から約２．０％を含むものが
特に飼料プレミックスとして適切である。動物に直接食
べさせる飼料添加物としては、本化合物の重量が約０．
０００２％から約０．３％を含むものである。
【００２５】このような添加物は、調製後の飼料が寄生
虫病の治療及び制御のために必要な活性化合物の濃度を
有するよう動物の飼料中へ添加される。本発明の化合物
の望ましい濃度は、特に使用される化合物と先に述べた
因子により変化するが、通常、期待しうる抗寄生虫作用
を示すには飼料中約０．００００１％から約０．００２
％の濃度をもって配合される。さらに、化合物が動物飼
料に添加される場合、発酵液からの乾燥菌糸体ケーキを
利用することができる。菌糸体は活性成分をより多く含
み、かつまた菌糸体の活性は測定可能なので、動物飼料
に直接添加することも可能である。
虫病の治療及び制御のために必要な活性化合物の濃度を
有するよう動物の飼料中へ添加される。本発明の化合物
の望ましい濃度は、特に使用される化合物と先に述べた
因子により変化するが、通常、期待しうる抗寄生虫作用
を示すには飼料中約０．００００１％から約０．００２
％の濃度をもって配合される。さらに、化合物が動物飼
料に添加される場合、発酵液からの乾燥菌糸体ケーキを
利用することができる。菌糸体は活性成分をより多く含
み、かつまた菌糸体の活性は測定可能なので、動物飼料
に直接添加することも可能である。
【００２６】本発明の化合物は、穀物の生育期におい
て、あるいはそれの貯蔵中において、打撃的な損害を与
える農業上の害虫に対しても、同様に有効である。化合
物はそのような農業上の害虫から効果的に生育期及び貯
蔵時の穀物を防御するために、スプレー、粉剤、エマル
ジョン等、周知の技術を用いて使用される。
て、あるいはそれの貯蔵中において、打撃的な損害を与
える農業上の害虫に対しても、同様に有効である。化合
物はそのような農業上の害虫から効果的に生育期及び貯
蔵時の穀物を防御するために、スプレー、粉剤、エマル
ジョン等、周知の技術を用いて使用される。
【００２７】本化合物の駆虫剤としての活性を測定する
には、実験の３日前に寄生虫に感染させたマウスに、個
々の化合物、化合物の混合物、濃縮抽出物、等を経口投
与する。最初の投薬から、１１，１２，１３日目に、マ
ウスの糞中の卵の検査を行う。そして次の日にマウスを
殺して、小腸基部に存在している寄生虫の数を測定す
る。感染・未投薬コントロール群と比較し、卵及び寄生
虫の数の十分な減少があった場合、活性化合物とみな
す。以下の実施例は本発明がより良く理解されるために
用意されたものであり、本発明を限定するものではな
い。
には、実験の３日前に寄生虫に感染させたマウスに、個
々の化合物、化合物の混合物、濃縮抽出物、等を経口投
与する。最初の投薬から、１１，１２，１３日目に、マ
ウスの糞中の卵の検査を行う。そして次の日にマウスを
殺して、小腸基部に存在している寄生虫の数を測定す
る。感染・未投薬コントロール群と比較し、卵及び寄生
虫の数の十分な減少があった場合、活性化合物とみな
す。以下の実施例は本発明がより良く理解されるために
用意されたものであり、本発明を限定するものではな
い。
【００２８】実施例１ Ａ．発酵 バチルス・ズブチリスＭＢ４９７４（ＡＴＣＣ５５０６
０）の凍結バイアル（２ｍｌ）を用いて、５０ｍｌの大
豆−グルコース培地の入った２５０ｍｌ容の三角フラス
コに接種した。種菌フラスコは回転振とう機上（２２０
ｒｐｍ）で２９．５℃で２４時間培養した。できた種菌
を２．５ｍｌづつ、５０ｍｌの大豆−グルコース培地の
入った２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種した。細胞は
１０μｇ/ ｍｌのイムノマイシン存在下で１８時間イン
キュベートして誘導した。ストレプトミセス・グリゼウ
スＨＣＡ−１８５（ＡＴＣＣ５５０７０）の凍結バイア
ル（２ｍｌ）を用いて、５０ｍｌの培地Ａの入った２５
０ｍｌ容の三角フラスコに接種した。種菌フラスコは回
転振とう機上（２２０ｒｐｍ）で２７℃で２４時間培養
した。できた種菌を２．５ｍｌづつ、５０ｍｌの変換培
地Ｂの入った２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種した。
１８時間後、細胞は１０μｇ/ ｍｌの１３−デオキシイ
ベルメクチンアグリコンに５時間暴露して誘導した。
Ｂ．ズブチリスＭＢ４９７４を含む５０ｍｌの培地、お
よびＳ．グリゼウスＨＣＡ−１８５を含む５０ｍｌの培
地中の誘導化休止細胞は一緒にして滅菌生理食塩水で２
回洗浄し、２５ｍｌの、１％グルコースを含む滅菌１０
０ｍＭＭＥＳバッファー（ｐＨ６．０）に懸濁した。以
下の構造式
０）の凍結バイアル（２ｍｌ）を用いて、５０ｍｌの大
豆−グルコース培地の入った２５０ｍｌ容の三角フラス
コに接種した。種菌フラスコは回転振とう機上（２２０
ｒｐｍ）で２９．５℃で２４時間培養した。できた種菌
を２．５ｍｌづつ、５０ｍｌの大豆−グルコース培地の
入った２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種した。細胞は
１０μｇ/ ｍｌのイムノマイシン存在下で１８時間イン
キュベートして誘導した。ストレプトミセス・グリゼウ
スＨＣＡ−１８５（ＡＴＣＣ５５０７０）の凍結バイア
ル（２ｍｌ）を用いて、５０ｍｌの培地Ａの入った２５
０ｍｌ容の三角フラスコに接種した。種菌フラスコは回
転振とう機上（２２０ｒｐｍ）で２７℃で２４時間培養
した。できた種菌を２．５ｍｌづつ、５０ｍｌの変換培
地Ｂの入った２５０ｍｌ容の三角フラスコに接種した。
１８時間後、細胞は１０μｇ/ ｍｌの１３−デオキシイ
ベルメクチンアグリコンに５時間暴露して誘導した。
Ｂ．ズブチリスＭＢ４９７４を含む５０ｍｌの培地、お
よびＳ．グリゼウスＨＣＡ−１８５を含む５０ｍｌの培
地中の誘導化休止細胞は一緒にして滅菌生理食塩水で２
回洗浄し、２５ｍｌの、１％グルコースを含む滅菌１０
０ｍＭＭＥＳバッファー（ｐＨ６．０）に懸濁した。以
下の構造式
【化１】 を有する１３−デオキシイベルメクチンアグリコンのＤ
ＭＳＯ溶液を最終濃度が５０μｇ/ ｍｌになるように加
えた。合体ブロスを回転振とう機上（２２０ｒｐｍ）２
７℃で１８時間インキュベートした。 Ｂ．単離と同定 全ブロスを同量の塩化メチレンで１回抽出した。塩化メ
チレン層を減圧下で蒸発乾固し、得られたオイルを移動
相に溶解し、ゾルバックスＯＤＳカラムを用いたＨＰＬ
Ｃで分析した。カラムは６０℃で８０％水性メタノール
により展開した。５−βおよび１３−βイベルメクチン
モノグルコピラノシド、１３−βイベルメクチンアグリ
コン、変換されなかった１３−デオキシイベルメクチン
アグリコンはそれぞれ標準品と比較した保持時間により
同定された。２４時間のインキュベーション後、ＨＰＬ
Ｃ分析から残存する１３−デオキシイベルメクチンアグ
リコンはわずかに５μｇ/ ｍｌであることが示された。
おもな生成物は１３−βイベルメクチンモノグルコピラ
ノシドＩであり、５−βイベルメクチンモノグルコピラ
ノシドII、１３−βイベルメクチンアグリコンがそれよ
り少ない量生成された。
ＭＳＯ溶液を最終濃度が５０μｇ/ ｍｌになるように加
えた。合体ブロスを回転振とう機上（２２０ｒｐｍ）２
７℃で１８時間インキュベートした。 Ｂ．単離と同定 全ブロスを同量の塩化メチレンで１回抽出した。塩化メ
チレン層を減圧下で蒸発乾固し、得られたオイルを移動
相に溶解し、ゾルバックスＯＤＳカラムを用いたＨＰＬ
Ｃで分析した。カラムは６０℃で８０％水性メタノール
により展開した。５−βおよび１３−βイベルメクチン
モノグルコピラノシド、１３−βイベルメクチンアグリ
コン、変換されなかった１３−デオキシイベルメクチン
アグリコンはそれぞれ標準品と比較した保持時間により
同定された。２４時間のインキュベーション後、ＨＰＬ
Ｃ分析から残存する１３−デオキシイベルメクチンアグ
リコンはわずかに５μｇ/ ｍｌであることが示された。
おもな生成物は１３−βイベルメクチンモノグルコピラ
ノシドＩであり、５−βイベルメクチンモノグルコピラ
ノシドII、１３−βイベルメクチンアグリコンがそれよ
り少ない量生成された。
【化２】
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成４年５月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:125 1:545） (72)発明者 シエイ−シユング トム チエン アメリカ合衆国，07751 ニユージヤーシ イ，モーガンヴイル，スコツト ドライヴ 12 (72)発明者 エドワード エス．イナミネ アメリカ合衆国，07065 ニユージヤーシ イ，ローウエイ，ラツセル アヴエニユー 376 (72)発明者 レイモンド エフ．ホワイト アメリカ合衆国，07726 ニユージヤーシ イ，イングリツシユタウン，ベケツト ロ ード 12
Claims (24)
- 【請求項１】 バチルス・ズブチリスとストレプトミセ
ス・グリゼウスを含み、かつ発酵基質として１３−デオ
キシイベルメクチンアグリコンを含む発酵培地。 - 【請求項２】 バチルス・ズブチリスがＡＴＣＣ５５０
６０である請求項１の発酵培地。 - 【請求項３】 ストレプトミセス・グリゼウスがＡＴＣ
Ｃ５５０７０である請求項１の発酵培地。 - 【請求項４】 バチルス・ズブチリスがＡＴＣＣ５５０
６０であり、ストレプトミセス・グリゼウスがＡＴＣＣ
５５０７０である請求項１の発酵培地。 - 【請求項５】 回収可能な量の１３−βイベルメクチン
モノグルコピラノシドを含む請求項１の発酵培地。 - 【請求項６】 回収可能な量の５−βイベルメクチンモ
ノグルコピラノシドを含む請求項１の発酵培地。 - 【請求項７】 回収可能な量の１３−βイベルメクチン
モノグルコピラノシドと５−βイベルメクチンモノグル
コピラノシドを含む請求項１の発酵培地。 - 【請求項８】 １３−βイベルメクチンモノグルコピラ
ノシドと５−βイベルメクチンモノグルコピラノシドの
製造方法であって、１３−デオキシイベルメクチンアグ
リコンをバチルス・ズブチリスとストレプトミセス・グ
リゼウスの各菌株を含む栄養培地中でインキュベート
し、回収可能な量の１３−βイベルメクチンモノグルコ
ピラノシドと５−βイベルメクチンモノグルコピラノシ
ドが得られるまでインキュベートを続けることを特徴と
する製造方法。 - 【請求項９】 温度が約２０℃から約４０℃である請求
項１の方法。 - 【請求項１０】 温度が約２４℃から約３７℃である請
求項１の方法。 - 【請求項１１】 温度が約２８℃から約３４℃である請
求項１０の方法。 - 【請求項１２】 ｐＨが約６．５から約８．０である請
求項１の方法 - 【請求項１３】 ｐＨが約６．８から約７．３である請
求項５の方法 - 【請求項１４】 １３−デオキシイベルメクチンアグリ
コンが初期に約０．１グラム/ リットルから約１．０グ
ラム/ リットルの濃度で存在する請求項１の方法。 - 【請求項１５】 １３−デオキシイベルメクチンアグリ
コンが初期に約０．１グラム/ リットルから約０．５グ
ラム/ リットルの濃度で存在する請求項７の方法。 - 【請求項１６】 インキュベーションが空気の存在下で
行なわれる請求項１記載の方法。 - 【請求項１７】 バチルス・ズブチリスとストレプトミ
セス・グリゼウスの少なくとも１種が変異株である請求
項１の方法。 - 【請求項１８】 両種とも変異株である請求項１０の方
法。 - 【請求項１９】 バチルス・ズブチリスがＡＴＣＣ５５
０６０である請求項１の方法。 - 【請求項２０】 ストレプトミセス・グリゼウスがＡＴ
ＣＣ５５０７０である請求項１の方法。 - 【請求項２１】 ストレプトミセス・グリゼウスがＡＴ
ＣＣ５５０７０である請求項１２の方法。 - 【請求項２２】 バチルス・ズブチリスが変異株である
請求項１２の方法。 - 【請求項２３】 ストレプトミセス・グリゼウスが変異
株である請求項１３の方法。 - 【請求項２４】 両種とも変異株である請求項１４の方
法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US59760390A | 1990-10-15 | 1990-10-15 | |
| US597603 | 1990-10-15 | ||
| US07/597,604 US5070015A (en) | 1990-10-15 | 1990-10-15 | Novel avermectins are produced from known microorganisms |
| US597604 | 1990-10-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0586065A true JPH0586065A (ja) | 1993-04-06 |
Family
ID=27082862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3262427A Pending JPH0586065A (ja) | 1990-10-15 | 1991-10-09 | 既知の微生物から生産される新規アベルメクチン |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0490474A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0586065A (ja) |
| AU (1) | AU8583091A (ja) |
| CA (1) | CA2053431A1 (ja) |
| NZ (1) | NZ240150A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9814622D0 (en) * | 1998-07-06 | 1998-09-02 | Biotica Tech Ltd | Polyketides,their preparation,and materials for use therein |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63264484A (ja) * | 1986-12-03 | 1988-11-01 | Sankyo Co Ltd | 新規ミルベマイシン類およびその製造法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ186851A (en) * | 1977-04-11 | 1984-12-14 | Merck & Co Inc | Glycosyloxy derivatives of milbemycin and parasiticidal compositions |
| US4203976A (en) * | 1978-08-02 | 1980-05-20 | Merck & Co., Inc. | Sugar derivatives of C-076 compounds |
| EP0185623A1 (de) * | 1984-12-21 | 1986-06-25 | Ciba-Geigy Ag | Milbemycin-Derivate zur Bekämpfung von Insekten und Parasiten |
| EP0235085A1 (de) * | 1986-02-20 | 1987-09-02 | Ciba-Geigy Ag | 13-Beta-Zuckerderivate von Milbemycinen, deren Herstellung und Verwendung gegen Ekto-und Endoparasiten am Nutztier oder an der Nutzpflanze |
-
1991
- 1991-10-08 NZ NZ240150A patent/NZ240150A/xx unknown
- 1991-10-09 EP EP19910309298 patent/EP0490474A3/en not_active Withdrawn
- 1991-10-09 JP JP3262427A patent/JPH0586065A/ja active Pending
- 1991-10-14 AU AU85830/91A patent/AU8583091A/en not_active Abandoned
- 1991-10-15 CA CA002053431A patent/CA2053431A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63264484A (ja) * | 1986-12-03 | 1988-11-01 | Sankyo Co Ltd | 新規ミルベマイシン類およびその製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0490474A3 (en) | 1992-07-08 |
| NZ240150A (en) | 1993-07-27 |
| CA2053431A1 (en) | 1992-04-16 |
| EP0490474A2 (en) | 1992-06-17 |
| AU8583091A (en) | 1992-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4378353A (en) | Novel C-076 compounds | |
| US4666937A (en) | Avermectin bioconversion products | |
| EP0204421B1 (en) | Antihelmintic macrocyclic lactones and their production by fermentation | |
| US5192671A (en) | Process for the glycosylation of avermectin compounds | |
| US5070015A (en) | Novel avermectins are produced from known microorganisms | |
| EP0212867A2 (en) | Antihelmintic avermectin derivatives produced by the fermentation of a microorganism | |
| US5015662A (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
| AU642295B2 (en) | 28-hydroxy ivermectin aglycone | |
| US5124258A (en) | Fermentation process for the preparation of ivermectin aglycone | |
| EP0205251A1 (en) | Antihelmintic macrocyclic lactones and their production by fermentation | |
| EP0214739A2 (en) | Anthelmintic avermectin derivative obtainable by fermentation | |
| AU646749B2 (en) | A process for the glycosylation of avermectin compounds at the 14a-position | |
| JPH0586065A (ja) | 既知の微生物から生産される新規アベルメクチン | |
| NZ230948A (en) | Avermectin derivatives, preparation by fermentation, pharmaceutical and insecticidal compositions thereof | |
| JPH0665279A (ja) | ５β−及び１３−βイベルメクチンモノグルコピラノシド | |
| US5250422A (en) | Biotransformation process for the production of invermectin derivatives | |
| JPH0698017B2 (ja) | 新規なイベルメクチン化合物の製造方法 | |
| EP0524686A1 (en) | A process for the 14a-hydroxylation of avermectin compounds | |
| US5478929A (en) | Bioconversion products of 27-hydroxy avermectin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 19950906 |