JPH0686682A - ４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法 - Google Patents
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法Info
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- JPH0686682A JPH0686682A JP27181592A JP27181592A JPH0686682A JP H0686682 A JPH0686682 A JP H0686682A JP 27181592 A JP27181592 A JP 27181592A JP 27181592 A JP27181592 A JP 27181592A JP H0686682 A JPH0686682 A JP H0686682A
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- trihydroxyisoflavone
- culture
- extract
- microorganism
- reduced pressure
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 下式で示される４’，７，８−トリヒドロキ
シイソフラボンを安価で効率よく製造する方法を提供す
る。 【化１】 【構成】 アスペルギルス属に属し、４’，７，８−ト
リヒドロキシイソフラボン生産能を有する微生物を培養
し、培養物から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラ
ボンを採取する。またダイジン及び／またはダイゼイン
を含有する完全合成培地に培養することによって、分離
精製工程を簡便にすることができる。
シイソフラボンを安価で効率よく製造する方法を提供す
る。 【化１】 【構成】 アスペルギルス属に属し、４’，７，８−ト
リヒドロキシイソフラボン生産能を有する微生物を培養
し、培養物から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラ
ボンを採取する。またダイジン及び／またはダイゼイン
を含有する完全合成培地に培養することによって、分離
精製工程を簡便にすることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗酸化剤等として有用な
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法
に関する。
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラ
ボンは下式で示される化合物で、イソフラボン類の１つ
である。
ボンは下式で示される化合物で、イソフラボン類の１つ
である。
【０００３】
【化２】
【０００４】製造方法に関しては、化学合成法はカルマ
ルカルの報告（Ｋａｒｍａｒｋａｒ，Ｊ．Ｓｃｉ．Ｉｎ
ｄｕｓｔｒ．Ｒｅｓ．，２０Ｂ巻．３４４頁（１９６１
年））等があり、天然物からの抽出法としては放線菌の
培養液からの分離（ジャーナル・オブ・アンチバイオテ
ィクス，４２巻，１３４４頁，１９８９年、特開平２−
１２４８８３号公報）等が知られている。４’，７，８
−トリヒドロキシイソフラボンには抗腫瘍活性や抗酸化
作用が知られており、そのためより安価に効率よく工業
的に製造する方法の開発が望まれていた。
ルカルの報告（Ｋａｒｍａｒｋａｒ，Ｊ．Ｓｃｉ．Ｉｎ
ｄｕｓｔｒ．Ｒｅｓ．，２０Ｂ巻．３４４頁（１９６１
年））等があり、天然物からの抽出法としては放線菌の
培養液からの分離（ジャーナル・オブ・アンチバイオテ
ィクス，４２巻，１３４４頁，１９８９年、特開平２−
１２４８８３号公報）等が知られている。４’，７，８
−トリヒドロキシイソフラボンには抗腫瘍活性や抗酸化
作用が知られており、そのためより安価に効率よく工業
的に製造する方法の開発が望まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は以上のような
状況に鑑みてなされたものであって、その目的は、
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを安価で効
率よく製造する方法を提供しようとするものである。
状況に鑑みてなされたものであって、その目的は、
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを安価で効
率よく製造する方法を提供しようとするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決すること
のできた本発明の製造方法は、アスペルギルス属に属
し、下式で示される４’，７，８−トリヒドロキシイソ
フラボン生産能を有する微生物を培地に培養して、培養
物から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを採
取することに要旨を有する。
のできた本発明の製造方法は、アスペルギルス属に属
し、下式で示される４’，７，８−トリヒドロキシイソ
フラボン生産能を有する微生物を培地に培養して、培養
物から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを採
取することに要旨を有する。
【０００７】
【化３】
【０００８】また本発明においては、前記微生物を、ダ
イジン及び／またはダイゼインを含有する完全合成培地
に培養して、培養物から４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボンを採取することが好ましい。
イジン及び／またはダイゼインを含有する完全合成培地
に培養して、培養物から４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボンを採取することが好ましい。
【０００９】
【作用】本発明者らは、４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボンの製造方法について種々検討した結果、ア
スペルギルス属に属する微生物が、その培養物中に
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを生産する
ことを見出し、さらには完全合成培地を用いることによ
って目的物の分離精製が簡便容易に行えることを見出し
て本発明を完成したものである。
イソフラボンの製造方法について種々検討した結果、ア
スペルギルス属に属する微生物が、その培養物中に
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを生産する
ことを見出し、さらには完全合成培地を用いることによ
って目的物の分離精製が簡便容易に行えることを見出し
て本発明を完成したものである。
【００１０】本発明で使用する微生物は、アスペルギル
ス属に属し、４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボ
ン生産能を有するものであれば特に制限されないが、例
えば、アスペルギルス ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｎｉｇｅｒ），アスペルギルス・ウサミ（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ ｕｓａｍｉｉ），アスペルギルス・ア
ワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ），
アスペルギルス・フェティデス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｆｅｔｉｄｕｓ）等が挙げられる。これらの微生物
の代表例としてアスペルギルス・ニガー ＩＦＯ ４４
１４が挙げられる。
ス属に属し、４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボ
ン生産能を有するものであれば特に制限されないが、例
えば、アスペルギルス ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｎｉｇｅｒ），アスペルギルス・ウサミ（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ ｕｓａｍｉｉ），アスペルギルス・ア
ワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ），
アスペルギルス・フェティデス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｆｅｔｉｄｕｓ）等が挙げられる。これらの微生物
の代表例としてアスペルギルス・ニガー ＩＦＯ ４４
１４が挙げられる。
【００１１】これらの微生物の菌学的性質は“バージー
ズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオ
ロジー；第８版，ザ・ウィリアムズ・アンド・ウィルキ
ンス社出版）に記載されており、これら菌株は公的微生
物保存機関から容易に入手できるものである。
ズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオ
ロジー；第８版，ザ・ウィリアムズ・アンド・ウィルキ
ンス社出版）に記載されており、これら菌株は公的微生
物保存機関から容易に入手できるものである。
【００１２】本発明においては、先ずアスペルギルス属
に属し、４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを
生産する能力を有する微生物が適当な培地に培養され
る。これらの微生物の培養においては、通常真菌類を培
養する方法が一般的に用いられる。
に属し、４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを
生産する能力を有する微生物が適当な培地に培養され
る。これらの微生物の培養においては、通常真菌類を培
養する方法が一般的に用いられる。
【００１３】培地としては、下記に例示するように、微
生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源、更には必
要に応じて無機塩などを含有させた培地が使用される。 炭素源：グルコース，フラクトース，マルトース，キシ
ロース，マンニット，グリセリン，糖蜜，デンプン，デ
キストリン，コーン・スチープ・リカー，ポテトエキス
等 窒素源：ペプトン，肉エキス，酵母エキス，乾燥酵母，
大豆粉，大豆蛋白分解物，カゼイン，アミノ酸，尿素，
ＮＺ−アミン，コーン・スチープ・リカー，フィッシュ
ミール，硝酸塩，アンモニウム塩等 必要に応じて：ナトリウム塩，カリウム塩，カルシウム
塩，マグネシウム塩，リン酸塩等の無機塩類，その他こ
れら微生物の生育及び４’，７，８−トリヒドロキシイ
ソフラボンの生成を促進する重金属，微量栄養源，発育
促進物質等
生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源、更には必
要に応じて無機塩などを含有させた培地が使用される。 炭素源：グルコース，フラクトース，マルトース，キシ
ロース，マンニット，グリセリン，糖蜜，デンプン，デ
キストリン，コーン・スチープ・リカー，ポテトエキス
等 窒素源：ペプトン，肉エキス，酵母エキス，乾燥酵母，
大豆粉，大豆蛋白分解物，カゼイン，アミノ酸，尿素，
ＮＺ−アミン，コーン・スチープ・リカー，フィッシュ
ミール，硝酸塩，アンモニウム塩等 必要に応じて：ナトリウム塩，カリウム塩，カルシウム
塩，マグネシウム塩，リン酸塩等の無機塩類，その他こ
れら微生物の生育及び４’，７，８−トリヒドロキシイ
ソフラボンの生成を促進する重金属，微量栄養源，発育
促進物質等
【００１４】また本発明者らが培地に関して種々検討し
た結果、下記に例示するように、ダイジン及び／または
ダイゼインを含有すると共に微生物が同化し得る炭素
源、消化し得る窒素源、更には必要に応じて無機塩など
を含有する完全合成培地を使用することによって分離精
製工程が簡便になることが判明した。 炭素源：グルコース，フラクトース，マルトース，キシ
ロース，マンニット，グリセリン，デンプン，デキスト
リン等 窒素源：硝酸塩，アンモニウム塩等 必要に応じて：ナトリウム塩，カリウム塩，カルシウム
塩，マグネシウム塩，リン酸塩等の無機塩類，その他こ
れら微生物の生育及び４’，７，８−トリヒドロキシイ
ソフラボンの生成を促進する重金属，微量栄養源，発育
促進物質等 ダイジン及び／またはダイゼインの添加濃度：０．０１
〜５．０ｍｇ／ｍｌの範囲。
た結果、下記に例示するように、ダイジン及び／または
ダイゼインを含有すると共に微生物が同化し得る炭素
源、消化し得る窒素源、更には必要に応じて無機塩など
を含有する完全合成培地を使用することによって分離精
製工程が簡便になることが判明した。 炭素源：グルコース，フラクトース，マルトース，キシ
ロース，マンニット，グリセリン，デンプン，デキスト
リン等 窒素源：硝酸塩，アンモニウム塩等 必要に応じて：ナトリウム塩，カリウム塩，カルシウム
塩，マグネシウム塩，リン酸塩等の無機塩類，その他こ
れら微生物の生育及び４’，７，８−トリヒドロキシイ
ソフラボンの生成を促進する重金属，微量栄養源，発育
促進物質等 ダイジン及び／またはダイゼインの添加濃度：０．０１
〜５．０ｍｇ／ｍｌの範囲。
【００１５】また上記いずれの培地を用いる場合でも好
ましい培養条件として下記のものが挙げられる。 培養：振とうまたは通気撹拌等の好気的条件下で行うの
が望ましい。 培養温度：２０〜３５℃、好ましくは２５〜３０℃の範
囲。 培地ｐＨ：ｐＨ５〜７程度の弱酸性が好ましい。 培養時間：液体培養の場合通常１〜７日間、好ましくは
培養液中の４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボン
の蓄積量が最大に達したときに培養を終了すればよい。
ましい培養条件として下記のものが挙げられる。 培養：振とうまたは通気撹拌等の好気的条件下で行うの
が望ましい。 培養温度：２０〜３５℃、好ましくは２５〜３０℃の範
囲。 培地ｐＨ：ｐＨ５〜７程度の弱酸性が好ましい。 培養時間：液体培養の場合通常１〜７日間、好ましくは
培養液中の４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボン
の蓄積量が最大に達したときに培養を終了すればよい。
【００１６】尚、これらの培地組成等の培養条件は、使
用する微生物の種類や外部の条件等に応じて好ましい結
果が得られる様適宜調節、選択されることは言うまでも
ない。また、液体培養において発泡がある場合は、シリ
コンオイル、植物油、界面活性剤等の消泡剤を適宜使用
すればよい。
用する微生物の種類や外部の条件等に応じて好ましい結
果が得られる様適宜調節、選択されることは言うまでも
ない。また、液体培養において発泡がある場合は、シリ
コンオイル、植物油、界面活性剤等の消泡剤を適宜使用
すればよい。
【００１７】このようにして得られた培養物の全体，或
は菌体若しくは培養液から４’，７，８−トリヒドロキ
シイソフラボンを採取することができる。まず培養物全
体から採取する場合は、培養物を凍結乾燥してその凍結
乾燥物を含水アセトンなどの含水親水性有機溶媒で抽出
し、得られた抽出液を減圧濃縮する。得られた粗物質は
更に、脂溶性物質の精製に通常用いられる公知の方法、
例えばカラムクロマトグラフィーによって精製すること
ができる。またダイジン及び／またはダイゼイインを含
有する完全合成培地で培養する場合、得られた抽出物か
ら高速液体クロマトグラフィーによってワンステップで
精製することができる。また菌体から採取する場合に
は、まず遠心分離によって菌体と培養濾液とに分離す
る。得られた菌体から前記と同様の方法で抽出，分離，
精製して４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを
得ることができる。
は菌体若しくは培養液から４’，７，８−トリヒドロキ
シイソフラボンを採取することができる。まず培養物全
体から採取する場合は、培養物を凍結乾燥してその凍結
乾燥物を含水アセトンなどの含水親水性有機溶媒で抽出
し、得られた抽出液を減圧濃縮する。得られた粗物質は
更に、脂溶性物質の精製に通常用いられる公知の方法、
例えばカラムクロマトグラフィーによって精製すること
ができる。またダイジン及び／またはダイゼイインを含
有する完全合成培地で培養する場合、得られた抽出物か
ら高速液体クロマトグラフィーによってワンステップで
精製することができる。また菌体から採取する場合に
は、まず遠心分離によって菌体と培養濾液とに分離す
る。得られた菌体から前記と同様の方法で抽出，分離，
精製して４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを
得ることができる。
【００１８】また、培養濾液から４’，７，８−トリヒ
ドロキシイソフラボンを採取するには、得られた培養濾
液を酢酸エチル等の非親水性有機溶媒で抽出するか、或
は活性炭，アルミナ，多孔性合成高分子，イオン交換樹
脂等の吸着剤に吸着させて酢酸エチルなどの溶出溶媒で
溶出し、得られた抽出液または溶出液を減圧濃縮し、前
記と同様の方法で分離精製することができる。
ドロキシイソフラボンを採取するには、得られた培養濾
液を酢酸エチル等の非親水性有機溶媒で抽出するか、或
は活性炭，アルミナ，多孔性合成高分子，イオン交換樹
脂等の吸着剤に吸着させて酢酸エチルなどの溶出溶媒で
溶出し、得られた抽出液または溶出液を減圧濃縮し、前
記と同様の方法で分離精製することができる。
【００１９】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、下記実施例は本発明を制限するものではな
く、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲内で変更実施する
ことは全て本発明の技術的範囲に包含される。
明するが、下記実施例は本発明を制限するものではな
く、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲内で変更実施する
ことは全て本発明の技術的範囲に包含される。
【００２０】実施例１ ＜微生物の培養＞微生物としてアスペルギルス・ニガー
ＩＦＯ ４４１４を用いた。 （ａ）グルコース２％（重量％の意味，以下同じ）、肉
エキス０．３％、ポリペプトン０．２％、塩化ナトリウ
ム０．２％、酵母エキス０．２％を含む寒天斜面培地上
でアスペルギルス・ニガー ＩＦＯ ４４１４を２５℃
７日培養した。このスラント１本の菌体を５００ｍｌ容
量三角フラスコ中の、液体培地Ａ（大豆粉１０％含有、
ｐＨ６．０）１００ｍｌに接種し、ロータリーシェーカ
ー（振幅６ｃｍ，毎分１８０回転）にて２８℃で９６時
間培養して種母を得た。 （ｂ）種母と同様に調製した５００ｍｌ容量三角フラス
コ２０本を滅菌し、上記方法で得られた種母３ｍｌずつ
を無菌操作にて植菌し、ロータリーシェーカー（振幅６
ｃｍ，毎分１８０回転）を用いて２８℃で９６時間培養
し、培養物約２０００ｍｌを得た。
ＩＦＯ ４４１４を用いた。 （ａ）グルコース２％（重量％の意味，以下同じ）、肉
エキス０．３％、ポリペプトン０．２％、塩化ナトリウ
ム０．２％、酵母エキス０．２％を含む寒天斜面培地上
でアスペルギルス・ニガー ＩＦＯ ４４１４を２５℃
７日培養した。このスラント１本の菌体を５００ｍｌ容
量三角フラスコ中の、液体培地Ａ（大豆粉１０％含有、
ｐＨ６．０）１００ｍｌに接種し、ロータリーシェーカ
ー（振幅６ｃｍ，毎分１８０回転）にて２８℃で９６時
間培養して種母を得た。 （ｂ）種母と同様に調製した５００ｍｌ容量三角フラス
コ２０本を滅菌し、上記方法で得られた種母３ｍｌずつ
を無菌操作にて植菌し、ロータリーシェーカー（振幅６
ｃｍ，毎分１８０回転）を用いて２８℃で９６時間培養
し、培養物約２０００ｍｌを得た。
【００２１】＜培養物からの４’，７，８−トリヒドロ
キシイソフラボンの抽出＞得られた培養物を凍結乾燥
し、その乾燥物に８０％含水アセトンを添加し、ホモジ
ナイザーで撹拌、抽出した。濾過によって残渣と抽出物
を分離し、その抽出物を減圧濃縮して抽出物を２４．９
ｇ得た。 ＜溶媒転溶による４’，７，８−トリヒドロキシイソフ
ラボンの精製＞得られた抽出物を純水に懸濁した。それ
にエーテルを添加し、分液ロートに注入して振とう機で
振とうした。静置して２層に分け、エーテル層を採取し
て溶媒を減圧留去して４’，７，８−トリヒドロキシイ
ソフラボンを含有する油状物質を３．２ｇ得た。
キシイソフラボンの抽出＞得られた培養物を凍結乾燥
し、その乾燥物に８０％含水アセトンを添加し、ホモジ
ナイザーで撹拌、抽出した。濾過によって残渣と抽出物
を分離し、その抽出物を減圧濃縮して抽出物を２４．９
ｇ得た。 ＜溶媒転溶による４’，７，８−トリヒドロキシイソフ
ラボンの精製＞得られた抽出物を純水に懸濁した。それ
にエーテルを添加し、分液ロートに注入して振とう機で
振とうした。静置して２層に分け、エーテル層を採取し
て溶媒を減圧留去して４’，７，８−トリヒドロキシイ
ソフラボンを含有する油状物質を３．２ｇ得た。
【００２２】＜シリカゲルクロマトグラフィーによる
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの精製＞得
られた油状物質を予めクロロホルムを用いて充填された
内径３０ｍｍ、長さ４００ｍｍの「シリカゲル６０」
（メルク社製）カラムに吸着させ、クロロホルムからメ
タノールに段階的に変化させる溶出溶媒を用いてクロマ
トグラフィーを行った。溶出液のうち４’，７，８−ト
リヒドロキシイソフラボンを含むフラクションを集めて
減圧濃縮し、純度７．５％程度の４’，７，８−トリヒ
ドロキシイソフラボン含有画分を４６３ｍｇ得た。
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの精製＞得
られた油状物質を予めクロロホルムを用いて充填された
内径３０ｍｍ、長さ４００ｍｍの「シリカゲル６０」
（メルク社製）カラムに吸着させ、クロロホルムからメ
タノールに段階的に変化させる溶出溶媒を用いてクロマ
トグラフィーを行った。溶出液のうち４’，７，８−ト
リヒドロキシイソフラボンを含むフラクションを集めて
減圧濃縮し、純度７．５％程度の４’，７，８−トリヒ
ドロキシイソフラボン含有画分を４６３ｍｇ得た。
【００２３】＜高速液体クロマトグラフィーによる
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの単離＞得
られた４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボン含有
画分から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
純品を得るために次の高速クロマトグラフィーにより分
離精製した。高速液体クロマトグラフィーは、送液ポン
プとして「ＬＣ−６ＡＤ」（島津製）、検出器として
「ＳＰＤ−Ｍ６Ａ」（島津製）、カラムはオクタドデシ
ル化シリカゲルの「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−１
０」、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ（野村化学製）を
用いた。上記で得た４’，７，８−トリヒドロキシイソ
フラボン含有画分４６２．６ｍｇをメタノール２ｍｌに
溶解し、２００μｌずつ１０回に分けてサンプルとして
注入した。展開溶出溶媒としてメタノール１０ｍＭリン
酸緩撃液（２：３）混合溶媒を用い、波長２６０ｎｍの
紫外部吸収で４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボ
ンに該当するピークを集めた。この画分を減圧濃縮し、
純水に懸濁してセプ−パック・カートリッジＣ１８（ウ
ォーターズ製）に吸着させて脱塩を行い、メタノールで
溶出させた。この溶出物を減圧濃縮して４’，７，８−
トリヒドロキシイソフラボンの純品３４．６ｍｇを得
た。
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの単離＞得
られた４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボン含有
画分から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
純品を得るために次の高速クロマトグラフィーにより分
離精製した。高速液体クロマトグラフィーは、送液ポン
プとして「ＬＣ−６ＡＤ」（島津製）、検出器として
「ＳＰＤ−Ｍ６Ａ」（島津製）、カラムはオクタドデシ
ル化シリカゲルの「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−１
０」、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ（野村化学製）を
用いた。上記で得た４’，７，８−トリヒドロキシイソ
フラボン含有画分４６２．６ｍｇをメタノール２ｍｌに
溶解し、２００μｌずつ１０回に分けてサンプルとして
注入した。展開溶出溶媒としてメタノール１０ｍＭリン
酸緩撃液（２：３）混合溶媒を用い、波長２６０ｎｍの
紫外部吸収で４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボ
ンに該当するピークを集めた。この画分を減圧濃縮し、
純水に懸濁してセプ−パック・カートリッジＣ１８（ウ
ォーターズ製）に吸着させて脱塩を行い、メタノールで
溶出させた。この溶出物を減圧濃縮して４’，７，８−
トリヒドロキシイソフラボンの純品３４．６ｍｇを得
た。
【００２４】尚、上記のようにして得られた純品の構造
は、各種機器分析（ＵＶ，ＩＲ，ＦＡＢ−ＭＳ，ＮＭＲ
等）結果から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボ
ンであることを確認した。即ち、このものの紫外線吸収
スペクトルは、２６０ｎｍに極大を有していた。赤外線
吸収スペクトルは、３４６０，３２００，１６５０，１
５８０，１５６０，１５１０ｃｍ-1に吸収極大を持って
いた。また高速電子衝突式マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ）では分子イオンピークは２７１であり、このことか
ら分子量は２７０であると判明した。これらの分析結果
を図１〜５に示す。
は、各種機器分析（ＵＶ，ＩＲ，ＦＡＢ−ＭＳ，ＮＭＲ
等）結果から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボ
ンであることを確認した。即ち、このものの紫外線吸収
スペクトルは、２６０ｎｍに極大を有していた。赤外線
吸収スペクトルは、３４６０，３２００，１６５０，１
５８０，１５６０，１５１０ｃｍ-1に吸収極大を持って
いた。また高速電子衝突式マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ）では分子イオンピークは２７１であり、このことか
ら分子量は２７０であると判明した。これらの分析結果
を図１〜５に示す。
【００２５】実施例２ ＜微生物の培養＞微生物としてアスペルギルス・ニガー
ＩＦＯ ４４１４を用いた。 （ａ）グルコース２％（重量％の意味，以下同じ）、肉
エキス０．３％、ポリペプトン０．２％、塩化ナトリウ
ム０．２％、酵母エキス０．２％を含む寒天斜面培地上
でアスペルギルス・ニガー ＩＦＯ ４４１４を２５℃
７日培養した。このスラント２白金耳の菌体を５００ｍ
ｌ容量三角フラスコ中のツァペック・ドックス培地（硝
酸ナトリウム０．２％，リン酸第二カリウム０．１％，
硫酸マグネシウム０．０５％，塩化カリウム０．０５
％，硫酸第一鉄０．００１％，グルコース３％，ｐＨ
６．０）１００ｍｌに接種し、ロータリーシェーカー
（振幅６ｃｍ，毎分１８０回転）にて２８℃で９６時間
培養して種母を得た。 （ｂ）ダイゼイン０．０５ｍｇ／ｍｌを添加したツァペ
ック・ドックス培地１００ｍｌをいれた５００ｍｌ容量
三角フラスコ２０本を滅菌し、上記方法で得られた種母
３ｍｌずつを無菌操作にて植菌し、ロータリーシェーカ
ー（振幅６ｃｍ，毎分１８０回転）を用いて２８℃で９
６時間培養し、培養物約２０００ｍｌを得た。
ＩＦＯ ４４１４を用いた。 （ａ）グルコース２％（重量％の意味，以下同じ）、肉
エキス０．３％、ポリペプトン０．２％、塩化ナトリウ
ム０．２％、酵母エキス０．２％を含む寒天斜面培地上
でアスペルギルス・ニガー ＩＦＯ ４４１４を２５℃
７日培養した。このスラント２白金耳の菌体を５００ｍ
ｌ容量三角フラスコ中のツァペック・ドックス培地（硝
酸ナトリウム０．２％，リン酸第二カリウム０．１％，
硫酸マグネシウム０．０５％，塩化カリウム０．０５
％，硫酸第一鉄０．００１％，グルコース３％，ｐＨ
６．０）１００ｍｌに接種し、ロータリーシェーカー
（振幅６ｃｍ，毎分１８０回転）にて２８℃で９６時間
培養して種母を得た。 （ｂ）ダイゼイン０．０５ｍｇ／ｍｌを添加したツァペ
ック・ドックス培地１００ｍｌをいれた５００ｍｌ容量
三角フラスコ２０本を滅菌し、上記方法で得られた種母
３ｍｌずつを無菌操作にて植菌し、ロータリーシェーカ
ー（振幅６ｃｍ，毎分１８０回転）を用いて２８℃で９
６時間培養し、培養物約２０００ｍｌを得た。
【００２６】＜培養物からの４’，７，８−トリヒドロ
キシイソフラボンの抽出＞得られた培養物を凍結乾燥
し、その乾燥物に８０％含水アセトンを添加し、ホモジ
ナイザーで撹拌、抽出した。濾過によって残渣と抽出物
を分離し、その抽出物を減圧濃縮して抽出物を２００ｍ
ｇ得た。
キシイソフラボンの抽出＞得られた培養物を凍結乾燥
し、その乾燥物に８０％含水アセトンを添加し、ホモジ
ナイザーで撹拌、抽出した。濾過によって残渣と抽出物
を分離し、その抽出物を減圧濃縮して抽出物を２００ｍ
ｇ得た。
【００２７】＜高速液体クロマトグラフィーによる
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの単離＞得
られた抽出物から４’，７，８−トリヒドロキシイソフ
ラボンの純品を得るために次の高速クロマトグラフィー
によって分離精製した。高速液体クロマトグラフィー
は、送液ポンプとして「ＬＣ−６ＡＤ」（島津製）、検
出器としてフォトダイオード アレイ「ＳＰＤ−Ｍ６
Ａ」（島津製）、カラムはオクタドデシル化シリカゲル
の「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−１０」、（内径２０
ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）（野村化学製）を用いた。上記
で得た抽出物２００ｍｇをメタノールに溶解し、サンプ
ルとして注入した。展開溶出溶媒としてメタノール１０
ｍＭリン酸緩衝液混合溶媒を用い、メタノール濃度を３
０％−６０％に直線的に変化させて溶出を行い、波長２
６０ｎｍの紫外部吸収で４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボンに該当するピークを集めた。この画分を減
圧濃縮し、純水に懸濁してセプ−パック・カートリッジ
Ｃ１８（ウォーターズ製）に吸着させて脱塩を行い、メ
タノールで溶出させた。この溶出物を減圧濃縮して
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの純品３０
ｍｇを得た。
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの単離＞得
られた抽出物から４’，７，８−トリヒドロキシイソフ
ラボンの純品を得るために次の高速クロマトグラフィー
によって分離精製した。高速液体クロマトグラフィー
は、送液ポンプとして「ＬＣ−６ＡＤ」（島津製）、検
出器としてフォトダイオード アレイ「ＳＰＤ−Ｍ６
Ａ」（島津製）、カラムはオクタドデシル化シリカゲル
の「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−１０」、（内径２０
ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）（野村化学製）を用いた。上記
で得た抽出物２００ｍｇをメタノールに溶解し、サンプ
ルとして注入した。展開溶出溶媒としてメタノール１０
ｍＭリン酸緩衝液混合溶媒を用い、メタノール濃度を３
０％−６０％に直線的に変化させて溶出を行い、波長２
６０ｎｍの紫外部吸収で４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボンに該当するピークを集めた。この画分を減
圧濃縮し、純水に懸濁してセプ−パック・カートリッジ
Ｃ１８（ウォーターズ製）に吸着させて脱塩を行い、メ
タノールで溶出させた。この溶出物を減圧濃縮して
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの純品３０
ｍｇを得た。
【００２８】尚、上記のようにして得られた純品は、実
施例１において得られた４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボン純品と高速液体クロマトグラフィー分析に
よる保留時間及びＵＶスペクトルを比較して、その結果
から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンである
ことを確認した。これらの分析結果を図６〜１０に示
す。
施例１において得られた４’，７，８−トリヒドロキシ
イソフラボン純品と高速液体クロマトグラフィー分析に
よる保留時間及びＵＶスペクトルを比較して、その結果
から４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンである
ことを確認した。これらの分析結果を図６〜１０に示
す。
【００２９】
【発明の効果】本発明は以上のように構成されており、
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを安価で効
率よく製造する方法を提供できるようになった。この
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンは抗酸化剤
等として有用である。
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを安価で効
率よく製造する方法を提供できるようになった。この
４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンは抗酸化剤
等として有用である。
【図１】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
紫外線吸収スペクトルである。
紫外線吸収スペクトルである。
【図２】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
高速電子衝突マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＡＳ）であ
る。
高速電子衝突マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＡＳ）であ
る。
【図３】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図４】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図５】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
赤外線吸収スペクトルである。
赤外線吸収スペクトルである。
【図６】高速液体クロマトグラフィーでのダイゼインの
溶出プロフィールである。
溶出プロフィールである。
【図７】高速液体クロマトグラフィーでの４’，７，８
−トリヒドロキシイソフラボンの溶出プロフィールであ
る。
−トリヒドロキシイソフラボンの溶出プロフィールであ
る。
【図８】高速液体クロマトグラフィーでのダイゼイン添
加ツァペック・ドックス培地培養抽出物の溶出プロフィ
ールである。
加ツァペック・ドックス培地培養抽出物の溶出プロフィ
ールである。
【図９】４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの
ＵＶ吸収スペクトルである。
ＵＶ吸収スペクトルである。
【図１０】図７中の保留時間１７分付近のピークのＵＶ
吸収スペクトルである。
吸収スペクトルである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:665）
Claims (2)
- 【請求項１】 アスペルギルス属に属し、下式で示され
る４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボン生産能を
有する微生物を培地に培養して、培養物から４’，７，
８−トリヒドロキシイソフラボンを採取することを特徴
とする４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製
造方法。 【化１】 - 【請求項２】 前記微生物を、ダイジン及び／またはダ
イゼインを含有する完全合成培地に培養して、培養物か
ら４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンを採取す
る請求項１に記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27181592A JPH0686682A (ja) | 1992-07-23 | 1992-10-09 | ４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19701992 | 1992-07-23 | ||
| JP4-197019 | 1992-07-23 | ||
| JP27181592A JPH0686682A (ja) | 1992-07-23 | 1992-10-09 | ４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0686682A true JPH0686682A (ja) | 1994-03-29 |
Family
ID=26510117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27181592A Withdrawn JPH0686682A (ja) | 1992-07-23 | 1992-10-09 | ４’，７，８−トリヒドロキシイソフラボンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0686682A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996035683A1 (fr) * | 1995-05-09 | 1996-11-14 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Nouveaux analogues de na23063 physiologiquement actifs et leur procede de production et leur utilisation |
| WO2000049009A1 (en) * | 1999-02-15 | 2000-08-24 | Novogen Research Pty. Ltd. | Production of isoflavone derivatives |
| US6987098B2 (en) | 1992-05-19 | 2006-01-17 | Novogen Research Pty. Ltd. | Health supplement |
| US7033621B1 (en) | 1997-04-28 | 2006-04-25 | Novogen, Inc. | Isoflavone compositions produced from legumes |
| US7202273B2 (en) | 1996-08-30 | 2007-04-10 | Novogen Research Pty Ltd | Therapeutic methods and compositions involving isoflavones |
| US7312344B2 (en) | 2001-03-08 | 2007-12-25 | Novogen Research Pty Limited | Dimeric isoflavones |
| JP2008056576A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Toyo Hakko:Kk | 抗グリケーション組成物、これを含有する飲食物、飲食物用添加剤、化粧品組成物及び医薬用組成物、並びにヒドロキシイソフラボンの製造方法 |
| US7488494B2 (en) | 1999-09-06 | 2009-02-10 | Novogen Research Pty Ltd. | Compositions and therapeutic methods involving isoflavones and analogues thereof |
-
1992
- 1992-10-09 JP JP27181592A patent/JPH0686682A/ja not_active Withdrawn
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6987098B2 (en) | 1992-05-19 | 2006-01-17 | Novogen Research Pty. Ltd. | Health supplement |
| US7045155B2 (en) | 1992-05-19 | 2006-05-16 | Novogen Research Pty Ltd. | Dietary supplements comprising soy hypocotyls containing at least one isoflavone |
| WO1996035683A1 (fr) * | 1995-05-09 | 1996-11-14 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Nouveaux analogues de na23063 physiologiquement actifs et leur procede de production et leur utilisation |
| US7202273B2 (en) | 1996-08-30 | 2007-04-10 | Novogen Research Pty Ltd | Therapeutic methods and compositions involving isoflavones |
| US7033621B1 (en) | 1997-04-28 | 2006-04-25 | Novogen, Inc. | Isoflavone compositions produced from legumes |
| WO2000049009A1 (en) * | 1999-02-15 | 2000-08-24 | Novogen Research Pty. Ltd. | Production of isoflavone derivatives |
| US7488494B2 (en) | 1999-09-06 | 2009-02-10 | Novogen Research Pty Ltd. | Compositions and therapeutic methods involving isoflavones and analogues thereof |
| US7312344B2 (en) | 2001-03-08 | 2007-12-25 | Novogen Research Pty Limited | Dimeric isoflavones |
| JP2008056576A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Toyo Hakko:Kk | 抗グリケーション組成物、これを含有する飲食物、飲食物用添加剤、化粧品組成物及び医薬用組成物、並びにヒドロキシイソフラボンの製造方法 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
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