JPS61152693A - アンスラサイクリン化合物ｒ２０ｘ１０およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、新規なアンスラサイクリン化合物およびその
用途に関する。

制癌性抗生物質としてのアンスラサイクリン化合物は医
薬として重要な位倉な占めており、既に各種のものが提
案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが大きいから、アンスラサイクリン化合物につい
てもそのアグリコン部分および糖部分の種類または置換
基において既存のものと異なる化合物に対しては不断の
希求があるといえよ発甲の概要 本発明は、上記の希求に応えろものである。

すなわち、本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２
０Ｘ　１０は、下式で示されるものである。本発明はこ
の化合物の酸付加塩にも関する。

本発明による抗腫瘍剤は、下式で示されるアンスラサイ
クリン化合物Ｒ２０Ｘ］０またはその酸付加塩を有効成
分とするものである。

馬 ｌ）化学構造 本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ　１０
は、上記の式（Ａ）で示される化学構造を有する。

この化学構造は、下記のようにして決定されたものであ
る。

すなわち、Ｒ２０Ｘ　１０　Ｙ　Ｏ，Ｉ　Ｎ　ｍ酸に溶
ＭＬ、１００℃に３０分間放置することによって加水分
解することにより、アグリコン部分と糖部分とを得た。

アグリコン部分は、核磁気共鳴スペクトルおよびマスス
ペクトル解析により、下記の構造（Ｂ）が推定された。

また、糖部分について、薄層クロマトグラフィー（ＴＬ
Ｏ）によりその挙動を標準物質と比較した結果、ダウノ
サミン（Ｄａｕｎｏａａｍｉｎｅ）と一致した。さらに
、１２０Ｘ］０の紫外部可視部吸収スペクトル、赤外吸
収スペクトル、核磁気共鳴スペクトル、ＦＤマススペク
トル、元素分析等の結果よりＲ２０Ｘ　１０の構造式は
上記式（ム）の通りに決定された。

２）物理化学的性状 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ　１０の物理化学的
性状のいくつかを示せば、下記の通りである。

（１）外　　Ｗ！、！黒褐色粉末 （２）元素分析：　　９　　　旦　　　亙　　　Ｐ分析
値　５９．７４　　５．６９　　２．６９　３１．８８
計算値　　５９．８８　　５．４３　　２．７９　３１
．９０（Ｃ−−Ｎｏ１０） （３）融　　点２２１４℃？分解）。

（４）比旋光度冨〔α］、＝＋ｔ４ｓ°（０−０，０５
，０ＨＯ１１：ＭｓＯＨ−１：１） （５）紫外部可視部吸収スペクトル 第１図に示した通りである。

メタノール中　　λｍａｚ　　ｎ！Ｄ　　（ＩＬ二）２
３４（８８１）、２１０（５３４）、２９２（１６２）
４６８（２４１）、４９４（３０４）、５１４（２４１
）、５２８（２２５）、５８４（６０） 酸性メタノ−中　　λｍａＸｎｍ　　（Ｋ’％）ｃｚ ２３４（８４６）、２５２（１０３）、２９２（１６６
）、４６８（２３６）、　　４９４（２９４）、５１４
（２０８）、５２ｇ（１８４） アルカリ性メタノール中　　λｍ＆Ｘ　　皿　（Ｋ　１
％）１αｍ ２４０（８７２）、２９４（１７２）、５６４（３１７
）、（６）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム法）第２
図に示した通りである。

（７）フロトン核磁気共鳴スペクトル （１００メガヘルツ、重クロロホルム−重メタノール混
液中） 第３図に示した通りである。

（８）　ＦＤマススペクトル 第４図に示した通りである。（分子量計算値−１０１，
５） （９）溶解性 酸性水、塩基性水、メタノール、エタノール、ｎ−フロ
パノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルムに可溶 水、ヘキサン、ンクロヘキサン、石油エーテル、ジエチ
ルエーテルに不溶 なお、Ｒ２０Ｘ１０はメタノール溶液中で褐色であるが
、アルカリ性で青紫色に変色する。

（＋ｃｉ　Ｒｆ値 Ｒ２０Ｘ　１０のシリカゲルプレート上での種々の溶媒
におけるＲｆ値は、下記の通りである。

展開系　　　　　Ｒｆ値（２５’Ｃ） クロロホルム：メタノール　　　　　　　　　　　０．
２０３１ｏｏホルム：メタノール：酢酸　　　　　　　
０．４７−１０＋１１ クロロホルム−メタノール：トリエチルアミン　　　０
．１０−１０：２１１ （メルク社「シリカゲル６０Ｆｚｓ４Ｊプレートを使用
） この化合物は棚部分に一級アミノ基を有するので、その
酵付加塩がありうる。この場合の酸としては、塩酸およ
び硫酸が代表的なものとして挙げられる。

Ｒ２０ＸＩＯ＋７）製造 １）概　要 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ　１０は現在のとこ
ろ微生物の培養によってのみしか得られていないが、類
縁化合物の合成化学的または微生物学的修飾によって製
造することも、あるいは全合成化学的に製造することも
できよう。

微生物の培養による場合の菌株としては、アクチノマジ
ェラ属に属するＲ　２０　Ｘ　１０生成能を有するもの
が使用される。具体的には、本発明者らの分離したアク
チノマジェラ・ロゼオビオラセエＲ２０がＲ２０Ｘ　１
０を生産することが本発明者らによって明らかにされて
いるが、その他の菌株については抗生物質生産菌単離の
常法によって適当なものを自然界より分離することが可
能である。また、Ａ。

ロゼオビオラセエＲ２０を含めてＲ２０Ｘ　１０生産菌
を放射線照射その他の処理に付して、Ｒ２０Ｘ　１０生
産能を高める余地も残されている。

２）　　Ｒ２０株 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ　１０生産能を有す
るアクチノマジェラ醜の菌株として本発明者らの見出し
ているＲ２０株は、下記の内容のものである。

（１）　　由来および寄託番号 Ｒ２０株は福岡県嘉穂郡嘉穂町大字小野谷の野菜畑で採
取した±鴫から分離されたものであり、昭和５８年７月
５日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて「
微工研菌寄第７１３８号」の番号？得ている。

（２）　　菌学的性状および生理学的性質国際放線菌命
名委員会（１８Ｐ）の方法便覧に従って行なった本菌株
の％像づけは、下記の通りである。

Ａ）形態性状 基中菌糸は分枝しながら寒天培地表面に放射状に広がり
、菌糸の分断は観察されない。空中菌糸は主軸を長く伸
ばし、短枝をはｙ直角（主軸に対して）に分岐（単軸分
校）し、その先端に１０４ｒ！Ａ内外またはそれ以上の
胞子からなる密な小螺旋状胞子鎖（１〜３回転、径２．
０〜２．５μ）および擬似胞子＃１（径２．５〜３．５
μ）や胞子塊を形成する。

胞子鎖は幅０．５〜０．８μの円筒状ンースに覆われ、
その表面は粗面状を呈し、個々の胞子は指骨状に連結す
る。胞子塊は不定形で、その胞子表面は粘質状物質で包
まれている。遊離胞子はまれに観察され、円筒形または
長円形、幅帆５〜Ｏ，Ｓμ、長さ０．７〜１．１μ、平
滑表面を呈する。真正胞子瀘、鞭毛胞子、菌核などは観
察されない。全細胞加水分解物中にメゾ型ジアミノピメ
リン酸とマジェロースを含むことから、細胞壁タイプは
ｉｌＢと判断される。

Ｂ）培養性状 各種培地における培養性状（２７℃培養）の観察結果は
、表１に示す通りである。

Ｃ）生理的性状 生理的性状（炭素源の同化性を含む）は、表２に示す通
りである。

Ｄ）考察および同定 本菌株は、（１）細胞壁タイプが［ｌＢであり、（２）
胞子鎖は１０個またはそれ以上の胞子からなり、（３）
擬似胞子嚢や胞子塊を形成し、（４）真正胞子嚢および
鞭毛胞子が観察されないことから、アクチノマジ野々村
の検索表〔隊工、第５２巻、７１〜７７頁、１９７４縁
　　　庖 年〕と記載〔酸工、第４９券、９０４〜９１２頁、１９
７１年〕より、本菌株はＡ、ロゼオビオラセエ（Ａ。

ｒｏｇｅｏｖｉｏユａｃ　ｅｋ）に最も近縁であると判
断される。

そこで、本菌株とＡ、ロゼオビオラセエの標準菌株（ｘ
ｃｃ　Ａ−１４５（野々村Ａ−５）：］を同条件下で培
養し、両菌株の主要な性状について比較した。

結果は表３に示されるように、菌叢色、鼻面色および最
適生育温度に僅少な差異がみられるものの、分類学的に
は極めてよく類似している。よって、本菌株は、アクチ
ノマジュラ・ロゼオビオラセエ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕ
ｒａ　ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅａ　Ｎｏｎｏｍｕｒａ
　ａｔ　０ｈａｒａ１９７１　）であると同定された。

３）培養／　Ｒ２０Ｘ　１０　ノ生産 アンスラサイクリン１２０　Ｘ　１０は、アクチノマジ
ェラ属に属するＲ２０Ｘ１０生産菌を適当な培地で好気
的に培養し、培養物から目的物を採取することによって
製造することができる。

培地は、Ｒ２０Ｘ　１０生産菌が利用しうる任意の栄讐
源を含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭
素源としてグルコース、クユークロース、マルトース、
スターチ、および油脂類などが使用でき、窒素源として
大豆粉、綿実粕、肉エキス、ペプトン、乾煙酢母、酵母
エキス、およびコーンスチーブリカーなどの有機物運び
にアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硝酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、および塩化アンモニウムなどの
無機物が使用できる。また、必要に応じて、食堪、塩化
カリウム、リン酸塩、重金属塩など無機塩類を添加する
ことができる。発酵中の発泡を抑制するために、常法に
従って適当な消泡剤、たとえばンリコーンを添加するこ
ともできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は２５℃〜４５℃が適当であるが、２７℃
〜３０℃が好ましい。この方法でＲ２０ＸＩＯの生産量
は、撮盪培讐、通気撹拌培養共に６日〜７日で最高に達
する。

このようにして１２０　Ｘ　１０の蓄積された培養物が
得られる。培養物中では、Ｒ２０Ｘ］０はその一部は菌
体中に存在するが、その大部分は培養Ｐ液に存在する。

このような培養物からＲ２０Ｘ　１０を採取するには、
合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つの方
法は、抽出の原理に基くものであって、具体的には、た
とえば、培養Ｐ液中のＲ２０Ｘ　１０についてはこれを
水不混和性の１２０　Ｘ　ｌｏ用溶媒（前記参照）例え
ば酢酸エチル、クロロホルム、などで抽出する方法（培
養Ｐ液は中性ないし微塩基性であると抽出効率が良好で
ある）、あるいは菌体内のＲ２０Ｘ１０については濾過
、遠心分離などで得た菌体集体をクロロホルム、酢酸エ
チル、メタノール、エタノール、アセトン、塙酸溶液ま
たは酢酸溶液などで処理して回収することができる。菌
体を分離せずに培養物そのま〜を上記の抽出操作に付す
こともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出の
範階に入れることができる。

培養物からＲ２０Ｘ　１０を採取する他の方法の一つは
、吸着の原理に基くものであって、既に液状となってい
るＲ　２０　Ｘ　１０含有物、倒置ば培養Ｐｉｌｌある
いは上記のようＫして抽出操作を行なうことによって得
られる抽出液、を対象として、適当な吸着剤、例えば活
性炭、アルミナ、シリカゲル、「ダイヤイオンＨＰ２０
Ｊ（三菱化成社製）、　「セフアデツクスＬＨ２０Ｊ（
ファルマンア社製）など、を用いたカラムクロマトグラ
フィー、液体クロマトグラフィー、その他によって目的
Ｒ２０Ｘ　１０を吸着させ、その徒溶離させろことによ
って、Ｒ２０Ｘ　１０を得ることができる。このように
して得られたＲ　２０　Ｘ　１０溶液を減圧濃縮乾固す
れば、Ｒ２０ＸＩＯの粗標品が得られる。

このようにして得られるＲ　２０　Ｘ　１０の粗標品を
さらに精製するためには、上記の抽出法および吸着法を
必要に応じて組合せて必要回数実施すればよい。例えば
、シリカゲル、「セファデックスＬＨ２０」、弱酸性イ
オン交換樹脂、活性炭などの吸着剤またはゲル濾過剤を
用いたカラムクロマトグラフィー、適当な溶媒を用いた
液体クロマトグラフィー、および向流分配法を適宜組合
わせて実施することができる。具体的には、例えば、Ｒ
２０Ｘ　１０粗標品を少量のクロロホルムに溶解し、シ
リカゲルカラムを用いて、適当な溶媒で展開して活性成
分を溶出させ、溶出液を減圧濃縮後、更に［セファデッ
クスＬＨ２０Ｊカラムで溶出させると、１２０　Ｘ　１
０を結晶として得ることができる。

Ｒ２０Ｘ　１０　ｃｖ用途 一本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０ＸＩＯ
は、制癌活性を有していて、医薬として有用な化合物で
ある。

１）生理活性 （１）抗腫瘍性 Ｒ２０Ｘ　１０は、実験動物の白血病に対して著しい抗
腫瘍作用を示した。例えば、ＣＤＦｌマウスに対してＰ
３８８白崩病細胞の懸濁液Ｉ　Ｘ　１０’ケ／マウスを
腹腔内に移植し、移植後より１日目と５日目とにＲ２０
Ｘ　１ｏを腹腔内に投与した。３０日間観察を行ない、
生理食塩水を投与した対照群のマウスの生存日数を１０
０とした延命率（％）で効果を示すと、下記の通りであ
った。

投与量（ｍｇ／ｋｇ７日）　　　　延命率Ｔ／Ｃ（％）
０．２５　　　　　　　　　　　　　　　１４４０．５
　　　　　　　　　　　　　　　　１５３さらに、ＯＤ
Ｐ！マウスに対してＰ２Ｓ５　　白血病細胞の懸ＰＩｊ
液Ｉ　Ｘ　１０’ケ／マウスを腹腔内に移植し、移植後
より１日目と５日目とにＲ２０ＸＩＯを静脈内に投与し
た。３０日間轡察を行ない、生理食塩水を投与した対照
群のマウスの生存日数Ｖ　１００とした延命率（チ）で
効果を示すと、下記の通りであった。

０．２５　　　　　　　　　　　　　　　　９４（２）
　　急性毒性（ＬＤ１０　） Ｒ２０Ｘ　１０のマウス晴腔内注射によるＬ　Ｄ　１０
は、０．６　（ｍｇ／ｋｇ　）　　以上であった。

２）抗腫瘍剤 このように、本発明のアンスラサイクリン化合物１２０
Ｘ１０は動物の腫瘍、特に悪性腫瘍に対して抗庸瘍性な
示すことが明らかにされた。

したがって、本発明Ｒ２０Ｘ　１０は抗腫瘍剤ないし腫
瘍治療剤として使用することができる。

抗腫瘍剤としてのＲ２０Ｘ　１０は合目的的な任蒼の投
与経路で、また採用投与経路によって決まる剤型で、投
与することができる。薬剤としては製薬上許容される担
体ないし希釈剤で希釈された形態がふつうである。

抗腫瘍剤としてのＲ２０Ｘ］０を実際に投与する場合に
は、これを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解して注
射する方法が代表的なものの一つとして挙げられる。具
体的には、動物の場合は腹腔内注射、皮下注射、静脈ま
たは動脈への崩管内注射および局所投与などの注射によ
る方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内注射
または局所投与などの注射による方法がある。

Ｒ２０Ｘ　１０の投与量は、動物試験の結果および種種
の情況を勘案して、連続的または間けつ的に投与したと
きに総投与声が一定ｔを越えないように定められる。具
体的な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の状
況、例えば年令、体重、性別、感受性、食餌、投与時間
、併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変
化することはいうまでもなく、また一定の条件のもとに
おける適量と投与回数は、上記の指針を基として専門医
の適量決定試ｔ＃によって決定されなければならない。

実　　験　　例 以下において「ｔｌ）」は−乃１」である。

実施例１ （１）　　種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して、ｐＨ７，２にｖＲ製したものである。

ポリペプトン　　　　　１１ モラセス　　　　　　　１１ 肉エキス　　　　　　　１％ 上記培地１５１１Ｑｌを大型試験管に分注殺菌し、アク
チノマジェラ・ロゼオビオラセエＲ２０をスラントより
１白金耳接種し、３７°Ｃにて７２時間試験管振盪機に
よりＳｌｌ　（２３０ｒｐｒｎ　）　したものを樺母と
した。

（２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して、ｐＨ７，４に調整したものである。

ブドウ糖　　　　　　　　２，５チ 大豆粉　　　　　　　　１，５優 乾燥酵母　　　　　　　０．２％ 炭酸カルシウム（沈降性）０．４％ 上記培地ｌＯリットルを１００ｍ１ずつ１００　ｍｌの
三角フラスコに分注殺菌したものへ、上記種母１　ｍｌ
を添加し、ロータリー７エーカー（２３Ｏｒｐｍ　）を
用いて２７”Ｃにて７日間回転培養を行なった。

（３１Ｒ２０Ｘ　１０の採取 培養様、培養液をＰ［相］し、菌体とＰ液とを分離する
。Ｆ液をＩＮ塩酸でｐＨ２に調整し、「ダイアイオンＨ
Ｐ−２０Ｊ（三菱化成社製）のカラム５ｘ４０ａｍに吸
着させる。蒸留水および１０憾メタノールで洗浄した後
、メタノールで溶出して濃縮する。

濃縮液をｐＨ８，５に評整し、クロロホルム−メタノー
ル（９：１）混液で３回反復抽出した。この抽出液を濃
縮後、６倍量のヘキサンを加えて生じた沈澱物を乾燥す
ると、赤色粉末１００ｍｇを得る（Ｒ２０Ｘ　１０　＠
　神品）。

実施例２ 実施例１で伊られたＲ　２０　Ｘ　ＩＱ粗標品１００ｍ
ｇをクロロホルム−メタノール（１：１）５ｍｌに溶解
し、薄層クロマトグラフィー（メルク社「シリカゲル６
０７ｚｓ４Ｊプレート）にて、クロロホルム−メタノー
ル−酢酸−水（４０：８＋１＋１）で展開し、斑値０．
２８付近の橙色画分をかきとった。これから、クロロホ
ルｈ−メｆｉ／−ル（ｌｔｌ　１　）でＲ２０Ｘ１０を
３回反復抽出した。この抽出液を濃縮乾固後、２ｍ１の
メタノールに溶解し、７アルマクア社ＬＨ−２０ゲル濾
過クロマトグラフィーで処理して、精製品１０　ｍｇを
得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｒ２０Ｘ１０の紫外部可視部吸収スペクトル
を模写したグラフである。 １・・・メタノール中 ２・・・酸性メタノール中 ３・・・アルカリ性メタノール中 第２図は、１２０　Ｘ　１０の赤外吸収スペクトルを模
写したグラフである。 第３−図は、Ｒ２０Ｘ　１０　ノ”Ｈ−ＮＭＲｘへｐ　
トルラ模したグラフである。 第４図 １事件の表示 昭和５９年　特許願　第２８１１９９号２　発明の名称 アンスラサイクリン化合物 Ｒ２０Ｘ１０およびその用途 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 Ｍ　　！ｌ　　麦　　酒　　株　　式　　会　　社４　
　代　　理　　人 明りＩｌ書の［発明の詳細な説明Ｊの欄８、補正の内容 明細ＩＩ／Ｉ第４１１第９行 と補正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式で示されるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ
   １０またはその酸付加塩 ▲数式、化学式、表等があります▼ ２、下式で示されるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ
   １０またはその酸付加塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼