JPS5978190A - 新規物質ａｘ―２ - Google Patents
新規物質ａｘ―２Info
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- JPS5978190A JPS5978190A JP57189467A JP18946782A JPS5978190A JP S5978190 A JPS5978190 A JP S5978190A JP 57189467 A JP57189467 A JP 57189467A JP 18946782 A JP18946782 A JP 18946782A JP S5978190 A JPS5978190 A JP S5978190A
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- C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D471/16—Peri-condensed systems
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- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＡＸ−２、その製造法およびＡＸ−２を含有す
る抗腫瘍剤に関する。さらに、詳しくけ、本発明は式 で示されるＡＸ−２、ストレプトミセス属またはミクロ
モノスポラ属に属する微生物によるＡＸ−２の製造法お
よびＡＸ−２を含有する抗腫瘍剤に関する。
る抗腫瘍剤に関する。さらに、詳しくけ、本発明は式 で示されるＡＸ−２、ストレプトミセス属またはミクロ
モノスポラ属に属する微生物によるＡＸ−２の製造法お
よびＡＸ−２を含有する抗腫瘍剤に関する。
新規で有用な抗腫瘍性物質は常に求められておシ、その
目的のため種々検討した結果、ストレプトミセス属また
はミクロモノスポラ属に属する微生物を培養し、その培
養物中に新規な抗腫瘍性物質ＡＸ−２が生産されること
を見出し本発明を完成するに至った。
目的のため種々検討した結果、ストレプトミセス属また
はミクロモノスポラ属に属する微生物を培養し、その培
養物中に新規な抗腫瘍性物質ＡＸ−２が生産されること
を見出し本発明を完成するに至った。
以下に本発明の詳細な説明する。
（２）
ＡＸ−２の理化学的性質は次の通シである。
■融点ニア５．５〜７７．５℃
■元素分析値： Ｃ５５，１６％、 Ｈ５，５５チ。
Ｎ１１．７４％
■比旋光度：〔α〕ッ＝−２７．３°（ｃ ＝＝０．１
７ ＣＨＣｌ３）■マススペクトル＝φ Ｍ＋３４９
２８８ ９８■ＵＶスペクトル：（メタノール） λｍａｘ ２０５ｎｍ（ε１０８００）、２９４ｎｍ（
ε５２００） ■’Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ（ｃＤｃｌ ３）ｚ、５
４（ｘＨ，ｂｒ）、１．９４（３Ｈ，ｓ）ｙ ２．８４
（ＩＨ。
７ ＣＨＣｌ３）■マススペクトル＝φ Ｍ＋３４９
２８８ ９８■ＵＶスペクトル：（メタノール） λｍａｘ ２０５ｎｍ（ε１０８００）、２９４ｎｍ（
ε５２００） ■’Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ（ｃＤｃｌ ３）ｚ、５
４（ｘＨ，ｂｒ）、１．９４（３Ｈ，ｓ）ｙ ２．８４
（ＩＨ。
ａ）、３．１４（ＩＨ，ｔ）、３．１７（ＩＨ，ａ）、
３．３３（ＩＨ，ｄａ）、３．３８（３Ｈ，Ｅｌ）、３
．５７（ＩＨ，ａａ）４．０３（３Ｉ（、ｓ）、４．２
９（ＩＬ ｄｉ）、４．４４（ＩＨ。
３．３３（ＩＨ，ｄａ）、３．３８（３Ｈ，Ｅｌ）、３
．５７（ＩＨ，ａａ）４．０３（３Ｉ（、ｓ）、４．２
９（ＩＬ ｄｉ）、４．４４（ＩＨ。
ｄａ）？ ４．７２（２Ｈ１ｂｒ＋ ｓ）■” ” Ｃ
−ＮＭＲスペクトルδ（ＣＤＣＡ！ 、 ）８．４，４
０．Ｌ ４ＳＬ９，４６．Ｌ ４９．１，５１．０，６
１．０゜６３．１．９１，１２６．７，１２８．４，１
４８．６，１５６．４１ Ｂ ６．８．１８ 、Ｌ、ａ
、 １８４．６■ＩＲスペクトル（ＫＥｒ錠剤法）礪−
１−■■園■（３） ３３５０１ １７１０１ １６４１９ １５９１、 １
０７６■薄層クロマトグラフィー〔シリカゲル（Ａｒ５
７１５メルク社製）〕におけるＲｆ値［株］溶解性 酢酸エチル！クロロホルム！アセトン！メタノール、エ
タノールに可溶、水ニ難溶。
−ＮＭＲスペクトルδ（ＣＤＣＡ！ 、 ）８．４，４
０．Ｌ ４ＳＬ９，４６．Ｌ ４９．１，５１．０，６
１．０゜６３．１．９１，１２６．７，１２８．４，１
４８．６，１５６．４１ Ｂ ６．８．１８ 、Ｌ、ａ
、 １８４．６■ＩＲスペクトル（ＫＥｒ錠剤法）礪−
１−■■園■（３） ３３５０１ １７１０１ １６４１９ １５９１、 １
０７６■薄層クロマトグラフィー〔シリカゲル（Ａｒ５
７１５メルク社製）〕におけるＲｆ値［株］溶解性 酢酸エチル！クロロホルム！アセトン！メタノール、エ
タノールに可溶、水ニ難溶。
石油エーテル、ｎ−ヘキサンに不溶
次にＡＸ−２の製造法について説明する。
本発明に使用する微生物としては、ストレプトミセス属
またはミクロモノスポラ属に属し、ＡＸ−２を生産する
能力を有する微生物であれば、いずれも用いられる。
またはミクロモノスポラ属に属し、ＡＸ−２を生産する
能力を有する微生物であれば、いずれも用いられる。
具体的々例としてストレプトミセス・ケスピトーズスＴ
−１７−１３５（ＮＲＲＬ １２５０８）ミクロモノス
ポラ書エスピーＫＹ１１０８４（ＮＲＲＬ１１０７１）
などがあげられる。
−１７−１３５（ＮＲＲＬ １２５０８）ミクロモノス
ポラ書エスピーＫＹ１１０８４（ＮＲＲＬ１１０７１）
などがあげられる。
（４）
ストレプトミセス・ケスビトーズスおよびミクロモノス
ポラ・エスピーＫＹ １１０８４の菌学的性質はそれぞ
れ特公昭３４−７５９７号公報および特開昭５３−１０
７４８７号公報に記載されている。
ポラ・エスピーＫＹ １１０８４の菌学的性質はそれぞ
れ特公昭３４−７５９７号公報および特開昭５３−１０
７４８７号公報に記載されている。
本菌株は、ストレプトミセス属またはミクロモノスポラ
属に属する既知菌種の場合にみられるように、その性状
が例えば紫外線、Ｘ線、薬品等の人工的変異手段で変異
することもあるが、このような変異株であってもＡＸ−
２の生産能を有するものはすべて本発明に適用できる。
属に属する既知菌種の場合にみられるように、その性状
が例えば紫外線、Ｘ線、薬品等の人工的変異手段で変異
することもあるが、このような変異株であってもＡＸ−
２の生産能を有するものはすべて本発明に適用できる。
本発明において使用する培地としては、炭素源、窒素源
、無機物、必要に応じてその低栄養物を程よく含有する
培地であれば、合成培地または天然培地のいずれでも使
用可能である。
、無機物、必要に応じてその低栄養物を程よく含有する
培地であれば、合成培地または天然培地のいずれでも使
用可能である。
培地に使用される炭素源としては、例えばグルコース、
クリセロール、フラクトース、マルトース、マンニット
、キシロース、カラクトース、ラクトース、リボース、
デキストリン、澱粉またはその加水分解液等の種々の炭
水化物質が単（５） 独または組合わせて用いられる。窒素源としては、アン
モニア、塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等の
各種の無機および有機アンモニウム塩類、尿素、ペプト
ン、ＮＺ−アミン、肉エキス、乾燥酵母、酵母エキス、
コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、フィツシ
ュミールあるいはその消化物、大豆粉あるいはその消化
物等の含窒素有機物質、グリシン、グルタミン酸、アラ
ニン等の各種アミノ酸が使用可能である。無機物質とし
ては、各種燐酸塩、食塩、炭酸カルシウム等さらには微
量の重金属塩が使用されるが、天然物を含む培地では必
ずしも添加を必要とし々い。また栄養要求を示す変異株
を用いる場合には、当然その栄養要求を満足させる物質
を培地に加えなければならない。
クリセロール、フラクトース、マルトース、マンニット
、キシロース、カラクトース、ラクトース、リボース、
デキストリン、澱粉またはその加水分解液等の種々の炭
水化物質が単（５） 独または組合わせて用いられる。窒素源としては、アン
モニア、塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等の
各種の無機および有機アンモニウム塩類、尿素、ペプト
ン、ＮＺ−アミン、肉エキス、乾燥酵母、酵母エキス、
コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、フィツシ
ュミールあるいはその消化物、大豆粉あるいはその消化
物等の含窒素有機物質、グリシン、グルタミン酸、アラ
ニン等の各種アミノ酸が使用可能である。無機物質とし
ては、各種燐酸塩、食塩、炭酸カルシウム等さらには微
量の重金属塩が使用されるが、天然物を含む培地では必
ずしも添加を必要とし々い。また栄養要求を示す変異株
を用いる場合には、当然その栄養要求を満足させる物質
を培地に加えなければならない。
培養は振盪培養あるいは通気攪拌深部培養等の好気的な
条件で行なわれる。培養温度は通常２５〜３５℃である
。培養期間は通常３〜４日（６） 間で培養液中にＡＸ−２が生成、蓄積する。
条件で行なわれる。培養温度は通常２５〜３５℃である
。培養期間は通常３〜４日（６） 間で培養液中にＡＸ−２が生成、蓄積する。
培養液からＡＸ−２の採取は例えば次の様に行なう。
培養終了後、分解防止剤としてグロパノール等を培養液
に加え、さらに濾過助剤を加えて、濾過によシ菌体を除
去し、ろ液を得る。この涙液を合成吸着剤であるダイヤ
イオンＨＰ−２０（三菱化成社製、商品名）等に吸着さ
せた後、メタノール等の溶出剤で溶出する。溶出液を減
圧濃縮し、メタノール等の有機溶媒を除去した後、酢酸
エチル等を加えて溶媒層にＡＸ−２を抽出する。この抽
出液を減圧濃縮した後、石油エーテル等を加えて沈澱化
させ粗粉末を得る。
に加え、さらに濾過助剤を加えて、濾過によシ菌体を除
去し、ろ液を得る。この涙液を合成吸着剤であるダイヤ
イオンＨＰ−２０（三菱化成社製、商品名）等に吸着さ
せた後、メタノール等の溶出剤で溶出する。溶出液を減
圧濃縮し、メタノール等の有機溶媒を除去した後、酢酸
エチル等を加えて溶媒層にＡＸ−２を抽出する。この抽
出液を減圧濃縮した後、石油エーテル等を加えて沈澱化
させ粗粉末を得る。
粗粉末をクロロホルム−メタノール（１００：３容量比
）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーに供する。Ａ
Ｘ−２を含む区分を集め、減圧濃縮し、石油エーテル等
を加え沈澱化させることによｊ９ＡＸ−２の黄褐色の粉
末を得ることができる。
）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーに供する。Ａ
Ｘ−２を含む区分を集め、減圧濃縮し、石油エーテル等
を加え沈澱化させることによｊ９ＡＸ−２の黄褐色の粉
末を得ることができる。
次にＡＸ−２の急性毒性試験および抗腫瘍活（７）
性について説明する。
Ｉ ＡＸ−２の急性毒性（”ＤＳＯ）試験性
体重２０±２Ｆの（１ｄＹ雄マウマウス１匹を△
用いて、薬剤を１回腹腔内または静脈内に投与し、投与
後１４日間マウスの生死を観察し、各投与群の死亡率を
求め、ベーレンス・ダレバー法よりＥＤ５゜を算出した
。
後１４日間マウスの生死を観察し、各投与群の死亡率を
求め、ベーレンス・ダレバー法よりＥＤ５゜を算出した
。
この結果、静脈内投与で２７ ｍｙ／Ｋｐ 、 腹腔
内投与では７．８ ｔａｇ／ＫＰであった。
内投与では７．８ ｔａｇ／ＫＰであった。
ＩＩ ＡＸ−２の抗腫瘍活性
（１）ザルコーマ１８０固型腫瘍に対する効果５Ｘ１０
’個のザルコーマ１８０細胞をｄｎＹ性 雄マウスの腹腔内に移植した後、７日目の腹△ 水から細胞を採取し、この細胞を滅菌生理食塩水で１回
洗浄した後、滅菌生理食塩水で５ Ｘ １０’ ｖｍｌ
の細胞浮遊液を作成した。
’個のザルコーマ１８０細胞をｄｎＹ性 雄マウスの腹腔内に移植した後、７日目の腹△ 水から細胞を採取し、この細胞を滅菌生理食塩水で１回
洗浄した後、滅菌生理食塩水で５ Ｘ １０’ ｖｍｌ
の細胞浮遊液を作成した。
この０．１１を体重２０±２２のｄｄＹ雄性マウスの右
腋窩部皮下に移植した。薬物は腫瘍移植後２４時間目に
１群５匹のマウスに尾静脈より投与した。抗腫瘍活性の
測定は移植後（８） ７日目に腫瘍の長径（ａ）と短径（ｂ）を測定し、腫瘍
体積に相当するａ ｘ ｂ”／２ の値を求め、対照群
（Ｃ）に対する薬物投与群（’ｒ）の体積比（ＴｉＣ）
によって、その効果をあられした。
腋窩部皮下に移植した。薬物は腫瘍移植後２４時間目に
１群５匹のマウスに尾静脈より投与した。抗腫瘍活性の
測定は移植後（８） ７日目に腫瘍の長径（ａ）と短径（ｂ）を測定し、腫瘍
体積に相当するａ ｘ ｂ”／２ の値を求め、対照群
（Ｃ）に対する薬物投与群（’ｒ）の体積比（ＴｉＣ）
によって、その効果をあられした。
第１表にザルコーマ１８０に対ｆルＡ Ｘ −２の静脈
内投与での効果を示す。
内投与での効果を示す。
第 １ 表
７、５−１５ｔｎｙ／Ｋｙの投与量で投与量に相関した
抗腫瘍効果が得られ、１５ ｉ＋ｇ／に９投与群でのＴ
ｉＣは０．２５であった。
抗腫瘍効果が得られ、１５ ｉ＋ｇ／に９投与群でのＴ
ｉＣは０．２５であった。
なおＥＤ、。値はザルコーマ１８０固型腫瘍（９）
の体積を対照群の５０俤に低下させる投与量とした。即
ち、縦軸にＴ／Ｃ１横軸に対数目盛で投与量を表わした
グラフに、投与量とガの関係をプロットし、投与量と抗
腫瘍活性を最小二乗法で直線として求め、Ｔ、／Ｃが０
．５を示す投与量をＥＤ、。値として算出した。
ち、縦軸にＴ／Ｃ１横軸に対数目盛で投与量を表わした
グラフに、投与量とガの関係をプロットし、投与量と抗
腫瘍活性を最小二乗法で直線として求め、Ｔ、／Ｃが０
．５を示す投与量をＥＤ、。値として算出した。
また末梢白血球数（ｗＢｃ）の測定はザルコーマ１８０
を皮下移植後、４日目に眼底よシ採血し、２０μ！の血
液を９．９８ ｄのセルキットセフン液中で分散させサ
ポニン液を１滴加え、赤血球を溶解させた後、ミクロセ
ルカウンターで行なった。
を皮下移植後、４日目に眼底よシ採血し、２０μ！の血
液を９．９８ ｄのセルキットセフン液中で分散させサ
ポニン液を１滴加え、赤血球を溶解させた後、ミクロセ
ルカウンターで行なった。
（２）メラノーマ８１−に対する効果
性
Ｃｓ７ＢＬ／６雄マウスの腹腔内に継代されてい△
るメラノーマＢ１６腫瘍塊より、＠癌細胞を調整し、滅
菌生理食塩水で２．５Ｘ１０’個の細胞浮遊液を作成し
た。この０．２ ｄを体重２ｏ±２ｆのＢＤＦ、雄性マ
ウスに腹腔内移植した。
菌生理食塩水で２．５Ｘ１０’個の細胞浮遊液を作成し
た。この０．２ ｄを体重２ｏ±２ｆのＢＤＦ、雄性マ
ウスに腹腔内移植した。
薬物は腫瘍移植後２４時間目に１回腹藤内投与した。薬
物非投与群の平均生存日数（Ｔ）（１０） に対する薬物投与群の平均生存日数（Ｃ）のパーセント
、Ｔ／Ｃ％で抗腫瘍活性を表わした。
物非投与群の平均生存日数（Ｔ）（１０） に対する薬物投与群の平均生存日数（Ｃ）のパーセント
、Ｔ／Ｃ％で抗腫瘍活性を表わした。
第２表にメラノーマＢ工、に対するＡＸ−２の腹腔内投
与における効果を示す。
与における効果を示す。
第 ２ 表
第２表から判る様に６ ｍｇ／ Ｋｙで２７７％以上の
５４を示し、いのマウスが生存した。
５４を示し、いのマウスが生存した。
又、治療比（最大効果を示す投与！／１３０％のＴ／Ｃ
を示す投与量）は１９３であった。
を示す投与量）は１９３であった。
ＡＸ−２は各種の投与形態で用いることができる。
ＡＸ−２を注射剤として用いるに際しては、例えばＡＸ
−２を少量のエタノールに溶解後、さらに、生理食塩水
、ブドウ糖、フラクトース、マンニット等の注射用液に
溶解して、その液を静脈内に投与すれば良い。また注射
剤作成の方法としては日本薬局法に基づいて、凍結乾燥
して製造しても良いし、又、塩化ナトリウムを加えた粉
末注射剤としても良い。
−２を少量のエタノールに溶解後、さらに、生理食塩水
、ブドウ糖、フラクトース、マンニット等の注射用液に
溶解して、その液を静脈内に投与すれば良い。また注射
剤作成の方法としては日本薬局法に基づいて、凍結乾燥
して製造しても良いし、又、塩化ナトリウムを加えた粉
末注射剤としても良い。
経口投与に際しては、適当な賦形剤とともに、錠剤、粉
剤、粒剤として投与できる。さらに動脈内投与、腹腔内
投与、胸腔内投与が可能である。
剤、粒剤として投与できる。さらに動脈内投与、腹腔内
投与、胸腔内投与が可能である。
投与量は年齢や症状により適宜増減できるが、！−５０
■／成大の範囲が好ましい。
■／成大の範囲が好ましい。
以下に実施例によって本発明の具体例を示す。
実施例１
種菌としてストレプトミセス・ケスピトーズスＴ−１７
−１３５（ＮＲＲＬ １２５０８）を用い、グルコース
ｉｆ／ｄ１．酵母ｘｙ／ｄｌ、デンゾｙ ０．５ ｙ／
ｄ１１食塩０．５ Ｗ／ｄｌ、炭酸カルシウ、ム０、３
ｆ／ｄｌ、 ｐＨ７，２ノ培地３００ゴを２！！容三
角フラスコで２８℃、３日間第一種培養を行なう。得ら
れた第一種培養液１５／を第一種培地成分と同一の第二
種培地１０（ｌに加え、通気攪拌を行ない２８℃で３日
間培養する。このようにして得られた第二種培養液をフ
ラクトース２ ｆ／ｄｉ、 大豆粉４ ｆ／ｄｌ、 テ
ア ）７１ Ｗ／ｄｉ。
−１３５（ＮＲＲＬ １２５０８）を用い、グルコース
ｉｆ／ｄ１．酵母ｘｙ／ｄｌ、デンゾｙ ０．５ ｙ／
ｄ１１食塩０．５ Ｗ／ｄｌ、炭酸カルシウ、ム０、３
ｆ／ｄｌ、 ｐＨ７，２ノ培地３００ゴを２！！容三
角フラスコで２８℃、３日間第一種培養を行なう。得ら
れた第一種培養液１５／を第一種培地成分と同一の第二
種培地１０（ｌに加え、通気攪拌を行ない２８℃で３日
間培養する。このようにして得られた第二種培養液をフ
ラクトース２ ｆ／ｄｉ、 大豆粉４ ｆ／ｄｌ、 テ
ア ）７１ Ｗ／ｄｉ。
食塩０．ｓ ｙ／ｄｉ 、炭酸カルシウムｏ、 ｓ ｆ
／ｄｉ％ｐＨ７，２の醗酵培地１ｕに加え、通気攪拌を
行ない３０℃で２日間培養する。
／ｄｉ％ｐＨ７，２の醗酵培地１ｕに加え、通気攪拌を
行ない３０℃で２日間培養する。
得られた培養液ＩＫｌにｎ−プロパノール８０ノおよび
ラジオライト＋５００（昭和化学工業社製商品名） ６
０ Ｋｆを加えた後、フィルタープレスにて菌体を炉別
し、Ｆ液を得る。Ｆ液をダイヤイオンＨＰ−２０５０ノ
に通塔し、吸着さく１３） せる。ダイヤイオンＨＰ−２０を水洗後、１５０Ｊの４
０係メタノール水溶液で不純物を除去し、さらに１５０
１の８０％メタノール水溶液で溶出すると、ＡＸ−２を
含む両分が得られる。この両分を減圧濃縮した後、溶液
のｐ）ｒを希硫酸で４．５に調整し、酢酸エチルを加え
て、酢酸エチル層にＡＸ−２を抽出する。酢酸エチル層
を分別し、無水硫酸ナトリウムを添加し十分に攪拌後、
無水硫酸す） ＩＪウムを分離除去し、ν液を減圧濃縮
する。１００プまでに濃縮した濃縮液を酢酸エチルで充
填したシリカゲル（関東化学社製１００〜２００メツシ
ユ）３１のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン（１
００：５容量比）の溶出剤で溶出し、クロマト分離を行
なう。ＡＸ−２画分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。沈澱を分離し室
温で真空乾燥を行ない、ＡＸ−２を２５８■得る。
ラジオライト＋５００（昭和化学工業社製商品名） ６
０ Ｋｆを加えた後、フィルタープレスにて菌体を炉別
し、Ｆ液を得る。Ｆ液をダイヤイオンＨＰ−２０５０ノ
に通塔し、吸着さく１３） せる。ダイヤイオンＨＰ−２０を水洗後、１５０Ｊの４
０係メタノール水溶液で不純物を除去し、さらに１５０
１の８０％メタノール水溶液で溶出すると、ＡＸ−２を
含む両分が得られる。この両分を減圧濃縮した後、溶液
のｐ）ｒを希硫酸で４．５に調整し、酢酸エチルを加え
て、酢酸エチル層にＡＸ−２を抽出する。酢酸エチル層
を分別し、無水硫酸ナトリウムを添加し十分に攪拌後、
無水硫酸す） ＩＪウムを分離除去し、ν液を減圧濃縮
する。１００プまでに濃縮した濃縮液を酢酸エチルで充
填したシリカゲル（関東化学社製１００〜２００メツシ
ユ）３１のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン（１
００：５容量比）の溶出剤で溶出し、クロマト分離を行
なう。ＡＸ−２画分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。沈澱を分離し室
温で真空乾燥を行ない、ＡＸ−２を２５８■得る。
実施例２
種菌としてミクロモノスポラ・エスピーＫＹ（１４）
１１０８４（ＮＲＲＬ 、１１０７１）を用い、肉エキ
ス１に倍、酵母ｘ キスｌ ｆ／ｄｉ 、食塩０．５
ｒ／ｊ、ｐ Ｈ７，２の培地３００ｍを２２１）ｌ容三
角フラスコで３０°Ｃ１２４時間、第一種培養を行なう
。
ス１に倍、酵母ｘ キスｌ ｆ／ｄｉ 、食塩０．５
ｒ／ｊ、ｐ Ｈ７，２の培地３００ｍを２２１）ｌ容三
角フラスコで３０°Ｃ１２４時間、第一種培養を行なう
。
得られた第一種培養液１，５ノを第一種培養液と同一の
第二種培地１００１に加え、通気攪拌を行ない、３０℃
、２日間培養する。このようにして得られた第二種培養
液を７ラクトース５−１硫酸７ ン−Ｅ ＝ ｆ） Ａ
１．５ ｆ／ｄｌ 、 Ｋ）Ｔ２ＰＯ４０，２ｆ／ｄ
ｌ 。
第二種培地１００１に加え、通気攪拌を行ない、３０℃
、２日間培養する。このようにして得られた第二種培養
液を７ラクトース５−１硫酸７ ン−Ｅ ＝ ｆ） Ａ
１．５ ｆ／ｄｌ 、 Ｋ）Ｔ２ＰＯ４０，２ｆ／ｄ
ｌ 。
Ｆ’ｅＳＯ４−７Ｈ２０１０ｍｇ／ａ、 ＭｎＳＯ４−
４Ｈ２０１０吟勺、Ｚｎ５Ｏ４・７Ｈ２０３ｔｓｇ／ｃ
ａｌ 、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０１１１、Ｍ２ＣＯ３−７
Ｈ２００，１ｆＡ、ｙａｃｌ ｏ、 ５ｙＡｌ、酵母エ
キスｌ ｆ／ｄｉ、ビオチン３０μｙ／１．ニコチン酸
０．５薦ｙ／ｌ、プロトカテキュ酸０．１罵νＪ％ ｐ
Ｈ６，８の醗酵培地ＩＫｌに加え通気、攪拌を行ない３
０℃で２日間培養する。
４Ｈ２０１０吟勺、Ｚｎ５Ｏ４・７Ｈ２０３ｔｓｇ／ｃ
ａｌ 、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０１１１、Ｍ２ＣＯ３−７
Ｈ２００，１ｆＡ、ｙａｃｌ ｏ、 ５ｙＡｌ、酵母エ
キスｌ ｆ／ｄｉ、ビオチン３０μｙ／１．ニコチン酸
０．５薦ｙ／ｌ、プロトカテキュ酸０．１罵νＪ％ ｐ
Ｈ６，８の醗酵培地ＩＫｌに加え通気、攪拌を行ない３
０℃で２日間培養する。
得られた培養液にｎ−プロパツール８０１およびラジオ
ライト≠５００６０Ｋｐ加えた後、フィルタープレスに
て菌体を戸別し炉液を得る。
ライト≠５００６０Ｋｐ加えた後、フィルタープレスに
て菌体を戸別し炉液を得る。
ろ液をダイヤイオンＨＰ−５０５０／に通塔し、吸着さ
せる。ダイヤイオ：／ＨＰ−５０を水洗後１５０ノの１
５％アセトン水溶液で不純物を溶出させ、さらに１５０
１の４０チアセトンで溶出するとＡＸ−２を含む両分が
得られる。
せる。ダイヤイオ：／ＨＰ−５０を水洗後１５０ノの１
５％アセトン水溶液で不純物を溶出させ、さらに１５０
１の４０チアセトンで溶出するとＡＸ−２を含む両分が
得られる。
この両分を減圧濃縮しアセトンを除去した後、溶液に対
して３０チの食塩水さらに酢酸エチルを等量加えてＡＸ
−２を含む物質を抽出する。
して３０チの食塩水さらに酢酸エチルを等量加えてＡＸ
−２を含む物質を抽出する。
酢酸エチル層を分別した後、無水硫酸ナトリウムを加え
、攪拌した後に無水硫酸ナトリウムを分離し、上澄液を
減圧濃縮させる。濃縮し析出した不純物を戸別し、その
ν液を石油エーテル中に加えて沈澱化させ、沈澱を分離
し、真空乾燥する。
、攪拌した後に無水硫酸ナトリウムを分離し、上澄液を
減圧濃縮させる。濃縮し析出した不純物を戸別し、その
ν液を石油エーテル中に加えて沈澱化させ、沈澱を分離
し、真空乾燥する。
乾燥粉末をクロロホルム１００ｖＬｌに溶解し、クロロ
ホルムで充填したシリカゲル（関東化学１００〜２００
メツシユ）３Ｊのカラムに通塔し、クロロホルム−メタ
ノール（１００：２容量比）の溶出剤で溶出しクロマト
分離を行なう。
ホルムで充填したシリカゲル（関東化学１００〜２００
メツシユ）３Ｊのカラムに通塔し、クロロホルム−メタ
ノール（１００：２容量比）の溶出剤で溶出しクロマト
分離を行なう。
ＡＸ−２を含む両分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。
石油エーテル中に加えて沈澱化させる。
分離後真空乾燥粉末を酢酸エチルに溶解し、酢酸エチル
で充填したシリカゲル（関東化学社１００〜２００メツ
シュ）２１のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン（
１００：Ｓ容量比）の溶出剤で溶出し、クロマト分離を
行なう。
で充填したシリカゲル（関東化学社１００〜２００メツ
シュ）２１のカラムに通塔し、酢酸エチル−アセトン（
１００：Ｓ容量比）の溶出剤で溶出し、クロマト分離を
行なう。
ＡＸ−２画分を集め、減圧濃縮した後、濃縮液を石油エ
ーテル中に加え、沈澱化させる。上澄液を分離除去した
沈澱を室温で真空乾燥し、ＡＸ−２を８４１１ｇ得る。
ーテル中に加え、沈澱化させる。上澄液を分離除去した
沈澱を室温で真空乾燥し、ＡＸ−２を８４１１ｇ得る。
実施例４ 製剤例
ＡＸ−２の無菌粉末１０１１９を１０ｄ用無菌褐色バイ
アルに分注し無菌粉末製剤とする。これを用時滅菌５０
％エタノール水５づを加え充分振とり攪拌して溶解し、
注射液を特徴する特許出願人 （１０２）協和醗酵工業
株式会社（１７） 第１頁の続き ０発 明 者 斎藤裕 町田市旭町３−６−６ ０発 明 者 河野−通 町田市旭町３−６−６
アルに分注し無菌粉末製剤とする。これを用時滅菌５０
％エタノール水５づを加え充分振とり攪拌して溶解し、
注射液を特徴する特許出願人 （１０２）協和醗酵工業
株式会社（１７） 第１頁の続き ０発 明 者 斎藤裕 町田市旭町３−６−６ ０発 明 者 河野−通 町田市旭町３−６−６
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 で示されるＡＸ−２ （２）ストレプトミセス属またはミクロモノスポラ属に
属し、ＡＸ−２を生産する能力を有する微生物を培地に
培養し、培養物中にＡＸ−２を生成蓄積せしめ、該培養
物からＡＸ−２を採取することを特徴とするＡＸ−２の
製造（１） で示されるＡＸ−２を含有する抗腫瘍剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189467A JPS5978190A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規物質ａｘ―２ |
| EP83306551A EP0110563B1 (en) | 1982-10-28 | 1983-10-27 | Antitumour substance from streptomyces |
| DE8383306551T DE3381470D1 (de) | 1982-10-28 | 1983-10-27 | Anti-tumor-verbindung aus streptomyces. |
| US06/546,142 US4563462A (en) | 1982-10-28 | 1983-10-27 | Substance AX-2, a process for producing the same and an antitumor composition containing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189467A JPS5978190A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規物質ａｘ―２ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5978190A true JPS5978190A (ja) | 1984-05-04 |
| JPH0347279B2 JPH0347279B2 (ja) | 1991-07-18 |
Family
ID=16241755
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189467A Granted JPS5978190A (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規物質ａｘ―２ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4563462A (ja) |
| EP (1) | EP0110563B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5978190A (ja) |
| DE (1) | DE3381470D1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0676409B2 (ja) * | 1990-11-22 | 1994-09-28 | 協和醗酵工業株式会社 | ピラゾロアクリドン誘導体 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56123983A (en) * | 1980-03-04 | 1981-09-29 | Masakazu Hamana | Benzodiazatricyclononane derivative |
-
1982
- 1982-10-28 JP JP57189467A patent/JPS5978190A/ja active Granted
-
1983
- 1983-10-27 EP EP83306551A patent/EP0110563B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-27 DE DE8383306551T patent/DE3381470D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-27 US US06/546,142 patent/US4563462A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3381470D1 (de) | 1990-05-23 |
| US4563462A (en) | 1986-01-07 |
| EP0110563A2 (en) | 1984-06-13 |
| JPH0347279B2 (ja) | 1991-07-18 |
| EP0110563A3 (en) | 1986-06-25 |
| EP0110563B1 (en) | 1990-04-18 |
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