JPS5978190A - 新規物質ax―2 - Google Patents
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- JPS5978190A JPS5978190A JP57189467A JP18946782A JPS5978190A JP S5978190 A JPS5978190 A JP S5978190A JP 57189467 A JP57189467 A JP 57189467A JP 18946782 A JP18946782 A JP 18946782A JP S5978190 A JPS5978190 A JP S5978190A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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- C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D471/16—Peri-condensed systems
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
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- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はAX−2、その製造法およびAX−2を含有す
る抗腫瘍剤に関する。さらに、詳しくけ、本発明は式 で示されるAX−2、ストレプトミセス属またはミクロ
モノスポラ属に属する微生物によるAX−2の製造法お
よびAX−2を含有する抗腫瘍剤に関する。
る抗腫瘍剤に関する。さらに、詳しくけ、本発明は式 で示されるAX−2、ストレプトミセス属またはミクロ
モノスポラ属に属する微生物によるAX−2の製造法お
よびAX−2を含有する抗腫瘍剤に関する。
新規で有用な抗腫瘍性物質は常に求められておシ、その
目的のため種々検討した結果、ストレプトミセス属また
はミクロモノスポラ属に属する微生物を培養し、その培
養物中に新規な抗腫瘍性物質AX−2が生産されること
を見出し本発明を完成するに至った。
目的のため種々検討した結果、ストレプトミセス属また
はミクロモノスポラ属に属する微生物を培養し、その培
養物中に新規な抗腫瘍性物質AX−2が生産されること
を見出し本発明を完成するに至った。
以下に本発明の詳細な説明する。
(2)
AX−2の理化学的性質は次の通シである。
■融点ニア5.5〜77.5℃
■元素分析値: C55,16%、 H5,55チ。
N11.74%
■比旋光度:〔α〕ッ=−27.3°(c ==0.1
7 CHCl3)■マススペクトル=φ M+349
288 98■UVスペクトル:(メタノール) λmax 205nm(ε10800)、294nm(
ε5200) ■’H−NMRスペクトル δ(cDcl 3)z、5
4(xH,br)、1.94(3H,s)y 2.84
(IH。
7 CHCl3)■マススペクトル=φ M+349
288 98■UVスペクトル:(メタノール) λmax 205nm(ε10800)、294nm(
ε5200) ■’H−NMRスペクトル δ(cDcl 3)z、5
4(xH,br)、1.94(3H,s)y 2.84
(IH。
a)、3.14(IH,t)、3.17(IH,a)、
3.33(IH,da)、3.38(3H,El)、3
.57(IH,aa)4.03(3I(、s)、4.2
9(IL di)、4.44(IH。
3.33(IH,da)、3.38(3H,El)、3
.57(IH,aa)4.03(3I(、s)、4.2
9(IL di)、4.44(IH。
da)? 4.72(2H1br+ s)■” ” C
−NMRスペクトルδ(CDCA! 、 )8.4,4
0.L 4SL9,46.L 49.1,51.0,6
1.0゜63.1.91,126.7,128.4,1
48.6,156.41 B 6.8.18 、L、a
、 184.6■IRスペクトル(KEr錠剤法)礪−
1−■■園■(3) 33501 17101 16419 1591、 1
076■薄層クロマトグラフィー〔シリカゲル(Ar5
715メルク社製)〕におけるRf値[株]溶解性 酢酸エチル!クロロホルム!アセトン!メタノール、エ
タノールに可溶、水ニ難溶。
−NMRスペクトルδ(CDCA! 、 )8.4,4
0.L 4SL9,46.L 49.1,51.0,6
1.0゜63.1.91,126.7,128.4,1
48.6,156.41 B 6.8.18 、L、a
、 184.6■IRスペクトル(KEr錠剤法)礪−
1−■■園■(3) 33501 17101 16419 1591、 1
076■薄層クロマトグラフィー〔シリカゲル(Ar5
715メルク社製)〕におけるRf値[株]溶解性 酢酸エチル!クロロホルム!アセトン!メタノール、エ
タノールに可溶、水ニ難溶。
石油エーテル、n−ヘキサンに不溶
次にAX−2の製造法について説明する。
本発明に使用する微生物としては、ストレプトミセス属
またはミクロモノスポラ属に属し、AX−2を生産する
能力を有する微生物であれば、いずれも用いられる。
またはミクロモノスポラ属に属し、AX−2を生産する
能力を有する微生物であれば、いずれも用いられる。
具体的々例としてストレプトミセス・ケスピトーズスT
−17−135(NRRL 12508)ミクロモノス
ポラ書エスピーKY11084(NRRL11071)
などがあげられる。
−17−135(NRRL 12508)ミクロモノス
ポラ書エスピーKY11084(NRRL11071)
などがあげられる。
(4)
ストレプトミセス・ケスビトーズスおよびミクロモノス
ポラ・エスピーKY 11084の菌学的性質はそれぞ
れ特公昭34−7597号公報および特開昭53−10
7487号公報に記載されている。
ポラ・エスピーKY 11084の菌学的性質はそれぞ
れ特公昭34−7597号公報および特開昭53−10
7487号公報に記載されている。
本菌株は、ストレプトミセス属またはミクロモノスポラ
属に属する既知菌種の場合にみられるように、その性状
が例えば紫外線、X線、薬品等の人工的変異手段で変異
することもあるが、このような変異株であってもAX−
2の生産能を有するものはすべて本発明に適用できる。
属に属する既知菌種の場合にみられるように、その性状
が例えば紫外線、X線、薬品等の人工的変異手段で変異
することもあるが、このような変異株であってもAX−
2の生産能を有するものはすべて本発明に適用できる。
本発明において使用する培地としては、炭素源、窒素源
、無機物、必要に応じてその低栄養物を程よく含有する
培地であれば、合成培地または天然培地のいずれでも使
用可能である。
、無機物、必要に応じてその低栄養物を程よく含有する
培地であれば、合成培地または天然培地のいずれでも使
用可能である。
培地に使用される炭素源としては、例えばグルコース、
クリセロール、フラクトース、マルトース、マンニット
、キシロース、カラクトース、ラクトース、リボース、
デキストリン、澱粉またはその加水分解液等の種々の炭
水化物質が単(5) 独または組合わせて用いられる。窒素源としては、アン
モニア、塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等の
各種の無機および有機アンモニウム塩類、尿素、ペプト
ン、NZ−アミン、肉エキス、乾燥酵母、酵母エキス、
コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、フィツシ
ュミールあるいはその消化物、大豆粉あるいはその消化
物等の含窒素有機物質、グリシン、グルタミン酸、アラ
ニン等の各種アミノ酸が使用可能である。無機物質とし
ては、各種燐酸塩、食塩、炭酸カルシウム等さらには微
量の重金属塩が使用されるが、天然物を含む培地では必
ずしも添加を必要とし々い。また栄養要求を示す変異株
を用いる場合には、当然その栄養要求を満足させる物質
を培地に加えなければならない。
クリセロール、フラクトース、マルトース、マンニット
、キシロース、カラクトース、ラクトース、リボース、
デキストリン、澱粉またはその加水分解液等の種々の炭
水化物質が単(5) 独または組合わせて用いられる。窒素源としては、アン
モニア、塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等の
各種の無機および有機アンモニウム塩類、尿素、ペプト
ン、NZ−アミン、肉エキス、乾燥酵母、酵母エキス、
コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、フィツシ
ュミールあるいはその消化物、大豆粉あるいはその消化
物等の含窒素有機物質、グリシン、グルタミン酸、アラ
ニン等の各種アミノ酸が使用可能である。無機物質とし
ては、各種燐酸塩、食塩、炭酸カルシウム等さらには微
量の重金属塩が使用されるが、天然物を含む培地では必
ずしも添加を必要とし々い。また栄養要求を示す変異株
を用いる場合には、当然その栄養要求を満足させる物質
を培地に加えなければならない。
培養は振盪培養あるいは通気攪拌深部培養等の好気的な
条件で行なわれる。培養温度は通常25〜35℃である
。培養期間は通常3〜4日(6) 間で培養液中にAX−2が生成、蓄積する。
条件で行なわれる。培養温度は通常25〜35℃である
。培養期間は通常3〜4日(6) 間で培養液中にAX−2が生成、蓄積する。
培養液からAX−2の採取は例えば次の様に行なう。
培養終了後、分解防止剤としてグロパノール等を培養液
に加え、さらに濾過助剤を加えて、濾過によシ菌体を除
去し、ろ液を得る。この涙液を合成吸着剤であるダイヤ
イオンHP−20(三菱化成社製、商品名)等に吸着さ
せた後、メタノール等の溶出剤で溶出する。溶出液を減
圧濃縮し、メタノール等の有機溶媒を除去した後、酢酸
エチル等を加えて溶媒層にAX−2を抽出する。この抽
出液を減圧濃縮した後、石油エーテル等を加えて沈澱化
させ粗粉末を得る。
に加え、さらに濾過助剤を加えて、濾過によシ菌体を除
去し、ろ液を得る。この涙液を合成吸着剤であるダイヤ
イオンHP−20(三菱化成社製、商品名)等に吸着さ
せた後、メタノール等の溶出剤で溶出する。溶出液を減
圧濃縮し、メタノール等の有機溶媒を除去した後、酢酸
エチル等を加えて溶媒層にAX−2を抽出する。この抽
出液を減圧濃縮した後、石油エーテル等を加えて沈澱化
させ粗粉末を得る。
粗粉末をクロロホルム−メタノール(100:3容量比
)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーに供する。A
X−2を含む区分を集め、減圧濃縮し、石油エーテル等
を加え沈澱化させることによj9AX−2の黄褐色の粉
末を得ることができる。
)を用いたシリカゲルクロマトグラフィーに供する。A
X−2を含む区分を集め、減圧濃縮し、石油エーテル等
を加え沈澱化させることによj9AX−2の黄褐色の粉
末を得ることができる。
次にAX−2の急性毒性試験および抗腫瘍活(7)
性について説明する。
I AX−2の急性毒性(”DSO)試験性
体重20±2Fの(1dY雄マウマウス1匹を△
用いて、薬剤を1回腹腔内または静脈内に投与し、投与
後14日間マウスの生死を観察し、各投与群の死亡率を
求め、ベーレンス・ダレバー法よりED5゜を算出した
。
後14日間マウスの生死を観察し、各投与群の死亡率を
求め、ベーレンス・ダレバー法よりED5゜を算出した
。
この結果、静脈内投与で27 my/Kp 、 腹腔
内投与では7.8 tag/KPであった。
内投与では7.8 tag/KPであった。
II AX−2の抗腫瘍活性
(1)ザルコーマ180固型腫瘍に対する効果5X10
’個のザルコーマ180細胞をdnY性 雄マウスの腹腔内に移植した後、7日目の腹△ 水から細胞を採取し、この細胞を滅菌生理食塩水で1回
洗浄した後、滅菌生理食塩水で5 X 10’ vml
の細胞浮遊液を作成した。
’個のザルコーマ180細胞をdnY性 雄マウスの腹腔内に移植した後、7日目の腹△ 水から細胞を採取し、この細胞を滅菌生理食塩水で1回
洗浄した後、滅菌生理食塩水で5 X 10’ vml
の細胞浮遊液を作成した。
この0.11を体重20±22のddY雄性マウスの右
腋窩部皮下に移植した。薬物は腫瘍移植後24時間目に
1群5匹のマウスに尾静脈より投与した。抗腫瘍活性の
測定は移植後(8) 7日目に腫瘍の長径(a)と短径(b)を測定し、腫瘍
体積に相当するa x b”/2 の値を求め、対照群
(C)に対する薬物投与群(’r)の体積比(TiC)
によって、その効果をあられした。
腋窩部皮下に移植した。薬物は腫瘍移植後24時間目に
1群5匹のマウスに尾静脈より投与した。抗腫瘍活性の
測定は移植後(8) 7日目に腫瘍の長径(a)と短径(b)を測定し、腫瘍
体積に相当するa x b”/2 の値を求め、対照群
(C)に対する薬物投与群(’r)の体積比(TiC)
によって、その効果をあられした。
第1表にザルコーマ180に対fルA X −2の静脈
内投与での効果を示す。
内投与での効果を示す。
第 1 表
7、5−15tny/Kyの投与量で投与量に相関した
抗腫瘍効果が得られ、15 i+g/に9投与群でのT
iCは0.25であった。
抗腫瘍効果が得られ、15 i+g/に9投与群でのT
iCは0.25であった。
なおED、。値はザルコーマ180固型腫瘍(9)
の体積を対照群の50俤に低下させる投与量とした。即
ち、縦軸にT/C1横軸に対数目盛で投与量を表わした
グラフに、投与量とガの関係をプロットし、投与量と抗
腫瘍活性を最小二乗法で直線として求め、T、/Cが0
.5を示す投与量をED、。値として算出した。
ち、縦軸にT/C1横軸に対数目盛で投与量を表わした
グラフに、投与量とガの関係をプロットし、投与量と抗
腫瘍活性を最小二乗法で直線として求め、T、/Cが0
.5を示す投与量をED、。値として算出した。
また末梢白血球数(wBc)の測定はザルコーマ180
を皮下移植後、4日目に眼底よシ採血し、20μ!の血
液を9.98 dのセルキットセフン液中で分散させサ
ポニン液を1滴加え、赤血球を溶解させた後、ミクロセ
ルカウンターで行なった。
を皮下移植後、4日目に眼底よシ採血し、20μ!の血
液を9.98 dのセルキットセフン液中で分散させサ
ポニン液を1滴加え、赤血球を溶解させた後、ミクロセ
ルカウンターで行なった。
(2)メラノーマ81−に対する効果
性
Cs7BL/6雄マウスの腹腔内に継代されてい△
るメラノーマB16腫瘍塊より、@癌細胞を調整し、滅
菌生理食塩水で2.5X10’個の細胞浮遊液を作成し
た。この0.2 dを体重2o±2fのBDF、雄性マ
ウスに腹腔内移植した。
菌生理食塩水で2.5X10’個の細胞浮遊液を作成し
た。この0.2 dを体重2o±2fのBDF、雄性マ
ウスに腹腔内移植した。
薬物は腫瘍移植後24時間目に1回腹藤内投与した。薬
物非投与群の平均生存日数(T)(10) に対する薬物投与群の平均生存日数(C)のパーセント
、T/C%で抗腫瘍活性を表わした。
物非投与群の平均生存日数(T)(10) に対する薬物投与群の平均生存日数(C)のパーセント
、T/C%で抗腫瘍活性を表わした。
第2表にメラノーマB工、に対するAX−2の腹腔内投
与における効果を示す。
与における効果を示す。
第 2 表
第2表から判る様に6 mg/ Kyで277%以上の
54を示し、いのマウスが生存した。
54を示し、いのマウスが生存した。
又、治療比(最大効果を示す投与!/130%のT/C
を示す投与量)は193であった。
を示す投与量)は193であった。
AX−2は各種の投与形態で用いることができる。
AX−2を注射剤として用いるに際しては、例えばAX
−2を少量のエタノールに溶解後、さらに、生理食塩水
、ブドウ糖、フラクトース、マンニット等の注射用液に
溶解して、その液を静脈内に投与すれば良い。また注射
剤作成の方法としては日本薬局法に基づいて、凍結乾燥
して製造しても良いし、又、塩化ナトリウムを加えた粉
末注射剤としても良い。
−2を少量のエタノールに溶解後、さらに、生理食塩水
、ブドウ糖、フラクトース、マンニット等の注射用液に
溶解して、その液を静脈内に投与すれば良い。また注射
剤作成の方法としては日本薬局法に基づいて、凍結乾燥
して製造しても良いし、又、塩化ナトリウムを加えた粉
末注射剤としても良い。
経口投与に際しては、適当な賦形剤とともに、錠剤、粉
剤、粒剤として投与できる。さらに動脈内投与、腹腔内
投与、胸腔内投与が可能である。
剤、粒剤として投与できる。さらに動脈内投与、腹腔内
投与、胸腔内投与が可能である。
投与量は年齢や症状により適宜増減できるが、!−50
■/成大の範囲が好ましい。
■/成大の範囲が好ましい。
以下に実施例によって本発明の具体例を示す。
実施例1
種菌としてストレプトミセス・ケスピトーズスT−17
−135(NRRL 12508)を用い、グルコース
if/d1.酵母xy/dl、デンゾy 0.5 y/
d11食塩0.5 W/dl、炭酸カルシウ、ム0、3
f/dl、 pH7,2ノ培地300ゴを2!!容三
角フラスコで28℃、3日間第一種培養を行なう。得ら
れた第一種培養液15/を第一種培地成分と同一の第二
種培地10(lに加え、通気攪拌を行ない28℃で3日
間培養する。このようにして得られた第二種培養液をフ
ラクトース2 f/di、 大豆粉4 f/dl、 テ
ア )71 W/di。
−135(NRRL 12508)を用い、グルコース
if/d1.酵母xy/dl、デンゾy 0.5 y/
d11食塩0.5 W/dl、炭酸カルシウ、ム0、3
f/dl、 pH7,2ノ培地300ゴを2!!容三
角フラスコで28℃、3日間第一種培養を行なう。得ら
れた第一種培養液15/を第一種培地成分と同一の第二
種培地10(lに加え、通気攪拌を行ない28℃で3日
間培養する。このようにして得られた第二種培養液をフ
ラクトース2 f/di、 大豆粉4 f/dl、 テ
ア )71 W/di。
食塩0.s y/di 、炭酸カルシウムo、 s f
/di%pH7,2の醗酵培地1uに加え、通気攪拌を
行ない30℃で2日間培養する。
/di%pH7,2の醗酵培地1uに加え、通気攪拌を
行ない30℃で2日間培養する。
得られた培養液IKlにn−プロパノール80ノおよび
ラジオライト+500(昭和化学工業社製商品名) 6
0 Kfを加えた後、フィルタープレスにて菌体を炉別
し、F液を得る。F液をダイヤイオンHP−2050ノ
に通塔し、吸着さく13) せる。ダイヤイオンHP−20を水洗後、150Jの4
0係メタノール水溶液で不純物を除去し、さらに150
1の80%メタノール水溶液で溶出すると、AX−2を
含む両分が得られる。この両分を減圧濃縮した後、溶液
のp)rを希硫酸で4.5に調整し、酢酸エチルを加え
て、酢酸エチル層にAX−2を抽出する。酢酸エチル層
を分別し、無水硫酸ナトリウムを添加し十分に攪拌後、
無水硫酸す) IJウムを分離除去し、ν液を減圧濃縮
する。100プまでに濃縮した濃縮液を酢酸エチルで充
填したシリカゲル(関東化学社製100〜200メツシ
ユ)31のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン(1
00:5容量比)の溶出剤で溶出し、クロマト分離を行
なう。AX−2画分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。沈澱を分離し室
温で真空乾燥を行ない、AX−2を258■得る。
ラジオライト+500(昭和化学工業社製商品名) 6
0 Kfを加えた後、フィルタープレスにて菌体を炉別
し、F液を得る。F液をダイヤイオンHP−2050ノ
に通塔し、吸着さく13) せる。ダイヤイオンHP−20を水洗後、150Jの4
0係メタノール水溶液で不純物を除去し、さらに150
1の80%メタノール水溶液で溶出すると、AX−2を
含む両分が得られる。この両分を減圧濃縮した後、溶液
のp)rを希硫酸で4.5に調整し、酢酸エチルを加え
て、酢酸エチル層にAX−2を抽出する。酢酸エチル層
を分別し、無水硫酸ナトリウムを添加し十分に攪拌後、
無水硫酸す) IJウムを分離除去し、ν液を減圧濃縮
する。100プまでに濃縮した濃縮液を酢酸エチルで充
填したシリカゲル(関東化学社製100〜200メツシ
ユ)31のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン(1
00:5容量比)の溶出剤で溶出し、クロマト分離を行
なう。AX−2画分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。沈澱を分離し室
温で真空乾燥を行ない、AX−2を258■得る。
実施例2
種菌としてミクロモノスポラ・エスピーKY(14)
11084(NRRL 、11071)を用い、肉エキ
ス1に倍、酵母x キスl f/di 、食塩0.5
r/j、p H7,2の培地300mを221)l容三
角フラスコで30°C124時間、第一種培養を行なう
。
ス1に倍、酵母x キスl f/di 、食塩0.5
r/j、p H7,2の培地300mを221)l容三
角フラスコで30°C124時間、第一種培養を行なう
。
得られた第一種培養液1,5ノを第一種培養液と同一の
第二種培地1001に加え、通気攪拌を行ない、30℃
、2日間培養する。このようにして得られた第二種培養
液を7ラクトース5−1硫酸7 ン−E = f) A
1.5 f/dl 、 K)T2PO40,2f/d
l 。
第二種培地1001に加え、通気攪拌を行ない、30℃
、2日間培養する。このようにして得られた第二種培養
液を7ラクトース5−1硫酸7 ン−E = f) A
1.5 f/dl 、 K)T2PO40,2f/d
l 。
F’eSO4−7H2010mg/a、 MnSO4−
4H2010吟勺、Zn5O4・7H203tsg/c
al 、CuSO4・5H20111、M2CO3−7
H200,1fA、yacl o、 5yAl、酵母エ
キスl f/di、ビオチン30μy/1.ニコチン酸
0.5薦y/l、プロトカテキュ酸0.1罵νJ% p
H6,8の醗酵培地IKlに加え通気、攪拌を行ない3
0℃で2日間培養する。
4H2010吟勺、Zn5O4・7H203tsg/c
al 、CuSO4・5H20111、M2CO3−7
H200,1fA、yacl o、 5yAl、酵母エ
キスl f/di、ビオチン30μy/1.ニコチン酸
0.5薦y/l、プロトカテキュ酸0.1罵νJ% p
H6,8の醗酵培地IKlに加え通気、攪拌を行ない3
0℃で2日間培養する。
得られた培養液にn−プロパツール801およびラジオ
ライト≠50060Kp加えた後、フィルタープレスに
て菌体を戸別し炉液を得る。
ライト≠50060Kp加えた後、フィルタープレスに
て菌体を戸別し炉液を得る。
ろ液をダイヤイオンHP−5050/に通塔し、吸着さ
せる。ダイヤイオ:/HP−50を水洗後150ノの1
5%アセトン水溶液で不純物を溶出させ、さらに150
1の40チアセトンで溶出するとAX−2を含む両分が
得られる。
せる。ダイヤイオ:/HP−50を水洗後150ノの1
5%アセトン水溶液で不純物を溶出させ、さらに150
1の40チアセトンで溶出するとAX−2を含む両分が
得られる。
この両分を減圧濃縮しアセトンを除去した後、溶液に対
して30チの食塩水さらに酢酸エチルを等量加えてAX
−2を含む物質を抽出する。
して30チの食塩水さらに酢酸エチルを等量加えてAX
−2を含む物質を抽出する。
酢酸エチル層を分別した後、無水硫酸ナトリウムを加え
、攪拌した後に無水硫酸ナトリウムを分離し、上澄液を
減圧濃縮させる。濃縮し析出した不純物を戸別し、その
ν液を石油エーテル中に加えて沈澱化させ、沈澱を分離
し、真空乾燥する。
、攪拌した後に無水硫酸ナトリウムを分離し、上澄液を
減圧濃縮させる。濃縮し析出した不純物を戸別し、その
ν液を石油エーテル中に加えて沈澱化させ、沈澱を分離
し、真空乾燥する。
乾燥粉末をクロロホルム100vLlに溶解し、クロロ
ホルムで充填したシリカゲル(関東化学100〜200
メツシユ)3Jのカラムに通塔し、クロロホルム−メタ
ノール(100:2容量比)の溶出剤で溶出しクロマト
分離を行なう。
ホルムで充填したシリカゲル(関東化学100〜200
メツシユ)3Jのカラムに通塔し、クロロホルム−メタ
ノール(100:2容量比)の溶出剤で溶出しクロマト
分離を行なう。
AX−2を含む両分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。
分離後真空乾燥粉末を酢酸エチルに溶解し、酢酸エチル
で充填したシリカゲル(関東化学社100〜200メツ
シュ)21のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン(
100:S容量比)の溶出剤で溶出し、クロマト分離を
行なう。
で充填したシリカゲル(関東化学社100〜200メツ
シュ)21のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン(
100:S容量比)の溶出剤で溶出し、クロマト分離を
行なう。
AX−2画分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を石油エ
ーテル中に加え、沈澱化させる。上澄液を分離除去した
沈澱を室温で真空乾燥し、AX−2を8411g得る。
ーテル中に加え、沈澱化させる。上澄液を分離除去した
沈澱を室温で真空乾燥し、AX−2を8411g得る。
実施例4 製剤例
AX−2の無菌粉末10119を10d用無菌褐色バイ
アルに分注し無菌粉末製剤とする。これを用時滅菌50
%エタノール水5づを加え充分振とり攪拌して溶解し、
注射液を特徴する特許出願人 (102)協和醗酵工業
株式会社(17) 第1頁の続き 0発 明 者 斎藤裕 町田市旭町3−6−6 0発 明 者 河野−通 町田市旭町3−6−6
アルに分注し無菌粉末製剤とする。これを用時滅菌50
%エタノール水5づを加え充分振とり攪拌して溶解し、
注射液を特徴する特許出願人 (102)協和醗酵工業
株式会社(17) 第1頁の続き 0発 明 者 斎藤裕 町田市旭町3−6−6 0発 明 者 河野−通 町田市旭町3−6−6
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 で示されるAX−2 (2)ストレプトミセス属またはミクロモノスポラ属に
属し、AX−2を生産する能力を有する微生物を培地に
培養し、培養物中にAX−2を生成蓄積せしめ、該培養
物からAX−2を採取することを特徴とするAX−2の
製造(1) で示されるAX−2を含有する抗腫瘍剤。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP57189467A JPS5978190A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規物質ax―2 |
EP83306551A EP0110563B1 (en) | 1982-10-28 | 1983-10-27 | Antitumour substance from streptomyces |
DE8383306551T DE3381470D1 (de) | 1982-10-28 | 1983-10-27 | Anti-tumor-verbindung aus streptomyces. |
US06/546,142 US4563462A (en) | 1982-10-28 | 1983-10-27 | Substance AX-2, a process for producing the same and an antitumor composition containing the same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP57189467A JPS5978190A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規物質ax―2 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5978190A true JPS5978190A (ja) | 1984-05-04 |
JPH0347279B2 JPH0347279B2 (ja) | 1991-07-18 |
Family
ID=16241755
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP57189467A Granted JPS5978190A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規物質ax―2 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4563462A (ja) |
EP (1) | EP0110563B1 (ja) |
JP (1) | JPS5978190A (ja) |
DE (1) | DE3381470D1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0676409B2 (ja) * | 1990-11-22 | 1994-09-28 | 協和醗酵工業株式会社 | ピラゾロアクリドン誘導体 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS56123983A (en) * | 1980-03-04 | 1981-09-29 | Masakazu Hamana | Benzodiazatricyclononane derivative |
-
1982
- 1982-10-28 JP JP57189467A patent/JPS5978190A/ja active Granted
-
1983
- 1983-10-27 EP EP83306551A patent/EP0110563B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-27 DE DE8383306551T patent/DE3381470D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-27 US US06/546,142 patent/US4563462A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3381470D1 (de) | 1990-05-23 |
US4563462A (en) | 1986-01-07 |
EP0110563A2 (en) | 1984-06-13 |
JPH0347279B2 (ja) | 1991-07-18 |
EP0110563A3 (en) | 1986-06-25 |
EP0110563B1 (en) | 1990-04-18 |
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