JPS5836957B2 - コウセイブツシツ ａ−２８０８６ ノセイゾウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質Ａ−２８０８６の製造法、更に詳しく
は因子Ａ、因子Ｂおよび因子Ｄを含む抗生物質Ａ−２８
０８６複合体の製造法に関する。

該抗生物質は抗細菌、抗糸状菌、抗ビールス、抗牛胸膜
肺炎菌（抗ＰＰＬＯ）、抗コクシジウム、殺昆虫、およ
び殺だに剤として有用であり、かつ反簡動物類の飼料利
用能率を増加させるために有効である。

本発明はストレプトマイシス・オーレオファシエンス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｕｒｅｏｆａｃｉｅ
ｎｓ ）ＮＲＲＬ５７５８またはストレプトマイシス・
オーレオファシエンス（ Ｓｔｒｅｐｓｏｍｙｃｅｓ
ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ ）ＮＲＲＬ ８０９２
を、該菌株の利用可能な炭素源、窒素源および無機塩類
を含有する培養基中で培養し、該生物によって培地中に
価値ある量の抗生物活性が現われるまで攪拌通気発酵条
件下で培養することより戒る構成因子Ａ、因子Ｂおよび
因子Ｄを含む抗生物質Ａ−２８０８６複合体を製造する
方法を提供せんとするものである。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａは白色の結晶状化合物（
アセトンー水から結晶化）であり、低級アルコール類、
ジメチルホルｌ８アミド、ジメチルスルホキシド、醋酸
エチル、クロロホルム、アセトンおよびベンゼンに可溶
であるが、ヘキサンには僅かに溶解し、水じは不溶性で
ある。

約９８〜１００゜Ｃで融解し、再凝固し、更に約１９５
〜？００℃で再融解する。

さらに本発明の抗生物質は下記の理化学的性状〔（ａ）
〜（ホ）〕を持っている。

（ａ） 分子量７６４（スペクトル測定法によって測
定）、 （ｂ） 元素分析値（近似値）、Ｃ、６６．６９％：
Ｈ、９．８５％；０、２３．１０％。

（Ｃ） 実験式二Ｃ４３Ｈ７０１１（質量スペクトル
分析法により測定）、 （ｄ）〔α）２Ｄ５０ ： ５ ４° （ Ｃ ＝
０． ２、メタノール）、 （ｅ）赤外線吸収スペクトル（クロロホルム中で測定）
において下記の識別吸収帯のピークが現れる。

２．８５、３．３４、５．８３、６．８２、７．２２、
７．５３（弱）、７．７８（弱）、８７５（強）、８９
５（強）、９．１５、９．５０（強）、９．５５（強）
、９．６０、９．８５、１０．１５、１０．４５１０．
７０（弱）ミクロン。

（ｆ） 紫外部吸収スペクトル（エタノール溶液）で
は２０ｍμ以下に末端吸収を示すだけである。

（ｇ） 核磁気共鳴スペクトル（重水素化クロロホル
ム中で測定）の特徴：δ６．０１、４．２１１４．１１
，３，９９、３，８９、３．８０、３．６７、３．６５
、３．５７、３．５５、２．８３、２．７６、２，７４
、２．６８、２．６６、２．５８、２．５６、２，３０
、２．２２、２．１７、２，１０、２．０５、１．９６
、ｌ．９０、１．８５、１．７０、１．６２、１．６０
、１．４７、１，３９、１．３１、ｌ．２５、１．１８
、０．９５、０．９３、０．９０、０．８８、０．８５
、０．７７、０．７５、０．７３、０．６８、０． ６
６ ｐｐｍ，（ｈ）８０％のヂメチルホルムアミド水
中においてｐＫａ値 ７．９の滴定し得る基を有する。

（ｉ） 以下のような格子間隔（単位二オングストロ
ーム）を持つ特徴あるＸ−４粉末回折のパターン（ Ｃ
ｕ 十十照射、１．５４０５λ照射、ニッケルフィルタ
ー）。

（ｊ） バチルス・ズブチリ，；＜ （ Ｂ ａｃｉ
ｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ ） ＡＴＣＣ ６
６ ３ ３株を検出生物とし、シリカーゲル上で、展開
溶媒としてベンゼンー醋酸エチル（３：２）の系で試み
た薄層クロマトグラフ法で０．２４のＲｆ値。

（ｋ） バチルス・ズプチリスＡＴＣＣ ６６３３
株を検出生物として用いた下表のペーパークロマトグラ
フ系において表に示すようなＲｆ値。

（１） 塩類およびエステル誘導体の形成可能な酸基
が１つ存在する。

− エステル化の可能な水酸基が少くとも１個存在する
。

本明細書において、（抗生物質Ａ−２８０８６）因子Ａ
なる用語は、前後の文章から矛盾のない限り、上記の因
子ＡおよびそのＣ２〜Ｃ６アシル・エステル誘導体なら
びにその生埋学的に許容される塩類を包含するものとす
る。

抗生物質Ａ−２ ８ ０ ８ ６因子Ｂは白色の結晶状
化合物（アセトンー水から結晶化）で、低級アルコール
類、ヂメチルホルムアミド、ヂメチルスルホキシト、醋
酸エチル、クロロホルム、アセトンおよびベンゼンに溶
解するが、ヘキサンには僅かしか溶解せず、水には不溶
である。

そして本物質は、下記（ａ）〜伽）の理化学的性状を具
えている。

（ａ） 約１５０〜１５３℃の融点、 （ｂ） 分子量７６２（高分解能の質量分析器で測定
）、（Ｃ） 実験式Ｃ４３Ｈ７００１１ （高分解能
の質量スペクトル法により測定）、 （ｄ）赤外線吸収スペクトル（クロロホルム中）におい
て次の識別吸収帯のピークが出る：２．８２、３，３０
、５，７７、５，８５、６．８０、７、２０、７．５０
（弱）、７．７２（弱）、７．８０（弱）、８．５７（
強）、８６８、８９０（強）、９．１０、９，５０、９
．８３（強）、９．９０、１０．１０、１０．１７（強
）、１０．４３（弱）、１０．８０（弱）、１ １．２
０ （弱）、１１．３５（弱）、１１．７３（弱）、
１２．０３（弱）ミクロン。

（ｅ） 紫外部吸収スペクトル（エタノール溶液）テ
は２２０ｍμに最大吸収ｃ Ｅ １％−１３７．５；１
傭 ε−１０、４７７）を示す。

（ｆ） 核磁気共鳴スペクトル（重水素化クロロホル
ム中）では次の特徴が見られる。

ａ７．２ｏ， ７．０ ９、６．２６、６，１５、４．
１９、４．１２、４．０５、３９５、３．８９、３．７
８、３６２、３，５９、３．５２、３．４８、２．８１
、２． ７ ３、２．６３、２．５４、２．５２、■，
９９、１，９１、１．８４、１，７１、１．６７、１．
６４、■．５５、１．４３、１．３３、１．１８、１．
１１、０．９６、０．９４、０．９０、０，８７、０．
８４、０．７７、０，７４、０． ６ ８ ｐｐｍ， （ｇ） バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ ６６３３
を検出微生物として用い、ベンゼンー醋酸エチル（３：
２）の系で行ったシリカゲル上での薄層クロマトグラフ
イーのＲｆ値は０．４２である。

（ｈ） バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ ６６３３
を検出微生物として用いて行ったペーパークロマトグラ
フ系におけるＲｆ値は次の如くである。

？ｉ） 塩類およびエステル誘導体を形戒しうる酸基
が１つ存在する。

（ｊ）ケ１・ン残基２餉、 （ｋ） ヒドロキシル残基が少くとも１涸存在する。

本明細書において、（抗生物質Ａ−２８０８６）因子Ｂ
なる用語は、前後の文章から矛盾のない限り、上記の因
子Ｂおよびその生埋学的に許容される塩類を包含するも
のとする。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは白色の結晶状の化合物
（アセトンー水から結晶化）である。

このものはメタノール、エタノール、ヂメチルホルムア
ミド、ヂメチルスルホキシド、醋酸エチル、クロロホル
ム、アセトンおよびベンゼンに溶解するが、ヘキサンに
は僅かしか溶解せず、水には不溶である。

本物質は９６〜９８℃で融解し、かつ次記の（ａ）−｛
ｍ）の性状を持っている。

（ａ） 分子量７７８（高分解能の質量スペクトル分
析法で測定） （ｂ） 元素分析値（近似値）、Ｃ、６７、５９％；
Ｈ、９３８％；０；２２．７７％、 （Ｃ） 実験式 Ｃ ４４ Ｈ７ ４ ０ １（高分
解能の質量スペクトル法で測定）、 （ｄ）〔α〕實 ：−５６° （ Ｃ ＝ ０． １、
メタノール）、 （ｅ） 赤外線吸収スペクトル（クロロホルム中で測
定）では下記の吸収帯ピークが見られる：２．８９、３
．３９、３４３、３．５０、５，８８、６．９０、７，
２７、７．６０、７．８４、９．００、９，２６、９．
６２、１０．３１、１０．５８、１ １．１０、１１．
４９ミクロン。

（ｆ）９５％の含水エタノールで紫外部吸収は観察され
ない。

（ｇ） クロロホルム中での核磁気共鳴スペクトルは
次の特徴がある、δ６，００、４．２０、４，１０、４
．００、３．９８、３．９２、３．８６、３，８３、３
．７９、３．６７、３．６４、３．５７、３．５４、２
．８８、２．８１、２．７１、２．６２、２．５８、２
．４８、２．４３、２．３７、２．２９、２，２１、２
．１５、２．１０、２．０４、１．９７、１．８９、■
．８３、１６７６、１．６８、１．６１、１．５８、１
，５５、１．４７、１．３９、１，３０、１．２５、１
、１８、０．９５、０．９０、０．８８、０．８４、０
．７４、０．６８ｐｐｍ０ （ｈ）ｓｏ％のヂメチルホルムアミド水の中で、８．６
７のｐＫａ値を持つ一関の滴定し得る基を有する。

（ｉ） 以下のような格子間融（単位二オングストロ
ーム）を有する特徴あるＸ一線粉末回折のパターン。

（Ｃｕ十十照射、１．５４０５λ、ニッケル・フィルタ
ー）。

（ｊ） バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ ６６３３
を検出生物として用い、下に示すようなシリカ・ゲル薄
層クロマトグラフ系に於で次の様なＲｆ値。

？）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ ６６３３を検出
生物として用い、下に示すペーパークロマトグラフ系で
求められる次のようなＲｆ値。

（１） 塩類およびエステル誘導体の形戒可能な酸基
が１個 （ホ）エステル化の可能な水酸基が少くとも１岡本明細
書において、（抗生物質Ａ−２８０８６）因子Ｄなる用
語は、前後の文章から矛盾のない限り、上記の因子Ｄお
よびそのＣ２〜Ｃ６のアシル・エステル誘導体、ならび
にその生理学的に許容される塩類を包含するものとする
。

今日、抗細菌剤は多数知られているが、なお引続き新し
い進歩的な抗生物質が要求されている現状である。

現今の抗生物質療法上の一問題として、抗生物質の間で
病原生物に対する効力に差異があるという事実があげら
れる。

またいま一つ、基準抗生物質に抵抗性を持つ生物株の発
生が問題とされてＬ・る。

さらに今一つ問題となるのは、罹病者が涸別的に、特定
の抗生物質から過敏症や毒性などに基づいて、しばしば
危険な副作用を受けるという事実である。

現今の療法にはこうした問題があるので、新抗生物質が
要求され続けるのである。

人間の病気治療に有用な新抗生物質の要求に加えて、家
畜病治療の分野においてもまた進歩した抗生物質が必要
となる。

重要な局面の一つとして、家禽や家畜類の生育を促進さ
せるのにも進歩した抗生物質が必要とされる。

例えば、生育の促進は病気を減少させることによって、
かつ飼料利用効率を増加させることによって達成される
。

家畜病治療学上、さらに特に、家禽飼育産業上、経済的
に重要性を持つ疾患の一つが、原虫病コクシジウム症（
ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ ）であることは周知のとこ
ろである。

コクシジウム症はエイメリア（ Ｅ ｉｍｅｒｉａ ）
またはイソスポラ（ Ｉ ｓｏｓｐｏｒａ ）の一種ま
たは多種による感染に起因する（概要は、米国アイオア
州、アメス、アイオア州立大学刊行、ビースターおよび
シュワルテ編纂の６デイジージズ・オブーポウルトリー
”第５版中のルンドおよびファーを参照）。

コクシジウム症に起因する莫大な経済的損失ならびに既
往の抗コクシジウム薬剤の不利益性という見地から、さ
らに優れた抗コクシジウム剤の探索が続けられている。

今一つ家畜業者に著しい経済的損失を与える疾患として
腸炎がある。

腸炎は幼鶏、豚、牛および羊に発生し、主として嫌気性
細菌、特にクロストリジウム・ベルフリンゲンス（ Ｃ
ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆ ｒｉｎｇｅｎｓ ）
とビルス類に起因する。

反劉動物の腸内中毒症、例えば羊の過食症はクロストリ
ジウム・ベルフリンゲンスの感染で惹起される一種の状
態である。

次に、牛のような反契動物の生育を促進させることが獣
医学での今一つの経済上の目標とされている。

飼料の利用能率を高めることにより生育促進を達成する
ことが特に関心の的となっている。

反契動物の飼料の主栄養分（炭水化物類）が利用される
機構はよく知られている。

該動物の第１胃内の微生物が炭水化物類を分解して単糖
類とし、更にこれらの単糖類をピルビン酸関連化合物に
変換するのである。

ピルビン酸塩は微生物学的作用により代謝されて醋酸、
酪酸あるいはブロピオン酸など、一括して揮発性脂肪酸
（ＶＦＡ）として知られるものを生成する。

更に詳細な論説についてはレング（フィリッグソンら畜
：フィジオロジー・オブ・ダイゼッション・アンド・メ
タボリズム・イン・ザ・ルミナント（英国ニューカッス
ル・アポン・タインオリエル出版社（１９７０年）刊の
４０８〜４１０頁））の論文がある。

ＶＦＡ利用の相対的効果は、フイードスタフス１９７１
年６月１９日号１９頁においてマッカラフにより、また
、Ｊ，Ａｎ， Ｓｃｉ，３３巻２８２頁（１９７１）
においてエスヶランド等により、ままた６ダイゼスチブ
・フイジオロジー・アンド・−ユートリション・オフ・
ルミナンッ”第２巻６２２〜６２５頁（１９７１）にお
いてチャーチ等によって議論されている。

醋酸塩や酪酸塩も利用されるが、プロピオン酸塩の利用
には重要な意義があり、その利用能率が著るしく低下す
ると動物はケトン症をひき起す。

従って動物を刺激して炭水化物から高い比率でプロピオ
ン酸を生成させ、これが動物の炭水化物利用効率を高め
させ、かつまたケトーシス症の影響を低減させるのであ
る。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤはポリエー
テル型抗生物質群の新しいメンバーである。

この群のメンバーの例としては、モネンシン（米国特許
第３５０１５６８号）：ダイアネマイシン〔ハミル、Ｒ
．Ｌ．；ホエーン、Ｍ，Ｍ．；ピッテンガー、Ｇ， Ｅ
， ；チャンバリン、Ｊ．：およびゴーマン、Ｍ．；ジ
ャーナル・オブ・アンテイバイオテイクス、２２巻１６
１頁（１９６９）〕ニゲリシン［Ｌ．Ｋ．スタインラウ
フ、マリー・ビンカートンおよびＪ．Ｗ．チャンバリン
、ビオヒミ力・ビオフイジカ・リサーチ・コムニケーシ
ョン ３３巻２９頁（ １ ９６８ ） 〕、およびサ
リノマイシン〔日本特許公告４ ７ −２ ５ ３ ９
１、１９７２年１０月２０日付、出願番号１９６２０
／１９７１：Ｄｅｒｗｅｎｔ Ｎｏ ， ７ ６ ９
６ ０ Ｔ１米国特許第３８５７９４８号、およびＨ
，キナシ、Ｎ．オタケ、■．ヨネハラ、Ｓ．サトーおよ
びＹ．サイトー、テトラヘドロン・レターズ、４”Ｊ巻
４ ９ ５ ５〜４９５８頁（１９７３）〕が含まれる
。

発酵学ならびに本明細書に於で使用せられるような゛抗
生物質複合体（ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｃｏｍｐｌｅ
ｘ ）”という用語は、一化学複合体を指すものではな
く、相伴って生成される涸々の抗生物質因子の混合体を
指すものである。

抗生物質複合体中に生成される涸々の因子の比率が、発
酵の条件によって変ることは、抗生物質の発酵生産に精
通する者なら是認できるであろう。

Ａ−２８０８６抗生物質複合体は、一新菌株ストレフト
マイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ５７５８を抗
生物質活性が程よく発生するまで攪拌通気発酵条件下で
培養することによって生産される。

Ａ−２８０８６抗生物質複合体は、また、ストレプトマ
イシス・オーレオファシエンスの今一つの新菌株ＮＲＲ
Ｌ ８０９２を培養することによってもまた生産され
る。

ストレプトマイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ
５７５８またはストレプトマイシス・オーレオファシ
エンスＮＲＲＬ ８０９２の何れによって生産された
場合でも、Ａ−２８０８６抗生物質複合体は発酵ブロス
ならびに菌糸体から磁性のある有機溶媒で抽出される。

抽出された抗生物質混合物は溶媒を濃縮して分離され、
濃縮物に過剰の石油エーテルを加えて不純物を沈降させ
、沢過し、かつそのＰ液を蒸発させると、Ａ−２８０８
６抗生物質混合物が得られる。

該抗生物質混合物はカラム・クロマトグラフ法によって
さらに精製され、かつ個々の因子に分離される。

Ａ−２８０８６化合物類は動植物体の病原となる生物の
生育を阻止する。

この阻止活性の一つの局面が、Ａ−２８０８６化合物類
の抗コクシジウム作用である。

このほか、Ａ−２８０８６化合物類は抗細菌一、抗ビー
ルスー、抗牛胸膜肺炎菌（抗−ＰＰＬＯ）、殺昆虫−、
殺だに一作用物質であり、かつ反銘動物類の飼料利用効
率を増加させる作用がある。

クロロホルム中でとった赤外線吸収スペクトルを図で表
わすと次のようである。

第１図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ 第２図 因子Ｂ 〃 第３図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの醋酸エステル
誘導体 第４図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのプロピオン酸
エステル誘導体 ？５図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの酪酸エステル
誘導体 第６図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エ
ステル誘導体 第７図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エ
ステル誘導体 第８図 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄ Ａ−２８０８６因子類は構造上互に関連性がある。

発酵の期間中に、少くとも４種類の抗生物質因子が併生
し、混合物として得られる。

因子類は相互に分離され、かつ因子Ａ，Ｂ、およびＤは
下文に記載するような個々の化合物として単離される。

Ａ−２８０８６因子類の混合物は大ていの有機溶媒に可
溶性であるが、水には不溶性である。

以下の項目にＡ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤの物理
的ならびにスペクトル的性質を記載する。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａはアセトンー水から結晶
する。

Ａ−２８０８６因子Ａは約９８〜１００℃で融解し、再
凝固して約１９５〜２００℃で再び融解する。

因子Ａの元素分析結果として、次のような平均百分組成
が得られている：Ｃ、６６．６９％；ｆ｛１９．８５％
：０、２３．１０％。

因子Ａには実験弐Ｃ４３ Ｈ７２ ０１が提案されてい
る。

質量分析法によって決定された、見かげ上の分子量は７
６４である。

クロロホルム中における因子Ａの赤外線吸収スペクトル
は付図（第１図）に示した。

次のような吸収帯のピークが観察される。

２６８５、３．３４、５．８３、６．８２、７．２２、
７．５３（弱）、７．７８（弱）、８７５（強）、８．
９５（強）、９．１５、９．５０（強）、９．５５（強
）、９，６０、９，８５、１０．１５、１０．４５、１
０、７０（弱）ミクロン。

因子Ａのエタノール中における紫外線吸収スペクトルは
２２０ｍμ以下に末端吸収があらわれるだけである。

重水素化クロロホルム中で測定したＡ− ２８０８６因子Ａの核磁気共鳴スペクトルに次の特徴が
ある： δ６．０１、４，２１、４」１、３．９９、３，８９、
３，８０、３，６７、３．６５、３．５７、３．５ ５
、２−８３、２．７６、２，７４、２．６８、２，６
６、２．５８、２．５６、２．３０、２．２２、２，１
７、２．１ ０， ２．０ ５、１９６、１，９０、ｌ
，８５、１．７０、１，６２、１．６０１１．４ ７、
１．３９、１，３１、ｌ２２５、１，１８、０．９５、
０．９３、０．９０、０．８８ ０．８５、０．７７
、０．７５、０． ７ ３ 、０．６８、０・６６ｐｐ
ｍＯ アセトンー水から結晶させた抗生物質Ａ−２８０８６因
子Ａは次のような特徴のＸ一線粉末回折パターンを示す
。

（Ｃｕ十十照射、１．５ ４ ０ ５λ、ーツケル・フ
ィルター ｄ は格子間隔（単位：オングストローム）
）。

抗生物質Ａ ２８０８６因子Ａの比旋光度は、 ※ ※温度２５℃で測定した時、−５４° （Ｃ＝０．２、
メタノール）で、この比旋光度は数回の測定に基く平均
値である。

８０％ヂメチルホルムアミド水中における因子Ａの電気
滴定法では、ｐＫａ値７，９を持つ滴定し得る基の存在
を示した。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａは種々の有機溶媒、（メ
タノール、エタノール、ヂメチルホルムアミド、ヂメチ
ルスルホキシド、醋酸エチル、クロロホルム、アセトン
およびベンゼン）に可溶性であるが、ヘキサンの様な極
性のない有機溶媒には難溶性であり、かつ水には不溶性
である。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａには、塩類およびエステ
ル誘導体の形成可能な−１固の酸基が存在し、かつエス
テル化の可能な水酸基が少くとも一つ存在する。

以上に列挙した物理学的性状に基いて、抗生物質Ａ−２
８０８６因子Ａの構造が提案されうるのである。

しかしながら、その構造決定は単に推定されたものであ
り、ここに提出された構造が単に一つの実験に基づく仮
説に基いて表現されたものであると理解されるべきであ
る。

Ａ２８０８６因子Ａの推定構造は式Ｉに示されている。

式ＣＩ） 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂは白色結晶状化合物（ア
セトンー水より）で、約１５０〜１５３℃の融点を持つ
。

高分解能の質量分析法によって測定された様に、因子Ｂ
は見かけ上７６２の分子量を持ち、Ｃ４３Ｈ７００１１
なる実験式が提示されている。

クロロホルム中での因子Ｂの赤外線スヘクトルは付図の
第２図に示さ．れており、次のような吸収帯のピークが
観察さる：２．８２、３．３ ０１５．７ ７、５．８
５、６．８ ０， ７．２ ０、７．５０（弱）、７．
７２（弱）、７．８０（弱）、８．５７（強）、８，６
８、８．９０（強）、９．１０、９．５０、９．８３（
強）、９．９ ０１１ ０．１ ０、１０．１７（強）
、１０．４３（弱）、１０．８０（弱）、１１２０（弱
）、１１．３５（弱）、１１．７３（弱）、１２．０３
（弱）ミクロン。

因子Ｂのエタノール中での紫外部吸収スペクトルは２２
ＱｍＢに最大吸収（Ｅ１％−１３７．５；ｇ１ｃＩＩｌ ＝１０．４７７）を示す。

Ａ−２８０８６因子Ｂの核磁気共鳴スペクトル（重水素
化クロロホルム中）では次の特徴が現われる。

δ７，２０、７．０９、６．２６、６．１５、４．１９
、４．１２、４．０５、３。

９５、３．８９、３． ７ ８ 、３．６ ２、３，５
９、３．５２、３．４８、２．８１、２．７３、２．６
３、２．５４、２．５２、１．９９、１．９１、１．８
４、１．７１，ｌ．６７、１，６４、１，５５、１．４
３、１．３３、１．１８、１．１１、０．９６、０．９
４、０．９０、０．８７、０．８４、０．７７、０．７
４、０． ６ ８ ｐｐｍ。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂは、例えばメタノール、
エタノール、ヂメチルホルムアミド、ヂメチルスルホキ
サイド、醋酸エチル、クロロホルム、アセトンおよびベ
ンゼンのような種々の有機溶媒に可溶性であるが、ヘキ
サンのような非極性有機溶媒には極めて僅かしか溶解せ
ず、また水には不溶性である。

Ａ−２８０８６抗生物質因子Ｂの化学構造は明かにされ
ていないが、これまでに得られた物理的化学的データは
、因子Ｂには唯一つのカルボン酸残基、２涸のケトン残
基および１個以上のヒドロキシル残基のあることを示し
ている。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは、ストレプトマイシス
・オーレオファシエン，’ＷＲＲＬ ５７５８によっ
て生成される時には微量因子である。

しかし、ストレプトマイシス・オーレオファシエンスＮ
ＲＲＬ ８０９２によって生成される場合には、Ａ−
２８０８６囚子Ｄは回収される場合には、Ａ−２８０８
６因子Ｄは回収された抗生物質活性の１０％に達する。

抗生物質Ａ−２８０８５因子Ｄは約９６〜９８℃の融点
をもつ白色結晶状物質（水一アセトンから）である。

高分解能質量分析により測定されたようにその見かけの
分子量は７７８である。

Ａ−２８０８６因子Ｄのナトリウム塩の質量スペクトル
中のピークの分子量は８００．５０５０であると観察さ
れた（ Ｃ４４Ｈ７３ ０１ １ Ｎａ ＝８００．５
０５０が計算値）。

Ａ−２８０８６因子Ｄの遊離酸の質量スペクトル中、７
７８に小いピークが、７ ６ ０．５ １ １ ７ （
Ｃ４４ Ｈ７２０１０ ＝７６０．５１２５が計算値
）に大きいピークが観察された。

遊離酸の質量スペクトルに於るｍ／ｅ７６０は分子イオ
ンから水を失った結果である。

従って因子Ｄの遊離酸の分子イオン組成はＣ４４Ｈ７４
０１１である。

Ａ−２８０８６因子Ｄの実験式としては、Ｃ４４Ｈ７４
０， ，が提示されている。

因子Ｄの元素分析の結果は次の百分組成を示す：Ｃ、６
７．５９％；Ｈ，９．３８％；０，２２．７７％。

Ｃ４４Ｈ７４０ ， ，としての理論的百分率組成は、
Ｃ、６７．８７％；Ｈ１ ９．５１％；０，２２．７７
％である。

Ａ−２８０８６因子Ｄの赤外線スペクトル（第８図）に
は次の観察される最大吸収が含まれている。

：２−８９、３．３９、３．４３、３．５０，５．８８
、６．９０、７、２７、７、６０、７，８４、９．００
、９．２６、９．６２、１０．３１、１０．５８、１
１．１ ０、１１４９ミクロン。

９５％含水エタノール中でＡ−２８０８６因子Ｄは全然
紫外部に吸収帯を示さない。

重水素化クロロホルム中でのＡ−２８０８６因子Ｄの核
磁気共鳴スペクトルは次の特性を示した：δ６．００，
４．２０、４．１０、４．００１３．９８、３．９２、
３．８６、３、８３、３．７９、３．６７、３．６４、
３．５７、３．５４、２．８８、２．８１、２． ７
１ 、２．６２、２．５８、２．４８、２、４３、２．
３７、２．２９、２．２１、２．１５、２．１０、２．
０４、１．９７、１．８９、１．８３、■．７６、１．
６８、１．６１、ｌ．５８、１．５５、１．４７、ｌ．
３９、１．３０，１２５、１．１８、０． ９ ５ 、
０．９０、０．８８、０．８４、０．７４、０． ６
８ ｐｐｍ ０アセトンー水から結晶させた抗生物質Ａ
−２８０８６因子Ｄは下記の特徴あるＸ一線粉末一回折
のパターンを持っている（Ｃｕ十十照射、１．５４０５
λ、ニッケル・フィルター、ｄ＝格子間隔（オングスト
ローム））。

温度２５℃で測定した時、抗生物質Ａ ※ ※２８０８６因子Ｄ（７）比旋光度は−５６° （Ｃ＝
０．１、メタノール）である。

８０％の含水ヂメチルホルムアミド中におけるＡ−２８
０８６因子Ｄの電気滴定結果ではｐＫａ値８６７を持つ
滴定し得る基の存在を認めた。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは、メタノール、エタノ
ール、ヂメチルホルムアミド、ヂメチルスルホキシド、
醋酸エチル、クロロホルム、アセトンならびにベンゼン
のような種々の有機溶媒に可溶性である。

Ａ−２８０８６因子Ｄは、ヘキサンのような非極性の有
機溶媒には極めて微量しか溶解せず、水には不溶である
。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄは塩類およびエステル誘
導体類を形成しうる一岡の酸基を有し、かつエステル化
のできる水酸基を少くとも一個有する。

以一ヒに列挙した物理学的性状に基づいて、抗生物質Ａ
−２８０８６因子Ｄの構造が提案されている。

ノ しかしながら、その構造決定は単に推定されたも
のであるから、ここに提示された構造が単に一つの実験
に基づく仮説を表したものであることを埋解されるべき
である。

Ａ−２８０８６因子Ｄの推定構造は式■に示される。

式［ＩＩ１ 〔式中、Ｒ，がＣＨ３、Ｒ２がＣ２Ｈ５であるがもしく
はＲ，がＣ２Ｈ５、Ｒ２がＣＨ３である。

〕検出生物としてバチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３
３を用いた時の種々の系のＦ紙クロマトグラフイーにお
ける抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ、ＢおよびＤＯＲｆ
値を第■表に掲げる。

第２表に、再び、バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３
３を検出生物として用い、シリカゲル（層の厚さ０．２
５ｍｍに予め塗布された平板、Ｆ一２５４、Ｅ．メルク
社製品）上で行った２種類の薄層クロマトグラフ系にお
ける抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤｏＲｆ
値を掲げる。

Ａ−２８０８６−Ｉと仮称した今一つの物質が抗生物資
Ａ−２８０８６複合体に伴って副生ずる。

このＡ−２８０８６−Ｉには微生物学的に活性はないが
構造的にＡ−２８０８６抗生物質類と関連性がある。

Ａ−２８０８６−Ｉは白色結晶性化合物（アセトンー水
より結晶化）であり、約１６０〜１６２℃の融点をもっ
ている。

Ａ−２８０８６−■と合成的に調製したＡ−２８０８６
因子ＡのメチルエステルのＮＭＲスペクトルや他の性質
ノ比較研究の結果、ｌ−２８０８６−ＩはＡ一２８０８
６因子Ａのメチルエステルないしは立体異性体のような
近縁化合物である証拠が得られた。

Ａ−２８０８６−Ｉは活性のＡ−２８０８６抗生物質因
子類に混ざって最初に沈殿してくるが、シリカゲル・ク
ロマトグラフ法によって他から容易に分離する。

溶出溶媒に醋酸エチルを用い、検出にバニリン噴霧試薬
（３％のバニリンのメタノール溶液に、本液１００ｒＩ
Ｌｌにつき濃Ｈ２ＳＯ４０．５ｒＬｌを添加したもの）
を用いるシリカゲル薄層クロマトグラフ法での概略のＲ
ｆ値は０．５３である。

バニリンを噴霧して加熱すると、Ａ−２８０８６−Ｉは
青色のスポットを与えるが、一方Ａ−２８０８６抗生物
質類は明るい桃色のスポットを与え、このものは速かに
暗褐色味を帯びた青色に変る。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤ、ならびに
本明細書記載の因子ＡおよびＤのアシル・エステル誘導
体は塩類を形成しうるものである。

生埋学的に許容される塩は、薬理学的にも許容される塩
、すなわち、温血動物に対する全体としての毒性が、塩
でない状態と比較して増加しない塩を意味する。

Ａ−２８０８６因子ＡおよびＢの代表的な、かつ適切な
アルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩にはナトリウム、
カリウム、リチウム、セシウム、ルビジウム、バリウム
、カルシウム、およびマグネシウム塩等がある。

またＡ２８０８６因子ＡおよびＢの適切なアミン塩とし
てはアムモニウム塩ならびに第四級のＣ１〜Ｃ４アルキ
ルアムモニウム塩およびヒドロキシーＣ２〜Ｃ４−アル
キルアムモニウム塩等がある。

アミン塩の具体的な例としては、Ａ−２８０８６因子Ａ
およびＢが水酸化アンモニウム、メチルアミン、第２級
プチルアミン、イソプロビルアミン、ヂエチルアミン、
ヂイソプロビルアミン、エタノールアミン トリエチル
アミン、３−アミノー１−プロパノール等と反応して生
成する塩がある。

Ａ−２８０８６因子Ａ， ＢおよびＤ、ならびに因子Ａ
およびＢのアシル・エステル誘導体のアルカリ金属およ
びアルカリ士類金属のカチオン性塩類は通常のカチオン
性の塩類の公知の調製法によって造られる。

例えば、遊離酸の状態の抗生物質因子ないしはエステル
誘導体を加温したメタノールまたはエタノールのような
適当な溶媒に溶解し、この溶液に、希望する無機塩基の
厳密な計算量をメタノール水に含ませた溶液を加えれば
よい。

こうしてできた塩は、溶媒の沢過や蒸発のような常例的
な方法によって単離できる。

有機アミン類で形成される塩も同様の方法で調製するこ
とができる。

例えば、アセトンのような適当な溶液中で、ガス状ない
しは液状のアミンを抗生物質因子の溶液に加え、溶媒と
過剰のアミンを蒸発除去すればよい。

家畜病治療薬剤学の技術でよく知られているように、抗
生物質で家畜を治療する場合、抗生物質の形状はあまり
重要ではない。

大抵の場合には、動物の体内の状態によって、薬物は服
用させられた状態以外の諸状態に変化する。

従って、服用させる場合の塩の様式は治療方法には意義
がないのである。

しかし経済上、便宜上ならびに毒性の理由から塩の状態
が選ばれるのであろう。

次にＡ−２８０８６因子Ａはアシル・エステル誘導体を
形成する。

エステル化は任意のＣ２〜Ｃ６酸無水物ないしは酸クロ
ライドで処理した時に、Ａ−２８０８６因子Ａの水酸基
群の一個所で起る。

例えば、このようなエステル類の典型的な調製法として
はＡ．−２８０８６因子Ａを、相手の酸の無水物と室温
で反応させる方法がある。

これらのエステル誘導体はまた抗生物質として有効であ
り、かつ飼料利用効率を増加させる薬剤としても有用で
ある。

以下の各項に、これらのＡ−２８０８６因子Ａのアシル
・エステル誘導体類の特性を記述する。

Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル・エステル誘導体は融
点約１００〜１０３℃の白色結晶性（アセトンー水より
）の物質である。

Ａ−２８０８６因子Ａアセチルーエステル誘導体の実験
式は？４５Ｈ７４０１で、分子量は約８０７であるが、
何れもＡ−２８０８６因子Ａに提案された実験式を基礎
にしたものである。

因子Ａのアセチル・エステル誘導体の元素分析値を示す
。

計算値、Ｃ４５ Ｈ７４ ０１２として、Ｃ、６６．９
７％；Ｈ、９．２４％；０、２３．７９％、実測値、Ｃ
、６７．６７％；Ｈ，８７１％；０，２３．１３％０Ａ
−２８０８６因子Ａのアセチルーエステル誘導体のクロ
ロホルム中でとった赤外線吸収スペクトルを挿入付図の
第３図に示した。

下記の極大吸収帯が観察される。

２．８５、３３６、３．３８（強）、５．８０、６，８
３、７，２５、７．５２（強）、７．６０（弱）、７．
８０（強）、８４５（強）、８８０（強）、８９５（強
）、９．１０（強）、９．２０、９．６３、９．８０（
強）、１０．１２（弱）、１０．２５（弱）、１０．５
０ミクロン。

エタノール中でのＡ−２８０８６因子Ａアセチルエステ
ルの紫外線吸収スペクトルでは末端吸収だけが観察され
た。

８０％の含水ヂメチルホルムアミド中におげるＡ−２８
０８６因子Ａアセチルエステル誘導体の電気滴定の結果
８５のｐＫａ値を持つ滴定し得る基の存在が示された。

Ａ−２ ８ ０８ ６因子Ａのプロピオニルエステル誘
導体は、融点約９６〜９８℃の白色結晶性（アセトンー
水から）の化合物である。

Ａ−２８０８６因子のプロピオン酸エステル誘導体は、
Ａ一２８０８６因子Ａについて提案された実験式に基く
と、その実験式はＣ４６ Ｈ７６ ｏ１で、分子量は約
８２１である。

因子Ａのプロピオン酸エステル誘導体の元素分析値の結
果から下記の百分率組成の値が得られた。

計算値、Ｃ４６Ｈ７６０１として、Ｃ、６７．２９％：
Ｈ、９．３３％；０、２ ３．３ ８％、実測値、Ｃ、
６６．０６％；■、９．１７％；０，２３．４１％。

Ａ−２８０８６因子Ａのプロピオン酸エステル誘導体の
クロロホルム中における赤外線吸収スペクトルを付図第
４図に示した。

下記の極大吸収が観察された。

２．８５、３，３３、３．３８（強）、３４５（強）、
５．７５（強）、５．８２、６．８１、７．２２、７３
０（強）、７．５０（弱）、７．６０（弱）、７．８
０， ８．４．３、８７５（強）、８９０１９．０５、
９、１５（強）、９．５０（強）、９．６３、９．８３
（弱）、１０．０５（強）、１０．１３、？０．２０（
強）、１０．４５、１０．６８ミクロン。

エタノール中でのＡ−２８０８６因子Ａのプロピオン酸
エステル誘導体の紫外線吸収スペクトルでは末端吸収だ
けが観察された。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの酪酸エステル誘導体は
、融点約９６〜９８℃の白色結晶性（アセトンー水から
）の化合物である。

Ａ−２８０８６因子Ａの酪酸エステル誘導体は、Ａ−２
８０８６因子Ａについて提案された実験式から推察され
るように、その実験式はＣ４Ｈ７８０１２で、分子量は
約８３５であり、Ｃ１ ６７．６０％；Ｈ，９．４１％
：Ｏ、２２．９９％の近似的組成を持っている。

Ａ−２８０８６因子Ａの酪酸エステル誘導体のクロロホ
ルム中における赤外線吸収スペクトルを付図の第５図に
示した。

下記の極大吸収が観察された。

２．８９、３．４０、３，４５、３．５ １ ， ５．
８ ５、５、９２（強）、５．９７（強）、６．９０、
７．３０、７−８４（弱）、８．５５、８８５（弱）、
９．０１（強）、９，２６、９．７６、９．９５、１０
．３１，１０．６４ミクロン。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘
導体は、約１７３〜１７５℃の融点を持つ白色結晶性化
合物（アセトンー水より）である。

Ａ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘導体は、
Ａ−２８０８６因子Ａの実験式から推察した実験式は、
Ｃ４８Ｈ８ｏＯ１、分子量約８４９で、Ｃ、６７．８９
％；Ｈ，９．５０％；０、２２−６１％なる近似元素組
成を持っている。

Ａ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘導体のク
ロロホルム中における赤外線吸収スペクトルを付図の第
６図に示した。

下記の極大吸収が観察された。

２．９０、３．４０、３．４５、３．５１、５．８７、
５．９２（強）、５．９９（強）、６，９１、７．３０
、７．６９（弱）、７．８７（弱）、８．１６、８．５
８、８．８５、（弱）、９．２６、９．７６、１０．０
０（弱）、１０．３１、１ ０． ６ ４ミクロン。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘
導体は、約１６３〜１６７゜Ｃの融点を持つ白色結晶性
化合物（アセトンー水より）である。

Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘導体は、
Ａ−２８０８６因子Ａとして提示された実験式から推定
した実験式Ｃ４９Ｈ８０１、分子量約８６３およびＣ，
６８．１８％；Ｈ１９．５８％；０、２２．２４％なる
近似元素組或を持っている。

Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘導体のク
ロロホルム中における赤外線吸収スペクトルを付図の第
７図に示した。

下記の極大吸収が観察された。

２．９０、３．４０、３．４５、３，５１、５．８７、
５．９２（強）、５．９７（強）、６．９０、７．３０
、７．６６（弱）、７．８４（弱）、８．ｌ６、８．５
８、８．８５（弱）、９．０５（強）、９．１７、９．
７２、９．９５、１０．２９、１０．６２ミクロン。

Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル化はＩＨ核磁気共鳴ス
ペクトルにおいて次のような変化の起ることが分った。

カルビニル共鳴が約４ ｐｐｍにおいて起り、約５．３
ｐｐｍだけ（正確な位置は種々のアシル誘導体で僅かに
変る）下の領域に移行する、その結果ビニル・プロトン
・シグナルも移行する。

これが下に示した部分構造中に現わされている変化の特
徴である。

（この図はＲはＣ１〜Ｃ５−アルキルを表わす。

）この部分構造は１Ｈ一同一核内共役解除（ホモタクレ
ア・デカツプリング）実験結果ならびに、醋酸およびプ
ロピオン酸・エステル誘導体からの１３Ｃ一核磁気共鳴
実験結果と全部一致する。

Ａ−２８０８６因子ＡのＣ２〜Ｃ６−アシル・エステル
誘導体類はメタノール、エタノール、ヂメチルホルムア
ミド、ヂメチル・スルホキシド、醋酸エチル、クロロホ
ルム、アセトン、およびベンゼンのような種々の有機溶
媒に溶解する。

しかしヘキサンのような非極性有機溶媒には僅かしか溶
解せず、かつ水には不溶性である。

Ａ −２ ８ ０ ８ ６のＣ２〜Ｃ６−アシル・エス
テル誘導体はどれも塩やエステル誘導体を形戒しうる酸
基を１＠有する。

本発明における新規抗生物質は、ストレプトマイシス・
オーレオファシエンスのＡ−２８０８６生産性を有する
菌株を、価値ある抗生物活性が産出されるまで、好気的
攪拌条件の下で適切な培養基中に培養することによって
生産される。

生成した抗生物質類は公知の種々の分離精製法によって
回収される。

次に、Ａ−２８０８６抗生物質の製造に有用な新型微生
物の一つは、トルコのアララト山上で採集された土壊試
料から分離された。

この生物は、シャーリング（Ｅ．Ｂ，）およびゴットリ
ブ（Ｄ．）によって“コオペラチブ・デスクリプション
・オブータイプ・カルチュアー・オブ・ストレプトマイ
シス、■、アテイショナル・スペシーズ・デスクリプシ
ョンズ・フロム・ファースト・アンドーセコンドースタ
デイズ“インターナショナル・ビウレチン・オブーシス
テマテイツク・バクテリオロジー．１８巻、２７９〜３
９２頁（１９６８）に記述されている如く、ストレプト
マイシス・オーレオファシエンス・ダツカー（ Ｓ ｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｕｒｅｓｆａｃｉｅｎｓ Ｄ
ｕｇｇａｒ ）の一菌株として分類されている。

この分類法は若干の付加的標準を添えてインターナショ
ナル・ストレプトマイシス・プロジェクト〔シャーリン
グ（Ｅ．Ｂ．）およびゴットリーブ（Ｄ）、メソツズ・
フォア・キャラクタリゼーション・オブ・ストレプトマ
イシス・スペシーズ．／インターナショナル・ビュレチ
ン・オフ・システマテイク・バクテリオロジー、１６巻
３１３〜３４０（１９６６））で推挙されている方法に
基くものである。

色彩名はＩＳＣＣ−ＮＢＳ法に従って選定したＣヶ’Ｊ
−（Ｋ，Ｌ．）およびジャツド（Ｄ，Ｂ）の“ザ・ＩＳ
ＣＣ−ＮＢＳ・メソッド・オブ・デジグネーチング・カ
ラー−アンド・ア・ディクショナリー・オブ・カラー・
ネームズ“Ｕ， Ｓ ．Ｄｅｐｔ， ｏｆ Ｃｏｒｒｍ
ｅｒｃｅ ，Ｃｉｒｃ．５５３、１ ９ ５ ５ 、Ｗ
ａｓｈｉｎｇｔｏｎ ，Ｄ， Ｃ．〕。

括弧内の数字や記号はトレスナーおよびバッカス式の色
彩系列を参照した〔トレスナー（Ｈ，Ｄ，）アンド・バ
ッカス（Ｓ．Ｊ．）、”システム・オブ・カラー・ホイ
ールズ・フォア・ストレプトマイシス・タクソノミー“
アプライド・ミクロバイオロジー・１１巻、３３５〜３
３８（１９６６）〕。

色命名表には下に線を引いた。

メルツおよびボウルのカラーブロックは括弧内に入れた
〔メルツ（Ａ）アンド・ボウル（Ｍ，Ｒ．） 、’ディ
クショナリー・オブーカラー“マツクグロウニヒル・フ
ック・コンパ二一、インコーパレーション、ニューヨー
ク、Ｎ．Ｙ．、〕。

培養菌は特に註を加えておらぬ限り３０℃で１４日間生
育させた。

Ａ−２８０８６生産菌株ＮＲＲＬ ５７５８の特性記
述 形態 胞子形成気菌糸は鉤状、輪状、および螺旋状のものから
成る。

典型的な屈曲直腸型の形態も観察される。

胞子は短くかつ円筒形で、１０〜５０涸の胞子が鎖状に
つながっている。

胞子は１．３μ×１．７５μの太さである（１．３μ〜
１．９５Ｘ１．３μの範囲）。

電子顕微鏡によって観察したところ、胞子の表面構造は
平滑である。

各種の培地上におげるＮＲＲＬ ５７５８の培養的特
徴 ・ＩＳＰ β２（酵母エキスー麦芽エキス）培地：発
育旺盛、裏面は中位の黄色〔１１Ｋ３〕、気菌糸の発生
は中位ないし良好、胞子形成、白色（Ｗ） １ ３ ｂ
ａおよび暗灰色（Ｇｙ） ３ ｉｈ 、溶解性色素な
し。

・ＩＳＰ β３（オートミール）培地；発育良好、裏
面は灰黄色［ｘＢ２）、気菌糸の生成は十分、暗灰色（
Ｇｙ）３ｉｈ、褐色溶解性色素少々。

・ＩＳＰ β４（無機塩類一殿粉寒天）培地；発育旺
盛、裏面は淡黄褐色［１２Ｅ５’ｌ、気菌子およぴ胞子
（Ｗ）紫がかった白色１３ｂａ ないし（Ｇｙ ）明る
い灰色ｄ、溶解性色素なし。

・ＩＳＰ β５（グリセリンーアスパラギン寒天）培
地二 発育良好、裏面は青味がかった黄緑色〔１０Ｂ１〕気菌
糸発生良好、胞子（Ｇｙ）黄灰色２ｄｃ、ないし明るい
灰赤褐色５ｆｅ 、溶解性色素なし。

・トマトーペーストオートミール寒天培地：発育旺盛、
裏面は淡黄褐色［１３Ｈ７）、気菌糸および胞子生成中
位ないし良好（Ｗ）白色ａないし（Ｇｙ）培地は灰色ｇ
：極微量の褐色溶解性色素。

・グリセリンーグリシン寒天培地： 発育旺盛、裏面は暗灰黄色［１２Ｉ６）、気菌糸および
胞子形戒良好（Ｙ）青味ある黄色２ｄｂ、溶解性色素な
し。

・葡萄糖一アスパラギン寒天培地二 発育旺盛、裏面は灰緑黄色［１２Ｅ２〕、気菌糸および
胞子多し（Ｇｙ）黄灰色２ｄｃ、極微量の褐色溶解性色
素。

・肉汁寒天培地： 生育良好、裏面は灰黄色［１２Ｂ２１気菌糸および胞子
あるも、生或貧弱のため色の指定なし、溶解性色素なし
。

・ベネットの寒天培地： 発育旺盛、裏面は灰黄色［１２Ｋ３］、気菌糸および胞
子生戒貧弱（Ｇｙ）黄灰色２ｄｃ、溶解性色素なし。

・リンゴ酸石灰（カルシウム）寒天培地：発育良好、裏
面は灰褐色［１５Ｃ８］、気菌糸および胞子形或なし、
褐色溶解性色素あり、接種位置透明。

・ツアベックの寒天培地： 生育貧弱、生育貧弱のため色の指定なし。

・エマーソンの寒天培地： 発育旺盛、裏面灰黄色Ｃ１１Ｊ．５ 〕、気菌糸および
胞子なし、溶解性色素なし。

●チロシン寒天： 生育旺盛、裏面淡いオリーブ褐色〔１４Ｃ４〕、気菌糸
および胞子多し、（Ｗ）ｂ（中央部）ないし（Ｇｙ）淡
褐灰色３ｆｅ（周辺部）、僅かな褐色溶解性色素。

・トリプトンー酵母寒天培地： 生育貧弱、色の指定なし。

次に、ＮＲＲＬ ５７５８菌は、標準処方に従って、
特別の生埋学的性質を調べた。

観察された性状と知り得た特徴は次の如くである。

さらに、ＮＲＲＬ ５７５８菌について行った炭素源
利用能なしらべた結果は下に示す如くで、菌の生育の度
合を示すのに用いた記号は、十 生育良好、炭素利用陽
性 （力 貧弱ないし十分（まずまず）の生育（ニ）生育微
弱、炭素利用、多分なし 生育せず、炭素利用せず 今一つの新規のＡ−２８０８６生産微生物は、化学的な
変異処理を施した後、一連の自然淘汰法によってストレ
プトマイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ ５７
５８から誘導したものである。

ＮＲＲＬ ８０９２として同一種と同定された本微生
物はまたストレプトマイシス・オーレオファシエンス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｕｒｅｏｆａｃｉｅ
ｎｓ ）ダガーの一菌株として分類した。

この分類は以前に記述されたストレプトマイシス分類法
ならびに類似の培養条件を使用したＮＲＲＬ ８０９
２菌の研究に基づ《。

これらの研究に於１規察されたＮＲＲＬ８０９２菌の特
徴を以下の諸項目に総括記述した。

Ａ−２８０８６生産菌株ＮＲＲＬ ８０９２の特性記
述 形態 ＩＳＰ β７培地（チロシン寒天）上で、本培養菌は
往々鉤状気菌糸（ ｈｏｏｋ ）を形成するが、主とし
て短い直立した胞子柄（ ｓｐｏｒｅｐｈｏｒｅ ）
を形或する。

胞子鎖は一連あたり１０胞子以下で、通常は−漣につき
４〜７胞子である。

短い、直立した胞子鎖が次の培地で観察された：ＩＳＰ
β３、ツアベック溶液寒天およびＩＳＰ β５ｏ
またエマーソンの寒天上では多数の集束菌糸が観察され
た。

チロシン寒天（ＩＳＰ β７）と葡萄糖−アスパラギ
ン寒天上で電子顕微鏡観察を行った。

胞子は平滑で、長さ１．２μ〜２．０μ、幅約１．０μ
の大きさの範囲で分布している。

平均的な胞子の大きさは１６μ×１．０μ。

各種培地におげるＮＲＲＬ ８０９２の培養的特徴： ・ＩＳＰ β２（酵母エキスー麦芽エキス）培地：発
育十分、裏面は淡黄褐色Ｃ １２Ｈ８１気菌糸十分、胞
子形或貧弱、気菌糸は淡灰色［１１ＡＩ）、溶解性色素
なし。

・ＩＳＰ β３（オー１・ミール）培地：生育まばら
、裏面透明、気菌糸なし。

溶解性色素なし。

・ＩＳＰ β４（無機塩一殿粉寒天）培地：発育中位
、裏面灰黄色〔１１Ｂ２〕、気菌糸に乏しくて、胞子形
成す、気菌糸は青味ある黄灰色Ｃ Ｉ ０ＡＩ ）、溶
解性色素なし。

・ＩＳＰ β５（グリセリンーアスパラギン寒天）培
地： 発育中位、裏面は青味ある黄色〔１０Ｆ２〕、気菌糸十
分、胞子形成貧弱、気菌糸は白色〔１０Ａ１）、溶解性
色素なし。

・トマト・ベース１・−オートミール寒天培地：発育中
位、裏面は灰色がかった緑黄色、気菌糸十分、胞子形成
中位で淡青灰色［ ５３Ａ２］、溶解性色素なし。

・グリセリンーグリシン寒天培地： 発育旺盛、裏面は灰黄色ＣＩＩＥＡ）、気菌糸中位で白
色〔１０Ａ１〕、胞子形成せず、溶解性色素なし。

・葡萄糖一アスパラギン寒天培地： 発育中位、裏面は淡黄色［１０Ｆ２］、気菌糸胞子形或
とも中位、白色〔１０Ａ１〕、溶解性色素なし。

・肉汁寒天培地： 生育まばら（ ｓｐａｒｓｅ ） 、裏面は青味ある黄
色［１０Ｂ２）、気菌糸なし、溶解性色素なし。

・ベネットの寒天培地： 発育十分、裏面の培地黄桃色Ｃ１１Ａ７〕、気菌糸極め
て貧弱、胞子形成なし、溶解性色素なし。

・リンゴ酸石灰寒天培地： 発育極めて不良、透明、気菌糸なし、溶解性色素なし。

・ツアベック液寒天培地： 生育極めて不良、裏面透明、気菌糸なし、溶解性色素な
し。

・エマーソンの寒天培地： 発育中位、裏面灰黄色［１１Ｉ５）、気菌糸点在す。

胞子形成なし、溶解性色素なし。・チロシン寒天培地： 発育中位、裏面は淡黄褐色［１２Ｈ６〕、気菌糸中位、
周辺は淡青灰色Ｃ５３Ａ２）、中心部は白色に近い、胞
子形成は中程度、溶解性色素なし。

・１・リプトンー酵母寒天培地： 生育極めて不良、透明、気菌糸なし、溶解性色素なし。

ＮＲＲＬ ８０９２菌はまた、標準処方に従って、特
定の生埋学的性質を調べた。

観察した性状と、知り得た特徴は次の如くである。

２５℃で旺盛に生育、十分な気菌糸生成、裏面淡褐色、
溶解性色素なし。

３０℃で生育旺盛、気菌糸十分、裏面淡褐色、溶解性色
素なし、３７℃で生育旺盛、気菌糸十分、裏面は褐色、
溶解性色素褐色、４０℃、生育旺盛、気菌糸はまばら、
裏面は赤褐色、溶解性色素深赤褐色あり、４５℃、生育
十分、気菌糸なし、裏面は赤褐色、中程度の赤褐色色素
。

次に、ＮＲＲＬ ８０９２菌について行った炭素源利
用能を吟味した結果は下に示す如くであり、用いた記号
は生育の度合を示す。

十 生育良好、利用能陽性 （１）生育弱ないし十分 （→ 生育微弱、利用能なしと推定 生育せず、利用能なし Ａ−２８０８６生産性のストレプトマイシス・オーレオ
ファシエンス株の若干の性質は、シャーリングおよびゴ
ットリーブにより記述されている生物の性質と異ってい
る。

これらの差異を第３表に総括表示した。

ＮＲＲＬ ５７５８菌とＮＲＲＬ ８０９２菌 との特異性の差異を第４表に総括した。

Ａ−２８０８６抗生物質類の生産に有用なストレプトマ
イシス・オーレオファシエンスの培養物は、寄託されて
、米国イリノイ州ペオリア６１６０４にある米国農務省
の農業研究サービスの北方市場取引ならびに栄養研究部
（ＴｈｅＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｍａｒ｛ｃｅｔｉｎｇ
ａｎｄ ＮｎｔｒｉｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＤ ｉｖ
ｉｓｉｏｎ ， Ｕ．Ｓ ．Ｄｅｐｔ ， ｏｆＡｇｒ
ｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
ｓｅｒｖｉｃｅ，ｐｅｏｒｉａ ， Ｉ ｌｌｉｎｏｉ
ｓ 、６ １ ６ ０ ４ ）の保管収集物の一部とな
っており、そこからＮＲＲＬ ５７５８およびＮＲＲ
Ｌ ８０９２なる寄託番号で寄託されており人手でき
る。

マタ、ストレフトマイシス・オーレオファシエンスＮＲ
ＲＬ ５７５８およびストレプトマイシス・オーレオ
ファシエンスＮＲＲＬ ８０９２は千葉市稲毛東５丁
目８番１号に住所を有する工業技術院微生物工業技術研
究所にそれぞれＦ Ｅ ＲＭＰ Ａ．３ ０ ９ ８
号およびＦ Ｅ ＲＭ −Ｐ 厘３０９９号として寄
託されている。

ストレフトマイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ
５７５８あるいはストレプトマイシス・オーレオファ
シエンスＮＲＲＬ ８０９２の生育は、多くの培養基
のうちの任意のものが用いられる。

しかしながら生産上の経済性、即ち収率の善し悪し、な
らびに生或物分離の難易をいう点で好適な培養基という
ものがある。

大規模な発酵で好ましい炭水化物源は、例へばタピオカ
のデキストリンと蔗糖であるが、その他葡萄糖、とうも
ろこし殿粉、果糖、マンノース、麦芽糖、乳糖等々もま
た用いることができる。

他にもコーン油、ピーナツト油、大豆油および魚油が有
利な炭素源となる。

好ましい窒素源は酵素で分解されたカゼインであるが、
ペプトン、大豆粉、棉実粉、グルタミン酸のようなアミ
ノ酸等等もまた用いられる。

培養基に加えられる無機栄養塩類としては、ナトリウム
ーマグネシウムーカルシウムー、アンモニウム、塩酸一
、炭酸一、硫酸−、硝酸一および同様なイオンを作るよ
うな従来の可溶性塩類がある。

微生物の生育と増殖に必要な微量要素もまた培地に含有
させるべきであり、かかる微量要素は通常、微生物の生
育要求に見合うだけの量は培地中の他の成分の夾雑物と
して混入している。

大規模な醗酵培養基には、泡立ちが問題となるなら、ポ
リプロピレン・グリコールのような消泡剤を少量（例え
ば０．２ｍｌ／Ｉｇ）添加することも必要であろう。

その他、絶対に必要ではないけれども、Ａ−２８０８６
生産性のストレプトマイセス・オーレオファシエンス株
の該抗生物質産生は、大豆油のような油の少量の添加に
より増強される事を付記しておく。

次に、Ａ−２８０８６抗生物質の実質上有意義な量だけ
生産するためには、タンク内で通気攪拌発酵するのが好
ましいが少量のＡ−２８０８６抗生物質なら振盪フラス
コ培養によって得られるであろう。

微生物を胞子の形態のままで大型タンクに接種すること
に伴なう抗生物質産生の時間的なずれ（ ｌａｇ ）の
ため、生育力のある種菌を接種することが好ましい。

生育力のある種菌とは微生物の新鮮で、活発に増殖して
いる培養物のことで、それには、少量の培地に胞子の状
態または菌糸片を接種して調製される。

この生育力のある種培養物を、更に大型タンクに移植す
る。

生育力ある種培養物の増殖に使用する培地は大型タンク
に用いるものと同一であってもよいが、またそれ以外の
培地も用いられる。

次に、本Ａ−２８０８６生産微生物は約２０〜４０℃温
度で増殖しうるが、約２７〜３０℃の温度に於てＡ−２
８０８６の最も好ましい産生が起るようである。

好気的攪拌培養では慣例として滅菌空気が培地に吹き込
まれる。

微生物を十分に増殖させるために、タンク生産で用いら
れる空気量としては通常毎分、培養液量の０．１容量以
上であることが好ましいとされている。

このＡ−２８０８６抗生物質を効果的に産生させるため
にタンク生産に使用する空気量としては、タンク中の培
養ブロスの０．２５容量以上であることが殊に好ましい
。

高度の溶解酸素のために該抗生物質の産生が抑圧低下す
るようなことはない。

次に、抗生物質生産に於ては、発酵期間中、培養ブロス
ないしは培養菌苔固形物を試料として、目的とする抗生
物質類に感受性のあることが知られている微生物を対象
とした抗生物活性活性試験によって追跡することができ
る。

本発明の抗生物質類の試験に有用な検定用生物の一つは
バチルスズブチリスＡＴＣＣ ６６３３である。

この生物学的検定法は寒天平板上でペーパー・ディスク
（ ｐａｐｅｒ −ｄｉｓｃ ； Ｐ紙平円板）を用い
ることにより軽便に遂行される。

次に、培養物無接種時の培地の当初のｐＨは、使用する
培地により多様である。

一般にそのｐＨは６．０〜７，５の範囲にあればよく、
発酵の終末期（生産物の収獲期）のｐＨはやや高まり、
６．５〜８．０の範囲となるのが普通である。

一般に、抗生物活性が検出されてくるのは発酵の二日目
からであり、通常約６〜１０日の間に最犬の成果が現わ
れてくる。

前記のＡ−２８０８６抗生物質は、通気攪拌発酵条件下
での産生に続き、発酵技術上公知の方法によって、発酵
液から回収することが出来る。

Ａ２８０８６産生微生物の発酵中に出来る抗生物活性は
菌糸塊および培養Ｆ液の何れにも見出される。

従って、ｔ過、抽出ならびに吸着クロマトグラフ法を含
む諸方法を組合せることによって、Ａ２８０８６抗生物
質類の最大限度の回収が達成されるのである。

発酵ブロスの全部ないしはそのｐ液からＡ−２８０８６
抗生物質類を分離するのに好ましい溶媒は醋酸エチルで
あるが、その他、通常用いられている溶媒類でも十分で
ある。

Ａ−２８０８６因子Ａ，ＢおよびＤを分離する特に有利
な方法の一つは全発酵ブロスのｐＨを約３．０位に下げ
ることである。

このｐＨ３．０では、Ａ−２８０８６因子Ａ，Ｂならび
にＤは菌子塊から都合よく沢別できる。

Ａ−２８０８６因子類を分離する今一つの有利な方法は
、例えば、重炭酸ナトリウムのような重炭酸塩を、ブロ
ス１リットル当りほぼ１グラムの計算で全発酵ブロスに
添加することである。

それによって、Ａ−２８０８６因子類は塩の形で菌糸塊
と都合よく分離されるのである。

該抗生物質類を菌糸塊から分離するために、メタノール
は好ましい溶媒であるが、その他の低級アルコール類や
ケトン類もまた用いられる。

次に共沸蒸留法もまたＡ−２８０８６抗生物質類の回収
に使用すると有利である。

この方法では、発酵ブロスに、水と適当な共沸混合物を
形成する有機溶媒が加えられる。

この溶媒一プロス混合液を共沸蒸留してブロスから少く
とも半量の水を除すると、Ａ−２８０８６抗生物質類の
溶存する水溶媒混合物が有機溶媒中に残ってくる。

不溶性の副生物はｐ過または遠心分離法のような適当な
方法で分離し、Ａ−２８０８６抗生物質類は溶媒の蒸発
、非溶媒の添加による沈降あるいは抽出法のような公知
の方法によって有機溶媒から回収される。

かかる回収方法を行うために水と適当な共沸混合物を形
成する有機溶媒には、例えばプチノレアノレコール、ア
ミルアルコール、ヘキシルアルコール、ベンジルアルコ
ール、醋酸ブチル、醋酸アミル、１・２−ヂクロロエタ
ン、３−ペンタノン、２ヘキサノン、ベンゼン、シクロ
ヘキサノン、トルエン、その他キシレン類等がある。

大規模な発酵製造工程では共沸蒸留法による回収が特に
有利である。

共沸蒸留液として捕獲された水と溶媒の両液は既知の技
法で分離し、更に以后の使用に回することができる。

またこのようにして除かれた水には汚染物が含まれてい
ないし、廃液処理操作を必要としない。

また、このようにして分離された溶媒は同じ工程に再利
用できる。

次に、抽出や吸着の操作を追加してＡ ２８０８６抗生物質の純化が進められるのである。

シリカ・ゲル、炭素、フロリジル（硅酸マグネシウムの
商標、フロリヂン社製品（米国フロリダ州タラハシー私
書函第９８９在））その他が有利に用いられる。

これとは別に、培養固形物は培養液の諸成分や菌糸が含
まれているので、抽出や分離を行はず、出来れば水分だ
け除いてＡ−２８０８．６抗生物質供給源として用いら
れる。

すなわちＡ−２８０８６の抗生物活性が出た後、培養ブ
ロスを凍結乾燥して直接に飼料のプレミックスに混合す
ることができるのである。

今一つの着眼として、培地中にＡ−２８０８６活性が生
じた后に、菌体を分離乾燥したものは直接に飼料プレミ
ックスに使用できる製品となる。

こうした用途のための菌体を分離する場合に、炭酸石灰
（約１ ０ ？／ｌ： ）を加えると、沢過し易く、改
良乾燥産品となる。

このように永年用いられて来た条件下で、これまで記述
されＮＲＲＬ ５７５８およびＮＲＲＬ８０９２と呼
称されて来たストレプトマイシス・オーレオファシエン
ス株は、抗生物因子Ａ２８０８６を主産物として産出す
る生物である。

その時々の発酵条件によって生成因子の比率は変ってく
るが、一般的には因子ＡはＮＲＲＬ５７５８株からの全
回収抗生物活性の９９％以上を占め、ＮＲＲＬ ８０
９２株からの全回収抗生物活性の９０％以上をしめてい
る。

Ａ−２８０８６因子ＢはＮＲＲＬ ５７５８株からの
残りの抗生物活性部の大部を占め、この際因子Ｄは微量
因子である。

これに反して、Ａ２８０８６因子ＤはＮＲＲＬ ８０
９２株からの全回収抗生物活性の約８〜１０％に上り、
この時は因子Ｂが微量因子である。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ， ＢおよびＤは円柱（
カラム）クロマトグラフ法、薄層クロマトグラフ法、そ
の他のような公知の方法を用いて個個のｆヒ合物として
相互に分離される。

例えば、シリカ・ゲル上での円柱クロマトグラフ法を用
い、ベンゼンー醋酸エチルのような、種々の溶媒混合物
で円柱を溶出することによって、因子Ａ， ＢおよびＤ
が分離される。

シリカゲル円柱にベンゼンー醋酸エチル溶媒混合物を用
いると、初めに因子Ｂが溶出し、因子ＡとＤはおくれで
溶出される。

これ迄に記述した様に、薄層クロマトグラフ法は溶出過
程を探知するのに軽便な方法である。

次にＡ−２８０８６ｆヒ合物類は動植物体に病原性のあ
る細菌や糸状菌の生育を阻止する作用がある。

下記の第５表にＡ−２８０８６の因子ＡとＢの微生物活
性を比較表示した。

試験方法は通常のディスク拡散法（ ｄｉｓｃｄｉｆｆ
ｕｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ）、〔６ｍ１ＩＬの吸取紙
を生産物１■／溶液１ ｍｌの溶液に浸す、被検生物を
接種した寒天平板上にこの吸取紙を置く方法〕である。

次に重要な局面のーっは、Ａ−２８０８６ｆヒ合物類が
嫌気性細菌の生育を阻止することである。

Ａ−２８０８６因子Ａが種々の嫌気性細菌を阻止する最
小阻止濃度（ＭＩ Ｃ ）を、標準の寒天稀釈法で測定
した結果を第６表に総括記載した。

終末は２４時間培養后に判定したものである。

次に、Ａ−２８０８６因子ＡのＣ２〜Ｃ６エステル誘導
体類はまた抗細菌ならびに抗糸状菌活性を持つものであ
る。

また、ある観点からすると、これらの誘導体は、ダラム
陽性菌に対する活性が因子Ａよりも増強されたという面
も見られた。

そこで、これらの誘導体の若干のものの相対的なダラム
陽性菌活性を、因子Ａの持つ活性と比較した。

幻照となる化合物類をＮ， Ｒ，クゼルおよびＦ．Ｗ，
カバナウが、ジャーナル・オブ・ファルマシューチカル
・サイエンス６０巻（５）、７６４〜７６７頁（１９７
１年）に記載する半自動ｆヒされたシステム（エランコ
社のオートターブ［Ｆ］式の微生物試験システム）上で
濁度測定試験法によって検査した。

このＡ−２８０８６抗生物質類の検定においては、次の
ようなテスト・パラメーターを用いた。

検定用の細菌スタフイ口コツカス・アウレウス（Ｈ−ヒ
ートレー）ＮＲＲＬ Ｂ−３１４を栄養培地（ｐＨ７
）中で３７℃で４時間培養したものを使用した。

被検試料および標準品はメタノールー水（１０：９０）
に溶解した。

標準品のＡ−２８０８６因子Ａを２、３、４、および５
ｍｃｇ／７７１ｌの濃度でオートタープ［Ｆ］・カラー
ゼル（ ．Ａｕｔｏｔｕｒｂ ＠ ｃａｒｏｕｓｅｌ
）にかげた。

検体化合物類は稀釈して１ ｍｌ当り約３〜４ ｍ ｃ
ｇの活性が含まれるようにしてからカラーゼルにかけた
。

標準品の活性と幻比して求められた検体化合物の相幻的
活性度を次に示す。

Ａ−２８０８６化合物類の抗微生物活性の今一つの有用
な局面はミコプラズマに対する活性である。

ＰＰＬＯとしてもまた知られているミコプラズマの種は
人間や種々の動物に病原性がある。

このＰＰＬＯ生物に則して効果のある薬剤は特に家畜生
産業から要望されている。

生体外でのプロス稀釈研究法で測定した種々のミコプラ
ズマに対する抗生物質Ａ−２８０８６の最低阻止濃度（
ＭＩＣ）を下の第７表にまとめた。

その１ｍｌあｔこりに１０ｍｃｇ程度の微量の抗生物質
Ａ−２８０８６を含んだ溶液でも動物をミコプラズマの
種から保護する外用消毒剤として有効である。

次にＡ−２８０８６ｆヒ合物類はまた、抗ビールス剤で
もある。

Ａ−２８０８６因子Ａは■型の小児麻痺ビールス（ ｔ
ｙｐｅ ＩＩＩ ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ ）、牛痘ビー
ルス（ ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ ） 、泡疹ビ
ールス（ ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ） およびセ
ムリキ・フォレスト・ビールス（ Ｓｅｍｌｉｋｉ Ｆ
ｏｒｅｓｔ ｖｉｒｕｓ ） に対して活性的であり
、これらはシミノフによって記載さレタ〔アプライド・
ミクロバイオ０ シ− ９ ８１）、６６〜７２頁（
１． ９ ６ １ ） ）試験法と類似の生体外プラー
ク抑制試験（ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｌａｑｕｅｓｕｐ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｅｓｔｓ ）により確証を得たも
のである。

Ａ−２８０８６因子Ａはまた、伝染性胃腸炎ビールス、
ニューカッスル病ビールスおよび感染性牛属鼻孔性気管
支炎ビールスに刻しても活性を示すが、これらも類似の
組織培養試験で確めたものである。

従って、ある面に於ては、Ａ−２８０８６「ヒ合物はど
れも皆、ビールスの抑制を目的として、経口的にも、局
所的にも、あるいは注射によっても補乳動物に投与する
ことができるのである。

ビールス病の予防まだは治療上有効な投薬の基準は、対
照となるビールスならびに薬物使用の目的が予防的か治
療的かに基き、投与は咄乳動物の体重１ｋｇに則し約１
〜５■であり、一定しないのが普通である。

以上のほか、Ａ−２８０８６ｆヒ合物を含有する液剤は
、できれば界面活性剤と共に、小児麻痺あるいは泡疹の
ような諸ビールスの存在している生体外棲息地の消毒に
も用いることができる。

かかる場合には約１〜１ ５ ０ ０ ｍｃｇ／ｍｌの
Ａ一２８０８６化合物を含有させた液剤がビールス類の
抑制に効果的である。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの急性毒性は、マウスの
腹腔内注射による投与法でそのＬＤ５ｏは７．１５■／
ｋｙである。

次にＡ−２８０８６１’ヒ合物類はまた殺虫剤でありか
つ殺たに剤でもある。

Ａ−２８０８６化合物類は昆虫類、例えばメキシコのピ
ーン・ビートル、ミルクウイード・バッグならびに家蝿
に刻して効力があるし、ツー・スポツテド・スパイダー
・マイト（ ｔｗｏ 一ｓｐｏｔｔｅｄ ｓｐｉｄｅｒ
ｍ ｉｔｅ ） とようなダニ類にも有効であり、
使用も５ ０ ０ ｐｐｍ程度の少量で足りる。

さらにまた、Ａ−２８０８６ｆヒ合物はぼうふら（ ｍ
ｏｓｑｕｉ ｔｅ ｌａｒｖａｅ ）にも有効で）使用
量は１ ｐｐｍの少量でよい。

このＡ−２８０８６（Ｌ合物の重要な一性質は、その抗
コクシジウム活性である。

例えば、飼育実験の結果、このＡ−２８０８６のどのｆ
ヒ合物でも０．００３％という少量をひよこ（雛鶏）の
餌に入れてやると体重増加が改善され、さらに０．００
５％という少量では、コクシジウム症原体に犯されたひ
よこの死亡を防ぎかつ損害数が減少する。

各種ノエイメリア属の病原体を与えたひよこ群におげろ
因子Ａの効力試５験の諸結果を第８表から第１０表に示
した。

家禽のコクシジウム症の予防ないし治療のためには、Ａ
−２８０８６化合物のどれかを、毎日経口的に、無毒で
而もコクシジウム原虫に有効な量を毎日経口的に鳥に投
与するのが好ましい。

鳥にＡ−２８０８６比合物を与える方法は多くあるが、
最も簡便なのは生理学的に許容できるような逓伝体と共
に与えること、特に好ましいのは鳥の摂取する飼料と共
に与える方法である。

また、Ａ２８０８６ｆヒ合物の適量を決定する上で種々
の因子が考慮されねばならないが、投与の割合は通常薬
物無添加飼料の０．００３ないし０．０４％の範囲、好
ましくは０．００５〜０．０２％の範囲にあるであろう
。

Ａ−２８０８６化合物類の今一つの重要な性質は、動物
の飼料利用効率を改善するという性能である。

例えば、Ａ−２８０８６ｆヒ合物類は発達した反倒機能
を持つ反倒動物類の飼料利用能率を改良するのである。

これまでにも論じて来た様に、反劉動物類における炭水
化物利用効率は、その動物のルーメン（反物胃）内の分
布生物を刺激してアセテートまたはブチレート塩よりも
むしろプロピオネートを生成させるように操作すること
によって高められる。

飼料の利用効率は、ルーメン中のプロピオン酸ｆヒ合物
の生或と濃度とを次の方法を用いて観察することにより
探知される。

先づ、ルーメン分泌物は、痩管（ ｆｉｓｔｕｌａ ）
を外科的にルーメン内に拡げて設置された雄の子牛から
得られる。

この子牛に穀類に富んだ飼料を与えて保育する。

ルーメン流動液の試料は四枚重ねのチーズクｏス（ ｃ
ｈｅｅｓｅｃｌｏｔｈ ）を透して浸み出させ、このＦ
液を集収する。

チーズクロスに残留した粒状物質は、初めのルーメン流
動液量にもどすのに十分な生理的緩衡液に浮遊させ、再
度浸出させる。

ジャーナル・オブ・デーリー・サイエンス、３８巻１２
２５〜１２３０頁（１９５５）中のチエン等の記載によ
れば、この際用いられる緩衝液は次の様な組成を持って
いる。

この２つの沢液を混合し放置して浮遊物質を表面に浮遊
分離させる。

透明層を分離し、同一緩衝液（ｉ：ｉ）で稀釈、而る后
ｐＨ６．８〜７．０の間に調整する。

稀釈されたルーメン液（ｌＱｍＡ’）を、上記の飼料４
０■、大豆蛋白質追加分１■、ならびに被検化合物を入
れた２５１１１ｌフラスコに加える。

一回の処理ごとに四重複するフラスコを用いる。

それぞれ、２組の４個のフラスコがまたコントロールに
用いられ、また０時間目のコントロールト培養１６時間
目のコントロールが使用される。

試験フラスコは何れも３８℃で１６時間培養する。

※※培養が終ると、各フラスコのｐＨを測定し、２５％
のメタ燐酸（２ｍ０を各フラスコに加える。

各試料は放置して沈澱させた後、上澄液をガスクロマト
グラフイで分析してプロピオネート、アセテート、およ
びブチレート化合物類を測定する。

コントロール以上にプロピオネート生成の増加の認めら
れたものが活性ｆヒ合物としての意義がある。

試験−ｆヒ合物の関連結果は推計学的にコントロールの
結果と比較する。

第１１表に処理フラスコ中の揮発性脂肪酸（ＶＦＡ）の
濃度とコントロール・フラスコ中の濃度との比を示す。

炭水ｆヒ物利用効率は、ルーメン（反Ｂ胃）の内容物の
標品を抜きとることが出来るようにルーメン中に痩管（
ｆｉｓｔｕｌａｓ ） を装置した動物で行われた
生体（ ｉｎ ｖｉｖｏ ）試験により更に解明される
。

第１２表に表示する試験結果は、それぞれ目方が約１０
００１ｂＳ，の痩管を取り付けた成熟した屠牛で行った
ものである。

２頭の子牛は正常食で飼育し、各処理群における４頭は
これと同じ飼料にＡ−２８０８６因子Ａを加えたもので
飼育した。

とり出した各１００ｍｌづつのルーメン流動液には、１
０％のメタ燐酸（１０．０ｍｌ）を添加し、試料を静置
し、しかる後澄明液をガスクロマトグラフ法で分析して
プロピオン酸濃度を測定した。

第１２表の結果は１４日間の処理期間中における５回以
上の平均をとったルーメン中のプロピオン酸濃度の平均
増率（パーセント）である。

この際のコントロールには大略２０モル・パーセントの
プロピオン酸があった。

なおその上に、羊の場合にもＡ−２８０８６因子Ａが飼
料利用効率を増進させる事を証拠づげることが、ｉｎ
ｖｉｖｏ試験で証明された。

これらは５６日間以上の期間をかげて実行し、その結果
は第１３表に総括した。

Ａ−２８０８６一因子一Ｄ一化合物類は抗ビールス剤で
ある。

Ａ−２８０８６因子ＤはメリーランドＢ型ビルス、■型
小児麻痺ビルス、ＣＯＥビルス、泡疹ビルス（ ｈｅｒ
ｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ） 、およびセミリキ・フオレス
ト・ビルスに刻して有効であり、これはシミノフの記載
〔アプライド・ミクロビオロジー、９巻１）６６〜７２
頁（１９６１），ｌと類似の生体外プラーク抑制試験に
よって確認された。

Ａ−２８０８６因子Ｄはまた、伝染性胃腸炎ビルス、ニ
ューカッスル病ビルス、ならびに感染性牛属鼻孔気管支
炎ビールスに有効であるが、これも同様の組織培養試験
により確認したものである。

か《の如＜Ａ−２８０８６一因子一〇（ヒ合物類がビル
スならびに嫌気性細菌の両者に刻して抑制活性を有する
事実は、該化合物類を雛鶏、豚、牛、ならびに羊の腸炎
の治療ないし予防用として有利ならしめるものである。

該Ａ−２８０８６一因子Ｄ（ヒ合物類はまた反例動物類
の腸内中毒症の治療にも有効である。

次に本発明にがかるＡ−２８０８６一因子一Ｄｆヒ合物
類の重要な性質の一つとして抗コクシジウム症活性があ
げられる。

ｉｎｖｉｔｒｏ での実験の結果、Ａ−２８０８６因
子Ｄはエイメリア・テネラに効く抗コクシジウム活性の
あることが証明された。

以下にその使用法を記載する〔詳細に関しては、エクス
ペリメンタル・パラシトロシ−３４巻１８９〜１９６頁
（１９７３）のＬ．Ｒ．マクダガルドおよびＲ．Ｂ，ガ
ロウエイの報告参照のこと〕。

寄生細胞の培養物はレイトン管（ Ｌｅｉｇｈｔｏｎｔ
ｕｂｅ）、プラスチック製の皿ないしその他の適当な培
養容器類を用いる簡易法によって調製する。

任意の適当な培地（イーグルの最少必要培地、アーレま
たはハンクの調和食塩水中ラクトアルブミン加水分解物
を加えたもの、培地１９９等）で２〜３日間生長させる
と、通常、適当な単層が生成して感染処理や薬物処理が
容易になる。

これらの研究にはひよこの腎臓細胞の一次培養物を用い
た。

生活力を有するエイメリア・テネラ （ Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ ）に感染したひ
な鳥の便からその接合子嚢を採取し、使用に先立って清
浄にして殺菌する。

この接合子嚢を懸濁し、懸濁液に通気発泡させるかまた
は羽根付シェーカーもしくはその他の適当な装置でおだ
やかに振盪しながら室温に保持して発芽させる。

発芽処理の間、細菌やかびの発育を防止するため、ニク
ロム酸カリウム、硫酸または他の薬品を使用することが
できる。

接合子嚢の外壁を機械的に破り、子嚢から出た種虫を活
動させるためにトリプシンおよび胆汗酸塩で処理するこ
とにより、子嚢から感染力を有する種虫を完全にはい出
させる。

容器中の細胞培養物に生活力のある種虫を導入すること
により、細胞培養物を感染させる。

次いでこれに試験化合物を導入することができる。

試験ｆヒ合物は好ましくは生理的食塩水中、１０％ジメ
チルホルムアミドを使用して導入する。

試験の終時点における抑制は無性生殖段階に刻する抑制
である。

感染９６時間後、培養物を固定、染色し、顕微鏡で観察
することによりその終時点を測定する。

第２世代としてのシゾント（ ｓｃｈｉｚｏｎｔ ）が
存在するか否か、単一細胞層に対する毒性が明らかであ
るか否かにより、その結果を活性（Ａ）、不活性（Ｎ）
または細胞毒素性（Ｃ）として記録する。

上記試験により証明されるＡ−２８０８６因子Ｄの抗コ
クシジウム活性を要約して第１４表に示す。

Ａ−２８０８６因子Ｄｆヒ合物の有する上記以外の特色
は反與動物の第一胃の機能を高めて飼料の利用効率を増
大せしめ得ることにある。

反興動物飼料中の主栄養或分（炭水化物）の利用機構は
よく知られている。

動物の第一胃中の微生物が炭水化物な単糖類に分解し、
この単糖類なピルビン酸＊＊化合物に変換する。

ピルビン酸ｆヒ合物は微生物による代謝作用により、揮
発性の脂肪酸（ＶＦＡ）として知られたアセテート、ブ
チレートまたはプロピオネートを形成する（より詳細に
をよ、フイリプソンら著：フイジオロジー・オブ・ダイ
ジエスチョン・アンド・メタボリズム・イン・ザ・ルミ
ナント（英国ニューカースル・アポン・タイン在オーリ
エル・プレス（１９７０年）刊）４０８〜４１０頁レン
グの記載参照）。

） ＶＦＡ利用の相幻的効率については、マツクク
ローフ（フードスタフス（ １ ９ ７ １．年６月１
９日）１９頁）、エスクランドら（ Ｊ． Ａｎ．Ｓｃ
ｉ，第３３巻２８２頁（１９７１年））、およびチャー
チら（デジエステイブ・フイジオロジー・アンド・ｉ
ニュートリション・オブ・ルミナンッ第２巻（１９７１
年）６２２および６２５頁の報告がある。

酢酸および酪酸ｆヒ合物が利用されるが、プロピオン酸
化合物の効率がより犬である。

加うるに、プロピオン酸化合物が非常に少ないときには
動物フ がケトン症に罹患する可能性がある。

それ故、有用な化合物は動物体内の炭水化物からより高
い量のプロピオン酸を産出するように刺激を与え、炭水
化物の利用効率を増大せしめ、またケトン症の罹患率を
減少させる。

５ 有用な化合物の第１胃中におけるプロピオン酸化
合物の生成および濃度に則する影響を因子Ａの場合と同
様な操作で観察することにより、その有用なｆヒ合物の
活性を測定することができる。

試験化合物の結果を苅照化合物の結果と統計学９ 的に
比較する。

第１５表はＡ−２８０８６因子Ｄで処理したフラスコ中
の揮発性脂肪酸濃度の苅照フラスコ中の揮発性脂肪酸濃
度の比を示すものである。

本発明の化合物はプロピオン酸化合物を増加させること
において典型的効果を有し、 それ故にこ のｆヒ合物を約０．０５〜５．５■／ｋｇ／日の割合で
反例動物に経口的に投与するとき、飼料利用効率を高め
ることができる。

本発明の化合物を約０．１〜２．５１ｎ９／ｋｇ／日の
割合で投与することにより最もよい結果が得られる。

本発明目的化合物の好ましい投与方法は、これを動物飼
料と混合する方法であるが、これを他の方法、たとえば
錠剤、ドレンチ剤、大丸薬、カプセル剤の剤型で投与す
ることができる。

これら種々の投与剤型は獣医薬理学的によく知られた方
法により製剤することができる。

個々の投与単位剤型は本発明化合物を処理すべき動物の
１日当固有の投与量に直接関連する量で含有させたもの
とすべきである。

家畜飼料と七〇トン当りＡ−２８０８６の３０１から成
る飼料組成物を肥育用家畜に与えることにより本発明化
合物を利用することができる。

この分野で知られているように、牛の飼料は他の飼料た
とえば家きんの飼料とは異なる。

牛の飼料は粗飼料たとえば綿実殻、トウモロコシサイレ
ージなどを含む。

加うるに、牛の飼料はより高率（しばしば１５〜２５％
）の非蛋白性窒素源を含有する。

通常、この非蛋白性窒素源は尿素である。前記のごとく
、本発明のＡ−２８０８６１ヒ合物は抗ビールス剤であ
り、また嫌気性菌、特にクロストリシウム・ベルフリン
ゲンス（ Ｃ ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇ
ｅｎｓ ）に刻して活性を有する。

それ故、にわとり、豚、牛、羊などの腸炎を処置し、予
防するため有用である。

またＡ−２８０８６ｆヒ合物は反劉動物の腸性中毒症を
処置するために有用である。

次に実施例を挙げて本発明の具体的実施態様を説明する
。

実施例 １ （Ａ） ストレプトマイシス・オーレオファシエンス
（ Ｓ， ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ ） ＮＲＲＬ
５ ７ ５ ８を使用するＡ−２８０８６の振盪フラ
スコ発酵二下記操作に従ってストレプトマイシス・オー
レオファシエンスＮＲＲＬ ５７５８の培養物ヲ作或
した。

すなわち、上記組成を有する寒天斜面培地にストレプト
マイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ ５７５８
を接種し、接種した培地を３０℃で６〜１０日間培養し
た。

菌体の生育した斜面培養物を牛血清で保護しながら滅菌
した白金耳でこすって胞子を散乱させた。

こうして得られた胞子と菌糸片の牛血清浮遊液を凍結乾
燥して６個のべレソトを造った。

得られた凍結乾燥ペレット１個を下記組戒の生育用培地
５０ｍｌに接種した。

２５０ｍｌ容のエルレンマイエルフラスコニ収められた
上記の接種済みの生育培地を、直径２インチの円弧運動
をする振盪機上で２ ５ Ｏｒｐｍの速度で旋回振盪し
ながら３０℃で２４時間培養した。

（Ｂ） ストレプトマイシス・オーレオファシエンス
ＮＲＲＬ ５７５８を使用するＡ−２８０８６のタン
ク発酵： 多量の接種菌を造るため、上記のようにして培養した生
育培養液１０ｍｌを前記の生育用培地と同じ組成をもつ
次の段階の生育培地４００ｍｌに接種、この二度目の接
種培地を２ｌ容のフラスコに入れ、直径２インチの円弧
運動式旋回振盪機上で２ ５ ０ ｒｐｍで２４時間３
０゜Ｃで培養した。

この二度目の生育培養液１ｌを下記組成の滅菌された生
産用培地’１ ０ ０ ｌに接種するためにこの培地は
１５〜２０ポンドの圧力で１２０℃に３０分間加圧殺菌
した後のｐＨは６．７であった。

このように調製して菌を植えた生産用培地を１６５ｌの
発酵タンク内で２９℃の温度で１０日間発酵させた。

この間発酵液には、毎分培養液量の０．４容量の割合で
無菌空気を通気した。

また培養液は２ ５ ０ ｒｐｍの割合で普通の攪拌器
で攪拌した。

実施例 ２ 下記組成のフラスコ培養基を用いること以外は実施例１
の方法に従い、Ａ−２８０８６抗生物質を生産した。

実施例 ３ ストレプトマイシス・オーレオファシエンスＮＲＲｆ，
５７５８によって生産されたＡ２８０８６抗生物質複合
体の分離： 実施例１に記載した方法によって得られた発酵液１３２
ｌ全部をｐ液助剤（ハイフロ・スーパーセル、硅藻土の
一種で、ジョンズーマンビル製造会社製品）で戸過し、
ｐ液９７１が得られた。

この沢過液はほぼ同量の醋酸エチルで抽出を試みた。

水層と醋酸エチル抽出液とを分離し、５００ｍｌぐらい
の量に濃縮した。

この濃縮醋酸エチル抽出物に過剰の石油エーテル（ Ｓ
ｋｅｌｌｙＳｏｌｖｅＦ；約１０ｌ）を加え、その結果
できる不用物質を沈殿させて分離した。

分離後のｔ液を減圧下で蒸発し、Ａ−２８０８６抗生物
質複合体６．９ｔを得た。

次に、菌体部に含まれるＡ−２８０８６抗生物質複合体
は、沢過した菌体を約半量のメタノールで２回抽出（６
２ｌと５９Ｊ）Ｌて得られた。

これらの２回のメタノール抽出液を合した後、減圧下で
メタノールを濃縮除去した。

この濃縮後に約１０ｌの水層が残る。

この水層を稀薄な水酸ｆヒナトリウム溶液でｐＨを約７
．５に調整した。

かくして得られた溶液をほぼ同量の醋酸エチルで２回（
１’と１０ｌ）抽出した。

該醋酸エチル抽出液を合した後、約４００ｍｌの量に濃
縮した。

この濃縮醋酸エチル抽出物を大過剰の石油エーテル中に
加えて不要物質を除去したが、その方法としては、沢過
培養液の濃縮抽出物について上に記載した方法を用いた
。

沢液中の菌体部から得たＡ２８０８６抗生物質複合体の
目方は２０．１’であった。

実施例 ４ Ａ−２８０８６中の個々の因子ＡおよびＢの単離： Ａ−２８０８６抗生物質複合体（実施例３に記載したよ
うに調製したもの）２３５？を約８０ｍｌのベンゼンに
溶解した。

このベンゼン溶液にシリカゲル円柱クロマドグラフ法を
応用した（９×１ ３ ０ ｃｍ． ８ ｌ ， Ｍａ
ｔｈｅｓｏｎ ｇｒａｄｅ ６ ２シリカゲル）。

吸着柱は種々の割合のベンゼンー醋酸エチル混合液で溶
出した。

次いで薄層クロマトグラフ法で溶出した。

溶媒系としてベンゼンー醋酸エチル（９０：１０）を用
いると、因子Ｂが最初に溶出し、個々の因子の一つとし
て単離された。

因子Ｂ （ ４ ３７１１ｇ）はアセトンー水で結晶し
、ｍｐ１５０〜１５３℃。

醋酸エチルの割合を徐々に増加しながらベンゼンー醋酸
エチル混合液で溶出を継続すると、因子Ａが溶出して来
た。

因子Ａを含む種々の分画を合併して減圧下で濃縮し、あ
とに残った残留物をアセトン約１５０ｍｌに溶解し、こ
のアセトン溶ｉＫ水約１５０ｍｌを加えた。

こうして得られた溶液に１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３に調節
した。

酸性にした該混合液を約１時間攪拌すると、その間に沈
殿が出来る。

この沈殿をｐ別してアセトン約１５０ｍｌに水約６０ｍ
ｌを加えたもので再結晶した。

生或した結晶は一夜真空乾燥し、因子Ａ約６６Ｌ？を得
た。

結晶の沢液かもアセトンを部分的に蒸発したところ、因
子Ａの二次的収得物約１．２′？が得られた。

実施例 ５ Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル・エステル誘導体の製
造： 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ７．４テをピリジン１５
０ｍｌに溶解、この溶液に無水醋酸５０ｍｌを添加した
。

この溶液を十分に混和し、ついで室温で放置した。

水２００ｍｌを加えて十分に混和し、この混合液を室温
で４時間放置した。

白色の固形物が沈殿するので、これを戸別し、水洗して
風乾した。

こうしで得た固形物をアセトン１００継に溶解し、次い
でこのアセトン溶液を真空下に蒸発乾燥した（この操作
を３回くりかえした。

）。こうして得られた残渣はアセトン１００ｍｌ−水５
０ｍｌから結晶させ、Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル
エステル誘導体６１４グを得た。

融点１００〜１０３゜Ｃ０ 実施例 ６〜９ 実施例５の方法により、ピリジンの存在の下で無水プロ
ピオン酸を因子Ａに反応させ、抗生物質Ａ−２ ８ ０
８ ６因子Ａのプロピオニル・エステル誘導体を得た
。

融点９６〜９８℃。実施例５の方法に従い、ピリジンの
存在の下で因子Ａを無水ｎ一酪酸と反応させ、抗生物質
Ａ２８０８６因子Ａのｎ−ブチリル・エステル誘導体を
得た。

融点７９〜８１゜Ｃｏ実施例５の方法により、ピリジン
の存在の下で因子Ａを無水カプロン酸と反応させ、抗生
物質Ａ−２８０８６因子Ａのｎ一カプロイル・エステル
誘導体を製造した。

融点１６３〜１６７℃。実施例５の方法に従い、ピリジ
ンの存在の下に因子Ａを無水きつそう酸と反応させ、抗
生物質Ａ一２８０８６因子Ａのｎ−バレリル・エステル
誘導体を製造した。

融点１７３〜１７５゜Ｃ０実施例 １０ Ａ−２８０８６因子Ａのナ１・リウム塩の製造：抗生物
質Ａ−２８０８６因子Ａ５００■をアセトン５’Ｑｍｌ
に溶解した。

この溶液に水５０ｍｌを加え、さらに５Ｎの水酸化ナト
リウム溶液を加えて液のｐＨを１０．５〜１１にした。

こうして得られた溶液を１時間攪拌し、次いで醋酸エチ
ルで抽出した。

醋酸エチル抽出部を真空下に蒸発乾固した。残渣をアセ
トンー水の溶液から沈殿させ、Ａ２８０８６因子Ａのナ
トリウム塩３７８ｍ９を得た。

融点１２０〜１２３゜Ｃ０ 実施例 １１〜１５ 実施例ｉｏの方法を用いて、抗生物質Ａ ２８０８６因子Ａ（５００■）と飽和水酸１ヒバリウム
溶液とから、抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのバリウム
塩３６９■を製造した。

融点１８８〜１９０℃。

実施例１０の方法を用いて、抗生物質Ａ一２８０８６因
子Ａ（５００■）と５Ｎの水酸化カリウム溶液とから３
６３■のＡ−２８０８６因子Ａのカリウム塩を製造した
。

融点１６５〜１６７゜Ｃｏ 実施例１０の方法を用い、抗生物質Ａ一 ２８０８６因子Ａ５ ０ ０ｍ９とＩＮ水酸化セシウム
とから５ ４ ０ ｍ９のＡ−２８０８６因子Ａセシウ
ム塩を得た。

融点１９０〜２１０゜Ｃ０実施例１０の方法により、抗
生物質Ａ ２８０８６因子Ｂと５Ｎ水酸ｆヒナトリウムとから抗生
物質Ａ−２８０８６因子Ｂのナトリウム塩を製造した。

実施例 １６ ストレプトマイシス・オーレオファシエンス（ Ｓ．
ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ ） ＮＲＲＬ ８ ０
９ ２を用いるＡ−２８０８６の振盪フラスコ発酵二下
記の組戒の寒天斜面培地でストレプトマイシス・オーレ
オファシエンスＮＲＲＬ ８０９２の培養物を製造し
た。

すなわち、この斜面培地にストレプトマイシス・オーレ
オファシエンスＮＲＲＬ ８０９２を接種し、接種培
地を３０℃で約７日間培養した。

菌の生育した斜面培養物を無菌の牛血清で保護しながら
殺菌した白金耳でこすって斜面培養物から胞子と菌糸の
浮遊液を調製した。

こうして出来た浮遊液を凍結乾燥し６個のペレットを調
製した。

こうして造った凍結乾燥ペレットの１個を下記組成の生
育用培地５０ｙｄに接種するのに用いた。

２５０ｍｌ容のエルレンマイエル・フラスコ中の菌を接
種した生育培地を、２インチの円弧運動する旋回式振盪
機上で２ ５ Ｏ ｒｐｍの速度で、４８時間３０℃で
培養した。

次に、下記組成の発酵用培地５ｏｍｌに、上記の菌体の
生育した培地（９．５ｍｌ、１パーセント）を接種使用
した。

実施例 １７ ストレプトマイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ
８０９２を用いたＡ−２８０８６のタンク発酵： Ａ−２８０８６の振盪フラスコ発酵法として実施例１６
の冒頭に記載した方法をタンク発酵の場合にも適用した
。

多量の接種菌を造るために、菌を培養した生育培地１０
ｍｌを同じ組成の次の段階の生育培地４００ｍｌに植え
つげるのに使用した。

２ｌ容のエルレンマイエル●フラスコに入れたこの次段
階の培養液を、２インチの円弧で旋回する振盪機に載せ
２ ５ ０ ｒｐｍで２４時間３０℃で培養した。

この菌を培養した二次的生育培地ｓｏｏｍｚを下記の組
或をもつ無菌の発酵用培地１ ００Ｊに接種するのに用
いた。

この培地のｐＨは、１５〜２０ポンドの圧力で３０分間
１２１゜Ｃで加圧殺菌した後６．８±０．１であった。

菌の接種された生産用培地は、容量１６５ｌの発酵タン
ク中で１０〜１２日間２８±１ ’Ｃで発酵させた。

また該発酵培地には毎分培養液の０．４容量の割合で無
菌空気を通気した。

またこの培養液は３ ０ ０ ｒｐｍの割合で普通の攪
拌機でかきまぜた。

実施例 １８ 下記組成の振盪フラスコあるいはタンクによる生産培地
を使うこと以外は実施例１７の方法に従ってＡ−２８０
８６抗生物質を生産した。

実施例ｌ７に記載した如く、加圧法により殺菌した後の
培地のｐＨは６．４であった。

実施例 １９ ストレプトマイシス・オーレオファシエンスＮＲＲＬ
８０９２によって生成されたＡ２８０８６抗生物質複
合体の分離： 実施例１７に記載した方法によって得られた全発酵液６
０リットルに希ＨＣＩ を加えてｐＨ３に調整した。

こうして出来た溶液を沢過助剤（ Ｈｙｆｌｏ Ｓｕｐ
ｅｒ − ｅｅｌ ，硅藻土の一種、Ｊ ｏｈｎｓ −
Ｍａｎｖｉｌｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏｒｐ ．
）を用いて沢過した。

分離した菌糸塊を３０Ｊのメタノールで抽出し、抽出液
には１． ５ ６ ｋｇのＮａ ＨＣ Ｏ ｓを攪拌し
ながら加えて行った。

この抽出液を分離した後、菌糸塊を更に３０ｌのメタノ
ールで再度抽出した。

両メタノール抽出液を合併し、メタノールを除去するた
めに真空濃縮した。

残留水溶液約７ｌを希ＨＣｌ でｐＨ７．５に調整した
。

こうして得られた溶液を醋酸エチル７ｌづつで２回抽出
した。

この醋酸エチル抽出液を合併し真空濃縮して油状の残渣
を得た。

この油状残留物をアセトン１５００ｍｌに溶解し、この
アセトン溶液に水１５００ｍｌを添加した。

こうして出来た溶液を希ＨＣＩ でｐＨ ３に調節し
て１時間攪拌した。

生成して来た沈殿を？別し、次いでアセトン１５００ｍ
ｌに溶解し、この溶液に水４００ｒｎｌを加えた。

こうして出来た溶液を結晶を折出させるために１６時間
放置した。

生成した結晶を沢刑し真空乾燥したところ、Ａ−２８０
８６因子ＡおよびＤならびにその他の結晶状の不純物を
含んだ粗結晶状の生成物７４１を得た。

この粗結晶状生成物４０？を約２５０ｍｌのベンゼンに
溶解した。

次いでこのベンゼン溶液にシリカゲル円柱クロマトグラ
フ法を適用した（９−×１２０−ＣｒｒＬ円柱： Ｇｒ
ａｃｅ−Ｄａｖｉｄｓｏｎ等級６２のシリカゲル使用）
。

円柱は下記の各溶媒４０ｌづつで順次溶出した。

■）ベンゼン ２）ベンゼン：醋酸エチル（９：１） ３） ／／ ／／ （４：１）４）
／／ ／／ （７：３）５）
／／ ｔｔ （ １ ：ｌ ）６）醋
酸エチル ７）メタノール これらからｌｌづつの分画を収集した。

各部分毎に溶出ｆヒ合物を同定するために、バチルス・
ズブチリスの生育阻止試験法と薄層クロマトグラフ法と
による検査を行った。

Ａ−２８０８６Ｉはベンゼン：醋酸エチル（４：１）で
溶出された。

Ａ−２８０８６因子Ｂはベンゼン：醋酸エチル（７：３
）で溶出された。

Ａ−２８０８６因子ＡとＤとはベンゼン：醋酸エチル（
７：３および１：１）で得られた部分（１１９〜１５６
までの部分）に溶出された。

これらの部分を合併し、真空下で蒸発乾燥した。

こうして得られた残渣をアセトン５００ｍｌに溶解した
。

このアセトン溶液に水５００ｍｌを加え、且つ、この溶
液を稀ＨＣＩ でｐＨ３に調節し、１時間攪拌した。

生成した沈殿を沢別し、さらにアセトン５００ｍｌ一水
１８０ｒｆＬｌから結晶させた。

こうして出来た結晶は沢別して真空乾燥したところＡ−
２８０８６の因子ＡおよびＤの混合物２０．１１が得ら
れた。

実施例 ２０ 因子ＡおよびＤの単体の分離と精製： 実施例１８で得られたＡ−２８０８６の因子ＡとＤの結
晶状混合物ｉｓ．ｓｙをベンゼン５ｏｒｕｌに溶解した
。

このベンゼン溶液にシリカゲル円柱クロマトグラフ法（
７−ＸＩＯＯ−ｃｆｒＬ円柱；Ｅ．Ｍｅｒｃｋ等級６
０のシリカゲル、２３０メッシュ（ＡＳＴＭ）より細か
い）を適用した。

円柱は次の溶媒で毎時９０ｍｌの流速で順次に溶出した
。

（１）ベンゼン１２ｌ （２）ベンゼン：醋酸エチル（９ ： １）混合物１２
ｌ （３）ベンゼン：醋酸エチル（４：１）混合物１２ｌ （４）ベンゼン：醋酸エチル（７：３）混合物１２ｌ （５）メタノール１０７ 溶出の進行を監視する７ためにバチルス・ズブチリスに
よるバイオオートグラフ法を薄層セルロースク０マトグ
ラフ法（ Ｍｅｒｃｋ Ｄ ａｒ ｍ ｓ ｔａｄｔセ
，／Ｌ／０一ス、アルミニウム支持板上）と共に行った
。

用いた溶媒系は次のものである。

水：メタノール：アセトン（１２：３：１）。

初めにＮＨ４０Ｈでこの溶液をｐＨ１０．５にしその後
、ＨＣｌ でｐＨ７．５に調節する。

活性が検出される迄の１〜２１分を集め、以後２００ｍ
ｌづつの部分を収集した。

Ａ−２８０８６因子Ｄだげを含んだ部分を合し、真空蒸
留して残渣を得た。

この残留物はアセトンー水（１：１）から結晶した。

結晶を分離して真空乾燥し、結晶状のＡ−２８０８６因
子Ｄ １ ４ ０１ｎ９を得た。

僅かにＡ−２８０８６因子Ａの混ったＡ一２８０８６因
子Ｄを含む部分を同じやり方で処理すると、さらに少量
のＡ−２８０８６因子Ａを含む結晶状のＡ−２８０８６
因子Ｄが１５０１ｎ９得られた。

同様の方法でＡ−２８０８６因子Ａだけを含む部分を処
理し結晶状のＡ−２８０８６因子４．７ｔを得た。

実施例 ２１ 下記組成の斜面培地を使用すること以外は、実施例１６
の方法に従って、Ａ−２８０８６抗生物質類を生成した
。

またこの場合は菌を植えた斜面を約７日間２８゜Ｃで培
養した。

実施例 ２２ フラスコ培地にも生産用培地にも下記組或のものを使用
すること以外は、実施例１７の方法に従ってＡ−２８０
８６抗生物質類を生産した。

実施例 ２３ 下記組成の培地を中間の第三段階の生育培地に用いるこ
と以外は実施例２１の方法に従って、Ａ２８０８６系抗
生物質を生産した。

実施例 ２４ コクシジウム症抑制を目的としてＡ−２８０８６で改良
されたひな鳥飼料の製造： 体重が速く増加するようにひな鳥を飼育するのに適した
均衡的で高性能な飼料を次のような配合処方で作製する
。

これらの物質は標準飼料配合技法に従って混合する。

投与する水には制限を加えない。こうした餌で飼育した
ひな鳥はコクシジウム症感染から保護され、体重増加も
コクシジウム症のない該薬剤無添加の類似の餌で飼育さ
れたひなに匹敵する。

実施例 ２５ Ａ−２８０８６で改善した肉牛の飼料の製造：均衡のと
れた高性能の肉牛の飼料は次のように調製される。

該混合飼料は圧縮して小塊にする。

動物１匹あたり１５ポンドの飼料を日々の平均摂取の割
合とすると、この飼料は１日に動物１匹あたり約３００
■のＡ−２８０８６因子Ａを供給していることになる。

実施例 ２６ Ａ−２ ８ ０ ８ ６因子Ｄのアセチル・エステル誘
導体の製造： 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄをピリジンに溶解する。

この溶液に無水醋酸の計算量を添加する。この溶液を十
分に混和してから一夜室温に放置する。

ついで、水を過剰に加えて混合物を室温に数時間放置す
る。

生或する沈殿を沢別し、水洗乾燥する。

こうして得られた固形物をアセトンに溶解し真空下で蒸
発乾固して、Ａ−２８０８６因子Ｄのアセチルエステル
誘導体が得られた。

実施例 ２７〜３０ 実施例２６の方法に従い、ピリヂンの存在下でＡ−２８
０８６因子Ｄを無水プロピオン酸と反応させることによ
り、抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄのプロピオニル・エ
ステル誘導体を製造した。

実施例２６の方法に従い、ピリジンの存在下でＡ−２８
０８６因子Ｄを無水ｎ一酪酸と反応させることにより、
抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄのｎ一酪酸エステル誘導
体を製造した。

実施例２６の方法により、ピリジンの存在下でＡ−２８
０８６因子Ｄを無水カプロン酸と反応させ、抗生物質Ａ
−２８０８６因子Ｄのｎ一カプロイル・エステル誘導体
を製造した。

実施例２６の方法に従って、ピリヂンの存在下でＡ−２
８０８６因子Ｄを無水吉草酸と反応させ、抗生物質Ａ−
２８０８６因子Ｄのｎ−バレリル・エステル誘導体を製
造した。

実施例 ３１ Ａ−２８０８６因子Ｄのナ｝ ＩＪウム塩の製造：抗生
物質Ａ−２８０８６因子Ｄをアセトンに溶解する。

この溶液に等量の水を加えこの溶液のｐＨが約１１にな
るのに十分な５Ｎ水酸化ナ゛トリウムを加える。

得られた溶液を約１時間攪拌し、次いで醋酸エチルで抽
出する。

真空下で醋酸エチルを蒸発させるとＡ−２８０８６因子
Ｄのナトリウム塩が得られる。

実施例３２〜３４ 実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子Ｄと５Ｎ
水酸化カリウムとから抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄの
カリウム塩を製造した。

実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子Ｄと飽和
水酸化バリウムとから抗生物質Ａ２８０８６因子Ｄのバ
リウム塩 を製造した。

実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子ＤとＩＮ
水酸化セシウムとから抗生物質Ａ一２８０８６因子Ｄの
セシウム塩を製造した。

実施例 ３５ コクシジウム症抑制を目的としてＡ−２８０８６因子を
含有させたひな鳥飼料の製造： 体重が速《増加するようにひよこを飼育するのに適した
均衡的で高性能な飼料は次の様な配合処方で調製される
。

これらの物質が標準飼刺配合技法に従って混合される。

投与する水には制限を加えない。こうした餌で飼育した
ひな鳥はコクシジウム症感染から保護され、体重の増加
はコクシジウム症にがかつていない該薬剤無添加の類似
飼料で飼育されたひなに匹敵する。

実施例 ３６ Ａ−２８０８６因子Ｄを含有する肉牛の飼料の製造： 均衡のとれた高穀物の肉牛用飼料は次のように製造され
る。

該混合飼料は圧縮して小塊とする。

動物１匹につき１５ポンドの飼料を日々の平均摂取の卯
拾とすると、この飼料は１匹につき約３００■のＡ一２
８０８６因子Ｄを供給していることになる。

【図面の簡単な説明】

図面はすべて本発明の抗生物質Ａ−２８０８６の赤外吸
収スペクトルを示す。 図面であって、第１図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａ
、第２図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂ、第３図は抗
生物質Ａ−２８０８６因子八のアセチルエステル誘導体
、第４図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのプロピオニ
ルエステル誘導体、第５図は抗生物質Ａ−２８０８６因
子Ａのブチリルエステル誘導体、第６図は抗生物質Ａ−
２８０８６因子Ａのバレリルエステル誘導体、第７図は
抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのカプロイルエステル誘
導体、第８図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｄのそれで
ある。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトマイシス属に属する抗生物質Ａ −２８
   ０８６生産菌を培地に培養し、その培養液から抗生物質
   Ａ−２８０８６因子Ａ、因子Ｂおよび因子Ｄを含む抗生
   物質Ａ−２８０８６複合体を採取することを特徴とする
   抗生物質Ａ−２８０８６複合体の製造法。